Klinisch-pathologische betekenis van de nucleaire factor (erytroïde-2) -gerelateerde factor 2 (Nrf2) expressie bij maagkanker

Klinisch-pathologische betekenis van de nucleaire factor (erytroïde-2) gerelateerde factor 2 (Nrf2) expressie bij maagkanker
Abstracte achtergrond
De transcriptiefactor nuclear factor (erytroïde-2) gerelateerde factor 2 (Nrf2) was oorspronkelijk geïdentificeerd als een belangrijke regulator van intracellulaire anti-oxidanten en fase II detoxificatie-enzymen via de transcriptionele up-regulering van vele anti-oxidant responselement (ARE) bevattende genen. Nrf2 beschermt niet alleen normale cellen maar ook kankercellen cellulaire stress, en verbetert kanker celoverleving. Sommige studies hebben aangetoond dat Nrf2 expressie in kankerpatiënten klinische betekenis. Echter, er is geen uitgebreide analyse van de nucleaire expressie niveau van Nrf2 in het maagdarmkanaal kankercellen geweest. In deze studie gericht we de expressie van Nrf2 immunohistochemisch te evalueren, en om de klinische relevantie bij maagkanker te beoordelen.
Methods
Een totaal van 175 patiënten met maagkanker die R0 gastrectomie met standaard lymfeklierdissectie ontvangen werden ingeschreven. We immunohistochemisch onderzocht Nrf2 expressie in paraffine ingebedde chirurgisch resectiepreparaten van deze 175 patiënten. groep verschillen werden geanalyseerd met behulp van de χ
2 test, Fisher's exact test, en de Mann-Whitney U Electronics Test. Associaties tussen Nrf2 expressie en clinicopathologische functies, waaronder klinische resultaten werden beoordeeld met behulp van univariate en multivariate analyse en Kaplan-Meier curves met de log-rank test, respectievelijk.
Resultaten
Nrf2 immunoreactiviteit werd voornamelijk geïdentificeerd in de kern van maagkanker cellen. Nrf2 positiviteit was nauw verbonden met de grootte van de tumor, tumor diepte, lymfkliermetastasen, lymfovasculaire invasie, histologie en fase (p < 0,05 voor iedereen). Een log-rank test gaf aan dat de totale overleving van de Nrf2-positieve groep was beduidend slechter dan die van de Nrf2-negatieve groep (p < 0,01). En, was positief Nrf2 expressie significant geassocieerd met resistentie tegen-5-FU gebaseerde adjuvante chemotherapie (p = 0,024).
Conclusies
Nrf2 expressie werd positief geassocieerd met agressief gedrag van de tumor bij maagkanker. Dit resultaat suggereert dat Nrf2 expressie in maagkanker is een potentiële indicator van slechtere prognose.
Sleutelwoorden
NF-E2-gerelateerde factor 2 Maagkanker Antioxidanten Achtergrond
Maagkanker is de vierde meest voorkomende maagdarmkanker en na meest voorkomende dodelijke maagdarmkanker ter wereld. Oost-Aziatische landen, waaronder Japan behoren tot de hoogste risicogebieden voor maagkanker [1,2]. In Japan is de instelling van massale screening met foto fluoroscopie of gastrointestinale fibroscopy tot maagkanker diagnose in een vroeg stadium. Een gunstige prognose wordt verwacht voor deze maagkankerpatienten na curatieve operatie of endoscopische behandeling. Echter, sommige patiënten vertonen een ongunstig natuurlijk, ondanks het ontvangen van curatieve resectie. Postoperatieve uitkomst van maagkanker sterk afhankelijk TNM factoren [3,4]. Naast deze kritische clinicopathologische factoren, is de prognose voor maagcarcinoom beïnvloed door verschillende biologische variabelen. In dit verband is het noodzakelijk om nieuwe kanker-gerelateerde factoren die kunnen worden gebruikt als markers voor de diagnose en behandeling van maagkanker vinden. Algemeen wordt aangenomen dat oxidatieve stress (OS) is betrokken bij de pathofysiologie van degeneratieve ziekten. Bovendien worden het genereren en toename van OS en secundaire DNA oxidatieve schade ook bekend met betrekking tot de schade en maligne transformatie van maagslijmvlies [5]. Zo heeft OS beschouwd belangrijke rol spelen bij de carcinogenese van maagkanker [5,6]. Ondernemingen De transcriptiefactor nucleaire factor (erythroide-2) gerelateerde factor 2 (Nrf2), dat een essentieel redox-gevoelige bZIP transcriptiefactor, werd oorspronkelijk geïdentificeerd als een belangrijke regulator van intracellulaire antioxidanten en van fase II detoxificatie-enzymen door de transcriptionele opregulatie van vele antioxidantreactie element (ARE) bevattende genen [7-9]. Onder basale omstandigheden, is gebonden aan het Nrf2 Kelch-like-ECH geassocieerd eiwit 1 (Keap1), een cul3 gebaseerde ubiquitine E3 ligase adapter Nrf2 ubiquitinatie en afbraak proteasoomafhankelijke [10].
Regelt Bij blootstelling van cellen aan oxidatieve stress of chemopreventieve verbindingen, Nrf2 naar de kern, vormt een heterodimeer met verplichte partner Maf, bindt aan de ARE sequenties in DNA en activeert de transcriptie van de downstream genen zoals antioxidantia en fase II detoxificatie-enzymen [8,11-13] . De belangrijkste biologische rol van Nrf2 wordt onderstreept door bevindingen tonen Nrf2-afhankelijke bescherming tegen vele menselijke ziekten of pathologische toestanden zoals kanker, neurodegeneratieve aandoeningen, cardiovasculaire aandoeningen, ontsteking, longfibrose, acute longschade en Nrf2 vertraagt ​​ook het verouderingsproces [14 -18]. Nrf2 aldus is beschouwd als een "goede" transcriptiefactor die essentieel is voor bescherming tegen oxidatieve stress [19]. Echter, opkomende data heeft de donkere kant van Nrf2 [20] onthuld. Recent is aangetoond dat afwijkende activering van het Nrf2 pathway vaak voorkomt in kankercellen en tumorweefsels. Nrf2 beschermt niet alleen normale cellen van transformeren in kankercellen, maar beschermt kankercellen cellulaire stress, versterkt kankercel overleving en wordt geassocieerd met de groei en progressie van kanker [18]. Aangezien deze onthullingen is er geen uitgebreide analyse van de expressie niveau van Nrf2 in de kern van maagkanker cellen geweest, en er zijn geen studies die gericht zijn op de relatie tussen de expressie van Nrf2 verduidelijking in de kern van maagkanker cellen en klinische geweest resultaat. In de huidige studie, voerden we het eerste onderzoek van de expressie niveau van Nrf2 in de kern van maagkanker cellen en de klinische betekenis van Nrf2 meningsuiting verder te bespreken met betrekking tot oxidatieve stress anti-.
Methoden
Detectie van Nrf2 expressie in maagkanker cellijnen door Western blot analyse
maagcarcinoom cellijnen MKN74, MNK45, KATO III en NUGC4 werden gekocht bij de Japanse Physical and Chemical Institute, Tokyo, Japan. De cellen werden geïncubeerd in RPMI 1640 met 10% foetaal runderserum (FBS), 100 eenheden /ml penicilline en 100 ug /ml streptomycine bij 37 ° C in een cel incubator. Alle cellen werden geoogst door centrifugatie, gespoeld met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en totaal proteïne werd geëxtraheerd in lysisbuffer. Nucleaire extracten en cytoplasmatische fracties van Western blotting van Nrf2 werden bereid onder toepassing van een nucleair /cytosol Fractionering Kit (K266-25, BioVison, California, USA). Western blot analyse van expressie in Nrf2 maagkanker cellijnen werd als volgt uitgevoerd. Gedenatureerde proteïne geëxtraheerd uit de kern en cytoplasma werd gescheiden op een SDS-polyacrylamidegel en overgebracht op Hybond membraan, dat vervolgens overnacht in 5% afgeroomde melk geblokkeerd in Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS). Het membraan werd vervolgens geïncubeerd met muizen monoklonaal antilichaam tegen Nrf2 (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) bij 1: 500 verdunning overnacht. Het membraan werd gespoeld met TBS-Tween 20 (TBST) en geïncubeerd met anti-muis IgG geconjugeerd aan mierikswortelperoxidase (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) gedurende 15 minuten. Immunoreactieve banden werden gevisualiseerd op röntgenfilm (Fuji, Japan) onder toepassing van ECL-plus detectiereagentia (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Engeland). Vervolgens, nucleaire en cytoplasmatische fracties bevestigen, werd het membraan gewassen met WB stripoplossing (Nakalai Tesque, Tokyo, Japan) gedurende 15 minuten en opnieuw gesondeerd nucleaire en cytoplasmatische markers met de anti-Lamine B1 antilichaam (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) en de anti-α-tubuline antilichaam (CP06, Calbiochem, MA, Verenigde Staten, 1:. 1000) respectievelijk
patiënten en monsters Inloggen Deze studie omvatte 175 patiënten met adenocarcinoom van de maag, dat was binnengedrongen in submucosa of dieper. Alle patiënten ondergingen curatieve gastrectomie met lymfeklierdissectie bij Kagoshima University Hospital van januari 1995 tot december 2004. Onder de 175 patiënten, 57, 14, 99 en 5 patiënten kregen distale, proximale, volledige en gedeeltelijke gastrectomie, respectievelijk. De verhouding mannen en vrouwen was 116-59, en de gemiddelde leeftijd was 66 jaar, uiteenlopend van 31 tot 84 jaar oud. Het aantal patiënten met stadium I, II en III maagkankers was 47, 33 en 95, respectievelijk. Histopathologisch werden 71 gevallen gedifferentieerd (papillair, goed gedifferentieerde en matig gedifferentieerde tubulaire adenocarcinoom) en 104 waren ongedifferentieerde (slecht gedifferentieerd adenocarcinoom, mucinous adenocarcinoom en zegelring cell carcinoma) carcinomen volgens de 7 e editie van de tumor metastase classificatie. Geen van deze patiënten kregen chemotherapie voor de operatie. Schriftelijke toestemming is verkregen van de patiënten en de studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van Kagoshima University Hospital (registratienummer 35-24). Dit onderzoek voldeden aan de in de Verklaring van Helsinki principes. Clinicopathologische bevindingen worden beschreven op basis van de 7 e editie van de tumor metastase indeling.
Immunohistochemische analyse van Nrf2 bij maagkanker en de evaluatie
Tumor monsters werden gefixeerd met 10% formaldehyde in PBS, ingebed in paraffine, verdeeld in 4-um dikke secties en gemonteerd op glasplaatjes voor immunohistochemische analyse. Secties werden deparaffinised in xyleen en gedehydrateerd in een gegradeerde reeks van ethanol. De endogene peroxidase activiteit van de monsters werd geblokkeerd door onderdompeling van de objectglaasjes in een 3% waterstof- peroxidase-methanol gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Na driemaal wassen met PBS (5 min per wasbeurt) werden de coupes behandeld met 1% bovine serum albumine gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur om niet-specifieke reacties te blokkeren. Voor kleuring met anti-Nrf2 antilichamen werden secties voorbehandeld met citraatbuffer gedurende 10 minuten bij 121 ° C in een magnetron om antigeniciteit te halen. De coupes werden drie maal gewassen met PBS gedurende 5 min per keer en werden vervolgens geblokkeerd door behandeling met PBS dat 3% afgeroomde melk gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. De geblokkeerde secties werden geïncubeerd met verdunde primaire anti-Nrf2-antilichaam (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) in PBS bij 4 ° C geïncubeerd, gevolgd door kleuring met een streptavidine-biotine-peroxidase kit ( Nichirei, Tokyo, Japan). De coupes werden drie maal gewassen in PBS gedurende 5 min per wasbeurt en het immuuncomplex werd zichtbaar gemaakt door incuberen van de secties met diaminobenzidine tetra- hydrochloride. De secties werden kort gespoeld in water, tegengekleurd met hematoxyline en gemonteerd. Goedaardige placenta weefsel werd gebruikt als positieve controle voor Nrf2. Nrf2 expressie werd bepaald door telling van het aantal kankercellen waarin de kern werd gekleurd met het anti-Nrf2 antilichaam. Alle immunologisch objectglaasjes werden geëvalueerd door twee onafhankelijke waarnemers (yk en SI), die zich onbewust van de klinische gegevens en overleving hebben waren. Om Nrf2 meningsuiting, 10 representatieve gebieden in de tumor werden geselecteerd, en de uitdrukking uit te werken in een totaal van 1.000 kankercellen (100 cellen per veld) werd geëvalueerd met behulp van een hoog vermogen (× 400) microscopie. Bij coëxistentie van gedifferentieerde en ongedifferentieerde gebied dezelfde afdeling, onderzochten we het expressieniveau van Nrf2 in de ongedifferentieerde gebied, terwijl het gebied van ongedifferentieerde kleiner dan gedifferentieerd gebied. De gemiddelde labeling index van Nrf2 werd beoordeeld op het percentage positieve cellen in elk veld. Expressie van Nrf2 werd beoordeeld op basis van zowel het percentage positieve cellen en de intensiteit van kleuring. De intensiteit van Nrf2 kleuring werd gekwantificeerd met behulp van een drie-waarde intensiteit score (0, 1+ of 2+). De mate van reactiviteit werd geëvalueerd volgens Solis et al. [21] en werd uitgedrukt als een percentage (0-100%). Immunohistochemische scores, die varieerde van 0 tot 200, berekend door de waarden van de intensiteit en de mate van reactiviteit vermenigvuldigen. Deze scores werden gebruikt om Nrf2 expressieniveaus te bepalen. Aangezien de mediane score van Nrf2 expressie bij maagkanker was 110 in de huidige studie, een cut-off waarde van 100 werd besloten.
Associatie tussen de expressie van Nrf2 bij maagkanker en chemoresistance Belgique Om te evalueren of de expressie van Nrf2 bij maagkanker beïnvloedt chemoresistance, vergeleken we de expressie niveau van Nrf2 bij maagkanker patiënten die 5-fluorouracil (5-FU) op basis adjuvante chemotherapie gekregen. We omschreven "5FU verzet", zoals maagkanker dat teruggekomen na adjuvante chemotherapie. Als een standaard protocol, beheren we-5-FU gebaseerde adjuvante chemotherapie bij patiënten met stadium II of III kanker. We uitgesloten patiënten die niet in staat zijn om adjuvante chemotherapie wegens bijwerkingen blijven waren. Als resultaat werden 72 patiënten in deze analyse.

Statistische analyse Statistische analyse van groepsverschillen werd uitgevoerd met de χ
2 test, Fisher's exact test en de Mann-Whitney U
testen. De Kaplan-Meier-methode werd gebruikt om te overleven analyse, en de verschillen in overleving werden geschat met behulp van de log-rank test. Prognostische factoren werden onderzocht door univariate en multivariate analyse (Cox proportionele risico's regressie model). Een p
waarde < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant te geven. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van de StatFlex versie 6.0 voor Windows-software (StatFlex versie 6.0, Artec Inc., Osaka, Japan).
Resultaten
Nrf2 expressie in maagcarcinoom cellijnen Ondernemingen De expressie van Nrf2 in nucleaire en cytoplasmatische fracties van maagcarcinoom cellijnen werd geanalyseerd door Western blotting. Nrf2 werd voornamelijk in de kern van alle maagkanker cellijnen en weinig expressie werd waargenomen in het cytoplasma (figuur 1). Figuur 1 Nucleaire factor (erytroïde-2) -gerelateerde factor 2 (Nrf2) expressie in de maag carcinoma cellijnen. Nrf2 eiwitexpressie in de nucleaire en cytoplasmatische extracten van de maag cellijnen MKN74, MNK45, KATO-III, en NUGC4 werd getest door Western blotting. De blot werd opnieuw gesondeerd met anti-Lamine B1 en anti-α-tubuline antilichamen die werden gebruikt als positieve controles voor de kern en cytoplasma, respectievelijk. Nucleaire en cytoplasmatische fracties waren duidelijk van elkaar gescheiden. Het Nrf2-eiwit werd geïdentificeerd vooral in de kern van maagkanker cellijnen. Little Nrf2 werd gedetecteerd in het cytoplasma.
Nrf2 immunohistochemische expressie bij maagkanker en de associatie met klinische en pathologische kenmerken
wij naast de expressie en subcellulaire lokalisatie van Nrf2 bepaald in 175 in paraffine ingebedde archivering maagkanker weefsels, met behulp van immunohistochemie. Tot de klinische kenmerken van de patiënten worden weergegeven in Tabel 1. Nrf2 immunoreactiviteit werd voornamelijk gedetecteerd in de nucleus (figuur 2). Verdere evaluatie van nucleaire Nrf2 immuunreactiviteit bleek dat de Nrf2 immunoreactieve patroon verschillen tussen gedifferentieerde maagkanker cellen en ongedifferentieerde maagkanker cellen in hetzelfde monster. Aldus ongedifferentieerde maagkanker cellen zouden eerder positieve immunoreactiviteit Nrf2 weergeven, terwijl gedifferentieerde maagkanker cellen. Van de 175 patiënten, 108 (61,7%) weergegeven een Nrf2 immunohistochemische score van meer dan 100 en werden als positief Nrf2. De resterende 67 (38,3%) van de patiënten werden geclassificeerd als de Nrf2 negatieve groep. Tabel 2 toont het verband tussen Nrf2 expressie en clinicopathologische functies. Nrf2 positieve expressie was significant geassocieerd met geslacht, tumorgrootte, tumor diepte, lymfkliermetastasen, lymfovasculaire invasie, histologische indeling en klinische stadium van de maag cancer.Table 1 Patient kenmerken
No.
Geslacht
Man
116
Female
59
Age
Mean
66
Range
31-84
Operation
99
Totaal gastrectomie
distale
56
proximale
14
Gedeeltelijke
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
histologie
Gedifferentieerde
71
Onzichtbare
104
Stage werd beoordeeld op basis van de 7de editie van de tumor metastase classificatie.
Figuur 2 Immunokleuring van de nucleaire factor (erytroïde-2) gerelateerde factor 2 (Nrf2) in klinische maagkanker monsters. Representatieve immunokleuring van Nrf2 in (a) positieve controle, goedaardige placentaweefsel; (B) normaal maag weefsel; (C - e) Maagkanker weefsels; (C) negatieve kleuring van Nrf2, (d) zwakke kleuring (1) van Nrf2, (e) sterke kleuring (2) van Nrf2 (oorspronkelijke vergroting, × 400). Expressie van Nrf2 in klinische monsters. Immunokleuring van Nrf2 (oorspronkelijke vergroting, × 400)
Tabel 2 Correlatie tussen de expressie van de nucleaire factor (erytroïde-2) -gerelateerde factor 2 (Nrf2) en klinisch-pathologische factoren
klinische factoren
Expressie van Nrf2
P- waarde
Negatief
Positieve
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)

Age
ns Restaurant < 65
22
47
≧ 65
45
61
Gender Restaurant < 0.05
mannelijke
51
65
vrouwelijke
16
43
tumorgrootte Restaurant < 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor diepte Restaurant < 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
Lymfeklier uitzaaiingen Restaurant < 0.05
Ja
35
74 verhuur No
32
34
Stage Restaurant < 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymfovasculaire invasie Restaurant < 0.05
Ja
49
90 verhuur No
18
14
histologie
<0,01
Gedifferentieerde
37
34
Onzichtbare
30
74
Nrf2 immunohistochemische expressie bij maagkanker en de associatie met 5-FU weerstand
Tabel 3 toont de correlatie tussen Nrf2 expressie en 5FU weerstand in de 72 patiënten die werden behandeld met 5-FU gebaseerde adjuvante chemotherapie. Van deze 72 patiënten, 59 waren Nfr2 positief en 13 waren Nfr2 negatief. Van de 59 Nfr2 positieve patiënten, 43 (72,9%) van de patiënten waren 5FU resistent, terwijl slechts 5 (38,5%) van de 13 Nrf2 negatieve patiënten waren 5FU resistent. Het verschil tussen het percentage Nrf2 positieve en negatieve Nrf2 patiënten in de 5FU verzetsgroep was statistisch significant (p = 0,024) .table 3 Correlatie tussen de expressie van nucleaire factor (erythroide-2) -gerelateerde factor 2 (Nrf2) en 5-Fluorouracil (5FU) chemosensitivity
5FU gevoeligheid Gids Expressie van Nrf2
P- waarde
Negatief
Positief
resistente
5
43
0,024
Sensitive
8
16
Survival analyse
Kaplan Meier analyse gaf aan dat de totale overleving van de Nrf2 positieve groep was beduidend slechter dan die van de Nrf2 negatieve groep (61% vs. 79%, respectievelijk) (p < 0,01) (Figuur 3). Figuur 3 Postoperatieve uitkomsten van 175 patiënten met maagkanker volgens nucleaire factor (erytroïde-2) gerelateerde factor 2 (Nrf2) expressie. Kaplan Meier analyse van de postoperatieve resultaten van 175 patiënten met maagkanker volgens Nrf2 expressie. Survival curves werden gebouwd voor de 175 patiënten die werden verdeeld in Nrf2-positieve en negatieve Nrf2-groepen. De Nrf2-positieve groep had een beduidend slechtere uitkomst is dan de Nrf2-negatieve groep (p < 0,01).
Daarnaast tumor diepte, tumorgrootte, lymfkliermetastasen, histologische indeling, lymfovasculaire invasie waren ook belangrijke factoren om te overleven gebaseerd op univariate analyse (Tabel 4) .table 4 univariate en multivariate analyse van prognostische factoren bij maagkanker
klinische factoren
univariate
multivariate
p

Multivariate P
Hazard ratio
95% betrouwbaarheidsinterval

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
tumorgrootte Restaurant < 0,01
0.35
1,58
0,61-4,09
Nodal betrokkenheid Restaurant < 0,01
0,03
5.02
1,18 - 21.41
Lymfovasculaire invasie Restaurant < 0.05
0,27
0.35
0,05-2,26
histologie Restaurant < 0.05
0.17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2 Restaurant < 0.05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, nucleaire factor (erytroïde-2) gerelateerde factor 2.
Wij ook uitgevoerd multivariate analyse van deze zes factoren Nrf2 als onafhankelijke prognostische marker. Lymfekliermetastasen werd geselecteerd als onafhankelijke prognostische marker. Echter werd Nrf2 expressie geselecteerd (Tabel 4).
Discussie
antioxidant Nrf2, die functioneert om normale cellen tegen oxidatieve beschadiging vele omstandigheden is beschouwd als een belangrijke cellulaire afweer mechanisme. Maar veel documenten aangegeven de overexpressie van Nrf2 en downstream genen in vele soorten van humane kanker [19-25]. Deze rapporten toonden aan dat Nrf2 niet alleen beschermt normale cellen van transformeren in kankercellen, maar ook gemakkelijker kankercel proliferatie en overleving verlengen [18]. Het voorliggende rapport is het eerste verslag van een associatie tussen de expressie van Nrf2 in de kern van maagkanker cellen en klinisch-pathologische bevindingen tonen.
In de huidige studie, werd Nrf2 immunoreactiviteit voornamelijk gedetecteerd in de kern, niet alleen in vivo, maar ook in vitro in een aantal maagkanker cellijnen. Er wordt gespeculeerd dat persistente nucleaire expressie van Nrf2 bij maagkanker cellijnen resulteert in de productie van antioxidantia, waarin aan deze kankercellijnen een hoog vermogen om reactieve zuurstofsoorten resist (ROS). Een gelijkaardig fenomeen werd beschreven door Ma et al. voor cervicale kankerweefsel Zij meldde dat upstaging van baarmoederhalskanker leidt niet alleen tot een hogere concentratie van Nrf2 in de kern van de kankercellen, maar ook een hogere concentratie downstream antioxidantreactie eiwitten [22]. Het kan dus theoretisch voorgesteld dat de maagkanker cellijnen nucleaire Nrf2 expressie hogere maligne potentieel door dit mechanisme hebben.
Immunohistochemisch We identificeerden een hoge mate van expressie in Nrf2 maagkanker klinische monsters (Tabel 2). Dus 61,7% van de monsters waren positief Nrf2, die boven het percentage positieve specimens gerapporteerd in niet-kleincellig longcarcinoom (26%) [21] of galblaas kanker (23%) [23] was.
Verder waren er significante correlaties tussen Nrf2 expressie en verschillende clinicopathologische factoren, zoals de grootte van de tumor, tumor diepte, lymfatische invasie, lymfekliermetastasen en tumor histologie. Onze bevindingen zijn in overeenstemming met die van Wang et al. die meldden dat de expressie van Nrf2 in galblaas kanker was significant geassocieerd met differentiatie, podium, en lymfekliermetastasen [23].
Onlangs Xiu-Freg Hu et al. eveneens onderzocht Nrf2 expressie bij maagkanker [26]. Zij stelden ook een prognostische betekenis van Nrf2 expressie in overeenstemming met onze resultaten. Echter, meldde ze dat Nrf2 immunoreactiviteit gedetecteerd in het cytoplasma, maar dat het niet gedetecteerd in de kern. Dit ander resultaat kan het gevolg zijn van het feit dat zij gebruikten verschillende antilichamen van die welke in deze studie. Het is goed gedocumenteerd dat Nrf2 oefent zijn antioxiderende vermogen wanneer zij naar de kern van het cytoplasma [27]. De immunoblotting analyse toonde dat Nrf2 was voornamelijk aanwezig in de kern van de cellen van maagkanker cellijnen. Daarom oordeel dat de aanhoudende overexpressie van Nrf2 in de kern van maagkanker cellen waarschijnlijk werkzaam als een antioxidant dat de maagkanker cellen beschermd tegen ROS en dat Nrf2 nucleaire expressie agressief gedrag van maagkanker kan weerspiegelen. Op basis van deze theorie, wij vonden het van essentieel belang om de nucleaire evalueren, maar niet cytoplasmatische expressie van Nrf2 in klinische monsters van maagkanker.
In deze studie toonden we de prognostische waarde van Nrf2 expressie door univariate analyse. Hoewel Nrf2 positiviteit niet als onafhankelijke prognostische marker van multivariate analyse geselecteerd, kan deze bevinding worden verklaard door de mogelijkheid dat Nrf2 positiviteit wezenlijk is aangetast door nodale betrokkenheid die een slechte prognostische factor beschouwd. Solis et al. en Wang et al. eveneens gemeld dat Nrf2 expressie was geassocieerd met een slechte overleving in niet-kleincellig longcarcinoom [21] en galblaas kanker [23], respectievelijk. Deze gegevens suggereren dat Nrf2 expressie kan worden gebruikt als een belangrijke prognostische parameter voor het voorspellen van de overleving van postoperatieve maagkankerpatiënten.
Onlangs gemeld dat hoge Nrf2 expressie kan bevorderen en verlengen kankercellen overleving na antikanker chemotherapie en radiotherapie [14,16,19-22,28-33]. Onze resultaten toonden ook aan dat positieve Nrf2 expressie was significant geassocieerd met resistentie tegen 5-FU gebaseerde adjuvante chemotherapie. Deze gecombineerde resultaten impliceren dat, door het evalueren van het expressieniveau van Nrf2 in de kern van maagkanker cellen, is het misschien mogelijk om de beste kandidaten die kunnen profiteren van de ontvangst niet alleen adjuvante chemotherapie maar ook neoadjuvante chemotherapie voorspellen.
Genetische of functionele remming van Nrf2 is te leiden tot de onderdrukking van cellulaire Nrf2 -gereguleerde antioxidant enzymen, waaronder cellulaire glutathion, thioredoxine en niet-eiwit thiolen. Uiteindelijk kan deze wijzigingen de gevoeligheid van kankercellen herstellen drugs en bestraling tegen kanker. Aldus Cho et al. gemeld dat functionele remming van Nrf2 leidt tot sensitisatie van kankercellen alkylerende antikankermiddelen [31]. Bovendien Ma et al. meldde dat de combinatie van cisplatine en knockdown van Nrf2 dramatisch en remde significant tumorgroei in vivo [22].
Rekening houdend met deze bewijzen, is het zeer waarschijnlijk dat een nieuwe chemotherapeutisch protocol dat Nrf2 bedoeld, dat op korte wordt geïntroduceerd toekomst. Zo zouden de werkzaamheid van chemotherapie eerst voorspeld door evaluatie van Nrf2 expressie en, indien van Nrf2 positieve patiënten worden beoordeeld als zijnde resistent tegen chemotherapie, dan kan het mogelijk zijn om voldoende effectiviteit van chemotherapie bereikt door gelijktijdige remming van Nrf2. Daarom is een nieuwe chemotherapeutische protocol dat antioxidant therapie kan een bruikbare methode voor het oplossen van een klinisch probleem te zijn opgenomen.
Conclusies
Nrf2 expressie nauw verbonden is met klinisch-pathologische factoren en de prognose van maagkanker patiënten. Nrf2 expressie in maagkanker kan nuttig zijn voor de evaluatie van biologische maligne potentieel, dat gedeeltelijk kan worden gemedieerd door Nrf2 versterking van de antioxidant vermogen van maagkanker cellen. Antioxidant therapie zou een veelbelovende aanpak voor de behandeling van Nrf2 positieve maagkanker patiënten
Afkortingen
Nrf2:.
NF-E2-gerelateerde factor 2
OS:
oxidatieve stress
Keap 1:
Kelch-like-ECH geassocieerd eiwit 1
ZIJN:
antioxidant respons element
FBS:
Foetaal runderserum
PBS:
fosfaat gebufferde zoutoplossing

TBS:
Tris-gebufferde zoutoplossing
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-fluorouracil
ROS:
reactive oxygen species
verklaringen
Dankwoord
Wij verklaren dat elke auteur kreeg geen Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Lymfangiogenese bij maagkanker geregeld via Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D axis
• Determinanten van maagkanker screening aanwezigheid in Korea: een multi-level analysis