Clinicopathological betydningen av kjernefysiske faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) uttrykk i magekreft

Clinicopathological betydningen av kjernefysiske faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) uttrykk i magekreft
Abstract
Bakgrunn
transkripsjonsfaktor nukleær faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) var opprinnelig identifisert som en viktig regulator av intracellulære anti-oksidanter og fra fase II-enzymer avgiftning gjennom dens transkripsjonelle opp-regulering av mange antioksydant responselement (ER)-holdige gener. Nrf2 beskytter ikke bare normale celler, men også kreftceller fra cellulært stress og forbedrer kreft celle overlevelse. Noen studier har vist at Nrf2 uttrykk hos kreftpasienter har klinisk betydning. Imidlertid har det ikke vært noe fullstendig analyse av kjerne ekspresjonsnivået av Nrf2 i gastrointestinale kreftceller. I denne studien ønsket vi å immunohistochemically evaluere uttrykk for Nrf2, og for å vurdere klinisk betydning i magekreft.
Metoder, En totalt 175 mage kreftpasienter som fikk R0 gastrektomi med standard lymfeknute disseksjon ble registrert. Vi immunohistochemically evaluert Nrf2 uttrykk i parafininnstøpte kirurgisk resected eksemplarer av disse 175 pasientene. Gruppeforskjeller ble analysert ved hjelp av χ
2 test, Fishers eksakte test, og Mann-Whitney U
test. Sammenhenger mellom Nrf2 uttrykk og clinicopathological funksjoner, inkludert klinisk utfall, ble vurdert ved hjelp univariate og multivariate analyser, og Kaplan-Meier-kurver med log-rank test, henholdsvis.
Resultater
Nrf2 immunoreaktivitets ble hovedsakelig identifisert i kjernen av mage kreftceller. Nrf2 positivitet ble nært knyttet til tumorstørrelse, tumor dybde, lymfeknutemetastaser, lymphovascular invasjon, histologi og scene (p < 0,05 for alle). En log-rank test indikerte at den totale overlevelse av Nrf2-positive gruppen var signifikant dårligere enn den for Nrf2-negative gruppe (p 0,01). Og positiv Nrf2 uttrykk var signifikant assosiert med resistens mot 5FU-basert adjuvant kjemoterapi (p = 0,024).
Konklusjoner
Nrf2 uttrykk var positivt assosiert med aggressiv svulst atferd i magekreft. Dette resultatet tyder på at Nrf2 uttrykk i magekreft er en potensiell indikator på dårligere prognose.
Nøkkelord
NF-E2-relatert faktor 2 magekreft Antioksidanter Bakgrunn
Magekreft er den fjerde vanligste gastrointestinal kreft og nest mest vanlige døds gastrointestinal kreft i verden. Østasiatiske land, inkludert Japan er blant de høyeste risikoområder for magekreft [1,2]. I Japan har etablering av massescreening ved hjelp av bilder gjennomlysning eller gastrointestinal fibroscopy førte til magekreft blir diagnostisert på et tidlig stadium. En gunstig prognose er forventet for disse magekreft pasienter etter kurativ kirurgi eller endoskopisk behandling. Men noen pasienter viser en ugunstig kurs tross mottar kurativ reseksjon. Den postoperative resultatet av magekreft avhenger sterkt av TNM faktorer [3,4]. I tillegg til disse kritiske clinicopathological faktorene, er prognosen for gastrisk karsinom påvirket av flere biologiske variabler. I denne sammenheng er det nødvendig å finne nye kreftrelaterte faktorer som kan brukes som markører for diagnose og behandling av mavekreft. Det er generelt akseptert at oksidativt stress (OS) er involvert i patofysiologien av degenerative sykdommer. Videre er genereringen og økningen av OS og sekundære DNA-oksydativ skade også kjent for å være relatert til skaden og ondartet transformasjon av mageslimhinnen [5]. Således, OS har vært ansett for å spille en viktig rolle i kreftutvikling av magekreft [5,6].
Transkripsjonsfaktor nukleær faktor (erythroid-2) -relaterte faktor to (Nrf2), som er et grunnleggende redoks-følsomme bzip transkripsjonsfaktor, ble opprinnelig identifisert som en kritisk regulator av intracellulære antioksidanter og fase II avgiftning enzymer gjennom transkripsjons oppregulering av mange antioksidant respons element (eR) holdige gener [7-9]. Under basale betingelser blir Nrf2 bundet til Kelch lignende ECH-assosiert protein 1 (Keap1), en cul3 basert E3 ubiquitin ligase adapter som regulerer Nrf2 ubiquitinering og proteasom-avhengig nedbrytning [10].
Ved eksponering av celler til oksidativt stress eller chemopreventive forbindelser, Nrf2 translocates til kjernen, danner en heterodimer med sin obligatoriske partner Maf, binder seg til de er sekvenser i DNA og aktiverer transkripsjon av nedstrømsgener som antioksidanter og fase II avgiftning enzymer [8,11-13] . Den viktigste biologiske rolle Nrf2 understrekes av resultatene demonstrerer Nrf2 avhengig beskyttelse mot mange menneskelige sykdommer eller patologiske tilstander så som kreft, neurodegenerative sykdommer, kardiovaskulære sykdommer, inflammasjon, pulmonal fibrose, akutt lungeskade og Nrf2 også bremser aldringsprosessen [14 -18]. Således Nrf2 har vært ansett som et "godt" transkripsjonsfaktor som er nødvendig for beskyttelse mot oksidativt stress [19]. Men nye data har avdekket den mørke siden av Nrf2 [20]. Det har nylig blitt vist at avvikende aktivering av Nrf2 pathway forekommer ofte i kreftceller og tumorvev. Nrf2 beskytter ikke bare normale celler fra transformerer til kreftceller, men beskytter også kreftceller fra cellulært stress, forbedrer kreftcelleoverlevelse og er assosiert med kreftvekst og progresjon [18]. Siden disse åpenbaringene, har det ikke vært noen omfattende analyse av uttrykket nivået av Nrf2 i kjernen av mage kreftceller, og det har vært noen studier som tar sikte på å avklare forholdet mellom uttrykk nivået Nrf2 i kjernen av mage kreftceller og klinisk utfall. I denne studien har vi gjennomført den første undersøkelsen av uttrykket nivået av Nrf2 i kjernen av mage kreftceller og videre diskutere den kliniske betydningen av Nrf2 uttrykk med hensyn til anti- oksidativt stress.
Metoder
Påvisning av Nrf2 uttrykk i mage kreft cellelinjer ved Western blot analyse Bedrifter den magekreft cellelinjer MKN74, MNK45, KATO-III og NUGC4 ble kjøpt fra den japanske Fysiske og kjemiske Institute, Tokyo, Japan. Cellene ble inkubert i RPMI 1640 med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 enheter /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin ved 37 ° C i en celleinkubator. Alle celler ble høstet ved sentrifugering, vasket med fosfatbufret saltvann (PBS) og totalt protein ble ekstrahert i lyseringsbuffer. Atom ekstrakter og cytoplasmatiske fraksjoner for Western blotting av Nrf2 ble utarbeidet med en kjernefysisk /cytosol Fraksjone Kit (K266-25, BioVison, California, USA). Western blot-analyse av Nrf2 ekspresjon i magecancercellelinjer ble utført som følger. Denaturert protein ekstrahert fra kjernen eller i cytoplasma ble separert på en SDS-polyakrylamidgel og overført til Hybond membran, som deretter ble blokkert over natten i 5% skummet melk i Tris-bufret saltvann (TBS). Membranen ble deretter inkubert med monoklonalt antistoff mot Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) ved 1: 500 fortynning for natten. Membranen ble renset med TBS-Tween 20 (TBST) og inkubert med anti-mus IgG konjugert til pepperrot-peroksidase (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) i 15 minutter. Immunreaktive bånd ble visualisert på X-ray film (Fuji, Japan) ved hjelp av ECL-Plus gjenkjenning reagenser (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, England). Deretter, for å bekrefte nukleære og cytoplasmiske fraksjoner, ble membranen vasket med WB Stripping Solution (Nakalai Tesque, Tokyo, Japan) i 15 minutter og re-probet for nukleære og cytoplasmiske markører ved hjelp av anti-Lamin B1-antistoff (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) og anti-α-Tubulin antistoff (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000) henholdsvis
pasienter og prøver
Denne studien inkluderte 175 pasienter med adenokarsinom i ventrikkel som hadde invadert inn submucosal lag eller dypere. Alle pasientene gjennomgikk kurativ gastrektomi med lymfeknute disseksjon ved Kagoshima universitetssykehus fra januar 1995 til desember 2004. Blant 175 pasienter, 57, 14, 99, og 5 pasienter fikk distal, proksimale, total og partiell gastrektomi, henholdsvis. Den mannlige til kvinnelige forholdet var 116-59, og gjennomsnittsalderen var 66 år, som strekker seg fra 31 til 84 år. Antallet pasienter med stadium I, II og III gastriske cancere var 47, 33 og 95, henholdsvis. Histopathologically, ble 71 tilfeller differensiert (papillær, godt differensiert og moderat differensiert rørformet adenokarsinom) og 104 var udifferensiert (dårlig differensiert adenokarsinom, mucinous adenokarsinom og signet-ring karsinom) karsinomer i henhold til 7 th utgaven av tumormetastaser klassifisering. Ingen av disse pasientene fikk kjemoterapi før operasjonen. Skriftlig informert samtykke er innhentet fra pasienter og studien ble godkjent av etisk komité Kagoshima universitetssykehus (registreringsnummer 35-24). Denne undersøkelsen dannet prinsippene i Helsinkideklarasjonen. Clinicopathological funn er beskrevet i henhold til 7 th utgaven av tumormetastaser klassifisering.
Immunhistokjemisk analyse av Nrf2 i magekreft og evalueringen
tumorprøver ble fiksert med 10% formaldehyd i PBS, innebygd i parafin, delt inn i 4-mikrometer tykke seksjoner og montert på glassplater for immunhistokjemisk analyse. Snittene ble deparaffinised i xylen og dehydrert i en gradert serie av etanol. Endogen peroksidase aktivitet av prøvene ble blokkert ved å dyppe objektglassene i en 3% hydrogenperoksidase-metanoloppløsning i 10 minutter ved romtemperatur. Etter vasking tre ganger med PBS (5 minutter per vask), ble delene behandlet med 1% bovint serumalbumin i 30 min ved romtemperatur for å blokkere ikke-spesifikke reaksjoner. For farging med anti-Nrf2 antistoffer ble snittene forbehandlet med sitrat-buffer i 10 minutter ved 121 ° C i en mikrobølgeovn for å hente antigenisitet. Seksjonene ble vasket tre ganger med PBS i 5 min hver gang, og ble deretter blokkert ved behandling med PBS som inneholdt 3% skummet melk i 10 minutter ved romtemperatur. De blokkerte seksjoner ble inkubert med fortynnet primære anti-Nrf2 antistoff (sc-365 949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) i PBS ved 4 ° C over natten, etterfulgt av farging med en streptavidin-biotin-peroksidase kit ( Nichirei, Tokyo, Japan). Seksjonene ble vasket tre ganger i PBS i 5 minutter per vask, og immunkomplekset ble visualisert ved inkubering av seksjoner med diaminobenzidin tetra-hydroklorid. Seksjonene ble skylt kort i vann, kontra med hematoksylin og montert. Noncancerous placental vev ble benyttet som positiv kontroll for Nrf2. Nrf2 ekspresjon ble bestemt ved telling av antallet av kreftceller i hvilken kjernen ble farget med anti-Nrf2 antistoff. Alle immunostained lysbilder ble evaluert av to uavhengige observatører (YK og SI), som var uvitende om kliniske data og sykdom utfallet. For å evaluere Nrf2 uttrykk, 10 representative områder innen svulsten ble valgt, og uttrykk i totalt 1000 kreftceller (100 celler per felt) ble evaluert med høy effekt (× 400) mikroskopi. I tilfelle av sameksistens av differensiert og udifferensiert område i samme seksjon, evaluerte vi ekspresjonsnivået av Nrf2 i udifferensiert område, selv om området av udifferensierte er mindre enn differensiert område. Den gjennomsnittlige merking indeks over Nrf2 ble vurdert etter andelen positive celler i hvert felt. Ekspresjon av Nrf2 ble vurdert på grunnlag av både andelen av positive celler og intensiteten av fargingen. Intensiteten av Nrf2 farging ble kvantifisert ved anvendelse av en tre-verdi stillingen intensitet (0, 1 +, eller 2+). Omfanget av reaktivitet ble evaluert i henhold til Solis et al. [21], og ble uttrykt som en prosentandel (0-100%). Immunhistokjemiske poengsummer, som gikk fra 0 til 200, ble beregnet ved å multiplisere verdiene av intensiteten og graden av reaktivitet. Disse scorene ble benyttet for å bestemme Nrf2 uttrykk nivåer. Siden median score på Nrf2 uttrykk i magekreft var 110 i denne studien, ble en cut-off verdi på 100 avgjort.
Sammenhengen mellom uttrykket nivået av Nrf2 i magekreft og chemoresistance
å vurdere om uttrykk nivå Nrf2 i magekreft påvirker chemoresistance, vi sammenlignet uttrykket nivået av Nrf2 i mage kreftpasienter som fikk 5-Fluorouracil (5-FU) basert adjuvant kjemoterapi. Vi definerte "5FU motstand" som magekreft som dukket opp igjen etter adjuvant kjemoterapi. Som en standard protokoll, administrere vi 5FU-basert adjuvant kjemoterapi til pasienter med stadium II eller III kreft. Vi utelatt pasienter som ikke var i stand til å fortsette adjuvant kjemoterapi på grunn av bivirkninger. Som et resultat ble 72 pasienter inkludert i denne analysen.
Statistisk analyse
Statistisk analyse av gruppeforskjeller ble utført ved hjelp av χ
2 test, Fishers eksakte test og Mann-Whitney U
test. Kaplan-Meier metoden ble brukt for overlevelsesanalyse, og forskjeller i overlevelse ble beregnet ved hjelp av log-rank test. Prognostiske faktorer ble undersøkt ved univariate og multivariate analyser (Cox regresjon modell). En p
verdi < 0,05 ble ansett for å indikere statistisk signifikans. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av StatFlex versjon 6.0 for Windows-programvare (StatFlex versjon 6.0, Artec Inc., Osaka, Japan).
Resultater
Nrf2 uttrykk i magekreft cellelinjer
uttrykk for Nrf2 i kjernekraft og cytoplasmatiske fraksjoner av gastrisk karsinom-cellelinjer ble analysert ved Western blotting. Nrf2 ble uttrykt hovedsakelig i kjernen av alle de gastriske cancercellelinjer og lite ekspresjon ble observert i cytoplasma (figur 1). Figur 1 Nuclear faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) uttrykk i magekreft cellelinjer. Nrf2 protein uttrykk i kjernefysiske og cytoplasmatiske ekstrakter av mage cellelinjer MKN74, MNK45, KATO-III, og NUGC4 ble analysert ved Western blotting. Blottet ble re-probet med anti-lamin B1, og anti-α-Tubulin antistoffer som ble brukt som positive kontroller for kjernen og cytoplasmaet, respektivt. Atom og cytoplasmatiske fraksjoner ble klart atskilt. Den Nrf2-proteinet ble identifisert hovedsakelig i kjernen av alle gastrisk cancer-cellelinjer. Lille Nrf2 ble oppdaget i cytoplasma.
Nrf2 immunhistokjemisk uttrykk i magekreft og sin tilknytning til clinicopathological funksjoner
Vi neste bestemt uttrykk og subcellulære lokalisering av Nrf2 i 175 parafininnstøpte arkiv mage kreft vev, ved hjelp av immunhistokjemi. De clinicopathological karakteristika for pasientene er vist i tabell 1. Nrf2 immunoreaktivitet ble funnet hovedsakelig i kjernen (figur 2). Videre evaluering av kjernefysisk Nrf2 immunoreaktivitets indikerte at Nrf2 immunoreactive mønster skilte mellom differensierte mage kreftceller og udifferensierte mage kreftceller i samme prøve. Således udifferensierte magekreftceller var mer sannsynlig å vise positiv Nrf2 immunreaktivitet sammenlignet med differensierte magekreftceller. Av de 175 pasientene, 108 (61,7%) viste en Nrf2 immunhistokjemisk score på mer enn 100, og ble klassifisert som Nrf2 positive. De resterende 67 (38,3%) pasienter ble klassifisert som Nrf2 negative gruppen. Tabell 2 viser korrelasjonen mellom Nrf2 ekspresjon og clinicopathological egenskaper. Nrf2 positivt uttrykk var signifikant assosiert med kjønn, tumorstørrelse, tumor dybde, lymfeknutemetastaser, lymphovascular invasjon, histologisk klassifisering og klinisk stadium av mage cancer.Table 1 Pasientkarakteristika
No.
Kjønns
Mann fra 116
Kvinne
59
Age
Mean
66
Range
31-84
Operation
99
Total gastrektomi
Distal
56
Proximal
14
Delvis
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histologi
Differensiert
71
Undifferentiated
104
Stage ble vurdert i henhold til syvende utgaven av tumormetastaser klassifisering.
Figur 2 Farging av kjernefysiske faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) i kliniske magekreft prøver. Representant farging av Nrf2 i (a) Positiv kontroll, noncancerous placenta vev; (B) normal mage vev; (c - e) magekreft vev; (C) negativ farging av Nrf2, (d) svak farging (1) av Nrf2, (e) sterk farging (2) av Nrf2 (opprinnelig forstørrelse x 400). Uttrykk av Nrf2 i kliniske prøver. Farging av Nrf2 (original forstørrelse, × 400)
Tabell 2 Sammenheng mellom uttrykket av kjernefysiske faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) og clinicopathological faktorer
Kliniske faktorer
Expression of Nrf2
P- verdi
Negativ
Positiv
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%) <.no> Age
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Kjønn
< 0,05
male 51
65
kvinnelige
16
43
Tumor størrelse
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor dybde
< 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4B
36
89
lymfeknutemetastaser
< 0,05
Ja
35
74
Ingen
32
34
Stage
< 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invasjon
< 0,05
Ja
49
90
Ingen
18
14
Histologi
<0,01
Differensiert
37
34
Undifferentiated
30
74
Nrf2 immunhistokjemisk uttrykk i magekreft og sin tilknytning til 5FU motstand
Tabell 3 viser sammenhengen mellom Nrf2 uttrykk og 5-FU motstand i de 72 pasientene som ble behandlet med 5-FU-baserte adjuvant kjemoterapi. Av disse 72 pasientene, 59 var Nfr2 positive og 13 var Nfr2 negative. Ut av de 59 Nfr2 positive pasienter, 43 (72,9%) av pasientene var 5FU resistente, mens bare fem (38,5%) av de 13 Nrf2 negative pasienter var 5FU resistente. Forskjellen mellom prosentandelen av Nrf2 positive og negative pasienter Nrf2 i 5FU motstandsgruppen var statistisk signifikant (p = 0,024) .table 3 Sammenheng mellom ekspresjonen av nukleær faktor (erythroid-2) -relaterte faktor to (Nrf2) og 5-Fluorouracil (5FU) kjemosensitivitet
5FU følsomhet

Expression of Nrf2
P- verdi
Negativ
Positiv
resistent
5
43
0,024
Sensitive
8
16
Survival analyse
Kaplan Meier-analyse viste at den totale overlevelsen av Nrf2 positive gruppen var vesentlig dårligere enn at av de Nrf2 negative gruppen (61% vs. 79% henholdsvis) (p < 0,01) (figur 3). Figur 3 Postoperative resultater av 175 mage kreftpasienter i henhold til kjernefysiske faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2 (Nrf2) uttrykk. Kaplan Meier analyse av postoperative utfall av 175 mage kreftpasienter etter Nrf2 uttrykk. Overlevelseskurver ble konstruert for de 175 pasientene som ble delt inn i Nrf2-positive og Nrf2-negative grupper. Den Nrf2-positive gruppen hadde signifikant dårligere resultat enn Nrf2-negative gruppen (p < 0,01).
I tillegg tumor dybde, tumor størrelse, lymfeknutemetastaser, histologisk klassifisering, lymphovascular invasjon var også viktige faktorer for å overleve basert på univariat analyse (tabell 4) .table 4 univariat og multivariat analyse av prognostiske faktorer i magekreft
Kliniske faktorer

univariat
multivariate
p

Multivariate P
Hazard ratio
95% konfidensintervall

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tumor størrelse
< 0,01
0,35
1,58
0,61 til 4,09
Nodal engasjement
< 0,01
0,03
5,02
1.18 - 21,41
Lymphovascular invasjon
< 0,05
0,27
0,35
0,05 til 2,26
Histologi
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81 til 3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1.37
0,66 til 2,87
Nrf2, nukleær faktor (erytropoide-2) -relaterte faktor 2.
Vi har også utført multivariat analyse av disse seks faktorer, inkludert Nrf2 som en selvstendig prognostisk markør. Lymfeknutemetastaser ble valgt som uavhengig prognostisk markør. Imidlertid Nrf2 ekspresjon ble ikke utvalgt (tabell 4).
Diskusjon
antioksidant Nrf2, som virker til å beskytte normale celler fra en rekke skadelige oksidative betingelser, har vært ansett for å være en viktig cellulær forsvarsmekanisme. Imidlertid har mange papirer indikert overekspresjon av Nrf2 og nedstrøms gener i mange typer kreft hos mennesker [19-25]. Disse rapporter viste at Nrf2 ikke bare beskytter normale celler fra transformerer til kreftceller, men kan også legge til rette for kreftcelleformering og forlenge overlevelsen [18]. Denne rapporten er den første rapporten for å vise en sammenheng mellom uttrykk nivået Nrf2 i kjernen av mage kreftceller og clinicopathological funn.
I denne studien ble Nrf2 immunoreaktivitets oppdaget hovedsakelig i kjernen, ikke bare in vivo, men også in vitro i et antall av magecancercellelinjer. Det har vært spekulert på at vedvarende atom ekspresjon av Nrf2 i magecancercellelinjer resulterer i produksjon av antioksidanter, som jf på disse kreftcellelinjene en høy evne til å motstå reaktive oksygenarter (ROS). Et lignende fenomen ble rapportert av Ma et al. for livmorhalskreft vev De rapporterte at upstaging av livmorhalskreft fører ikke bare til en høyere konsentrasjon av Nrf2 i kjernen av kreftcellene, men også til en høyere konsentrasjon av nedstrøms antioksydant respons proteiner [22]. Det kan derfor være teoretisk foreslått at magekreft cellelinjer med atom Nrf2 uttrykk ville ha en høyere malignitetspotensiale gjennom denne mekanismen.
Vi immunohistochemically identifisert en høy grad av Nrf2 uttrykk i magekreft kliniske prøver (tabell 2). Således, 61,7% av prøvene var positive Nrf2, som var høyere enn prosentandelen av positive prøver rapportert i ikke-småcellet lungekarsinom (26%) [21] eller i galleblærekreft (23%) [23].
Videre var det signifikante sammenhenger mellom Nrf2 uttrykk og flere clinicopathological faktorer som tumorstørrelse, tumor dybde, lymfatisk invasjon, lymfeknutemetastaser, og tumorhistologi. Våre funn er i overensstemmelse med de av Wang et al. som rapporterte at uttrykk for Nrf2 i galleblæren kreft var signifikant assosiert med differensiering, scene, og lymfeknutemetastaser [23].
Nylig Xiu-freg Hu et al. tilsvar undersøkt Nrf2 uttrykk i magekreft [26]. De foreslo også en prognostisk betydning av Nrf2 uttrykk i samsvar med våre resultater. Imidlertid rapporterte de at Nrf2 immunoreaktivitet ble funnet i cytoplasma, men at det ble ikke påvist i kjernen. Dette annet resultat kan skyldes det faktum at de brukte forskjellige antistoffer fra de som brukes i den foreliggende undersøkelse. Det er godt dokumentert at Nrf2 utøver sin antioksidant egenskaper bare når det translocates til kjernen fra cytoplasma [27]. Vår immunblotting-analyse viste at Nrf2 var hovedsakelig til stede i kjernen av de celler av magecancercellelinjer. Vi har derfor vurdert at den vedvarende overekspresjon av Nrf2 i kjernen av magekreftceller arbeidet sannsynligvis som en antioksidant som er beskyttet av magekreftceller fra ROS, og at Nrf2 atom ekspresjon kan reflektere aggressiv oppførsel av magekreft. Basert på denne teori, anses det funnet viktig å vurdere atom, men ikke cytoplasmisk ekspresjon av Nrf2 i kliniske prøver av magekreft.
I denne studien viste vi den prognostiske verdi av Nrf2 uttrykk ved univariat analyse. Selv om Nrf2 positivitet ikke ble valgt som en uavhengig prognostisk markør ved multivariat analyse, kan dette funn forklares ved muligheten for at Nrf2 positivitet ble signifikant påvirket av nodal engasjement som ble ansett som dårlig prognostisk faktor. Solis et al. og Wang et al. likeledes rapportert at Nrf2 ekspresjon ble assosiert med dårlig total overlevelse i ikke-småcellet lungekarsinom [21] og i galleblærekreft [23], respektivt. Disse dataene tyder på at Nrf2 ekspresjon kan bli brukt som en betydelig prognostisk parameter for forutsigelse av overlevelsen av postoperative magekreftpasienter.
Det har nylig blitt rapportert at høy Nrf2 ekspresjon kan lette og forlenge kreftcelleoverlevelse etter anticancer kjemoterapi og strålebehandling [14,16,19-22,28-33]. Våre resultater viste også at positiv Nrf2 uttrykk var signifikant assosiert med resistens mot 5FU basert adjuvant kjemoterapi. Disse kombinerte resultater kan tyde på at, ved å evaluere ekspresjonsnivået av Nrf2 i kjernen av magekreftceller, kan det være mulig å forutsi de beste kandidatene som kan dra nytte fra å motta ikke bare adjuvant kjemoterapi, men også neoadjuvant kjemoterapi.
Genetic eller funksjonell inhibering av Nrf2 har vist seg å resultere i undertrykkelse av cellulære Nrf2 -regulated antioksidant enzymer, inkludert cellulær glutation, tioredoksin og ikke-protein-tioler. I siste instans kan disse endringene gjenopprette følsomheten av kreftceller til anticancermedikamenter og strålebehandling. Således Cho et al. rapportert at funksjonelle hemming av Nrf2 fører til allergi av kreftceller til alkylerende cytostatika [31]. Videre Ma et al. rapporterte at kombinasjonen av cisplatin og knockdown av Nrf2 dramatisk, og i betydelig grad hemmet tumorvekst in vivo [22].
ta disse bevisene i betraktning, er det meget sannsynlig at en ny kjemoterapeutisk protokoll som involverer Nrf2 regulering vil bli innført i nær framtid. For eksempel kan effekten av kjemoterapi først bli forutsagt ved evaluering av Nrf2 uttrykk og, hvis noen av Nrf2 positive pasienter er vurdert til å være motstandsdyktig overfor kjemoterapi, så kan det være mulig å oppnå tilstrekkelig effekt av kjemoterapi ved samtidig hemming av Nrf2. Derfor er en ny kjemoterapeutisk protokoll som inneholder antioksidant terapi kan være en nyttig metode for å løse et klinisk problem.
Konklusjoner
Nrf2 uttrykk er nært forbundet med clinicopathological faktorer og prognose av mage kreftpasienter. Nrf2 ekspresjon i magekreft kan være nyttige for evaluering av biologisk maligne potensial, som kan være mediert delvis av Nrf2 forbedring av antioksidant evnen av gastrisk kreft celler. Antioksidant terapi kan være en lovende metode for behandling av Nrf2 positive mage kreftpasienter
Forkortelser
Nrf2.
NF-E2-relatert faktor 2
OS:
Oksidativt stress
Keap 1:
Kelch lignende ECH-assosiert protein 1
ER:
antioksidant respons element
FBS:
Fetal bovin serum
PBS:
Fosfatbufret saltvann

TBS:
Tris-bufret saltvann
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-Fluorouracil
ROS:
reaktive oksygenforbindelser
Erklæringer
Takk
Vi erklærer at hver forfatter fikk ingen Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Lymphangiogenesis i Gastric Cancer regulert gjennom Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D axis
• Determinanter av magekreft screening oppmøte i Korea: a multi-level analyse