Clinicopathological Bedeutung der Kernfaktor (erythroide-2) -related Faktor 2 (Nrf2) Expression in Magen cancer

Clinicopathological Bedeutung der Kernfaktor (erythroide-2) -bezogene Faktor 2 (Nrf2) Expression in Magenkrebs
Zusammenfassung
Hintergrund
der Transkriptionsfaktor nuclear factor (erythroid-2) -bezogene factor 2 (Nrf2) wurde ursprünglich als ein kritischer Regulator der intrazellulären Antioxidantien identifiziert und der Phase II Entgiftungsenzyme durch seine transkriptionale hoch~~POS=TRUNC von vielen Antioxidationsreaktion Element (ARE) -haltigen Genen. Nrf2 schützt nicht nur normale Zellen, sondern auch Krebszellen von zellulären Stress und verbessert Überleben von Krebszellen. Einige Studien haben gezeigt, dass Nrf2-Expression in Krebspatienten klinische Bedeutung hat. Allerdings hat es in Magen-Darm-Krebszellen keine umfassende Analyse der nuklearen Expression von Nrf2 gewesen. In dieser Studie wollten wir auf immunhistochemisch die Expression von Nrf2 zu bewerten und ihre klinische Bedeutung bei Magenkrebs zu beurteilen.
Methoden Insgesamt 175 Patienten mit Magenkrebs
die R0 Gastrektomie mit Standard Lympknotendissektion erhalten eingeschrieben waren. Wir immunhistochemisch Nrf2-Expression in den in Paraffin eingebetteten chirurgisch reseziert Exemplare dieser 175 Patienten ausgewertet. Gruppenunterschiede wurden mit dem χ analysiert
2-Test, Fisher-Test und der Mann-Whitney-U
Test. Assoziationen zwischen Nrf2-Expression und klinisch-pathologischen Eigenschaften, einschließlich der klinischen Ergebnisse wurden unter Verwendung von uni- bewertet und multivariate Analysen und Kaplan-Meier-Kurven mit dem Log-Rank-Test auf.
Ergebnisse | Nrf2 Immunreaktivität wurde überwiegend im Zellkern identifiziert von Magenkrebszellen. (; 0,05 für alle p <) Nrf2 Positivität war eng mit der Größe des Tumors, Tumortiefe, Lymphknotenmetastasen, lymphovascular Invasion, Histologie und Stadium verbunden. Ein Log-Rank-Test zeigte, dass die Gesamtüberlebenszeit der Nrf2-positive Gruppe, die deutlich schlechter war als der Nrf2-negativen Gruppe (p < 0,01). Und positive Nrf2-Expression signifikant mit Resistenz gegenüber 5-FU-basierten adjuvanten Chemotherapie (p = 0,024).
Schlussfolgerungen
Nrf2-Expression wurde positiv mit aggressiven Tumorverhalten bei Magenkrebs in Verbindung gebracht. Dieses Ergebnis legt nahe, dass Nrf2-Expression in Magenkrebs ist ein potentieller Indikator für schlechtere Prognose.
Schlüsselwörter NF-E2-ähnlichen Faktor 2 Magenkrebs Antioxidantien hintergrund und Magenkrebs ist die vierthäufigste Magen-Darm-Krebs und die zweithäufigste tödliche Magen-Darm-Krebs in der Welt. Ostasiatischen Ländern, darunter Japan gehören zu den höchsten Risikogebiete für Magenkrebs [1,2]. In Japan hat sich die Einrichtung von Massenscreening mit Foto Fluoroskopie oder Magen-Darm-fibroscopy führte zu Magenkrebs in einem frühen Stadium diagnostiziert. Eine günstige Prognose ist für diese Patienten mit Magenkrebs nach kurativer Operation oder endoskopische Behandlung zu erwarten. Allerdings zeigen einige Patienten einen ungünstigen Verlauf trotz kurativer Resektion zu erhalten. Die postoperative Ergebnis von Magenkrebs hängt stark von TNM Faktoren [3,4]. Zusätzlich zu diesen kritischen klinisch-pathologischen Faktoren ist die Prognose von Magenkarzinom durch mehrere biologische Variablen beeinflusst. In diesem Zusammenhang ist es notwendig, neue krebsbedingte Faktoren zu finden, die als Marker für die Diagnose und Behandlung von Magenkrebs verwendet werden kann. Es wird allgemein angenommen, dass oxidativer Stress (OS) in der Pathophysiologie von degenerativen Erkrankungen beteiligt ist. Darüber hinaus werden die Erzeugung und Steigerung des OS und sekundären DNA oxidativer Schädigung auch auf die Beschädigung und maligne Transformation der Magenschleimhaut werden im Zusammenhang bekannt [5]. So wurde OS als eine wichtige Rolle in der Karzinogenese von Magenkrebs zu spielen [5,6].
Der Transkriptionsfaktor Nuclear Factor (erythroide-2) -related Faktor 2 (Nrf2), die eine Grund ist redoxsensitiven bZIP Transkriptionsfaktor, der ursprünglich als entscheidender Regulator der intrazellulären Antioxidantien identifiziert wurde und der Phase-II-Entgiftungsenzyme durch die Transkriptions upregulation vieler Antioxidans-Response-Element (ARE) enthaltenden Gene [7-9]. Unter basalen Bedingungen wird Nrf2 zum Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1) gebunden ist, eine Cul3 Basis E3 Ubiquitin-Ligase-Adapter, der Nrf2 Ubiquitinierung und Proteasom-abhängigen Abbau reguliert [10].
Nach Exposition von Zellen gegen oxidativen Stress oder chemopräventiven Verbindungen, transloziert Nrf2 an den Kern bildet ein Heterodimer mit seinem obligatorischen Partner Maf, bindet an die ARE-Sequenzen in DNA und aktiviert die Transkription nachgeschalteter Gene wie Antioxidantien und Phase-II-Entgiftungsenzyme [8,11-13] . Die wichtige biologische Rolle von Nrf2 wird durch Befunde demonstrieren Nrf2-abhängige Schutz gegen viele Krankheiten des Menschen oder pathologischen Zuständen wie Krebs, neurodegenerativen Erkrankungen, Herz-Kreislauf- Erkrankungen, Entzündungen, Lungenfibrose, akute Lungenverletzung und Nrf2 auch verlangsamt den Prozess des Alterns unterstrichen [14 -18]. So Nrf2 wurde als "gut" Transkriptionsfaktor betrachtet, die zum Schutz gegen oxidativen Stress wesentlich ist [19]. Allerdings hat entstehenden Daten, die die dunkle Seite von Nrf2 enthüllt [20]. Es wurde kürzlich gezeigt, dass aberrante Aktivierung des Nrf2-Weg häufig in Krebszellen und Tumorgeweben auftritt. Nrf2 schützt nicht nur normale Zellen aus in Krebszellen verwandeln, sondern schützt auch Krebszellen von zellulären Stress, verbessert das Überleben von Krebszellen und ist mit Krebswachstum und Progression [18]. Da diese Offenbarungen, hat es keine umfassende Analyse des Expressionsniveaus von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen, und es wurden keine Studien zur Klärung des Zusammenhangs zwischen der Expression von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen und klinische Ziel gewesen Ergebnis. In der aktuellen Studie führten wir die erste Prüfung des Expressionsniveaus von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen und weiter die klinische Bedeutung der Nrf2-Expression gegen oxidativen Stress zu anti- diskutieren.
Methoden
Nachweis von Nrf2-Expression in Magenkrebs-Zelllinien durch Western-Blot-Analyse
die Magenkarzinomzelllinien MKN74, MNK45, KATO-III und NUGC4 wurden von der japanischen Physikalische und chemische Institute, Tokyo, Japan erworben. Die Zellen wurden in RPMI 1640 mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) inkubiert, 100 Einheiten /ml Penicillin und 100 ug /ml Streptomycin bei 37 ° C in einem Zellinkubator. Alle Zellen wurden durch Zentrifugation geerntet, mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gespült und Gesamtprotein wurde in Lysepuffer extrahiert. Kernextrakte und Cytoplasma-Fraktionen für Western-Blot von Nrf2 wurden unter Verwendung eines Atom /Cytosol Fractionation Kit (K266-25, BioVison, Kalifornien, USA). Western-Blot-Analyse von Nrf2-Expression in Magenkrebszelllinien wurde wie folgt ausgeführt. Denaturiertem Protein aus dem Kern oder Cytoplasma extrahiert wurde auf einem SDS-Polyacrylamidgel aufgetrennt und auf Hybond-Membran überführt, die dann über Nacht in Tris-gepufferter Salzlösung (TBS) in 5% Magermilch blockiert. 500 Verdünnung für über Nacht: Die Membran wurde dann mit monoklonalen Maus-Antikörper gegen Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) bei 1 inkubiert. Die Membran mit TBS-Tween 20 (TBST) gewaschen und mit anti-Maus-IgG, konjugiert an Meerrettich-Peroxidase (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) für 15 Minuten gespült wurde. Immunreaktive Banden wurden auf Röntgenfilm (Fuji, Japan) unter Verwendung von ECL-Plus Nachweisreagenzien (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, England) sichtbar gemacht. Anschließend nuklearen und zytoplasmatischen Fraktionen zu bestätigen, wurde die Membran mit WB Ausstreiflösung (Nakalai Tesque, Tokyo, Japan) für 15 Minuten gewaschen und für Kern- und cytoplasmatische Marker-re sondiert unter Verwendung des anti-Lamin B1-Antikörper (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) und die Anti-α-Tubulin-Antikörper (CP06, Calbiochem, MA, USA., 1: 1000), die jeweils
Patienten und Proben
Diese Studie umfasste 175 Patienten mit einem Adenokarzinom des Magens, die eingedrungenen in Submukosa oder tiefer. Alle Patienten wurden kurative Gastrektomie mit Lymphknotendissektion in Kagoshima University Hospital von Januar 1995 bis Dezember 2004. Unter 175 Patienten, 57, 14, 99 und 5 Patienten erhielten distalen, proximalen, vollständige und teilweise Gastrektomie sind. Das Verhältnis Männer zu Frauen betrug 116 bis 59, und das Durchschnittsalter lag bei 66 Jahren zwischen 31 und 84 Jahren. Die Anzahl der Patienten mit Stadium I, II und III Magenkarzinome betrug 47, 33 bzw. 95. Histopathologisch wurden 71 Fälle zu unterscheiden (papilläre, gut differenzierte und mäßig Rohr Adenokarzinom differenziert) und 104 waren undifferenziert (schlecht differenzierten Adenokarzinom, muzinöse Adenokarzinom und Siegelringzellkarzinom) Karzinome nach dem 7 th Edition von Tumorknoten Metastasierung Einstufung. Keiner dieser Patienten erhielten eine Chemotherapie vor der Operation. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von den Patienten erhalten, und die Studie wurde von der Ethikkommission der Kagoshima University Hospital (Registrierungsnummer 35-24) zugelassen. Diese Untersuchung entsprach den Grundsätzen der Deklaration von Helsinki skizziert. Clinicopathological Befunde werden die 7 gemäß th Edition von Tumorknoten Metastasierung Klassifizierung beschrieben.
Immunhistochemische Analyse von Nrf2 in Magenkrebs und seine Bewertung
Tumorproben mit 10% Formaldehyd in PBS fixiert wurden, in Paraffin eingebettet, geschnitten in 4 um dicke Abschnitte und montiert auf Glasobjektträger für immunhistochemische Analyse. Die Schnitte wurden in Xylol und dehydratisiert in einer Serie von abgestuften Ethanol deparaffinised. Die endogene Peroxidase-Aktivität der Proben wurde durch Eintauchen der Objektträger in einer 3% Wasserstoffperoxidase-Methanol-Lösung für 10 min bei Raumtemperatur blockiert. Nach dreimaligem Waschen mit PBS (5 min pro Waschung) wurden die Schnitte für 30 min bei Raumtemperatur mit 1% Rinderserumalbumin behandelt unspezifische Reaktionen zu blockieren. Zum Färben mit anti-Nrf2 Antikörper mit Citratpuffer Schnitte wurden in einem Mikrowellenofen bei 121 ° C für 10 min vorbehandelt Antigenität abzurufen. Die Schnitte wurden für jeweils 5 min dreimal mit PBS gewaschen und wurden dann durch Behandlung mit PBS blockiert, für 10 min bei Raumtemperatur 3% Magermilch enthält. Die blockierten Abschnitte wurden mit dem verdünnten primären Anti Nrf2-Antikörper (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) inkubiert in PBS bei 4 ° C über Nacht, gefolgt von mit einem Streptavidin-Biotin-Peroxidase-Kit-Färbung ( Nichirei, Tokyo, Japan). Die Schnitte wurden für 5 Minuten pro Wasch dreimal in PBS gewaschen und der Immunkomplex wurde durch Inkubieren der Schnitte mit Diaminobenzidin tetra-Hydrochlorid sichtbar. Die Schnitte wurden kurz in Wasser, mit Hämatoxylin gegengefärbt gespült und montiert. Noncancerous Plazentagewebe wurde als positive Kontrolle für Nrf2 verwendet. Nrf2-Expression wurde durch Zählen der Anzahl von Krebszellen bestimmt, in dem der Kern mit dem Anti-Nrf2-Antikörper gefärbt wurde. Alle immunhistochemisch Dias wurden von zwei unabhängigen Beobachtern (YK und SI) ausgewertet, die keine Ahnung von den klinischen Daten und Krankheitsverlauf waren. Zu Nrf2 Ausdruck, 10 repräsentative Felder innerhalb des Tumors, wurden ausgewählt, und die Expression in insgesamt 1000 Krebszellen (100 Zellen pro Feld) auszuwerten wurde mit hoher Leistung (× 400) Mikroskopie ausgewertet. Im Falle der Koexistenz von differenzierten und undifferenzierten Bereich in demselben Abschnitt werteten wir die Expressionsniveaus von Nrf2 im undifferenzierten Bereich, obwohl der Bereich von undifferenzierten kleiner als differenzierte Bereich. Die durchschnittliche Markierungsindex von Nrf2 wurde nach dem Anteil der positiven Zellen in jedem Bereich beurteilt. Expression von Nrf2 wurde basierend auf sowohl der Anteil der positiven Zellen und die Intensität der Färbung bewertet. Die Intensität der Nrf2-Färbung wurde mit einem Score von drei Intensitätswert quantifiziert (0, 1+ oder 2+). Das Ausmaß der Reaktivität wurde gemäß Solis et al ausgewertet. [21] und wurde als Prozentsatz (0-100%) ausgedrückt. Immunhistochemischen Ergebnisse, die 0-200 reichten, wurden durch Multiplizieren der Werte der Intensität und das Ausmaß der Reaktivität berechnet. Diese Werte wurden verwendet, um Nrf2 Expressionsniveaus zu bestimmen. Da die mittlere Punktzahl von Nrf2-Expression in Magenkrebs 110 Studie in der anwesend war, ein Cut-off-Wert von 100 wurde beschlossen.
Assoziation zwischen der Expression von Nrf2 in Magenkrebs und Chemoresistenz
Um zu bewerten, ob die Expressionsniveau von Nrf2 in Magenkrebs wirkt Chemoresistenz, wir das Expressionsniveau von Nrf2 in Magenkrebs-Patienten verglichen, die 5-Fluorouracil (5FU) basierte adjuvante Chemotherapie erhalten. Wir definierten "5FU Widerstand", wie Magenkrebs, die nach einer adjuvanten Chemotherapie wieder aufgetreten. Als Standardprotokoll, verabreichen wir 5FU-basierten adjuvanten Chemotherapie bei Patienten mit Stadium II oder III Krebs. Ausgeschlossen wurden Patienten, die nicht in der Lage waren zu einer adjuvanten Chemotherapie aufgrund von Nebenwirkungen fortzusetzen. Als Ergebnis wurden 72 Patienten in dieser Analyse eingeschrieben. Die statistische Analyse
Die statistische Analyse der Unterschiede zwischen den Gruppen durchgeführt wurde unter Verwendung des χ
2-Test, der exakte Test nach Fisher und der Mann-Whitney-U
Test. Die Kaplan-Meier-Methode wurde für das Überleben Analyse verwendet, und Unterschiede im Überleben wurden mit Hilfe des Log-Rank-Test geschätzt. Die prognostische Faktoren wurden durch univariate und multivariate Analysen (Cox-Proportional-Hazards-Regressionsmodell) untersucht. A p
Wert < 0,05 wurde als statistisch signifikant anzuzeigen. Alle statistischen Analysen wurden unter Verwendung der StatFlex Version ausgeführt 6.0 für Windows-Software (StatFlex Version 6.0; Artec Inc., Osaka, Japan).
Ergebnisse | Nrf2-Expression in Magenkarzinomzelllinien
Die Expression von Nrf2 in Kern und cytoplasmatische Fraktionen von Magenkarzinomzelllinien wurde durch Western-Blotting analysiert. Nrf2 wurde vor allem in den Zellkern von allen der Magenkrebs-Zelllinien und wenig Ausdruck ausgedrückt wurde im Cytoplasma (Abbildung 1) beobachtet. Abbildung 1 Kernfaktor (erythroide-2) -bezogene Faktor 2 (Nrf2) Expression in Magenkarzinomzelllinien. Nrf2-Protein-Expression in der Kern- und Cytoplasma-Extrakte der Magen-Zelllinien MKN74, MNK45, KATO-III, und NUGC4 wurde durch Western-Blot getestet. Der Blot wurde erneut sondiert mit anti-Lamin B1 und anti-α-Tubulin-Antikörper, die als positive Kontrollen für den Kern und Plasma verwendet wurden, respectively. Kern- und Cytoplasma-Fraktionen wurden klar getrennt. Das Nrf2-Protein wurde vor allem in den Zellkern aller Magenkrebszelllinien identifiziert. Kleine Nrf2 wurde im Zytoplasma nachgewiesen. Nrf2 immunhistochemischen Expression in Magenkrebs und seine Verbindung mit klinisch-pathologischen Eigenschaften online kaufen Wir neben den Ausdruck und die subzelluläre Lokalisation von Nrf2 in 175 Paraffin eingebettete Archivmagenkrebsgewebe bestimmt, Immunhistochemie. Die klinisch-pathologischen Charakteristika der Patienten sind in Tabelle 1 gezeigt Nrf2-Immunreaktivität wurde hauptsächlich in den Zellkern (2) festgestellt. Eine weitere Bewertung der Kern Nrf2-Immunreaktivität zeigte, daß das Nrf2 immunoreaktiv Muster zwischen differenzierten Magenkrebszellen und undifferenzierte Magenkrebszellen in der gleichen Probe unterschiedlich. So waren undifferenziert Magenkrebszellen eher positive Nrf2 Immunreaktivität anzuzeigen im Vergleich zu differenzierten Magenkrebszellen. Von den 175 Patienten, 108 (61,7%) zeigten eine Nrf2 immunhistochemischen Punktzahl von mehr als 100 und wurden als Nrf2 positiv eingestuft. Die restlichen 67 (38,3%) der Patienten wurden als Nrf2 negativen Gruppe eingestuft. Tabelle 2 zeigt die Korrelation zwischen Nrf2-Expression und klinisch-pathologischen Eigenschaften. Nrf2 positiven Ausdruck war signifikant mit Geschlecht, Tumorgröße, Tumortiefe, Lymphknotenmetastasen, lymphovascular Invasion, histologische Klassifizierung und klinischen Stadium von Magen cancer.Table 1 Patientencharakteristika assoziiert
Nr
Geschlecht
männlich
116
Weiblich
59
Alter
Mittlere
66
Bereich
31-84
Betrieb
99
Gesamt Gastrektomie
Distal 56
proximale
14
Teil
6 Bühne
IA, IB
47
IIA, IIB
33

IIIA, IIIB,
IIIC 95
Histologie
Differenzierte
71
Undifferenzierte
104
Bühne wurde nach der 7. Auflage von Tumorknoten Metastasierung Klassifizierung bewertet.
Abbildung 2 Immunostaining von nuclear factor (erythroide-2) -related Faktor 2 (Nrf2) in der klinischen Magenkrebs Proben. Repräsentative Immunfärbung von Nrf2 in (a) Positive Kontrolle, noncancerous Plazentagewebe; (B) normalen Magengewebe; (C - e) Magenkrebsgewebe; (C) eine negative Färbung von Nrf2, (d) eine schwache Färbung (+1) von Nrf2, (e) eine starke Färbung (+2) von Nrf2 (Originalvergrößerung, × 400). Expression von Nrf2 in klinischen Proben. Immunostaining von Nrf2 (Originalvergrößerung, × 400)
Tabelle 2 Korrelation zwischen der Expression von nuclear factor (erythroide-2) -bezogene Faktor 2 (Nrf2) und klinisch-pathologischen Faktoren
Klinische Faktoren
Expression von Nrf2
P- Wert
Negative
Positive
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
Alter
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Geschlecht
< 0.05
männlich
51
65
weiblich
16
43
Tumorgröße
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor Tiefe
< 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
Lymphknotenmetastasen
< 0,05
Ja 35
74
No
32
34
Bühne
< 0,01
IA, IB 28
19
IIA, IIB 12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
lymphovascular Invasion
< 0,05
Ja
49
90
Kein
18
14
Histologie
< 0,01
Differenzierte
37
34
Undifferenzierte 30
74
Nrf2 immunhistochemischen Expression in Magenkrebs und seine Verbindung mit Tabelle
5FU Widerstand 3 zeigt die Korrelation zwischen Nrf2-Expression und 5FU Widerstand in den 72 Patienten, die mit 5FU-basierten adjuvanten Chemotherapie behandelt wurden. Von diesen 72 Patienten waren 59 Nfr2 positiv und 13 waren Nfr2 negativ. Von den 59 Nfr2 positiven Patienten, 43 (72,9%) Patienten waren 5FU resistent, während nur 5 (38,5%) der 13 Nrf2-negativen Patienten 5FU resistent waren. Die Differenz zwischen dem Anteil der positiven und Nrf2 Nrf2-negativen Patienten in der 5FU Widerstandsgruppe war statistisch signifikant (p = 0,024) .Tabelle 3 Korrelation zwischen der Expression von nuclear factor (erythroide-2) -bezogene Faktor 2 (Nrf2) und 5-Fluorouracil (5FU) Chemosensitivitäts
5FU Empfindlichkeit Expression von Nrf2
P- Wert

Negative
Positive
beständig
5
43
0,024
Sensitive
8 16
Survival Analyse
Kaplan-Meier-Analyse zeigte, dass die Gesamtüberlebenszeit der Nrf2 positiven Gruppe war signifikant schlechter als dass der Nrf2-negativen Gruppe (61% vs. 79% bzw.) (p < 0.01) (Abbildung 3). Abbildung 3 postoperative Ergebnisse von 175 Patienten mit Magenkrebs nach nuclear factor (erythroide-2) -related Faktor 2 (Nrf2) Ausdruck. Kaplan-Meier-Analyse der postoperativen Ergebnisse von 175 Patienten Magenkrebs zu Nrf2-Expression nach. Überlebenskurven wurden für die 175 Patienten aufgebaut, die in Nrf2-positive und Nrf2-negativen Gruppen eingeteilt. Die Nrf2-positive Gruppe einen deutlich schlechteren Ergebnis als der Nrf2-negativen Gruppe (p < 0,01) hatte.
Außerdem Tumordicke, Tumorgröße, Lymphknotenmetastasen, histologischen Klassifikation, waren lymphovascular Invasion auch wichtige Faktoren für das Überleben basierend auf univariaten Analyse (Tabelle 4) .Tabelle 4 univariate und multivariate Analysen von prognostischen Faktoren bei Magenkrebs
Klinische Faktoren
univariate
multivariate
p

Multivariate P
Hazard Ratio
95% Konfidenzintervall

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tumorgröße
< 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
Nodal Beteiligung
< 0,01
0,03
5,02
1.18 - 21.41
lymphovascular Invasion
< 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
Histologie
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, nuclear factor (erythroide-2) -related Faktor 2.
Wir führten auch multivariate Analyse dieser sechs Faktoren Nrf2 als unabhängiger prognostischer Marker inklusive. Lymphknotenmetastasen wurde als unabhängiger prognostischer Marker ausgewählt. Jedoch wurde Nrf2-Expression nicht ausgewählt (Tabelle 4).
Discussion
das Antioxidans Nrf2, die Funktionen normalen Zellen aus zahlreichen Beschädigung oxidativen Bedingungen zu schützen, wurde als ein wichtiger zellulärer Abwehrmechanismus zu sein. Allerdings haben viele Papiere, die eine Überexpression von Nrf2 und seiner stromabwärtigen Gene in vielen Arten von Krebs beim Menschen indiziert [19-25]. Diese Berichte zeigten, dass Nrf2 schützt nicht nur normale Zellen vor Umwandlung in Krebszellen, sondern kann auch Krebszellproliferation erleichtern und verlängern das Überleben [18]. Der vorliegende Bericht ist der erste Bericht einer Assoziation zwischen der Expression von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen und klinisch-pathologischen Befunde zeigen.
In der aktuellen Studie wurde Nrf2 Immunreaktivität überwiegend im Zellkern nachgewiesen, nicht nur in vivo aber auch in vitro in einer Reihe von Magenkrebs-Zelllinien. Es hat sich persistent Kernexpression von Nrf2 in Magenkrebszelllinien führt zur Produktion von Antioxidantien spekuliert worden, die reaktive Sauerstoff auf diesen Krebszelllinien eine hohe Fähigkeit verleihen Spezies (ROS) zu widerstehen. Ein ähnliches Phänomen wurde von Ma et al. Gewebe für Gebärmutterhalskrebs berichteten sie, dass von Gebärmutterhalskrebs upstaging führt nicht nur zu einer höheren Konzentration von Nrf2 im Kern der Krebszellen, sondern auch zu einer höheren Konzentration von Downstream antioxidative Reaktion Proteine ​​[22]. Es kann daher theoretisch vorgeschlagen, dass die Magenkrebszelllinien mit Kern Nrf2 Ausdruck würde eine höhere Dignität durch diesen Mechanismus haben.
Wir immunhistochemisch eine hohe Rate von Nrf2-Expression in Magenkrebs klinischen Proben (Tabelle 2) identifiziert. Somit 61,7% der Proben wurden Nrf2 positive, die in nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom (26%) [21] oder in Gallenblasenkrebs (23%) [23] berichteten, höher als der Prozentsatz der positiven Proben war.
Darüber hinaus gab es signifikante Korrelationen zwischen Nrf2-Expression und mehrere klinisch-pathologischen Faktoren wie der Größe des Tumors, Tumortiefe, lymphatische Invasion, Lymphknoten-Metastasen und Tumor Histologie. Unsere Ergebnisse sind in Übereinstimmung mit denen von Wang et al. die, dass die Expression von Nrf2 in Gallenblasenkrebs berichtet wurde, signifikant mit Differenzierung, Stadium und Lymphknotenmetastasen assoziiert [23].
Kürzlich Xiu-Freg Hu et al. ähnlich Nrf2-Expression in Magenkrebs untersucht [26]. Sie schlugen vor, auch eine prognostische Bedeutung von Nrf2-Expression in Übereinstimmung mit unseren Ergebnissen. Sie berichteten jedoch, dass Nrf2-Immunreaktivität im Zytoplasma erkannt wurde, aber dass es nicht in den Zellkern erkannt wurde. Diese anderen Ergebnis kann auf die Tatsache zurückzuführen sein, dass sie verschiedene Antikörper von den in der vorliegenden Studie verwendet. Es wurde gut dokumentiert, dass Nrf2 nur seine antioxidative Fähigkeit ausübt, wenn es auf den Kern aus dem Zytoplasma transloziert [27]. Unsere Immunoblot-Analyse zeigte, dass Nrf2 im Kern der Zellen des Magenkrebszelllinien überwiegend vorhanden war. Wir hielten daher, dass die anhaltende Überexpression von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen wahrscheinlich als Antioxidans gearbeitet, die die Magenkrebszellen von ROS geschützt, und dass Nrf2 Kernexpression kann aggressives Verhalten von Magenkrebs zu reflektieren. Auf der Grundlage dieser Theorie, hielten wir es für unerlässlich Kern zu bewerten, aber nicht Cytoplasmaexpression von Nrf2 in klinischen Proben von Magenkrebs.
In dieser Studie haben wir gezeigt, den prognostischen Wert von Nrf2-Expression durch univariate Analyse. Obwohl Nrf2 Positivität nicht als unabhängiger prognostischer Marker durch multivariate Analyse ausgewählt wurde, kann dieser Befund durch die Möglichkeit zu erklären, dass Nrf2 Positivität signifikant von Lymphknotenbefall betroffen war, die als schlechter prognostischer Faktor angesehen wurde. Solis et al. und Wang et al. in ähnlicher Weise berichtet, dass Nrf2-Expression mit einer schlechten Gesamtüberleben in nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom [21] und in der Gallenblase Krebs in Verbindung gebracht wurde [23] auf. Diese Daten legen nahe, dass Nrf2-Expression könnte als signifikante prognostische Parameter für die Vorhersage der Überlebenszeit von postoperativen Patienten mit Magenkrebs verwendet werden.
Es ist vor kurzem berichtet worden, dass hohe Nrf2-Expression kann erleichtern und Krebszellüberlebens nach Anti-Krebs-Chemotherapie und Strahlentherapie verlängern [14,16,19-22,28-33]. Unsere Ergebnisse zeigten auch, dass positive Nrf2-Expression signifikant mit einer Resistenz gegen 5-FU basierte adjuvante Chemotherapie assoziiert war. Diese kombinierten Ergebnisse können bedeuten, dass, durch die Auswertung der Expressionsniveaus von Nrf2 im Kern von Magenkrebszellen, könnte es möglich sein, die besten Kandidaten vorherzusagen, die den Empfang von nicht nur einer adjuvanten Chemotherapie profitieren können, sondern auch eine neoadjuvante Chemotherapie.
Genetische oder funktionelle Inhibierung von Nrf2 wurde in der Unterdrückung der zellulären Nrf2 -regulierten antioxidative Enzyme, einschließlich zellulären Glutathion, Thioredoxin und nicht-Protein-Thiole führen gezeigt. Letztendlich können diese Veränderungen der Empfindlichkeit von Krebszellen wiederherzustellen Drogen-und Strahlentherapie gegen Krebs. Somit Cho et al. berichtet, dass funktionelle Inhibierung von Nrf2 zur Sensibilisierung von Krebszellen zu alkylierenden Antikrebsmittel [31] führt. Weiterhin Ma et al. berichtet, dass die Kombination von Cisplatin und Zuschlags von Nrf2 dramatisch und in vivo signifikant inhibiert das Tumorwachstum [22].
Diese Beweise Berücksichtigung, ist es sehr wahrscheinlich, dass ein neues Protokoll, das chemotherapeutische Nrf2 Regulierung beinhaltet in naher eingeführt werden Zukunft. Zum Beispiel könnte die Wirksamkeit der Chemotherapie zunächst durch Auswertung von Nrf2-Expression und vorhergesagt werden, wenn eine von Nrf2-positiven Patienten beurteilt werden als resistent gegenüber Chemotherapie zu sein, dann kann es möglich sein, eine ausreichende Wirksamkeit der Chemotherapie durch gleichzeitige Hemmung von Nrf2 zu erreichen. Daher wird ein neuer chemotherapeutischen Protokoll, das Antioxidans Therapie umfasst kann ein klinisches Problem eine nützliche Methode für die Lösung.
Schlussfolgerungen
Nrf2-Expression eng mit klinisch-pathologischen Faktoren und die Prognose von Patienten mit Magenkrebs assoziiert ist. Nrf2-Expression in Magenkrebs kann zur Beurteilung der biologischen Malignitätspotential nützlich sein, die teilweise von Nrf2 Verbesserung der antioxidativen Fähigkeit von Magenkrebs-Zellen vermittelt werden kann. Antioxidative Therapie könnte ein vielversprechender Ansatz für die Behandlung von Nrf2 positiven Magenkrebs-Patienten sein
Abkürzungen
Nrf2.
NF-E2-bezogenen Faktor 2
OS:
Oxidativer Stress
Keap 1:
Kelch-like ECH-associated protein 1
sind:
Antioxidans-Response-Element
FBS:
Fötales Rinderserum
PBS:
Phosphat-gepufferte Saline

TBS:
Tris-gepufferte Salzlösung
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-Fluorouracil
ROS:
Reaktive Sauerstoffspezies
Erklärungen
Danksagung
Wir erklären, dass jeder Autor nicht erhalten Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

• Lymphangiogenese in Magenkrebs geregelt durch Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D-Achse
• Bestimmungsfaktoren von Magenkrebs-Screening Teilnahme in Korea: ein Multi-Level-analysis