importancia clínico-patológica del factor nuclear (eritroide-2) Factor de -relacionado 2 (Nrf2) en la expresión gástrica cancer

significado clínico-patológica del factor nuclear (eritroide-2) Factor de -relacionado 2 (Nrf2) expresión en el cáncer gástrico
Resumen Antecedentes
factor de Francia El factor nuclear factor de transcripción (eritroide-2) -relacionado 2 (Nrf2) fue originalmente identificado como un regulador crítico de antioxidantes intracelulares y enzimas de fase II de desintoxicación a través de su transcripcional sobre regulación de muchos respuesta anti-oxidante elemento (SE) que contienen los genes. Nrf2 protege no sólo a las células normales, sino también a las células de cáncer de estrés celular, y aumenta la supervivencia de células de cáncer. Algunos estudios han demostrado que la expresión Nrf2 en pacientes con cáncer tiene importancia clínica. Sin embargo, no ha habido un análisis exhaustivo del nivel de expresión nuclear de Nrf2 en las células de cáncer gastrointestinal. En este estudio tuvo como objetivo evaluar la expresión inmunohistoquímica de Nrf2, y para evaluar su importancia clínica en el cáncer gástrico.
Métodos
Un total de 175 pacientes con cáncer gástrico que se gastrectomía R0 con disección de los ganglios linfáticos norma se inscribieron. Nosotros evaluamos la expresión inmunohistoquímica Nrf2 en los especímenes resecado quirúrgicamente en parafina de estos 175 pacientes. Se analizaron las diferencias entre los grupos utilizando la χ
2 prueba, la prueba exacta de Fisher y la prueba de Mann-Whitney U
prueba. Las asociaciones entre la expresión de Nrf2 y las características clínico-patológicas, incluyendo el resultado clínico, se evaluaron mediante análisis univariante y multivariante, y las curvas de Kaplan-Meier con la prueba de log-rank, respectivamente.
Resultados
Nrf2 inmunoreactividad fue identificado predominantemente en el núcleo de células de cáncer gástrico. positividad Nrf2 está estrechamente asociada con el tamaño del tumor, la profundidad del tumor, metástasis de ganglios linfáticos, invasión linfovascular, histología y estadio (p < 0,05 para todos). Una prueba de log-rank indicó que la supervivencia global del grupo Nrf2-positivas fue significativamente más pobre que la del grupo de Nrf2-negativo (p < 0,01). Y, la expresión positiva Nrf2 se asoció significativamente con la resistencia a la quimioterapia adyuvante basada en 5-FU (p = 0,024). Conclusiones

expresión Nrf2 se asoció positivamente con el comportamiento agresivo del tumor en el cáncer gástrico. Este resultado sugiere que la expresión Nrf2 en el cáncer gástrico es un indicador potencial de peor pronóstico.
Relacionada con NF-E2 Palabras clave
factor de 2 Antioxidantes cáncer gástrico Antecedentes
El cáncer gástrico es el cuarto cáncer más común gastrointestinal y la cáncer gastrointestinal fatal segunda más común en el mundo. países de Asia oriental, incluidos Japón se encuentran entre las zonas de más alto riesgo para el cáncer gástrico [1,2]. En Japón, el establecimiento de cribado poblacional mediante fluoroscopia foto o fibroscopía gastrointestinal ha dado lugar a cáncer gástrico se diagnostica en etapas tempranas. Se espera que un pronóstico favorable para estos pacientes con cáncer gástrico después de la cirugía curativa o tratamiento endoscópico. Sin embargo, algunos pacientes muestran una evolución desfavorable a pesar de recibir la resección curativa. El resultado postoperatorio de cáncer gástrico depende en gran medida de factores TNM [3,4]. Además de estos factores clinicopatológicos críticos, el pronóstico de carcinoma gástrico está influenciada por varias variables biológicas. En este contexto, es necesario encontrar nuevos factores relacionados con el cáncer que se pueden utilizar como marcadores para el diagnóstico y tratamiento del cáncer gástrico. En general se acepta que el estrés oxidativo (OS) está implicado en la fisiopatología de las enfermedades degenerativas. Además, se conocen también la generación y aumento de OS y el daño oxidativo del ADN secundaria a estar relacionado con el daño y la transformación maligna de la mucosa gástrica [5]. Por lo tanto, OS ha sido considerado para jugar un papel importante en la carcinogénesis del cáncer gástrico [5,6]. Comentario El factor de transcripción factor nuclear (eritroide-2) Factor de -related 2 (Nrf2), que es una base sensible a redox factor de transcripción bzip, fue originalmente identificado como un regulador crítico de antioxidantes intracelulares y enzimas de fase II de desintoxicación a través de la regulación positiva de la transcripción de muchos elemento de respuesta antioxidante (ARE) que contienen genes [7-9]. En condiciones basales, Nrf2 se une a la proteína asociada a ECH kelch-como 1 (Keap1), un adaptador de E3 ubiquitina ligasa basado en Cul3 que regula la ubiquitinación Nrf2 y proteasoma dependiente de la degradación de [10].
Tras la exposición de las células a el estrés oxidativo o compuestos quimiopreventivos, Nrf2 se transloca al núcleo, forma un heterodímero con su socio obligatorio Maf, se une a las secuencias están en el ADN y activa la transcripción de genes aguas abajo tales como antioxidantes y enzimas de fase II de desintoxicación [8,11-13] . El papel biológico importante de Nrf2 está subrayado por los resultados que demuestran la protección Nrf2 dependiente contra muchas enfermedades humanas o estados patológicos como el cáncer, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardiovasculares, inflamación, fibrosis pulmonar, lesión pulmonar aguda y Nrf2 también retarda el proceso de envejecimiento [14 -18]. Por lo tanto Nrf2 ha sido considerado como un "buen" factor de transcripción que es esencial para la protección contra el estrés oxidativo [19]. Sin embargo, los datos emergentes ha revelado el lado oscuro de Nrf2 [20]. Recientemente se ha demostrado que la activación aberrante de la ruta de Nrf2 se produce con frecuencia en células de cáncer y tejidos tumorales. Nrf2 protege no sólo a las células normales de la transformación en células cancerosas, pero también protege a las células de cáncer de estrés celular, aumenta la supervivencia de células de cáncer y se asocia con el crecimiento del cáncer y la progresión [18]. Dado que estas revelaciones, no ha habido un análisis exhaustivo del nivel de expresión de Nrf2 en el núcleo de las células de cáncer gástrico, y no ha habido estudios tendientes a esclarecer la relación entre el nivel de expresión de Nrf2 en el núcleo de las células de cáncer gástrico y clínica resultado. En el presente estudio, se llevó a cabo el primer examen del nivel de expresión de Nrf2 en el núcleo de las células de cáncer gástrico y se discute aún más la importancia clínica de expresión Nrf2 con respecto al anti- estrés oxidativo.
Métodos de Detección
Nrf2 expresión en líneas celulares de cáncer gástrico mediante análisis de transferencia Western
las líneas celulares de carcinoma gástrico MKN74, MNK45, Kato-III y NUGC4 fueron adquiridos de los japoneses física y química del Instituto, Tokio, Japón. Las células se incubaron en medio RPMI 1640 con 10% de suero bovino fetal (FBS), 100 unidades /ml de penicilina, y 100 mg /ml de estreptomicina a 37 ° C en un incubador de células. Todas las células se recogieron por centrifugación, se lavó con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y la proteína total se extrajo en tampón de lisis. Los extractos nucleares y citoplasmáticas fracciones de Western Blot de Nrf2 se prepararon utilizando un kit nuclear /citosol Fraccionamiento (K266-25, BioVison, California, EE.UU.). El análisis de transferencia Western de la expresión Nrf2 en líneas celulares de cáncer gástrico se realizó como sigue. proteína desnaturalizada extraída del núcleo o citoplasma se separó en un gel de SDS-poliacrilamida y se transfirió a una membrana Hybond, que después se bloqueó durante la noche en leche descremada al 5% en solución salina tamponada con Tris (TBS). A continuación, la membrana se incubó con el anticuerpo monoclonal de ratón contra Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, EE.UU.) a una dilución 1: 500 para pasar la noche. La membrana se enjuagó con TBS-Tween 20 (TBST) y se incubaron con anti-IgG de ratón conjugado con peroxidasa de rábano picante (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, EE.UU.) durante 15 minutos. Las bandas inmunorreactivas se visualizaron en una película de rayos X (Fuji, Japón) usando reactivos de detección ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Inglaterra). Posteriormente, para confirmar las fracciones nucleares y citoplasmáticas, la membrana se lavó con WB solución de reextracción (Nakalai Tesque, Tokio, Japón) durante 15 minutos y volvieron a sondar para los marcadores nucleares y citoplasmáticas utilizando el anticuerpo B1 anti-Lamin (ab16048, Abcam, Cambridge , EE.UU., 1: 1000) y el anticuerpo anti-α-tubulina (CP06, Calbiochem, MA, EE.UU., 1:. 1000), respectivamente
pacientes y muestras
estudio incluyó 175 pacientes con adenocarcinoma gástrico que habían invadido en la capa submucosa o más profundo. Todos los pacientes fueron sometidos a una gastrectomía curativa con disección de los ganglios linfáticos en el Hospital de la Universidad de Kagoshima desde enero de 1995 hasta diciembre de 2004. Entre los 175 pacientes, 57, 14, 99, y 5 pacientes recibieron distal, proximal, gastrectomía total y parcial, respectivamente. La razón hombre-mujer fue de 116 a 59, y la edad media fue de 66 años, que van de 31 a 84 años. El número de pacientes con estadio I, II y III, el cáncer gástrico fue de 47, 33 y 95, respectivamente. Punto de vista histopatológico, se diferenciaron 71 casos (papilar bien diferenciado y moderadamente diferenciado adenocarcinoma tubular) y 104 eran indiferenciado (adenocarcinoma pobremente diferenciado, adenocarcinoma mucinoso y carcinoma de células en anillo de sello) carcinomas de acuerdo con el 7 ª edición de metástasis en los ganglios tumorales clasificación. Ninguno de estos pacientes recibió quimioterapia antes de la cirugía. escrito el consentimiento informado se obtuvo de los pacientes y el estudio fue aprobado por el Comité Ético del Hospital de la Universidad de Kagoshima (número de registro 35-24). Esta investigación se ajustaba a los principios esbozados en la Declaración de Helsinki. hallazgos clínico-patológicos se describen de acuerdo con el 7 ª edición de la clasificación nodo metástasis tumoral.
El análisis inmunohistoquímico de Nrf2 en el cáncer gástrico y su evaluación
Las muestras tumorales fueron fijadas con formaldehído al 10% en PBS, se incluyeron en parafina, seccionaron en secciones gruesas de 4 micras y montados en portaobjetos de vidrio para el análisis inmunohistoquímico. Las secciones se deparaffinised en xileno y se deshidrataron en una serie de etanol graduado. La actividad de la peroxidasa endógena de los especímenes fue bloqueada mediante la inmersión de los portaobjetos en una solución de peroxidasa de metanol 3% de hidrógeno durante 10 min a temperatura ambiente. Después de lavar tres veces con PBS (5 min por lavado), las secciones se trataron con 1% de albúmina de suero bovino durante 30 min a temperatura ambiente para bloquear las reacciones no específicas. Para la tinción con anticuerpos anti-Nrf2, las secciones se tratan previamente con tampón de citrato durante 10 min a 121 ° C en un horno de microondas para recuperar la antigenicidad. Las secciones se lavaron tres veces con PBS durante 5 min cada vez, y luego se bloquearon mediante el tratamiento con PBS que contenía 3% de leche desnatada durante 10 min a temperatura ambiente. Las secciones bloqueadas se incubaron con el anticuerpo anti-Nrf2 primario diluido (sc-365 949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) en PBS a 4 ° C durante la noche, seguido de tinción con un kit de estreptavidina-biotina-peroxidasa ( Nichirei, Tokio, Japón). Las secciones se lavaron tres veces en PBS durante 5 min por lavado, y el complejo inmune se visualizó por incubación de las secciones con clorhidrato de diaminobencidina tetra. Las secciones se enjuagaron brevemente en agua, por contraste con hematoxilina y se montaron. tejido placentario no canceroso se utilizó como control positivo para Nrf2. expresión Nrf2 se determinó contando el número de células cancerosas en el que el núcleo se tiñó con el anticuerpo anti-Nrf2. Todos immunostained diapositivas fueron evaluados por dos observadores independientes (YK y SI), que no tenían conocimiento de los datos clínicos y la evolución de la enfermedad. Para evaluar la expresión Nrf2, se seleccionaron 10 campos representativos dentro del tumor, y la expresión en un total de 1000 células cancerosas (100 células por campo) se evaluó usando alta potencia (× 400) microscopía. En el caso de coexistencia de la superficie selectiva y no selectiva en la misma sección, se evaluó el nivel de expresión de Nrf2 en la zona indiferenciada, a pesar de que el área de la indiferenciada es más pequeña que el área diferenciada. El índice medio de etiquetado de Nrf2 se evaluó de acuerdo con la proporción de células positivas en cada campo. Expresión de Nrf2 se evaluó basándose tanto en la proporción de células positivas y la intensidad de la tinción. La intensidad de la tinción de Nrf2 se cuantificó usando una puntuación de intensidad de tres valores (0, 1+ o 2+). El grado de reactividad se evaluó según Solis et al. [21] y se expresó como un porcentaje (0-100%). puntajes inmunohistoquímicos, que iban de 0 a 200, se calculan multiplicando los valores de la intensidad y el grado de reactividad. Se utilizaron estas calificaciones para determinar los niveles de expresión Nrf2. Ya que la puntuación media de la expresión Nrf2 en el cáncer gástrico fue de 110 en el presente estudio, un valor de corte de 100 se decidió.
Asociación entre el nivel de expresión de Nrf2 en el cáncer gástrico y la quimio-resistencia
Para evaluar si la nivel de expresión de Nrf2 en el cáncer gástrico afecta a la quimio-resistencia, se comparó el nivel de expresión de Nrf2 en pacientes con cáncer gástrico que recibieron 5-fluorouracilo (5-FU) la quimioterapia adyuvante basada. Definimos "resistencia 5FU", como el cáncer gástrico que recidiva tras la quimioterapia adyuvante. Como un protocolo estándar, administramos basada en 5FU quimioterapia adyuvante a pacientes con cáncer en estadio II o III. Se excluyeron los pacientes que no eran capaces de continuar la quimioterapia adyuvante, debido a los efectos secundarios. Como resultado, 72 pacientes fueron incluidos en este análisis.
El análisis estadístico
El análisis estadístico de las diferencias entre grupos se realizó mediante la χ
2 prueba, la prueba exacta de Fisher y la prueba de Mann-Whitney U
prueba. El método de Kaplan-Meier se utilizó para el análisis de supervivencia, y las diferencias en la supervivencia se estimaron mediante el uso de la prueba de log-rank. Los factores pronósticos fueron examinados por análisis univariado y multivariado (Cox de riesgos proporcionales modelo de regresión). Un valor de p <
; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando la versión 6.0 StatFlex para el software de Windows (versión 6.0 StatFlex; Artec Inc., Osaka, Japón).
Resultados
expresión Nrf2 en líneas celulares de carcinoma gástrico
La expresión de Nrf2 en nuclear y las fracciones citoplasmáticas de líneas celulares de carcinoma gástrico se analizaron por transferencia Western. Nrf2 se expresó principalmente en el núcleo de todas las líneas celulares de cáncer gástrico y se observó poca expresión en el citoplasma (Figura 1). Figura 1 El factor nuclear (eritroide-2) -relacionado factor de 2 (Nrf2) expresión en líneas celulares de carcinoma gástrico. expresión de la proteína Nrf2 en los extractos nucleares y citoplásmicos de las líneas de células gástricas MKN74, MNK45, KATO-III, y NUGC4 se ensayó por transferencia Western. La transferencia se volvieron a sondar con anticuerpos anti-Lamin B1 y anti-α-tubulina que se utilizaron como controles positivos para el núcleo y el citoplasma, respectivamente. fracciones nucleares y citoplasmáticos se separaron claramente. La proteína Nrf2 se identificó principalmente en el núcleo de todas las líneas celulares de cáncer gástrico. Poco Nrf2 se detectó en el citoplasma.
Nrf2 expresión inmunohistoquímica en el cáncer gástrico y su asociación con características clinicopatológicas
A continuación se determinó la expresión y localización subcelular de Nrf2 en 175 tejidos de cáncer gástrico archivos incluidos en parafina, mediante inmunohistoquímica. Las características clinicopatológicas de los pacientes se muestran en la Tabla 1. inmunorreactividad Nrf2 se detectó principalmente en el núcleo (Figura 2). Una evaluación más profunda de la inmunorreactividad nuclear de Nrf2 indicó que el patrón inmunorreactiva Nrf2 difería entre las células de cáncer gástrico diferenciadas y no diferenciadas células de cáncer gástrico en la misma muestra. Así, las células de cáncer gástrico no diferenciadas eran más propensos a mostrar inmunorreactividad Nrf2 positivo en comparación con células de cáncer gástrico diferenciadas. De los 175 pacientes, 108 (61,7%) muestran una puntuación inmunohistoquímica Nrf2 de más de 100 y se clasificaron como Nrf2 positivo. Los 67 (38,3%) pacientes restantes fueron clasificados como el grupo negativo Nrf2. La Tabla 2 muestra la correlación entre la expresión de Nrf2 y las características clínico-patológicas. Nrf2 expresión positiva se asoció significativamente con el sexo, el tamaño del tumor, la profundidad del tumor, metástasis de ganglios linfáticos, invasión linfovascular, clasificación histológica y la etapa clínica de cancer.Table gástrica 1 Características de los pacientes
Nº
género
Hombre
116
Mujer
59
Edad media

66
Rango
31-84
Operación
99
total gastrectomía distal

56
proximal página 14
parcial página 6
Etapa
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histología
diferenciada
71
indiferenciado
104
etapa se evaluó de acuerdo con la 7ª edición de la clasificación de metástasis en los ganglios tumorales.
Figura 2 La inmunotinción del factor nuclear (eritroide-2) Factor de -relacionado 2 (Nrf2) en muestras clínicas de cáncer gástrico. inmunotinción representante de Nrf2 en (a) Control positivo, tejido placentario no canceroso; (B) el tejido normal del estómago; (c - e) los tejidos de cáncer gástrico; (C) la tinción negativa de Nrf2, (d) tinción débil (1) de Nrf2, (e) tinción fuerte (2) de Nrf2 (aumento original, × 400). Expresión de Nrf2 en muestras clínicas. La inmunotinción de Nrf2 (aumento original, × 400)
Tabla 2 Correlación entre la expresión del factor nuclear de los factores (eritroide-2) -relacionado 2 (Nrf2) y los factores clínico-patológicos
factores clínicos
Expresión de Nrf2
P- valor
negativo positivo

n = 67 (38,3%) guía empresas n = 108 (61,7%)
Edad
ns Hotel < 65
22
47
≧ 65
45
61
Género Hotel < 0,05
masculina
51
65
femenina
16
43
El tamaño del tumor Hotel < 0,01 Hotel < 5 cm
36
27
≧ 5 cm de profundidad
31
81
tumor Hotel < 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
Las metástasis ganglionares Hotel < 0,05
Sí
35
74
Sin
32
34
Etapa Hotel < 0,01
IA, IB
28 página 19
IIA, IIB página 12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
linfovascular invasión Hotel < 0,05
Sí
49
90
Sin
18 página 14
Histología Hotel < 0,01
diferenciada
37
34
indiferenciado
30
74
Nrf2 expresión inmunohistoquímica en el cáncer gástrico y su asociación con la resistencia 5FU
Tabla 3 muestra la correlación entre expresión Nrf2 y resistencia a 5-FU en los 72 pacientes que fueron tratados con quimioterapia adyuvante basada en 5-FU. De estos 72 pacientes, 59 eran Nfr2 positivo y 13 eran Nfr2 negativo. De los 59 pacientes Nfr2 positivos, 43 (72,9%) pacientes eran resistentes a 5-FU, mientras que sólo el 5 (38,5%) de los 13 pacientes eran resistentes negativos Nrf2 5FU. La diferencia entre el porcentaje de pacientes negativos Nrf2 positivos y Nrf2 en el grupo de resistencia 5FU fue estadísticamente significativa (p = 0,024) .Tabla 3 Correlación entre la expresión del factor nuclear (eritroide-2) -relacionado factor de 2 (Nrf2) y 5-fluorouracilo (5FU) quimiosensibilidad
sensibilidad 5FU
Expresión de Nrf2
P- valor
negativo positivo

Resistente página 5
43
0,024
sensible página 8
16
el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier
análisis indicó que la supervivencia global del grupo positivo Nrf2 fue significativamente más pobres que la del grupo de Nrf2 negativo (61% vs. 79%, respectivamente) (p < 0,01) (Figura 3). Figura 3 resultados postoperatorios de 175 pacientes con cáncer gástrico de acuerdo con el factor nuclear (eritroide-2) Factor de -relacionado 2 (Nrf2) expresión. El análisis de Kaplan Meier de los resultados postoperatorios de 175 pacientes con cáncer gástrico según la expresión Nrf2. Las curvas de supervivencia se construyeron para los 175 pacientes que se dividieron en grupos de Nrf2-positivos y negativos Nrf2. El grupo Nrf2-positivo tuvo un resultado significativamente peor que el grupo Nrf2-negativo (p < 0,01).
Además, la profundidad del tumor, el tamaño del tumor, metástasis de ganglios linfáticos, la clasificación histológica, la invasión linfovascular fueron también factores importantes para la supervivencia basado en el análisis univariante (Tabla 4) .Tabla 4 análisis univariado y multivariado de factores pronósticos en el cáncer gástrico
factores clínicos

univariante
multivariado
p

multivariado P
cociente de riesgos
intervalo de confianza del 95%

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
tamaño del tumor Hotel < 0,01
0,35 1,58

0,61 - 4,09
implicación nodal Hotel < 0,01 0,03

5,02 1,18
- 21.41
linfovascular invasión Hotel < 0,05
0,27 0,35

0,05-2,26
Histología Hotel < 0,05 0,17

1.1.62
0,81-3,24
Nrf2 Hotel < 0,05
0,40 1,37

0,66-2,87
Nrf2, el factor nuclear 2.
también se realizó (eritroide-2) Factor de -relacionado análisis multivariado de estos seis factores, entre ellos Nrf2 como un marcador pronóstico independiente. metástasis en los ganglios linfáticos fue seleccionado como marcador pronóstico independiente. Sin embargo, la expresión de Nrf2 no ​​fue seleccionado (Tabla 4).
Discusión
El antioxidante Nrf2, que funciona para proteger las células normales de numerosas condiciones oxidantes dañinos, ha sido considerado como un importante mecanismo de defensa celular. Sin embargo, muchos trabajos han indicado la sobreexpresión de Nrf2 y sus genes aguas abajo en muchos tipos de cáncer humano [19-25]. Estos informes mostraron que Nrf2 no ​​sólo protege a las células normales de la transformación en células cancerosas, pero también pueden facilitar la proliferación de células cancerosas y prolongar la supervivencia [18]. El presente informe es el primer informe que demuestra una relación entre el nivel de expresión de Nrf2 en el núcleo de las células de cáncer gástrico y los hallazgos clínico-patológicos.
En el presente estudio, se detectó predominantemente Nrf2 inmunoreactividad en el núcleo, no sólo en vivo, pero también in vitro en un número de líneas celulares de cáncer gástrico. Se ha especulado que la expresión nuclear de Nrf2 persistente en líneas celulares de cáncer gástrico resultados en la producción de antioxidantes, que confieren a estas líneas celulares de cáncer de una alta capacidad para resistir las especies reactivas de oxígeno (ROS). Un fenómeno similar se informó por Ma et al. para el tejido de cáncer de cuello uterino Se informó de que eclipsar de cáncer cervical conduce no sólo a una concentración más alta de Nrf2 en el núcleo de las células cancerosas, pero también a una mayor concentración de proteínas de respuesta antioxidantes aguas abajo [22]. Por lo tanto, puede ser en teoría propone que las líneas celulares de cáncer gástrico con la expresión nuclear de Nrf2 tendrían un mayor potencial maligno a través de este mecanismo.
inmunohistoquímica identificado una alta tasa de expresión Nrf2 en muestras clínicas de cáncer gástrico (Tabla 2). Por lo tanto, 61,7% de las muestras eran Nrf2 positivo, que era mayor que el porcentaje de muestras positivas reportado en carcinoma de pulmón de células no pequeñas (26%) [21] o en cáncer de vesícula biliar (23%) [23].
Por otra parte, hubo correlaciones significativas entre la expresión de Nrf2 y varios factores clínico-patológicos tales como el tamaño del tumor, la profundidad del tumor, invasión linfática, metástasis en los ganglios linfáticos y la histología del tumor. Nuestros resultados están de acuerdo con los de Wang et al. quien informó que la expresión de Nrf2 en cáncer de vesícula biliar se asoció significativamente con la diferenciación, estadio y metástasis de ganglios linfáticos [23].
Recientemente Xiu-Freg Hu et al. investigado de manera similar la expresión Nrf2 en el cáncer gástrico [26]. También sugirieron un significado pronóstico de la expresión Nrf2 de acuerdo con nuestros resultados. Sin embargo, se informó que Nrf2 inmunorreactividad se detectó en el citoplasma, pero que no se detectó en el núcleo. Este resultado diferente puede ser debido al hecho de que se utilizaron diferentes anticuerpos a partir de las que se usan en el presente estudio. Ha sido bien documentado que Nrf2 ejerce su capacidad antioxidante sólo cuando se transloca al núcleo del citoplasma [27]. Nuestro análisis de inmunotransferencia mostró que Nrf2 era predominantemente presente en el núcleo de las células de las líneas celulares de cáncer gástrico. Por lo tanto, consideramos que la sobreexpresión persistente de Nrf2 en el núcleo de células de cáncer gástrico probable trabajó como un antioxidante que protege las células de cáncer gástrico de ROS, y que Nrf2 expresión nuclear puede reflejar el comportamiento agresivo del cáncer gástrico. Sobre la base de esta teoría, consideramos que es esencial para evaluar nuclear, pero no frente al citoplasma de expresión de Nrf2 en muestras clínicas de cáncer gástrico.
En este estudio, hemos demostrado el valor pronóstico de la expresión Nrf2 por análisis univariado. Aunque Nrf2 positividad no fue seleccionado como un marcador pronóstico independiente en el análisis multivariante, este hallazgo puede explicarse por la posibilidad de que Nrf2 positividad fue significativamente afectada por la afectación ganglionar que fue considerado como factor de mal pronóstico. Solis et al. y Wang et al. informó de forma similar que la expresión de Nrf2 se asoció con una pobre supervivencia global en el carcinoma no microcítico de pulmón de células [21] y en el cáncer de vesícula biliar [23], respectivamente. Estos datos sugieren que la expresión Nrf2 podría ser utilizado como un parámetro pronóstico significativo para la predicción de la supervivencia de pacientes con cáncer gástrico postoperatorias.
Recientemente se ha informado de que la alta expresión Nrf2 puede facilitar y prolongar la supervivencia de células de cáncer después de la quimioterapia contra el cáncer y la terapia de radiación [14,16,19-22,28-33]. Nuestros resultados también mostraron que la expresión Nrf2 positiva se asoció significativamente con la resistencia a la quimioterapia adyuvante a base 5FU. Estos resultados combinados pueden implicar que, mediante la evaluación del nivel de expresión de Nrf2 en el núcleo de células de cáncer gástrico, podría ser posible predecir los mejores candidatos que pueden beneficiarse de recibir no sólo la quimioterapia adyuvante, sino también la quimioterapia neoadyuvante.
Genética o inhibición funcional de Nrf2 se ha demostrado que resulta en la represión de Nrf2 enzimas -regulated antioxidantes celulares, incluyendo glutatión celular, tiorredoxina y tioles no proteicos. En última instancia, estas alteraciones pueden restaurar la sensibilidad de las células cancerosas a medicamentos contra el cáncer y la terapia de radiación. Por lo tanto, Cho et al. informó de que la inhibición funcional de Nrf2 conduce a la sensibilización de las células cancerosas a alquilantes agentes contra el cáncer [31]. Además, Ma et al. informó de que la combinación de cisplatino y desmontables de Nrf2 dramáticamente y el crecimiento del tumor significativamente inhibida in vivo [22].
Tomando estas evidencias en cuenta, es muy probable que un nuevo protocolo quimioterapéutico que implica la regulación Nrf2 se introducirá en la cerca futuro. Por ejemplo, la eficacia de la quimioterapia puede ser predicha por primera evaluación de la expresión Nrf2 y, si alguno de los pacientes Nrf2 positivos se evalúan como resistentes a la quimioterapia, a continuación, puede ser posible para conseguir una eficacia suficiente de la quimioterapia por inhibición concomitante de Nrf2. Por lo tanto un nuevo protocolo quimioterapéutico que incluye la terapia antioxidante puede ser un método útil para la resolución de un problema clínico.
Conclusiones
expresión Nrf2 está estrechamente asociada con factores clinicopatológicos y el pronóstico de pacientes con cáncer gástrico. expresión Nrf2 en el cáncer gástrico puede ser útil para la evaluación de potencial maligno biológica, que puede estar mediada en parte por la mejora Nrf2 de la capacidad antioxidante de las células de cáncer gástrico. La terapia antioxidante podría ser un enfoque prometedor para el tratamiento de pacientes con cáncer gástrico positivos Nrf2
abreviaciones
Nrf2:.
relacionada con NF-E2 factor de 2
OS:
El estrés oxidativo
Keap 1:
Kelch-ECH como la proteína asociada a 1
son:
elemento de respuesta antioxidante
FBS: suero bovino fetal
PBS: tampón fosfato salino


TBS:
solución salina tamponada con Tris
TBST:
TBS-Tween 20
5FU: página 5-fluorouracilo
ROS:
especies reactivas del oxígeno
Declaraciones
Agradecimientos
declaramos que cada autor no recibió Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• Linfangiogénesis en el cáncer gástrico regulada a través de Akt mTOR VEGF-C-eje /VEGF-D /
• Determinantes de la asistencia a la detección del cáncer gástrico en Corea: un análisis multinivel