Клинико-патологическими значение ядерного фактора (эритроидного-2) Фактор 2 о связанных выражение (Nrf2) при раке желудка

Клинико-патологическими значение ядерного фактора (эритроидных-2) Фактор 2 о связанных (Nrf2) выражение в рак желудка
Аннотация
Справочная информация
транскрипционный фактор ядерного фактора (эритроидного-2) Фактор 2 о связанных (Nrf2) был первоначально идентифицирован в качестве важнейшего регулятора внутриклеточных антиоксидантов и второй фазы детоксификации ферментов через транскрипционном повышающей регуляции многих элементов реагирования антиоксидантом (ARE) -содержащие генов. Nrf2 защищает не только нормальные клетки, но и раковые клетки от клеточного стресса, и повышает выживаемость клеток рака. Некоторые исследования показали, что экспрессия Nrf2 у онкологических больных имеет клиническое значение. Тем не менее, не было никакого комплексного анализа уровня ядерной экспрессии Nrf2 в желудочно-кишечных раковых клеток. В данном исследовании мы стремились иммуногистохимическое оценить экспрессию Nrf2, и оценить его клиническое значение в развитии рака желудка.
Методы
в общей сложности 175 больных раком желудка, которые получили R0 гастрэктомию со стандартной лимфодиссекции были включены. Мы иммуногистохимическое оценивали экспрессию Nrf2 в залитых парафином хирургически удаленных образцов этих 175 пациентов. Групповые различия были проанализированы с использованием χ
2 тест, точный критерий Фишера, и Mann-Whitney U
тест. Ассоциации между Nrf2 выражения и клинико-патологическими особенностями, включая клинические исходы, оценивались с помощью одномерных и многомерных анализов и Каплана-Мейера с тестом лог-рангового соответственно.
Результаты
Nrf2 иммунореактивности был преимущественно идентифицирован в ядре клетки рака желудка. Nrf2 положительность был тесно связан с размером опухоли, глубины опухоли, метастазов в лимфатических узлах, лимфоваскулярной вторжения, гистологии и стадии (р &ЛТ; 0,05 для всех). Тест журнала ранга указал, что общая выживаемость в Nrf2-положительной группе была значительно беднее, чем у Nrf2-отрицательной группы (р &л; 0,01). И, положительное Nrf2 выражение было достоверно связано с устойчивостью к 5ФУ на основе адъювантной химиотерапии (р = 0,024).
Выводы
выражение Nrf2 положительно связан с агрессивным поведением опухоли при раке желудка. Этот результат позволяет предположить, что экспрессия Nrf2 при раке желудка является потенциальным индикатором хуже прогноза.
Ключевые слова
NF-E2, связанных с фактором 2 Желудочный Антиоксиданты рака фона
рака желудка является четвертым наиболее распространенным раком желудочно-кишечного тракта и вторым наиболее распространенным смертельным раком желудочно-кишечного тракта в мире. Страны Восточной Азии, включая Японию являются одними из областей высокого риска развития рака желудка [1,2]. В Японии, создание массового скрининга с использованием фотографий рентгеноскопии или желудочно-кишечного тракта фиброэндоскопия привело к развитию рака желудка диагностируется на ранних стадиях. Благоприятный прогноз, как ожидается, для этих больных раком желудка после радикальной операции или эндоскопического лечения. Тем не менее, некоторые пациенты показывают неблагоприятный курс несмотря на получение целебное резекцию. Послеоперационный исход рака желудка сильно зависит от TNM факторов [3,4]. В дополнение к этим критическим клинико-патологическими факторами, прогноз рака желудка зависит от нескольких биологических переменных. В этом контексте необходимо найти новые факторы, связанных с раком, которые могут быть использованы в качестве маркеров для диагностики и лечения рака желудка. Принято считать, что окислительный стресс (ОС) участвует в патофизиологии дегенеративных заболеваний. Кроме того, генерация и увеличение ОС и вторичного окислительного повреждения ДНК, также, как известно, связаны с повреждением и злокачественной трансформации слизистой оболочки желудка [5]. Таким образом, операционная система была рассмотрена, играют важную роль в канцерогенезе рака желудка [5,6].
Фактора транскрипции ядерного фактора (эритроидных-2) Фактор 2 о связанных (Nrf2), который является одним из основных окислительно-восстановительная чувствительных BZIP фактор транскрипции, первоначально был идентифицирован как критический регулятор внутриклеточных антиоксидантов и второй фазы детоксикации ферментов через транскрипционный повышающей регуляции многих элементов антиоксидантом ответа (ARE) -содержащие генов [7-9]. Под базальных условиях, Nrf2 связан с Kelch типа ECH-ассоциированный белок 1 (Keap1), в cul3 основе E3 убиквитинлигазы адаптера, который регулирует Nrf2 Убиквитинирование и протеосом-зависимой деградации [10].
При воздействии клеток окислительный стресс или химиопрофилактические соединения, Nrf2 транслоцируется в ядро, образует гетеродимер с его обязательным партнером Maf, связывается с последовательностями ДНК находятся в и активирует транскрипцию нижестоящих генов, таких как антиоксиданты и фазы II детоксикации ферментов [8,11-13] , Важная биологическая роль Nrf2 подчеркивается результатами, демонстрирующих Nrf2-зависимую защиту от многих человеческих заболеваний или патологических состояний, таких как рак, нейродегенеративные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания, воспаление, фиброз легких, острой легочной травмы и Nrf2 также замедляет процесс старения [14 -18]. Таким образом, Nrf2 рассматривалась как "хороший" фактор транскрипции, который имеет важное значение для защиты от окислительного стресса [19]. Тем не менее, появляются данные показал темную сторону Nrf2 [20]. Недавно было показано, что аберрантных активация пути Nrf2 часто происходит в раковых клетках и опухолевых тканей. Nrf2 защищает не только нормальные клетки от трансформации в раковые клетки, но и защищает раковые клетки от клеточного стресса, повышает выживаемость клеток рака и связано с ростом рака и прогрессии [18]. Так как эти откровения, не было никакого комплексного анализа уровня экспрессии Nrf2 в ядре клеток рака желудка, и не было никаких исследований, направленных на выяснение взаимосвязи между уровнем экспрессии Nrf2 в ядре клеток рака желудка и клинические результат. В настоящем исследовании мы провели первое исследование уровня экспрессии Nrf2 в ядре клеток рака желудка и дальнейшее обсуждение вопроса о клинической значимости выражения Nrf2 по отношению к анти окислительный стресс.
Методы
Обнаружение Nrf2 выражение в желудочном линий раковых клеток с помощью Вестерн-блоттинга
желудочной карциномы клеточных линий MKN74, MNK45, Kato-III и NUGC4 были приобретены у японского физико-химического института, Токио, Япония. Клетки инкубировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед /мл пенициллина и 100 мкг /мл стрептомицина при 37 ° С в инкубаторе клеток. Все клетки собирали центрифугированием, промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и общий белок экстрагируют в буфере для лизиса. Ядерные экстракты и цитоплазматические фракции для Вестерн-блоттинга из Nrf2 были подготовлены с использованием набора атомному /Цитозоль фракционирования (K266-25, BioVison, Калифорния, США). Вестерн-блот-анализ экспрессии Nrf2 в желудочном линиях раковых клеток проводили следующим образом. Денатурированного белка, извлеченные из ядра или цитоплазме разделяли на ДСН-полиакриламидном геле и переносили на мембрану Hybond, который затем блокировали в течение ночи в 5% обезжиренном молоке в Трис-буферном солевом растворе (TBS). Затем мембрану инкубировали с мышиными моноклональными антителами против Nrf2 (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, США) в разведении 1: 500 в течение ночи. Мембрану промывали TBS-Tween 20 (TBST), и инкубировали с антителом против мышиного IgG, конъюгированного с пероксидазой хрена (HAF007, РД Syestems, Миннеаполис, США) в течение 15 минут. Иммунореактивного полосы визуализировали на рентгеновской пленке (Fuji, Япония) с использованием реагентов обнаружения ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Бакингемшир, Англия). Впоследствии, чтобы подтвердить ядерные и цитоплазматические фракции, мембрану промывали WB десорбирующий раствор (Nakalai Tesque, Токио, Япония) в течение 15 минут и повторно зондировали для ядерных и цитоплазматических маркеров с использованием B1 антитела анти-ламин (ab16048, Abcam, Кембридж , США, 1: 1000) и антитела анти-α-тубулина (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000) соответственно
Пациенты и образцы
В исследование были включены 175 пациентов с аденокарциномой желудка, которые вторгались в подслизистый слой или глубже. Всем пациентам была выполнена целебное гастрэктомию с лимфодиссекция в больнице Кагосима университета с января 1995 года по декабрь 2004 года среди 175 пациентов, 57, 14, 99 и 5 пациентов получили дистальный, проксимальный, полная и частичная гастрэктомия, соответственно. Соотношение мужчин и женщин было 116 до 59, а средний возраст составлял 66 лет, начиная с 31 до 84 лет. Число пациентов со стадией I, II и III рака желудка была 47, 33 и 95, соответственно. Гистопатологически, 71 случаев были дифференцированы (папиллярный, хорошо дифференцированы и умеренно дифференцированные трубчатые аденокарциномы) и 104 были недифференцированные (слабо дифференцированной аденокарциномы, коллоидный аденокарциномы и карциномы перстень клеток) карциномы в соответствии с 7 е издание опухолевого узла метастазирования классификация. Ни один из этих больных не получали химиотерапию до операции. Письменное информированное согласие было получено от пациентов и исследование было одобрено этическим комитетом больницы Кагосима университета (регистрационный номер 35-24) по. Это исследование согласуется с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации. Результаты клинико-патологическими описаны в соответствии с 7 е издание опухоли классификации узла метастазирования.
Иммуногистохимического анализа Nrf2 при раке желудка и его оценка
Образцы опухоли фиксировали 10% формальдегида в PBS, погружают в парафин, разрезали на толстых секций 4 мкм и помещали на предметные стекла для иммуногистохимического анализа. Срезы deparaffinised в ксилоле и обезвоживали в серии градуированного этанола. Эндогенный пероксидазы активность образцов была перекрыта погружением слайдов в 3% водорода раствор пероксидазой метанола в течение 10 мин при комнатной температуре. После трехкратной промывки PBS (5 мин на промывку), срезы обрабатывали 1% бычьего сывороточного альбумина в течение 30 мин при комнатной температуре, чтобы блокировать неспецифические реакции. Для окрашивания анти-Nrf2 антителами, срезы были предварительно обработаны с цитратного буфера в течение 10 мин при 121 ° С в микроволновой печи для извлечения антигенности. Срезы промывали три раза PBS в течение 5 мин каждый раз, а затем блокировали путем обработки ФБР, содержащим 3% обезжиренным молоком в течение 10 мин при комнатной температуре. Блокированные срезы инкубировали с разведенным первичного анти-Nrf2 антителом (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) в PBS при 4 ° С в течение ночи, с последующим окрашиванием с комплектом стрептавидин-биотин-пероксидаза ( Nichirei, Токио, Япония). Срезы промывали три раза в PBS в течение 5 мин на каждую промывку, а иммунный комплекс визуализировали путем инкубации секции с диаминобензидин тетра гидрохлорид. Срезы промывали короткое время в воду, контрастному окрашиванию гематоксилином, и установлен. Доброкачественное плацентарной ткани использовали в качестве положительного контроля для Nrf2. Nrf2 выражение было определено путем подсчета количества раковых клеток, в которых ядро ​​окрашивали анти-Nrf2 антителом. Все иммуноокрашиванию слайды были оценены двумя независимыми наблюдателями (YK и СИ), которые не знали о клинических данных и исход заболевания. Для оценки Nrf2 экспрессии, были выбраны 10 репрезентативным поля внутри опухоли и экспрессию в общей сложности 1000 раковых клеток (100 клеток на поле) оценивали с использованием высокой мощности (× 400) микроскопии. В случае сосуществования дифференцированного и недифференцированного площади в той же секции, мы оценивали уровень экспрессии Nrf2 в недифференцированном области, несмотря на то, площадь недифференцированные меньше дифференцированной области. Средний показатель маркировки Nrf2 оценивали по доле положительных клеток в каждой области. Выражение Nrf2 оценивали на основе как доля положительных клеток и интенсивности окрашивания. Интенсивность Nrf2 окрашивания определяли количественно, используя оценку интенсивности три значения (0, 1+ или 2+). Степень реактивности оценивали в соответствии с Солис и соавт. [21] и выражали в процентах (0-100%). Иммуногистохимическая баллы, которые варьировались от 0 до 200, были рассчитаны путем умножения значения интенсивности и степени реактивности. Эти оценки были использованы для определения Nrf2 уровней экспрессии. Так как средний балл экспрессии Nrf2 при раке желудка была в настоящем исследовании, 110, отсечной значение 100 было принято решение о.
Ассоциации между уровнем экспрессии Nrf2 при раке желудка и химиорезистентность
Чтобы оценить ли уровень экспрессии Nrf2 при раке желудка влияет на химическую устойчивость, мы сравнили уровень экспрессии Nrf2 в больных раком желудка, который получил 5-фторурацил (5-ФУ) на основе адъювантной химиотерапии. Мы определили «сопротивление 5ФУ» как рак желудка, что повторялась после адъювантной химиотерапии. В качестве стандартного протокола, мы администрировать 5ФУ на основе адъювантной химиотерапии для пациентов с раком стадии II или III. Мы исключили пациентов, которые были не в состоянии продолжать адъювантной химиотерапии из-за побочных эффектов. В результате, 72 пациентов были включены в этот анализ.
Статистический анализ
Статистический анализ групповых различий проводили с использованием х
2 теста, точный критерий Фишера и Манна-Уитни U <бр> тест. Метод Каплана-Мейера использовали для анализа выживаемости, а также различий в выживаемости были оценены с помощью лог-рангового теста. Прогностические факторы были рассмотрены одномерных и многомерных анализов (Кокса регрессионной модели). Значение р
&л; 0,05 рассматривалось как для обозначения статистической значимости. Все статистические анализы были выполнены с использованием StatFlex версии 6.0 программного обеспечения для Windows (StatFlex версии 6.0; Artec Inc., Осака, Япония).
Результаты
экспрессии Nrf2 в карциномы желудка клеточных линий
Экспрессию Nrf2 в ядерной и цитоплазматические фракции желудочных линий клеток карциномы анализировали с помощью Вестерн-блоттинга. Nrf2 выражалась главным образом в ядре всех желудочных линий раковых клеток и мало экспрессия наблюдалась в цитоплазме (рис 1). Рисунок 1 Ядерный фактор (эритроидных-2) Фактор 2 о связанных выражение (Nrf2) в желудочном карцинома клеточных линиях. Nrf2 экспрессии белка в ядра и цитоплазмы экстрактов желудка клеточных линий MKN74, MNK45, КАТО-III, и NUGC4 анализировали с помощью Вестерн-блоттинга. Блот был повторно зондировали с использованием анти-ламина В1 и анти-α-тубулина антителами, которые были использованы в качестве положительного контроля для ядра и цитоплазмы, соответственно. Ядерные и цитоплазматические фракции четко разделены. Белок Nrf2 был идентифицирован в основном в ядре всех желудочных линий раковых клеток. Маленький Nrf2 был обнаружен в цитоплазме.
Nrf2 иммуногистохимическое выражение в развитии рака желудка и его связь с клинико-патологическими особенностями
Далее мы определили экспрессию и внутриклеточную локализацию Nrf2 в 175 залитых парафином архивных желудочных раковых тканей, с использованием иммуногистохимии. В клинико-патологических характеристики пациентов приведены в таблице 1. Nrf2 иммунореактивности был обнаружен в основном в ядре (рисунок 2). Дальнейшая оценка ядерной Nrf2 иммунореактивности указал, что Nrf2 иммунореактивная картина отличается от дифференцированных клеток рака желудка и недифференцированных клеток рака желудка в том же образце. Таким образом, недифференцированные клетки рака желудка, более вероятно, чтобы показать положительный Nrf2 иммунореактивность по сравнению с дифференцированными клеток рака желудка. Из 175 пациентов, 108 (61,7%) проявили Nrf2 иммуногистохимическое балл выше 100 и были классифицированы как Nrf2 положительный. Остальные 67 (38,3%) пациентов были отнесены к отрицательной группе Nrf2. В таблице 2 показана корреляция между экспрессией Nrf2 и клинико-патологическими особенностями. положительное выражение Nrf2 было в значительной степени связано с полом, размер опухоли, глубины опухоли, метастазов в лимфоузлах, лимфоваскулярной инвазии, гистологической классификации и клинической стадии желудка cancer.Table 1 характеристик пациента

No.

Пол
Мужской
116
Female
59
Возраст
Среднее
66
Диапазон
31-84
Операция
99
Всего гастрэктомия
Дистальный
56
Проксимальный
14
Частичная
6
Этап
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
гистологии
дифференцированы
71
Недифференцированный
104
Этап оценивали по 7-е издание опухолевого узла классификации метастазирования.
Рисунок 2 Иммуноокрашивание ядерного фактора (эритроидного-2) 2 раза о связанных (Nrf2) в клинических образцах рака желудка. Представитель иммунное Nrf2 в (а) положительного контроля, доброкачественное плацентарной ткани; (Б) нормальный желудок ткани; (с - е) ткани рака желудка; (В) отрицательное окрашивание Nrf2, (г) слабое окрашивание (+1) из Nrf2, (е) сильное окрашивание (+2) от Nrf2 (исходное увеличение, × 400). Экспрессия Nrf2 в клинических образцах. Иммуноокрашивание Nrf2 (оригинал, увеличение × 400)
Таблица 2 корреляции между экспрессией ядерного фактора (эритроидных-2) фактор 2 о связанных (Nrf2) и клинико-патологическими факторами
Клинические факторы

Выражение Nrf2

P- значение

Негативный

Положительный

п = 67 (38,3%)

п = 108 (61,7%)

Возраст
нс
&л; 65
22
47
≧ 65
45
61
Пол
&л; 0,05
самца
51
65
женский <бр> 16
43
размер опухоли
&л; 0,01
&л; 5 см
36
27
≧ 5 см
глубина 31
81
Опухоль
&л; 0,01
Т1а, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
метастазов в лимфоузлах
&л; 0,05
Да
35
74
нет
32
34
Этап
&л; 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
лимфоваскулярная вторжение
&л; 0,05
Да
49
90
Нет
18
14
гистологии
&л; 0,01
Дифференцированный
37
34
Недифференцированный
30
74
Nrf2 иммуногистохимическое выражение при раке желудка и его связь с устойчивостью к 5ФУ
таблице 3 показана корреляция между выражение Nrf2 и сопротивление 5ФУ в 72 пациентов, получавших лечение с 5ФУ на основе адъювантной химиотерапии. Из этих 72 пациентов, 59 были Nfr2 положительными и 13 были Nfr2 отрицательными. Из Nfr2 положительных пациентов 59, 43 (72,9%) больных были резистентны 5ФУ, в то время как только 5 (38,5%) из Nrf2 отрицательных больных 13 были устойчивы 5ФУ. Разница между процентом Nrf2 положительных и отрицательных Nrf2 пациентов в группе сопротивления 5ФУ было статистически значимым (р = 0,024) .table 3 Корреляция между экспрессией ядерного фактора (эритроидного-2) фактор 2 о связанных (Nrf2) и 5-фторурацил (5ФУ) химиочувствительность
чувствительность 5ФУ

выражение Nrf2

P- значение


Негативный

Позитивный

Устойчив страница 5 из 43
0,024
Чувствительный
8
16
выживание анализ
анализ Каплана-Мейера показал, что общая выживаемость положительной группы Nrf2 была значительно беднее что отрицательной группы Nrf2 (61% против 79% соответственно) (р &ЛТ; 0,01) (рисунок 3). Рисунок 3 послеоперационные результаты 175 больных раком желудка в зависимости от ядерного фактора (эритроидных-2) 2 фактора о связанных экспрессии (Nrf2). Каплан Meier анализ послеоперационных исходов 175 больных раком желудка в соответствии с выражением Nrf2. Кривые выживаемости были построены для 175 пациентов, которые были разделены на Nrf2-положительных и отрицательных Nrf2-групп. Nrf2-положительная группа имела значительно худший результат, чем Nrf2-отрицательной группы (р &л; 0,01).
Кроме того, глубина опухоли, размер опухоли, метастазов в лимфатических узлах, гистологической классификации, лимфоваскулярная вторжения были также важными факторами выживания на основе однофакторного анализа (таблица 4) .table 4 Одномерный и многомерный анализ прогностических факторов при раке желудка
Клинические факторы

однофакторном

мультивариантном

р

Мультивариантный P

отношение рисков

95% доверительный интервал

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11,44
Опухоль размер
&л; 0,01
0,35
1,58
0,61 - 4,09
лимфоузлов
&л; 0,01
0,03
5,02
1,18 - 21,41
лимфоваскулярная вторжение
&л; 0,05
0,27
0.35
0.05-2.26
гистологии
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81 - 3,24
Nrf2
&л; 0,05
0,40 1,37

0,66 - 2,87
Nrf2, ядерный фактор (эритроидных-2) 2. фактор о связанных
Мы также провели многомерный анализ этих шести факторов, в том числе Nrf2 в качестве независимого прогностического маркера. метастазами Лимфатические был выбран в качестве независимого прогностического маркера. Тем не менее, выражение Nrf2 не было выбрано (таблица 4).
Обсуждение
Антиоксидант Nrf2, который функционирует, чтобы защитить нормальные клетки от многочисленных повреждающих окислительных условий, было считается основным механизмом клеточной защиты. Тем не менее, многие бумаги показали сверхэкспрессии Nrf2 и его нижестоящих генов во многих типах рака человека [19-25]. Эти отчеты показали, что Nrf2 не только защищает нормальные клетки от трансформации в раковые клетки, но также может способствовать пролиферации раковых клеток и улучшает выживаемость [18]. Настоящий доклад является первым докладом, чтобы показать связь между уровнем экспрессии Nrf2 в ядре клеток рака желудка и клинико-патологическими результатами.
В текущем исследовании, Nrf2 иммунореактивности был обнаружен преимущественно в ядре, а не только в естественных условиях, но также в пробирке в ряде желудочных линий раковых клеток. Было высказано предположение, что постоянная ядерная экспрессия Nrf2 в желудочном результатов линий раковых клеток в производстве антиоксидантов, которые придают на этих линиях раковых клеток высокую способность противостоять активных форм кислорода (ROS). Аналогичное явление было сообщено Ма и др. для шейки матки ткани рака Они сообщили, что upstaging рака шейки матки, приводит не только к более высокой концентрации Nrf2 в ядре раковых клеток, но и к более высокой концентрации вниз по течению антиоксидантных белков отклика [22]. Поэтому он может быть теоретически предположил, что желудочные раковые клетки линии с ядерной Nrf2 выражение будет иметь более высокий потенциал злокачественную через этот механизм.
Мы иммуногистохимическое определили высокий уровень экспрессии Nrf2 в раке желудка клинических образцов (таблица 2). Таким образом, 61,7% образцов были Nrf2 положительным, что было выше, чем процент положительных образцов сообщалось в немелкоклеточного рака легкого (26%) [21] или при раке желчного пузыря (23%) [23].
Кроме того, существуют значительные корреляции между экспрессией Nrf2 и несколько клинико-патологическими факторов, таких как размер опухоли, глубины опухоли, лимфатической инвазии, метастазов в лимфатических узлах, а также опухоли гистологии. Наши результаты согласуются с таковыми Wang и соавт. который сообщил, что экспрессия Nrf2 при раке желчного пузыря был в значительной степени связано с дифференциацией, стадии и метастазов в лимфатических узлах [23].
Недавно Сю-Freg Ху и др. Аналогичным образом исследовали экспрессию Nrf2 при раке желудка [26]. Они также предложили прогностическое значение выражения Nrf2 в соответствии с нашими результатами. Тем не менее, они сообщили, что Nrf2 иммунореактивности был обнаружен в цитоплазме, но, что он не был обнаружен в ядре. Это другой результат может быть связано с тем, что они использовали различные антитела от тех, которые используются в настоящем исследовании. Было хорошо известно, что Nrf2 проявляет свою антиоксидантную способность только тогда, когда транслоцируется в ядро ​​из цитоплазмы [27]. Наш иммуноблоттинга анализ показал, что Nrf2 был преимущественно присутствует в ядре клетки желудка линий раковых клеток. Поэтому мы считали, что сохраняющаяся избыточная экспрессия Nrf2 в ядре клеток рака желудка, вероятно, работал в качестве антиоксиданта, который защищал желудочные раковые клетки от РФК, и что ядерная экспрессия Nrf2 может отражать агрессивное поведение рака желудка. Исходя из этой теории, мы сочли необходимым оценить ядерной, но не цитоплазматическая экспрессия Nrf2 в клинических образцах рака желудка.
В этом исследовании мы показали прогностическое значение выражения Nrf2 с помощью однофакторного анализа. Хотя Nrf2 положительность не был выбран в качестве независимого прогностического маркера с помощью многофакторного анализа, этот вывод можно объяснить возможность того, что Nrf2 позитивности существенное влияние лимфоузлов, которое рассматривается как плохой прогностический фактор. Солис и др. и Ван и др. аналогичным образом, что экспрессия Nrf2 была связана с плохой общей выживаемости в немелкоклеточного рака легкого [21] и при раке желчного пузыря [23], соответственно. Эти данные свидетельствуют о том, что выражение Nrf2 могут быть использованы в качестве важного прогностического параметра для прогнозирования выживаемости пациентов после операции рака желудка.
Недавно было сообщено, что высокая экспрессия Nrf2 может облегчить и продлить выживание рака клеток после противораковой химиотерапии и лучевой терапии [14,16,19-22,28-33]. Наши результаты также показали, что положительное Nrf2 выражение было в значительной степени связано с сопротивлением на основе 5ФУ адъювантной химиотерапии. Эти объединенные результаты могут означать, что, оценивая уровень экспрессии Nrf2 в ядре клеток рака желудка, можно было бы предсказать лучших кандидатов, которые могут извлечь выгоду от получения не только адъювантной химиотерапии, но и неоадъювантной химиотерапии.
Генетическая или функциональное ингибирование Nrf2 было показано, что приводит к репрессиям клеточных -regulated антиоксидантных ферментов Nrf2, в том числе клеточного глутатиона, тиоредоксин и небелковых тиолов. В конечном счете, эти изменения могут восстанавливать чувствительность раковых клеток к противоопухолевым препаратам и лучевой терапии. Таким образом, чо и др. Сообщается, что функциональное ингибирование Nrf2 приводит к сенсибилизации раковых клеток к алкилирующим противораковых агентов [31]. Кроме того, Ма и др. сообщили, что комбинация цисплатин и нокдаун Nrf2 резко и рост опухоли значительно тормозится в естественных условиях [22].
Принимая эти доказательства во внимание, то весьма вероятно, что новый химиотерапевтическое протокол, который включает в себя регулирование Nrf2 будет введена в ближайшее будущее. Например, эффективность химиотерапии может быть предсказана путем оценки экспрессии Nrf2 и, если какой-либо из положительных пациентов Nrf2 оцениваются как устойчивые к химиотерапии, то это может быть возможным, чтобы достичь достаточной эффективности химиотерапии при одновременном ингибировании Nrf2. Поэтому новый химиотерапевтическое протокол, который включает в себя антиоксидантной терапии может быть полезным методом для решения клинических проблем.
Выводы
выражение Nrf2 тесно связана с клинико-патологическими факторами и прогнозом у больных раком желудка. Nrf2 выражение в рак желудка может быть полезным для оценки биологического злокачественного потенциала, который может быть опосредовано частично путем повышения Nrf2 антиоксидантной способности клеток рака желудка. Антиоксидантная терапия может быть перспективным подходом для лечения Nrf2 положительных пациентов с раком желудка
Сокращения
Nrf2:.
NF-E2, связанных с фактором 2


ОС:
окислительный стресс


Keap 1:
Kelch типа ECH-ассоциированный белок 1


являются: <бр> антиоксидантом элемент ответа


FBS:
эмбриональная бычья сыворотка


PBS:
фосфатный солевой буфер


TBS:
Трис-солевой буфер


TBST:
TBS-Tween 20


5ФУ:
5-фторурацил


ROS:
активных форм кислорода


декларациях
Выражение признательности
Мы заявляем, что каждый автор получил не Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Лимфангиогенез в рака желудка регулируется с помощью Akt /МРМ-VEGF-C /VEGF-D axis
• Факторы, определяющие посещаемость скрининга рака желудка в Корее: многоуровневая analysis