Klinisk-patologisk betydelse nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) uttryck i gastric cancer

klinisk-patologisk betydelse nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) uttryck i magcancer Bild Sammanfattning
Bakgrund
transkriptions~~POS=TRUNC faktorn~~POS=HEADCOMP nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) identifierades ursprungligen som en kritisk regulator av intracellulära antioxidanter och av fas II avgiftnings enzymer genom dess transkriptionell uppreglering av många anti-oxidant svar element (ARE) -innehållande gener. Nrf2 inte bara skyddar normala celler utan även cancerceller från cellulär stress, och förbättrar cancercellöverlevnad. Vissa studier har visat att Nrf2 expression i cancerpatienter har klinisk betydelse. Däremot har det inte funnits någon övergripande analys av kärnuttrycksnivån Nrf2 i gastrointestinala cancerceller. I denna studie syftar vi att immunohistokemiskt utvärdera uttrycket av Nrf2, och bedöma dess kliniska betydelse i magcancer.
Metoder
Totalt 175 gastric cancerpatienter som fick R0 gastrektomi med standard lymfkörtel dissekering inkluderades. Vi immunhistokemiskt utvärderas Nrf2 uttryck i paraffininbäddade kirurgiskt resekterade exemplar av dessa 175 patienter. Gruppskillnader analyserades med användning av χ
2 tester, Fishers exakta test, och Mann-Whitney U
test. Samband mellan Nrf2 uttryck och kliniskt patologiska funktioner, inklusive kliniska resultat, bedömdes med hjälp univariat och multivariat analys, och Kaplan-Meier kurvor med log-rank test, respektive.
Resultat
Nrf2 immunoreaktivitet övervägande identifierats i kärnan av gastric cancerceller. Nrf2 positivitet var nära förknippad med tumörstorlek, tumördjup, lymfkörtelmetastaser, lymphovascular invasion, histologi och steg (p < 0,05 för alla). En log-rank test indikerade att den totala överlevnaden av Nrf2-positiva gruppen var signifikant sämre än den för den Nrf2-negativa gruppen (p < 0,01). Och positiv Nrf2 uttryck var signifikant associerade med resistens mot 5-FU-adjuvant kemoterapi (p = 0,024).
Slutsatser
Nrf2 uttryck positivt samband med aggressiv tumör beteende i magcancer. Detta resultat tyder på att Nrf2 uttryck i magcancer är en potentiell indikator för sämre prognos.
Nyckelord
NF-E2-besläktad faktor 2 magcancer Antioxidanter Bakgrund
Gastric cancer är den fjärde vanligaste mag-tarmcancer och näst vanligaste dödliga gastrointestinal cancer i världen. Östasiatiska länder, inklusive Japan är bland de högsta riskområden för magcancer [1,2]. I Japan har inrättandet av massundersökning använder fotopapper genomlysning eller gastrointestinal fibroscopy lett till magcancer som diagnostiseras på ett tidigt stadium. En gynnsam prognos förväntas för dessa gastric cancerpatienter efter kurativ kirurgi eller endoskopisk behandling. Men vissa patienter visar en ogynnsam kurs trots att ta emot kurativ resektion. Den postoperativa resultatet av magcancer är starkt beroende av TNM faktorer [3,4]. Utöver dessa kritiska kliniskt patologiska faktorer, är prognosen för magcancer påverkas av flera biologiska variabler. I detta sammanhang är det nödvändigt att finna nya cancerrelaterade faktorer som kan användas som markörer för diagnos och behandling av gastrisk cancer. Det är allmänt accepterat att oxidativ stress (OS) är involverad i patofysiologin av degenerativa sjukdomar. Dessutom är generering och ökning med OS och sekundär DNA oxidativ skada även känd för att vara relaterad till skadan och malign transformation av magslemhinnan [5]. Således har OS ansetts spela viktiga roller i karcinogenes av magcancer [5,6].
Transkriptionsfaktorn nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2), som är en grundläggande redox-känslig bZIP transkriptionsfaktor, identifierades ursprungligen som en kritisk regulator av intracellulära antioxidanter och fas II avgiftning enzymer genom transkriptions uppreglering av många antioxidant responselement (ARE) -innehållande gener [7-9]. Under basala förhållanden, är Nrf2 bunden till Kelch liknande ECH-associerat protein 1 (Keap1), en cul3 baserad E3 ubiquitin ligas adapter som reglerar Nrf2 ubikitinering och proteasom-beroende nedbrytning [10].
Vid exponering av celler för oxidativ stress eller kemopreventiva föreningar, translokerar Nrf2 till kärnan, bildar en heterodimer med sin obligatoriska partner Maf, binder till är sekvenser i DNA och aktiverar transkriptionen av nedströms gener såsom antioxidanter och fas II avgiftningsenzymer [8,11-13] . Den viktiga biologiska roll Nrf2 understryks av resultaten visar Nrf2 beroende skydd mot många mänskliga sjukdomar eller patologiska tillstånd såsom cancer, neurodegenerativa sjukdomar, hjärt-kärlsjukdomar, inflammation, lungfibros, akut lungskada och Nrf2 också bromsar åldrandet [14 -18]. Sålunda Nrf2 har ansetts som en "god" transkriptionsfaktor som är väsentlig för skydd mot oxidativ stress [19]. Men nya uppgifter har avslöjat den mörka sidan av Nrf2 [20]. Det har nyligen visats att avvikande aktivering av Nrf2-vägen förekommer ofta i cancerceller och tumörvävnader. Nrf2 inte bara skyddar normala celler från omvandla till cancerceller, men skyddar också cancerceller från cellulär stress, förbättrar cancercellöverlevnad och är associerad med cancertillväxt och progression [18]. Eftersom dessa avslöjanden har det inte funnits någon övergripande analys av uttrycksnivån för Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller, och det har inte funnits några studier som syftar till att klargöra förhållandet mellan uttrycksnivån för Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller och klinisk resultat. I den aktuella studien genomförde vi den första granskningen av uttrycksnivån för Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller och ytterligare diskutera den kliniska betydelsen av Nrf2 uttryck med avseende på anti- oxidativ stress.
Metoder
detektion av Nrf2 uttryck i magcancer cellinjer genom Western blot-analys sälja The gastric carcinoma cellinjer MKN74, MNK45, KATO-III och NUGC4 köptes från den japanska Fysikaliska och kemiska Institute, Tokyo, Japan. Cellerna inkuberades i RPMI 1640 med 10% fetalt bovint serum (FBS), 100 enheter /ml penicillin och 100 | ig /ml streptomycin vid 37 ° C i en cellinkubator. Alla celler skördades genom centrifugering, sköljdes med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och totalt protein extraherades i lyseringsbuffert. Kärnextrakt och cytoplasmiska fraktioner för Western blotting av Nrf2 framställdes med användning en kärnenergi /cytosol Fraktione Kit (K266-25, BioVison, Kalifornien, USA). Western blot-analys av Nrf2-uttryck i gastriska cancercellinjer utfördes enligt följande. Denaturerat protein extraheras från kärnan eller cytoplasman separerades på en SDS-polyakrylamidgel och överfördes till Hybond-membran, som därefter blockerades över natten i 5% skummjölk i Tris-buffrad saltlösning (TBS). Membranet inkuberades sedan med monoklonal musantikropp mot Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) vid 1: 500 utspädning för över natten. Membranet sköljdes med TBS-Tween 20 (TBST) och inkuberades med anti-mus-IgG konjugerat till pepparrotsperoxidas (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) under 15 minuter. Immunoreaktiva band visualiserades på röntgenfilm (Fuji, Japan) med hjälp av ECL-Plus detektionsreagens (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, England). Därefter för att bekräfta nukleära och cytoplasmiska fraktioner tvättades membranet med WB strippningslösningen (Nakalai Tesque, Tokyo, Japan) i 15 minuter och återsonderade för nukleära och cytoplasmiska markörer med hjälp av anti-Lamin B1 antikropp (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) och anti-α-tubulin antikropp (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000) respektive
patienter och prover
studien inkluderade 175 patienter med magcancer som hade invaderat i submukosala lager eller djupare. Samtliga patienter genomgick kurativ gastrektomi med lymfkörtel dissektion vid Kagoshima Universitetssjukhus från januari 1995 till december 2004. Bland 175 patienter, 57, 14, 99, och 5 patienter fick distala, proximal, total och partiell gastrektomi respektive. Den kvoten män till kvinnor var 116-59, och medelåldern var 66 år, som sträcker sig från 31 till 84 år. Antalet patienter med stadium I, II och III gastric cancer var 47, 33 och 95, respektive. Histopatologiskt ades 71 fall differentierade (papillär, väl differentierade och måttligt differentierad tubulär adenokarcinom) och 104 var odifferentierade (dåligt differentierade adenokarcinom, mucinous adenokarcinom och klackring cellscancer) karcinom enligt 7 e upplagan av tumör nod metastaser klassificering. Ingen av dessa patienter fick kemoterapi före operation. Skriftligt informerat samtycke erhölls från patienterna och studien godkändes av den etiska kommittén för Kagoshima Universitetssjukhuset (registreringsnummer 35-24). Denna undersökning överensstämde med de principer som anges i Helsingforsdeklarationen. Kliniskt patologiska fynd beskrivs enligt 7 e upplagan av tumör nod metastaser klassificering.
Immunhistokemisk analys av Nrf2 i magcancer och dess utvärdering
Tumörprover fixerades med 10% formaldehyd i PBS, inbäddade i paraffin, uppställd i fyra-im tjocka sektioner och monterades på objektglas för immunohistokemisk analys. Sektioner deparaffinised i xylen och dehydratiserades i en serie av graderade etanol. Den endogena peroxidasaktiviteten hos proverna blockerades genom nedsänkning av objektglasen i en 3% väteperoxidas-metanollösning under 10 minuter vid rumstemperatur. Efter tvättning tre gånger med PBS (5 min per tvätt), var sektionerna behandlades med 1% bovint serumalbumin under 30 min vid rumstemperatur för att blockera icke-specifika reaktioner. För färgning med anti-Nrf2 antikroppar, var sektioner förbehandlades med citratbuffert i 10 min vid 121 ° C i en mikrovågsugn för att hämta antigenicitet. Sektionerna tvättades tre gånger med PBS under 5 min varje gång, och blockerades sedan genom behandling med PBS innehållande 3% skummjölk i 10 min vid rumstemperatur. De blockerade sektioner inkuberades med den utspädda primära anti Nrf2 antikropp (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) i PBS vid 4 ° C över natten, följt av färgning med en streptavidin-biotin-peroxidas-kit ( Nichirei, Tokyo, Japan). Sektionerna tvättades tre gånger i PBS under 5 minuter per tvätt, och immunkomplexet visualiserades genom inkubering av sektionerna med diaminobensidin tetra-hydroklorid. Sektionerna sköljdes kortvarigt i vatten, motfärgades med hematoxylin och monterades. Noncancerous placentavävnad användes som positiv kontroll för Nrf2. Nrf2 expression bestämdes genom räkning av antalet cancerceller i vilka kärnan färgades med anti-Nrf2 antikropp. Alla immunglas utvärderades av två oberoende observatörer (YK och SI), som var omedvetna om de kliniska data och sjukdom resultatet. För att utvärdera Nrf2 uttryck, 10 representativa fält inom tumören valdes ut, och expression i totalt 1000 cancerceller (100 celler per fält) utvärderades med användning av hög effekt (× 400) mikroskopi. I fallet med samexistensen av differentierade och odifferentierade område i samma avsnitt, utvärderade vi expressionsnivån av Nrf2 i det odifferentierade området, även om området för odifferentierade är mindre än differentierad område. Den genomsnittliga märkning index för Nrf2 bedömdes enligt andelen positiva celler i varje fält. Uttryck av Nrf2 bedömdes baserat på både andelen positiva celler och intensiteten av färgning. Intensiteten av Nrf2 färgning kvantifieras med hjälp av ett tre-värde intensitetspoäng (0, 1+ eller 2+). Omfattningen av reaktivitet utvärderades enligt Solis et al. [21] och uttryckt i procent (0-100%). Immunohistokemiska poäng, som varierade från 0 till 200, beräknades genom att multiplicera värdena för intensitet och omfattningen av reaktivitet. Dessa poäng användes för att bestämma Nrf2 expressionsnivåer. Eftersom median poäng Nrf2 uttryck i magcancer var 110 i den aktuella studien var en cut-off värdet på 100 beslutat om Association.
Mellan uttrycksnivån för Nrf2 i magcancer och chemoresistance
om att utvärdera expressionsnivån av Nrf2 i magcancer påverkar chemoresistance jämförde vi uttrycksnivån för Nrf2 i gastric cancerpatienter som fick 5-fluorouracil (5-FU) adjuvant kemoterapi. Vi definierade "5FU motstånd" som magcancer som återkom efter adjuvant kemoterapi. Som ett standardprotokoll, administrera vi 5FU-adjuvant kemoterapi för patienter med stadium II eller III cancer. Vi exkluderade patienter som inte kunde fortsätta adjuvant kemoterapi på grund av biverkningar. Som ett resultat har 72 patienter inkluderades i denna analys.
Statistisk analys
Statistisk analys av gruppskillnader utfördes med hjälp av χ
2 test Fishers exakta test och Mann-Whitney U
test. Kaplan-Meier-metoden användes för överlevnadsanalys, och skillnader i överlevnad uppskattades med hjälp av log-rank test. Prognostiska faktorer undersöktes av univariata och multivariata analyser (Cox proportional hazards regressions). Ett p
värde < 0,05 ansågs indikera statistisk signifikans. Alla statistiska analyser utfördes med användning av StatFlex version 6.0 för Windows-program (StatFlex version 6.0; Artec Inc., Osaka, Japan).
Resultat
Nrf2 expression i gastriska karcinom-cellinjer
uttryck av Nrf2 inom kärn och cytoplasmatiska fraktioner av magkarcinom cellinjer analyserades med Western blotting. Nrf2 uttrycktes huvudsakligen i kärnan hos alla de gastriska cancercellinjer och liten expression observerades i cytoplasman (Figur 1). Figur 1 Nuclear faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) uttryck i gastric carcinoma cellinjer. Nrf2-proteinexpression med nukleära och cytoplasmiska extrakt av de gastriska cellinjer MKN74, MNK45, KATO-III, och NUGC4 analyserades med Western blotting. Blotten återprobades med anti-Lamin B1 och anti-α-tubulin-antikroppar som användes som positiva kontroller för kärnan och cytoplasman, respektive. Nukleära och cytoplasmiska fraktioner tydligt åtskilda. Den Nrf2 protein identifierades huvudsakligen i kärnan av alla gastriska cancercellinjer. Little Nrf2 detekterades i cytoplasman.
Nrf2 immunhistokemisk uttryck i magcancer och dess samband med kliniskt patologiska egenskaper
Vi bestämde nästa uttryck och subcellulära lokalisering av Nrf2 i 175 paraffininbäddade arkiv magcancer vävnader med hjälp av immunohistokemi. De kliniskt patologiska egenskaper hos de patienter visas i tabell 1. Nrf2 immunoreaktivitet detekterades huvudsakligen i kärnan (figur 2). Ytterligare utvärdering av kärn Nrf2 immunoreaktivitet visade att Nrf2 immunoreaktiva mönstret skiljer sig mellan differentierade gastric cancerceller och odifferentierade gastric cancerceller i samma prov. Således, odifferentierade gastric cancerceller var mer benägna att visa positiva Nrf2 immunoreaktivitet jämfört med differentierade gastric cancerceller. Av de 175 patienter, 108 (61,7%) uppvisade en Nrf2 immunhistokemisk poäng som är större än 100 och klassificerades som Nrf2 positiv. De återstående 67 (38,3%) patienter klassificerades som Nrf2 negativa gruppen. Tabell 2 visar sambandet mellan Nrf2 uttryck och kliniskt patologiska funktioner. Nrf2 positivt uttryck var signifikant associerad med kön, tumörstorlek, tumördjup, lymfkörtelmetastaser, lymphovascular invasion, histologisk klassificering och kliniska stadiet av gastric cancer.Table 1 Patient egenskaper
Nej
Kön
Man
116
Kvinna
59
Ålder
Medelvärde
66
räckvidd
31-84
Operation
99
Totalt gastrektomi
Distal
56
Proximal
14
Partiell
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB,
IIIC 95
Histologi
differentierade
71
odifferentierad
104
Stage bedömdes enligt 7: e upplagan av tumör nod metastaser klassificering.
Figur 2 Immunfärgning av nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) i kliniska magsäckscancer prover. Representativ immunfärgning av Nrf2 i (a) Positiv kontroll, noncancerous placental vävnad; (B) normal mage vävnad; (c - e) Gastric cancervävnader; (C) negativ färgning av Nrf2, (d) svag färgning (1) av Nrf2, (e) stark färgning (2) av Nrf2 (ursprunglig förstoring, × 400). Expression av Nrf2 i kliniska prover. Immunfärgning av Nrf2 (ursprunglig förstoring, × 400) katalog Tabell 2 Samband mellan uttryck av nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) och kliniskt patologiska faktorer
kliniska faktorer
Expression av Nrf2
P- värde
Negativ
Positiv
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
vid Age
ns Hotel < 65
22
47
≧ 65
45
61
Kön Hotel < 0,05
male
51 65
kvinnliga
16
43
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP Hotel < 0,01 Hotel < 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumör djup Hotel < 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4A, T4B
36 89
lymfnodmetastaser Hotel < 0,05
Ja sälja 35
74
Ingen
32
34
Stage Hotel < 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invasion Hotel < 0,05
Ja
49
90
Ingen
18
14
Histologi Hotel <0,01
differentierade
37
34
odifferentierad
30
74
Nrf2 immunhistokemisk uttryck i magcancer och dess samband med 5FU motstånd
Tabell 3 visar sambandet mellan Nrf2 uttryck och 5FU motstånd i 72 patienter som behandlades med 5-FU-adjuvant kemoterapi. Av dessa 72 patienter, 59 var Nfr2 positiva och 13 var Nfr2 negativa. Ut ur de 59 Nfr2 positiva patienter, 43 (72,9%) patienter 5FU resistenta, medan endast 5 (38,5%) av de 13 Nrf2 negativa patienter var 5FU resistenta. Skillnaden mellan den procentuella andelen av Nrf2 positiva och Nrf2 negativa patienter i 5FU motståndsgruppen var statistiskt signifikant (p = 0,024) .table 3 Korrelation mellan uttryck av nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) och 5-Fluorouracil (5FU) chemosensitivity
5FU känslighet
Expression av Nrf2
P- värde
Negativ
Positiv
resistent
5
43
0,024
Känslig
8
16
överlevnads~~POS=TRUNC analys~~POS=HEADCOMP
Kaplan Meier-analys indikerade att den totala överlevnaden av Nrf2 positiva gruppen var signifikant sämre än det av Nrf2 negativa gruppen (61% jämfört med 79% respektive) (p < 0,01) (Figur 3). Figur 3 Postoperativa utfallen av 175 patienter med ventrikelcancer enligt nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2 (Nrf2) uttryck. Kaplan Meier-analys av de postoperativa resultaten av 175 gastric cancerpatienter enligt Nrf2 uttryck. Överlevnadskurvor konstruerades för de 175 patienter som delades in Nrf2-positiva och Nrf2-negativa grupper. Den Nrf2-positiva gruppen hade en signifikant sämre utfall än Nrf2-negativa gruppen (p < 0,01).
Dessutom tumördjup, tumörstorlek, lymfkörtelmetastaser, histologisk klassificering, var lymphovascular invasion också betydande faktorer för överlevnad baserat på univariat analys (tabell 4) .table 4 univariata och multivariata analyser av prognostiska faktorer i magcancer
kliniska faktorer
univariat
Multivariate
p

Multivariate P
Hazard ratio
95% konfidensintervall

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11,44
Tumörstorlek Hotel < 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
Nodal engagemang Hotel < 0,01
0,03
5,02
1,18 - 21,41
Lymphovascular invasion Hotel < 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
histologi Hotel < 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2 Hotel < 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, nukleär faktor (erytroid-2) -relaterade faktor 2.
Vi utförde också multivariat analys av dessa sex faktorer, bland annat Nrf2 som en oberoende prognostisk markör. Lymfkörtelmetastaser valdes som oberoende prognostisk markör. Emellertid var Nrf2 expression inte valt (tabell 4) Diskussion
antioxidant Nrf2, som fungerar för att skydda normala celler från många skadliga oxidativa förhållanden.
, Har ansetts vara en viktig cellulär försvarsmekanism. Emellertid har många papper indikerade överuttryck av Nrf2 och dess nedströms gener i många typer av human cancer [19-25]. Dessa rapporter visade att Nrf2 inte bara skyddar normala celler från omvandla till cancerceller, men kan också underlätta cancercellproliferation och förlänga överlevnaden [18]. Denna rapport är den första rapporten som visar ett samband mellan uttrycksnivån för Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller och kliniskt patologiska fynd.
I den aktuella studien var Nrf2 immunoreaktivitet detekteras huvudsakligen i kärnan, inte bara in vivo men också in vitro i ett antal av gastriska cancercellinjer. Det har spekulerats att ihållande kärn uttryck av Nrf2 i magcancer cellinjer resulterar i produktion av antioxidanter, som ger dessa cancercellinjer en hög förmåga att motstå reaktiva syreradikaler (ROS). Ett liknande fenomen rapporterades av Ma et al. för cervical cancervävnad De rapporterade att upstaging av cervical cancer leder inte bara till en högre koncentration av Nrf2 i kärnan av cancercellerna, men också att en högre koncentration av nedströms antioxidant svarsproteiner [22]. Det kan därför vara teoretiskt föreslås att gastric cancercellinjer med kärn Nrf2 uttryck skulle ha en högre malign potential genom denna mekanism.
Vi identifierade immunohistokemiskt en hög grad av Nrf2 uttryck i magcancer kliniska prover (tabell 2). Således var 61,7% av proverna Nrf2 positiv, vilket var högre än andelen positiva prover rapporterades i icke-småcellig lungcancer (26%) [21] eller i gallblåsan cancer (23%) [23].
Vidare fanns signifikanta korrelationer mellan Nrf2 uttryck och flera kliniskt patologiska faktorer såsom tumörstorlek, tumördjup, lymfatiska invasion, lymfkörtelmetastaser och tumör histologi. Våra fynd är i enlighet med de av Wang et al. som rapporterade att uttryck av Nrf2 i gallblåsan cancer var signifikant associerad med differentiering, scen, och lymfkörtelmetastaser [23].
Nyligen Xiu-Freg Hu et al. liknande undersökt Nrf2 uttryck i magcancer [26]. De föreslog också en prognostisk betydelse Nrf2 uttryck i enlighet med våra resultat. Men, rapporterade de att Nrf2 immunoreaktivitet upptäcktes i cytoplasman men att det inte upptäcks i kärnan. Denna annat resultat kan bero på det faktum att de använde olika antikroppar från de som används i föreliggande studie. Det har väl dokumenterat att Nrf2 utövar sin antioxidant förmåga endast när det translokerar till kärnan från cytoplasman [27]. Vår immunoblotting analys visade att Nrf2 var övervägande närvarande i kärnan av cellerna i gastriska cancercellinjer. Vi ansåg därför att den ihållande överuttryck av Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller troligen arbetat som en antioxidant som skyddade mag cancerceller från ROS, och att Nrf2 kärn uttryck kan återspegla aggressivt beteende av magcancer. Baserat på denna teori, ansåg vi det nödvändigt att utvärdera kärnvapen, men inte cytoplasmisk expression av Nrf2 i kliniska prover av magcancer.
I denna studie visade vi prognostiska värdet av Nrf2 uttryck genom univariat analys. Även Nrf2 positivitet inte valdes som en oberoende prognostisk markör av multivariat analys, kan detta fynd förklaras av möjligheten att Nrf2 positivitet signifikant påverkas av körtelinvolvering som ansågs vara dålig prognostisk faktor. Solis et al. och Wang et al. liknande rapporterade att Nrf2 uttryck förknippas med dålig överlevnad i icke-småcellig lungcancer [21] och i gallblåsan cancer [23], respektive. Dessa data antyder att Nrf2 expression skulle kunna användas som en signifikant prognostisk parameter för förutsägelse av överlevnaden av postoperativa patienter gastric cancer.
Det har nyligen rapporterats att hög Nrf2 uttryck kan underlätta och förlänga cancercellöverlevnad efter kemoterapi mot cancer och strålningsterapi [14,16,19-22,28-33]. Våra resultat visade också att positiv Nrf2 uttryck var signifikant associerade med resistens mot 5FU adjuvant kemoterapi. Dessa kombinerade resultat kan innebära att, genom att utvärdera uttrycksnivån för Nrf2 i kärnan av gastriska cancerceller, kan det vara möjligt att förutsäga de bästa kandidaterna som kan dra nytta av att ta emot inte bara adjuvant kemoterapi utan också neoadjuvant kemoterapi.
Genetiska eller funktionell hämning av Nrf2 har visat sig resultera i förtrycket av cellulära Nrf2 -regulated antioxidant enzymer, inklusive cellulär glutation, tioredoxin och icke-proteintioler. Slutligen kan dessa förändringar återställa känsligheten hos cancercellerna att cancermotverkande läkemedel och strålningsterapi. Sålunda Cho et al. rapporterade att funktionell hämning av Nrf2 leder till sensibilisering av cancerceller till alkylerande anticancermedel [31]. Dessutom Ma et al. rapporterade att kombinationen av cisplatin och knockdown av Nrf2 dramatiskt och signifikant hämmade tumörtillväxt in vivo [22].
Med dessa bevis hänsyn, är det mycket troligt att en ny kemoterapeutisk protokoll som innebär Nrf2 förordningen kommer att införas inom en snar framtida. Till exempel kan effekten av kemoterapi först förutsägas genom utvärdering av Nrf2 uttryck och, om något av Nrf2 positiva patienter bedöms vara resistent mot kemoterapi, kan det vara möjligt att uppnå tillräcklig effekt av kemoterapi vid samtidig hämning av Nrf2. Därför har en ny kemoterapeutisk protokoll som innehåller antioxidant terapi kan vara en användbar metod för att lösa ett kliniskt problem.
Slutsatser
Nrf2 uttryck är nära förknippad med kliniskt patologiska faktorer och prognosen för patienter med ventrikelcancer. Nrf2 expression i magcancer kan vara användbara för utvärdering av biologisk malign potential, vilket kan medieras delvis av Nrf2 förstärkning av antioxidanten förmågan hos gastriska cancerceller. Antioxidant terapi kan vara en lovande strategi för behandling av positiva patienter Nrf2 magcancer
Förkortningar
Nrf2.
NF-E2-besläktad faktor två
OS:
Oxidativ stress
Keap en
Kelch liknande ECH-associerat protein 1
ÄR:
antioxidant svarselement
FBS:
fetalt bovinserum
PBS:
Fosfatbuffrad saltlösning

TBS:
Tris-saltlösning
TEST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-fluorouracil
ROS:
reaktiva syreradikaler
förklaringar
Tack
Vi förklarar att varje författare fick ingen Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Lymfangiogenes i ventrikelcancer regleras genom Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D axel
• Bestämmelse av gastric cancerscreening närvaro i Korea: en multi-level analys