Clinicopathological pomen jedrske faktorja (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) izraz želodčnega cancer

Clinicopathological pomen jedrske faktorja (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) izraz na raka želodca
Abstract
Ozadje
transkripcijski faktor jedrski faktor (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) je bila prvotno opredeljena kot kritično regulator celičnih antioksidantov in faza II razstrupljanje encimov prek svojih transkripcijski up-regulacijo številnih odgovor antioksidant element (SE), vsebujoč gene. Nrf2 ne ščiti le normalne celice, ampak tudi rakave celice iz celične stresa in izboljša preživetje rakavih celic. Nekatere študije so pokazale, da ima Nrf2 izražanje pri bolnikih z rakom klinični pomen. Vendar pa ni bilo izčrpno analizo raven jedrske ekspresije Nrf2 v gastrointestinalnih rakavih celic. V tej študiji smo želeli imunohistokemicno oceni izraz Nrf2, in ocenijo njen klinični pomen pri raku želodca.
Metode
A skupaj 175 želodčnih bolnikih z rakom, ki so prejemali kurativna R0 želodca s standardno bezgavk seciranje bili vključeni. Mi imunohistokemicno ocenili Nrf2 izraz v-parafin vgrajeni kirurško odstranjenimi osebkov teh 175 bolnikov. Razlike v skupini so bili analizirani z 2 testa χ
, Fisherjev natančni test in Mann-Whitney U
test. Združenja med Nrf2 izražanja in clinicopathological funkcij, vključno s kliničnim izidom, so bili ocenjeni s pomočjo univariatne in analize multivariatna, in Kaplan-Meier krivulje s testom log-rank, oziroma je bil.
Rezultati
Nrf2 radioinkorporacijo pretežno opredeljena v jedru želodčne rakave celice. Nrf2 pozitivnost je bila tesno povezana z velikostjo tumorja, globina tumorja, bezgavkah, lymphovascular invazije, histologijo in stopnji (p < 0,05 za vse). Test log-rang je pokazala, da je bila celotna preživetje Nrf2 pozitivni skupini bistveno slabša kot pri Nrf2-negativne skupini (p < 0,01). In, je bil pozitiven Nrf2 izraz bistveno povezane z odpornostjo proti temelji na 5-FU adjuvantno kemoterapijo (p = 0,024).
Sklepi
Nrf2 izražanja je pozitivno povezana z agresivnim obnašanjem tumorjev pri raku želodca. Ta rezultat kaže, da je Nrf2 izraz v raka želodca potencialni kazalec slabše prognoze.
Povezanih z NF-E2 Ključne besede
faktor 2 želodcu raka Antioksidanti Ozadje
raka želodca je četrti najpogostejši rak prebavil in drugi najpogostejši usodne gastrointestinalni rak na svetu. Vzhodnoazijskih držav, vključno z Japonsko, so med območja z najvišjo stopnjo tveganja za raka želodca [1,2]. Na Japonskem, je vzpostavitev množičnega presejanja na fotografski floroskopija prebavilih fibroscopy pripeljalo do raka želodca diagnosticiranih v zgodnjih fazah. Ugodno prognoza je pričakovati pri teh želodčnih bolnikih z rakom naslednjih kurativno operacijo ali endoskopsko zdravljenje. Vendar pa nekateri bolniki kažejo neugodno smer kljub prejemu kurativno resekcijo. Pooperativno izid raka želodca je močno odvisna od TNM dejavnikov [3,4]. Poleg teh kritičnih clinicopathological dejavnikov je prognoza karcinom želodca vplivalo več bioloških spremenljivk. V zvezi s tem je treba najti nove dejavnike, povezane z rakom, ki se lahko uporabljajo kot markerji za diagnozo in zdravljenje raka želodca. Je splošno sprejeto, da je oksidativni stres (OS) vpleten v patofiziologijo degenerativnih bolezni. Poleg tega so znani tudi proizvodnja in povečanje OS in sekundarne DNA oksidativno škodo, ki se v zvezi s škodo in maligno transformacijo želodčne sluznice [5]. Tako OS se šteje, da igrajo pomembno vlogo pri karcinogeneze raka želodca [5,6].
Transkripcijski faktor jedrsko faktor (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2), ki je osnovni redoksi-občutljiv bzip transkripcijski faktor, je bila prvotno opredeljena kot kritični regulator celičnih antioksidantov in faza II razstrupljanje encimov prek transkripcijske uravnavanjem mnogih antioksidant odzivnega elementa (SE) vsebujočimi geni [7-9]. Pod bazalnih pogojih je Nrf2 vezan na kelch podobno-ECH povezan proteina 1 (Keap1), ki temelji na cul3 E3 ubikvitin ligaze adapter, ki ureja Nrf2 ubikvitinacije in proteasoma odvisni degradacijo. [10]
Po izpostavljenosti celic oksidativni stres ali kemopreventivno spojine, Nrf2 premikanjem v jedro tvori heterodimer s svojo obvezno partnerjem MAF, veže na zaporedja v DNK in aktivira transkripcijo nadaljnjih genov, kot so antioksidanti in faza II razstrupljanje encimov [8,11-13] . Pomembno biološko vlogo Nrf2 je poudarjena z ugotovitvami dokazujejo Nrf2-odvisno zaščito pred mnogimi humanih bolezni ali patoloških stanj, kot so rak, nevrodegenerativne bolezni, bolezni srca in ožilja, vnetja, pljučna fibroza, akutna pljučna poškodbe in Nrf2 tudi upočasni 14 proces staranja [ -18]. Tako Nrf2 je bila obravnavana kot "dobro" transkripcijski faktor, ki je ključnega pomena za zaščito pred oksidativnim stresom [19]. Vendar pa se pojavljajo podatke je razkrila temno stran Nrf2 [20]. Nedavno je bilo dokazano, da pride do odklonski aktiviranje Nrf2 poti pogosto pri rakavih celic in tumorskih tkiv. Nrf2 ščiti ne le normalne celice pred preoblikovanje rakavih celic, ampak tudi varuje rakavih celic iz celične stresa, izboljša preživetje raka celic in je povezana z rastjo in napredovanja [18] raka. Od teh odkritij, ni bilo celovita analiza ravni ekspresije Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic, in ni bilo študije, katerih namen je pojasnitev odnosa med stopnjo ekspresije Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic in klinično izid. V sedanji raziskavi smo izvedli prvi pregled nivoja ekspresije Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic in nadalje razpravljali o klinični pomen Nrf2 izražanja glede na anti- oksidativni stres.
Metode
odkrivanje Nrf2 izraz v želodcu linij rakavih celic, ki jih blot analizo zahodni
želodčni rak celičnih linijah MKN74, MNK45, KATO-III in NUGC4 so bile kupljene iz japonskega fizikalne in kemijski inštitut, Tokio, Japonska. Celice inkubiramo v RPMI 1640 z 10% fetalnega govejega seruma (FBS), 100 enot /ml penicilina in 100 fig /ml streptomicina pri 37 ° C v inkubatorju celične. Vse celice požanjemo s centrifugiranjem, speremo s fosfatnim pufrom (PBS), celotni protein smo ekstrahirali v liznega pufra. Jedrske ekstrakti in citoplazemska frakcije za metodo Western blot Nrf2 so bile pripravljene z uporabo jedrske /citosolu frakcioniranja Kit (K266-25, BioVison, California, ZDA). Western analizo prepivek Nrf2 izražanja v želodcu raka celičnih linijah smo izvedli, kot sledi. Denaturirani protein pridobljen iz jedra in citoplazmo ločimo na SDS-poliakrilamidnem gelu in preneseni na Haybond membrano, ki je bil nato blokiran preko noči pri 5% posnetega mleka v Tris pufrom (TBS). Membrana smo nato inkubirali z mišjega monoklonskega protitelesa proti Nrf2 (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc. Santa Cruz, CA, USA) na 1: 500 redčenja preko noči. Membrana speremo s TBS-Tween 20 (TBST) in inkubiramo z anti-mišji IgG, konjugiran na hrenovo peroksidazo (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, ZDA) 15 minut. Imunološko pasovi so vidne tudi na rentgenskem filmu (Fuji, Japonska) z uporabo reagentov za odkrivanje ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Anglija). Kasneje, potrditi jedrskih in citoplazme frakcij, smo membrano sprali z WB Slačenje Solution (Nakalai Tesque, Tokio, Japonska) za 15 minut in ponovno preizkusijo glede jedrske in citoplazme markerjev, ki uporabljajo protitelesa na B1 anti-Lamina (ab16048, Abcam, Cambridge , ZDA, 1: 1000) in protitelo anti-α-tubulina (CP06, Calbiochem, MA, ZDA, 1:. 1000) oziroma
Bolniki in osebki
Ta študijo je bilo vključenih 175 bolnikov z adenokarcinomom želodca, ki so vdrli v Submukozno plast ali globlje. Vsi bolniki doživel kurativno želodca z bezgavk seciranje na University Hospital Kagoshima od januarja 1995 do decembra 2004. Med 175 bolniki, 57, 14, 99 in 5 bolnikov prejelo distalni, proksimalno, skupni in po delni odstranitvi želodca oz. Razmerje med moškimi in žensko je bilo 116 do 59, povprečna starost je bila 66 let, od 31 do 84 let. Število bolnikov z odpovedjo I, II in III želodca raka bila 47, 33 in 95, v tem zaporedju. Histopathologically, diferencirane 71 primerov (papilarni, dobro razlikuje, in zmerno razlikujejo cevasto adenokarcinom) in 104 so bili neraznovrstne (slabo diferenciran adenokarcinom, mucinozni adenokarcinom in karcinom pečat-obroč celic) karcinomov po 7 th izdaji tumor vozlišča metastaze razvrstitev. Nobeden od teh bolnikov je prejelo kemoterapijo pred operacijo. Pisna privolitev je bila pridobljena iz bolnikov in študija je odobril Etični odbor University Hospital Kagoshima (registrska številka 35-24). Ta preiskava je skladna z načeli, opisanimi v Helsinški deklaraciji. Clinicopathological ugotovitve so opisane v skladu s 7 th izdaji tumorja klasifikacije vozlišče metastaz.
Imunohistokemičnim analizo Nrf2 raka želodca in njeno vrednotenje
bili vzorci bula določena z 10% formaldehida v PBS, vgrajeni v parafin, prerezana na 4-mikrometrskimi debelih odsekov in montiran na steklenih ploščicah za imunohistokemičnim analizo. Odseki so bili deparaffinised v ksilenu in posušiti v seriji stopenjski etanola. Endogenega peroksidaze aktivnost vzorcev je bil blokiran s potopitvijo stekelc v 3% vodikovega peroksidaza metanola raztopino 10 minut pri sobni temperaturi. Po trikratnem spiranju s PBS (5 min na pranje) so bili odseki obdelamo z 1% serumskega albumina goveje 30 minut pri sobni temperaturi, da smo blokirali nespecifična reakcije. Za obarvanju z anti-Nrf2 protitelesa so odseki obdelamo s citratnim pufrom za 10 minut pri 121 ° C v mikrovalovni pečici za pridobivanje antigenost. Odseki speremo trikrat s PBS 5 min vsakič, in nato blokirali z obdelavo s PBS, ki vsebuje 3% posneto mleko za 10 minut pri sobni temperaturi. Blokirane odseki inkubiramo z razredčenim primarni anti-Nrf2 protitelesa (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) v PBS pri 4 ° C preko noči, čemur sledi obarvanje s kompletom streptavidina-biotin-peroksidazo ( Nichirei, Tokio, Japonska). Odseki speremo trikrat v PBS 5 min na pranje in imunski kompleks vizualiziramo z inkubacijo odseke z diaminobenzidine tetra klorida. Oddelki so sprati kratko v vodi, jih nasprotno z hematoksilinom in nameščen. Noncancerous placente tkivo uporabimo kot pozitivni kontroli za Nrf2. Nrf2 ekspresijo smo določili s štetjem števila rakavih celic, v kateri je jedro obarvanih z anti-Nrf2 protitelesa. Vse imunoreaktivnosti diapozitivi so bili ocenjeni z dvema neodvisnima opazovalci (yk in SI), ki so bili ne zavedajo kliničnih podatkov in izid bolezni. Da bi ocenili Nrf2 izraz, je bilo izbranih 10 reprezentativnih polja znotraj tumorja, in izražanja pri skupno 1000 rakavih celic (100 celic na terenu) je bil ovrednoten z veliko močjo (x 400) mikroskopijo. V primeru soobstoju diferencirane in nediferencirane območju v istem oddelku, smo ocenili stopnjo ekspresije Nrf2 na nediferenciran območju, čeprav je območje nediferencirani manjše od diferenciranih področjih. Povprečni indeks označevanje Nrf2 je bila ocenjena glede na delež pozitivnih celic na vsakem področju. Izraz Nrf2 smo ocenili na osnovi obeh deležu pozitivnih celic in intenzivnost obarvanja. Intenzivnost Nrf2 obarvanja je količinsko uporabo kazalnikov v intenzivnosti tri vrednosti (0, 1+ ali 2+). Obseg reaktivnosti je bila ocenjena v skladu s Solis et al. [21] in je bil izražen kot odstotek (0-100%). Imunohistokemične rezultati, ki so bili od 0 do 200, so bile izračunane z množenjem vrednosti intenzivnosti in obsega reaktivnosti. Ti rezultati so bili uporabljeni za določitev Nrf2 nivoje izražanja. Ker je bila mediana rezultat Nrf2 izražanja v raka želodca 110 v tej študiji je bila mejna vrednost 100 odločila.
Pridružitvi med stopnjo ekspresije Nrf2 raka želodca in chemoresistance
Za oceno, ali je izraz raven Nrf2 raka želodca vpliva chemoresistance, smo primerjali nivo ekspresije Nrf2 pri bolnikih z rakom želodca, ki so prejeli 5-fluorouracil (5-FU), ki temelji adjuvantno kemoterapijo. "Odpor 5-FU« smo opredelili kot rak želodca, da je ponovila po adjuvantne kemoterapije. Kot standardni protokol, smo upravljanje, ki temelji na 5-FU adjuvantno kemoterapijo bolnikom z rakom faza II ali III. Nismo pa bolnike, ki niso mogli nadaljevati adjuvantno kemoterapijo zaradi neželenih učinkov. Kot rezultat, je bilo 72 bolnikov, vključenih v to analizo.
Statistična analiza
je Statistična analiza razlik v skupini opravi z uporabo χ
2 test, Fisherjev natančni test in Mann-Whitney U
Test. Metoda Kaplan-Meier je bila uporabljena za analizo preživetja, in razlike v preživetju so bili ocenjeni s pomočjo testa log-rang. Napovedni dejavniki so pregledali univariatne in multivariatne analize (Cox sorazmernih tveganj regresijski model). A p
vrednost < 0.05 se je štelo, da kažejo statistično značilna. Vse statistične analize so bile opravljene z uporabo StatFlex različice 6.0 za programsko opremo Windows (StatFlex različici 6.0; Artec Inc., Osaka, Japonska).
Rezultati
Nrf2 izražanja v želodcu karcinom celičnih linijah
izražanje Nrf2 v jedrski in citoplazemska frakcije želodčnih celičnih linij karcinoma je bila analizirana z metodo Western blot. Nrf2 bila izražena predvsem v jedru vseh želodca raka celičnih linij in malo ekspresijo opazili v citoplazmi (slika 1). Slika 1 Jedrska faktor (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) izražanje v želodčnih karcinom celičnih linijah. Nrf2 protein izraz v jedrskih in citoplazme izvlečkov želodca celičnih linij MKN74, MNK45, KATO-III, in NUGC4 smo analizirali z Western blot. Lisa je ponovno zaznati z anti-Lamina B1 in anti-α-tubulina protiteles, ki so bili uporabljeni kot pozitivne kontrole za jedra in citoplazmo oz. Jedrske in citoplazemska frakcije so jasno ločeni. Nrf2 proteina smo identificirali predvsem v jedru vseh želodčnega raka celičnih linij. Mali Nrf2 je bila odkrita v citoplazmi.
Nrf2 imunohistokemičnim izraz v raka želodca in njegovo povezavo s clinicopathological funkcijami
smo poleg določenih izražanje in subceličnih lokalizacije Nrf2 v 175-parafin vgrajeni arhivskih želodca tkiva raka, s pomočjo imunohistokemično. Je clinicopathological značilnosti bolnikov so prikazani v tabeli 1. Nrf2 radioinkorporacijo bila odkrita predvsem v jedru (slika 2). Nadaljnje ocenjevanje jedrske Nrf2 radioinkorporacijo navedeno, da Nrf2 imunoreaktivnega vzorec razlikovala med diferenciranimi želodčne rakavih celic in nediferencirani želodčnih rakavih celic iz istega vzorca. Tako je bilo bolj verjetno, da se prikaže pozitivno Nrf2 radioinkorporacijo primerjavi z diferenciranimi želodčnih rakave celice nediferencirani želodca rakave celice. Od 175 bolnikov, 108 (61,7%) je prikazala Nrf2 imunohistokemičnim rezultat več kot 100 in so razvrščene kot Nrf2 pozitiven. Preostalih 67 (38,3%) bolnikov je bilo razvrščenih kot negativni skupini Nrf2. Tabela 2 prikazuje korelacijo med Nrf2 izražanja in clinicopathological funkcije. Nrf2 pozitivno izražanje je bistveno povezana s spolom, velikost tumorja, globina tumorja, bezgavkah, lymphovascular invazije, histološko razvrščanje in klinični fazi želodca cancer.Table 1 bolniku značilnosti
št
spolov
moški
116
ženska
59
Starost
Povprečna
66
Območje
31-84
Delovanje
99
Skupaj želodca
Distalno
56
Proksimalni
14
Delna
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histologija
diferenciranih
71
Raznovrstna
104
faza je bila ocenjena v skladu s 7. izdaji tumorja vozlišča klasifikacije metastaz.
Slika 2 imunskim barvanjem jedrske faktorjem (eritroidnih-2) -povezana faktorjem 2 (Nrf2) v kliničnih želodca vzorcih raka. Predstavnik imunskim barvanjem Nrf2 v (a) pozitivne kontrole noncancerous posteljice tkiva; (B) običajno želodec tkivo; (c - e) tkiva z rakom želodca; (C) negativno obarvanje Nrf2, (d) šibko obarvanje (1) Nrf2, (e) močno obarvanje (2) Nrf2 (prvotna povečava, x 400). Izražanje Nrf2 v kliničnih vzorcih. Imunskim barvanjem Nrf2 (originalni povečavi × 400)
Tabela 2 Korelacija med izražanja jedrske faktorja (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) in clinicopathological dejavnikov
Klinični dejavniki
Podajanje Nrf2
P- vrednost
negativna

Pozitivna
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)

Age
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Spol
< 0,05
moški
51
65
ženski
16
43
velikost tumorja
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor globina
< 0,01
T1A, T1b, T2
31
19
T3, T4A, T4b
36
89
bezgavkah
< 0,05
Da Poslovni
35
74
Ne
32
34
Stage
< 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invazija
< 0,05
Da
49
90
Ne
18
14
Histologija
<0,01
diferencirana
37
34
Raznovrstna
30
74
Nrf2 imunohistokemični izraz na raka želodca in njegova povezava s 5-FU Odpornost
Tabela 3 prikazuje korelacijo med Nrf2 izražanja in odpornost 5FU pri 72 bolnikih, ki so dobivali, ki temelji na 5-FU adjuvantno kemoterapijo. Od teh 72 bolnikov, 59 je bilo Nfr2 pozitivno, 13 pa jih Nfr2 negativni. Od 59 Nfr2 pozitivnih bolnikih, so 5FU odporni 43 (72,9%) bolnikov, medtem ko 5 (38,5%) od 13 Nrf2 negativnih bolnikov je bilo le 5FU odporni. Razlika med odstotkom Nrf2 pozitivnih in negativnih Nrf2 pacientov v skupini odpornosti 5FU bila statistično pomembna (p = 0,024) .table 3 Korelacija med ekspresijo jedrske faktorja (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) in 5-fluorouracil (5FU) chemosensitivity
občutljivost 5FU

Podajanje Nrf2
P- vrednost
Negativna
Pozitivna
odporen
5
43
0.024
Sensitive
8
16
preživetje analiza
analizo Kaplan Meier je pokazala, da je bilo celotno preživetje v pozitivni skupini Nrf2 bistveno slabši od da negativnega skupine Nrf2 (61% v primerjavi z 79% oz) (p < 0,01) (slika 3). Slika 3 Pooperativni rezultati 175 bolnikov z rakom želodca po jedrski faktor (eritroidnih-2) -povezana faktor 2 (Nrf2) izraz. Kaplan Meier analiza pooperacijske rezultatov 175 bolnikov želodca z rakom po Nrf2 izražanja. Krivulji preživetja so bili zgrajeni za 175 bolnikov, ki so razdeljeni v Nrf2 pozitivnih in Nrf2 negativnih skupin. Nrf2 pozitivni skupina je imela precej slabše rezultate kot pri Nrf2-negativne skupini (p < 0,01).
Poleg globina tumor, velikost tumorja, bezgavkah, histološko razvrstitev so lymphovascular invazija tudi pomembni dejavniki za preživetje temelji na univariantne analize (tabela 4) .table 4 univariatna in multivariatna analiza napovednih dejavnikov pri raku želodca
Klinični dejavniki
univariatne
multivariatnih
str

Multivariatno P
razmerja ogroženosti

95% interval zaupanja

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tumor velikost
< 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
vozliščna sodelovanje
< 0,01
0,03
5.02
1.18 - 21.41
Lymphovascular invazija
< 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
Histologija
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1.37
0,66-2,87
Nrf2, jedrska faktor (eritroidnih-2) -povezana faktor 2.
prav tako smo izvedli multivariatna analiza teh šestih dejavnikov, vključno Nrf2 kot samostojna prognostičnega marker. Bezgavkah je bil izbran kot neodvisni prognostični označevalec. Vendar Nrf2 izraz ni bil izbran (tabela 4).
Razprava
antioksidant Nrf2, ki deluje za zaščito normalnih celic iz številnih škodljivih pogojih oksidacije, je bila po ocenah velik celični obrambni mehanizem. Vendar pa so številni dokumenti navedli čezmerno Nrf2 in njenih nadaljnjim genov v mnogih vrstah raka človeškega [19-25]. Ta poročila so pokazala, da Nrf2 ne ščiti le normalne celice iz preoblikovanje v rakavih celicah, lahko pa tudi olajša širjenje raka celic in podaljša preživetje [18]. To poročilo je prvo poročilo kažejo na povezavo med stopnjo ekspresije Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic in clinicopathological ugotovitvah.
V sedanjem študiji so Nrf2 radioinkorporacijo odkrita pretežno v jedru ne samo vivo ampak prav tako in vitro v številnih želodčnega raka celičnih linij. Ugotovljeno je bilo predvidevali, da vztrajno jedrsko ekspresije Nrf2 v želodčnih rakave celične linije rezultatov v proizvodnji antioksidantov, ki dajejo na teh celičnih linijah raka visoko sposobnost, da se uprejo reaktivnih kisikovih vrst (ROS). Podoben pojav je poročal Ma et al. Za materničnega tkiva, raka sta poročala, da upstaging raka materničnega vratu ne vodi le k višji koncentraciji Nrf2 v jedru rakavih celic, ampak tudi višjo koncentracijo antioksidativnih proteinov zaključnih odzivanja [22]. Zato lahko teoretično predlaga, da bi imeli želodčnih linije rakava celica z jedrsko Nrf2 izražanja višjo maligni potencial prek tega mehanizma.
Imunohistokemicno Identificirali smo visoko stopnjo Nrf2 izražanja v raka želodca kliničnih vzorcev (tabela 2). Tako je bilo 61,7% vseh vzorcev Nrf2 pozitiven, kar je več kot odstotek pozitivnih vzorcev, navedenega v nedrobnocelični pljučni karcinom (26%) [21] ali žolčnika raka (23%) [23].
Poleg tega obstajajo pomembne povezave med Nrf2 izražanja in več clinicopathological dejavnikov, kot so velikost tumorja, globina tumorja, limfnega invazije, bezgavkah in histologijo tumorja. Naši rezultati so v skladu s tistimi Wang et al. ki je poročal, da je izražanje Nrf2 v raka žolčnika je bistveno povezan z diferenciacijo, stopnjo in bezgavkah [23].
kratkim Xiu-Freg Hu et al. podobno raziskovali Nrf2 izraz v rakom želodca [26]. Predlagala sta tudi napovedni pomen Nrf2 izražanja v skladu z našimi rezultati. Vendar pa so poročali, da je bil Nrf2 radioinkorporacijo zaznali v citoplazmi vendar ni bila odkrita v jedru. Ta različna Rezultat je lahko posledica dejstva, da so uporabljene različne protitelesa od tistih, uporabljenih v tej študiji. Je bilo dobro dokumentirano, da Nrf2 doseže svoj antioksidativno sposobnost samo takrat, ko je premikanjem v jedro iz citoplazme [27]. Naše imunoblotanju analiza je pokazala, da je Nrf2 pretežno prisoten v jedru celice želodčnega raka celičnih linij. Zato menimo, da je obstojna čezmernim Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic bi deloval kot antioksidant, ki je zaščitena z želodčne rakavih celic ROS, in da lahko Nrf2 jedrska izraz odraža agresivnost raka želodca. Na podlagi te teorije, smo menili, da je bistvenega pomena za oceno jedrske, vendar ne citoplazme izraz Nrf2 v kliničnih vzorcih raka želodca.
V tej študiji smo pokazali napovedno vrednost Nrf2 izražanja univariantne analizo. Čeprav Nrf2 pozitivnost ni bila izbrana kot neodvisni prognostični označevalec, ki ga multivariatne analize, lahko ta ugotovitev lahko pojasnili z možnostjo, da je Nrf2 pozitivnost s bezgavk udeležbo, ki je bila obravnava kot slabe prognostični dejavnik bistveno vplivala. Solis sod. Wang et al. Podobno je poročal, da je bil Nrf2 izraz povezan s slabim celokupno preživetje v nedrobnoceličnim pljučnim rakom [21] in v žolčnika raka [23], v tem zaporedju. Ti podatki kažejo, da lahko Nrf2 izraz uporabljen kot pomemben prognostičnega parameter za napovedovanje preživetje pooperativne bolnikov z rakom želodca.
Nedavno so poročali, da lahko visoke Nrf2 ekspresija olajša in podaljša preživetje rakavih celic po raku kemoterapijo in radioterapijo [14,16,19-22,28-33]. Naši rezultati tudi pokazali, da je bil pozitiven Nrf2 izraz bistveno povezane z rezistenco na adjuvantno kemoterapijo 5FU temelji. Kombinirani rezultati lahko pomeni, da je z oceno nivoja izražanja Nrf2 v jedru želodčnih rakavih celic, bi bilo mogoče napovedati najboljše kandidate, ki lahko koristi od prejema ne samo adjuvantno kemoterapijo, temveč tudi novi dopolnilni kemoterapiji.
Genetsko ali funkcionalna zaviranje Nrf2 je pokazalo, da se pri zatiranju mobilnih Nrf2 -regulated antioksidativnih encimov, vključno s celičnimi glutationa, thioredoxin in brez beljakovin tiolov. Konec koncev, lahko te spremembe obnovi občutljivost rakavih celic proti raku drog in radioterapijo. Tako, Cho et al. poročali, da je funkcionalna zaviranje Nrf2 vodi k senzibilizaciji rakavih celic alkilatnih agentov proti raku [31]. Poleg tega Ma sod. poročali, da je kombinacija cisplatina in rasklapanje Nrf2 dramatično in bistveno zaviral rast tumorja in vivo [22].
Ob teh dokazov upoštevanju, da je zelo verjetno, da se bo nova kemoterapevtik protokol, ki vključuje ureditev Nrf2 uveden v bližnji prihodnosti. Na primer, lahko učinkovitost kemoterapije najprej napovedati z vrednotenjem Nrf2 izražanja in če kateri koli od Nrf2 pozitivnih pacientov ocenila kot odporna na kemoterapijo, potem je mogoče doseči zadostno učinkovitost kemoterapije ob sočasni inhibicijo Nrf2. Torej nov kemoterapevtik protokol, ki vsebuje antioksidant terapija je lahko zelo uporabna metoda za reševanje klinični problem.
Sklepe
je Nrf2 izraz tesno povezan z clinicopathological dejavnikov in prognozo bolnikov z rakom želodca. Nrf2 izraz raka želodca so lahko koristne za vrednotenje biološke malignega potenciala, ki ga lahko posredovane delno krepitev Nrf2 z antioksidativno sposobnost želodca rakavih celic. Antioksidant terapija lahko obetaven pristop za zdravljenje Nrf2 pozitivnih bolnikov z rakom želodca
Kratice
Nrf2.
Povezanih z NF-E2 faktor 2
OS:
oksidativni stres
Keap 1:
Kelch podobno-ECH povezan protein 1
SO:
antioksidant odgovor element
FBS:
plod goveji serum
PBS:
fosfatnim pufrom

TBS:
Tris-pufrom
TBST:
TBS-Tween 20
5-FU:
5-fluorouracil
ROS:
reaktivnih kisikovih
deklaracij
Potrditve
Izjavljamo, da vsak avtor prejel nobene Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Limfangiogenezo želodčnega raka urejeno preko Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D os
• Dejavniki raka želodca preverjanja prisotnosti v Koreji: analiza na več ravneh