importance clinicopathologique du facteur nucléaire (érythroïde-2) concernant la PI facteur 2 (Nrf2) expression dans le cancer gastrique

importance clinicopathologique du facteur nucléaire (érythroïde-2) facteur 2 la PI (Nrf2) expression dans le cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Le facteur nucléaire du facteur de transcription (érythroïde-2) facteur 2 la PI (Nrf2) était à l'origine identifié comme un régulateur critique d'anti-oxydants intracellulaires et des enzymes de phase II de désintoxication à travers sa transcription régulation à la hausse de plusieurs élément de réponse anti-oxydant (ARE) gènes contenant. Nrf2 protège non seulement les cellules normales mais aussi les cellules cancéreuses de stress cellulaire et augmente la survie des cellules cancéreuses. Certaines études ont montré que l'expression Nrf2 chez les patients atteints de cancer a une signification clinique. Cependant, il n'y a pas eu d'analyse globale du niveau d'expression nucléaire de Nrf2 dans les cellules cancéreuses gastro-intestinales. Dans cette étude, nous avons cherché à évaluer l'expression immunohistochimique de Nrf2, et d'évaluer son importance clinique dans le cancer gastrique.
Méthodes
Un total de 175 patients atteints de cancer gastrique qui ont reçu R0 gastrectomie à la norme dissection des ganglions lymphatiques ont été inscrits. Nous immunohistochimie évalué l'expression Nrf2 dans les échantillons réséquées chirurgicalement paraffine de ces 175 patients. Les différences de groupe ont été analysées à l'aide du χ
2 test, le test exact de Fisher, et le test de Mann-Whitney U. Les associations entre l'expression Nrf2 et les caractéristiques clinico, y compris les résultats cliniques, ont été évalués à l'aide univariée et multivariée analyses, et les courbes de Kaplan-Meier avec le test du log-rank, respectivement de. Résultats
Nrf2 immunoréactivité a été principalement identifiés dans le noyau de les cellules de cancer gastrique. Nrf2 positivité a été étroitement associée à la taille de la tumeur, la profondeur de la tumeur, les métastases des ganglions lymphatiques, invasion lymphovasculaire, l'histologie et l'étape (p < 0,05 pour l'ensemble). Un test log-rank a indiqué que la survie globale du groupe Nrf2 positif était significativement plus faible que celle du groupe Nrf2-négatif (p < 0,01). Et, l'expression Nrf2 positif était significativement associée à la résistance à la chimiothérapie adjuvante à base de 5FU (p = 0,024). De Conclusions
expression Nrf2 a été positivement associés à un comportement de tumeur agressive dans le cancer gastrique. Ce résultat suggère que l'expression Nrf2 dans le cancer gastrique est un indicateur potentiel de pire pronostic.
Facteur 2 Antioxydants cancer gastrique Contexte Mots-clés
NF-E2 liés
Le cancer gastrique est le quatrième cancer le plus fréquent gastro-intestinal et la cancer gastro-intestinal mortel deuxième plus commun dans le monde. les pays d'Asie de l'Est, y compris le Japon sont parmi les zones les plus à risque pour le cancer gastrique [1,2]. Au Japon, la mise en place du dépistage de masse en utilisant la photo fluoroscopie ou fibroscopie gastro-intestinal a conduit à un cancer gastrique diagnostiqué à un stade précoce. Un pronostic favorable est attendue pour ces patients atteints de cancer gastrique après une chirurgie curative ou traitement endoscopique. Cependant, certains patients montrent une évolution défavorable en dépit d'une résection curative. Le résultat postopératoire du cancer gastrique dépend fortement de facteurs TNM [3,4]. En plus de ces facteurs clinico critiques, le pronostic du cancer de l'estomac est influencée par plusieurs variables biologiques. Dans ce contexte, il est nécessaire de trouver de nouveaux facteurs liés au cancer qui peuvent être utilisés en tant que marqueurs pour le diagnostic et le traitement du cancer gastrique. Il est généralement admis que le stress oxydatif (OS) est impliqué dans la pathophysiologie des maladies dégénératives. Par ailleurs, la production et l'augmentation du système d'exploitation et des dommages oxydatifs de l'ADN secondaire sont également connus pour être liés à l'endommagement et la transformation maligne de la muqueuse gastrique [5]. Ainsi, OS a été considéré pour jouer un rôle important dans la carcinogenèse du cancer gastrique [5,6].
Le facteur nucléaire du facteur de transcription (érythroïde-2) facteur 2 la PI (Nrf2), qui est une base redox sensible bZIP facteur de transcription, a été identifiée à l'origine comme un régulateur critique des anti-oxydants intracellulaires et des enzymes de phase II de détoxication par la régulation positive de la transcription d'un grand nombre élément de réponse antioxydant (ARE) contenant les gènes [7-9]. Dans des conditions basales, Nrf2 est lié à l'ECH-protéine associée de kelch-like 1 (Keap1), un E3 adaptateur ubiquitine ligase à base de CUL3 qui réglemente Nrf2 ubiquitination et protéasome-dépendante la dégradation [10].
Lors de l'exposition des cellules à le stress oxydatif ou de composés de chimioprévention, Nrf2 translocation vers le noyau, forme un hétérodimère avec son partenaire obligatoire Maf, se lie aux séquences dans l'ADN et active la transcription des gènes en aval, tels que des antioxydants et enzymes de phase II de désintoxication [8,11-13] . Le rôle biologique important de Nrf2 est soulignée par les résultats démontrant la protection Nrf2 dépendante contre de nombreuses maladies humaines ou des états pathologiques tels que le cancer, les maladies neurodégénératives, les maladies cardiovasculaires, l'inflammation, la fibrose pulmonaire, une lésion pulmonaire aiguë et Nrf2 ralentit également le processus de vieillissement [14 -18]. Ainsi Nrf2 a été considéré comme un «bon» facteur de transcription qui est essentielle pour la protection contre le stress oxydatif [19]. Toutefois, les données émergentes a révélé le côté sombre de Nrf2 [20]. Il a été récemment montré que l'activation aberrante de la voie Nrf2 se produit fréquemment dans les cellules cancéreuses et les tissus tumoraux. Nrf2 protège les cellules normales, non seulement de se transformer en cellules cancéreuses, mais protège également les cellules cancéreuses du stress cellulaire, augmente la survie des cellules cancéreuses et est associée à la croissance du cancer et à la progression [18]. Depuis ces révélations, il n'y a pas d'analyse complète du niveau d'expression de Nrf2 dans le noyau des cellules de cancer gastrique, et il n'y a pas eu d'études visant à clarifier la relation entre le niveau de Nrf2 d'expression dans le noyau des cellules de cancer gastrique et clinique résultat. Dans l'étude actuelle, nous avons effectué le premier examen du niveau de Nrf2 d'expression dans le noyau des cellules de cancer gastrique et de discuter davantage la signification clinique d'expression Nrf2 par rapport à anti- stress oxydatif.
Méthodes
Détection de expression Nrf2 dans gastriques lignées cellulaires de cancer par analyse Western blot
les lignées de cellules de carcinome gastrique MKN74, MNK45, KATO-III et NUGC4 ont été achetés à partir de la physique et chimique Institut japonais, Tokyo, Japon. Les cellules ont été incubées dans un milieu RPMI 1640 avec 10% de sérum de fœtus bovin (FBS), 100 unités /ml de pénicilline et 100 pg /ml de streptomycine à 37 ° C dans un incubateur de cellules. Toutes les cellules ont été récoltées par centrifugation, on le rince avec du tampon phosphate salin (PBS) et les protéines totales ont été extraites dans un tampon de lyse. Des extraits nucléaires et des fractions cytoplasmiques pour Western blot de Nrf2 ont été préparés en utilisant un kit nucléaire /cytosol Fractionnement (K266-25, BioVison, Californie, USA). Analyse par transfert Western de l'expression Nrf2 dans des lignées cellulaires de cancer gastrique a été réalisée comme suit. une protéine dénaturée extraite du noyau ou le cytoplasme a été séparé sur un gel SDS-polyacrylamide et transféré sur une membrane Hybond, qui a été ensuite bloqué pendant une nuit dans 5% de lait écrémé dans une solution saline tamponnée au Tris (TBS). La membrane a ensuite été incubée avec un anticorps monoclonal de souris contre Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) à 1: 500 dilution pour la nuit. La membrane a été rincée avec du TBS-Tween 20 (TBST) et mis en incubation avec IgG anti-souris conjugué à la peroxydase de raifort (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) pendant 15 minutes. Les bandes immunoréactives ont été visualisées sur le film X-ray (Fuji, Japon) en utilisant des réactifs de détection ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Angleterre). Par la suite, afin de confirmer les fractions nucléaires et cytoplasmiques, la membrane a été lavée avec de la BM solution de décapage (Nakalai Tesque, Tokyo, Japon) pendant 15 minutes et re-sondé marqueurs nucléaires et cytoplasmiques utilisant l'anticorps B1 anti Lamin (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) et l'anticorps anti-α-tubuline (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000) respectivement
patients et échantillons
Cette étude a inclus 175 patients atteints d'un adénocarcinome gastrique qui avaient envahi dans la couche sous-muqueuse ou plus profond. Tous les patients ont subi une gastrectomie curative avec dissection des ganglions lymphatiques à l'hôpital universitaire de Kagoshima à partir de Janvier 1995 à Décembre 2004. Parmi 175 patients, 57, 14, 99, et 5 patients ont reçu distale, proximale, gastrectomie totale et partielle, respectivement. Le ratio hommes-femmes était de 116 à 59, et l'âge moyen était de 66 ans, allant de 31 à 84 ans. Le nombre de patients de stade I, II et III cancers gastriques était de 47, 33 et 95, respectivement. Histopathologique, 71 cas ont été différenciés (papillaire, bien différenciées et modérément différencié adénocarcinome tubulaire) et 104 étaient indifférencié (adénocarcinome peu différencié, adénocarcinome mucineux et le carcinome chevalière) carcinomes selon le 7 e édition du noeud de la tumeur métastatique classification. Aucun de ces patients ont reçu une chimiothérapie avant la chirurgie. Le consentement éclairé écrit a été obtenu à partir des patients et l'étude a été approuvé par le comité d'éthique de l'hôpital universitaire de Kagoshima (numéro d'enregistrement 35-24). Cette enquête était conforme aux principes énoncés dans la Déclaration d'Helsinki. les résultats clinico-pathologiques sont décrites en fonction de la 7 ème édition de la tumeur classification noeud métastases.
analyse immunohistochimique de Nrf2 dans le cancer gastrique et son évaluation
échantillons de tumeurs ont été fixées avec 10% de formaldehyde dans du PBS, noyées dans de la paraffine, sectionné en 4 um sections épaisses et montées sur des lames de verre pour une analyse immunohistochimique. Les coupes ont été déparaffinées dans du xylene et déshydratées dans une série d'éthanol à gradient. L'activité de peroxydase endogène des échantillons a été bloqué en plongeant les lames dans une solution de Peroxydase de methanol 3% d'hydrogène pendant 10 min à température ambiante. Après trois lavages avec du PBS (5 minutes par lavage), les sections ont été traitées avec 1% d'albumine de sérum bovin pendant 30 minutes à la température ambiante pour bloquer les réactions non spécifiques. Pour la coloration avec des anticorps anti-Nrf2, les sections ont été prétraitées avec un tampon citrate pendant 10 min à 121 ° C dans un four à micro-ondes pour récupérer antigénicité. Les sections ont été lavées trois fois avec du PBS pendant 5 minutes chaque fois, et ont ensuite été bloquées par un traitement avec du PBS contenant 3% de lait écrémé pendant 10 minutes à température ambiante. Les sections bloquées ont été incubées avec l'anticorps anti-Nrf2 primaire dilué (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) dans du PBS à 4 ° C pendant une nuit, suivie d'une coloration avec un kit de streptavidine-biotine-peroxydase ( Nichirei, Tokyo, Japon). Les sections ont été lavées trois fois dans du PBS pendant 5 minutes par lavage, et le complexe immun a été visualisé par incubation des sections avec du chlorhydrate diaminobenzidine TETRA. Les sections ont été rincées brièvement dans de l'eau, de contraste avec l'hématoxyline et montées. tissu placentaire noncancerous a été utilisé comme témoin positif pour Nrf2. nrf2 expression a été déterminée en comptant le nombre de cellules cancéreuses dans lesquelles le noyau a été colorée avec l'anticorps anti-Nrf2. Toutes les lames immunohistochimique ont été évalués par deux observateurs indépendants (YK et SI), qui ne connaissaient pas les données cliniques et les résultats de la maladie. Pour évaluer l'expression Nrf2, 10 champs représentatifs au sein de la tumeur ont été sélectionnés, et l'expression dans un total de 1000 cellules cancéreuses (100 cellules par champ) a été évaluée en utilisant une puissance élevée (× 400) microscopie. Dans le cas de la coexistence de la zone différenciée et indifférencié dans la même section, nous avons évalué le niveau de Nrf2 d'expression dans la zone indifférenciée, même si la zone de indifférenciée est plus petite que la zone différenciée. L'indice de marquage moyen de Nrf2 a été évaluée en fonction de la proportion de cellules positives dans chaque domaine. L'expression de Nrf2 a été évaluée sur la base à la fois de la proportion de cellules positives et l'intensité de la coloration. L'intensité de la coloration Nrf2 a été quantifiée en utilisant un score d'intensité à trois valeurs (0, 1+ ou 2+). La mesure de la réactivité a été évaluée selon Solis et al. [21] et a été exprimée en pourcentage (0-100%). scores immunohistochimiques, allant de 0 à 200, ont été calculées en multipliant les valeurs de l'intensité et de l'étendue de la réactivité. Ces scores ont été utilisés pour déterminer les niveaux d'expression Nrf2. Étant donné que le score médian d'expression Nrf2 dans le cancer gastrique était de 110 dans la présente étude, une valeur de 100 cut-off a été décidé de. Association entre le niveau d'expression de Nrf2 dans le cancer gastrique et la chimiorésistance
Pour évaluer si le niveau de Nrf2 dans le cancer gastrique d'expression affecte la chimiorésistance, nous avons comparé le niveau d'expression de Nrf2 chez les patients atteints de cancer gastrique qui a reçu le 5-fluorouracile (5FU) de chimiothérapie adjuvante à base. Nous avons défini la «résistance de 5FU" que le cancer gastrique qui a récidivé après une chimiothérapie adjuvante. Comme un protocole standard, nous administrons chimiothérapie adjuvante à base de 5FU-aux patients atteints de cancer de stade II ou III. Nous avons exclu les patients qui ne sont pas en mesure de continuer la chimiothérapie adjuvante en raison d'effets secondaires. En conséquence, 72 patients ont été inclus dans cette analyse.
Analyse statistique
L'analyse statistique des différences entre les groupes a été réalisée à l'aide du χ
2 test, test exact de Fisher et de Mann-Whitney U
test. La méthode de Kaplan-Meier a été utilisée pour l'analyse de survie, et les différences de survie ont été estimées en utilisant le test du log-rank. Les facteurs pronostiques ont été examinés par des analyses univariée et multivariée (risques proportionnels de Cox modèle de régression). Une valeur p <
; 0,05 a été considérée pour indiquer la signification statistique. Toutes les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant la version StatFlex 6.0 pour le logiciel Windows (StatFlex version 6.0; Artec Inc., Osaka, Japon). Résultats de
expression Nrf2 dans des lignées cellulaires de carcinome gastrique
L'expression de Nrf2 dans le nucléaire et des fractions cytoplasmiques de lignées cellulaires de cancer de l'estomac ont été analysées par Western blot. Nrf2 a été exprimé principalement dans le noyau de toutes les lignées cellulaires de cancer gastrique et peu d'expression a été observée dans le cytoplasme (figure 1). La figure 1 facteur nucléaire (érythrocytaire-2) concernant la PI facteur 2 (Nrf2) expression dans des lignées cellulaires de carcinome gastrique. expression de la protéine Nrf2 dans des extraits nucléaires et cytoplasmiques des lignées de cellules gastriques MKN74, MNK45, KATO-III, et NUGC4 a été analysée par Western Blot. Le transfert a été re-sondé avec des anticorps anti-lamine B1 et anti-α-tubuline qui ont été utilisés comme témoins positifs pour le noyau et le cytoplasme, respectivement. fractions nucléaires et cytoplasmiques ont été clairement séparées. La protéine Nrf2 a été identifié principalement dans le noyau de toutes les lignées cellulaires de cancer gastrique. Peu Nrf2 a été détectée dans le cytoplasme.
Nrf2 expression immunohistochimique dans le cancer gastrique et son association avec des caractéristiques clinico
Nous avons ensuite déterminé l'expression et la localisation subcellulaire de Nrf2 dans 175 tissus de cancer gastrique archives paraffine, par immunohistochimie. Les caractéristiques clinico-pathologiques des patients sont montrés dans le tableau 1. Nrf2 immunoréactivité a été détectée principalement dans le noyau (figure 2). Une évaluation plus poussée de l'immunoréactivité nucléaire de Nrf2 a indiqué que le motif immunoréactif Nrf2 différent entre les cellules cancéreuses gastriques différenciées et des cellules cancéreuses gastriques non différenciées dans le même échantillon. Ainsi, les cellules cancéreuses gastriques indifférenciées étaient plus susceptibles d'afficher immunoréactivité Nrf2 positive par rapport aux cellules cancéreuses gastriques différenciées. Sur les 175 patients, 108 (61,7%) affiche un score immunohistochimique Nrf2 supérieur à 100 et ont été classés comme Nrf2 positif. Les 67 (38,3%) patients ont été classés en tant que groupe négatif Nrf2. Le tableau 2 montre la corrélation entre l'expression Nrf2 et les caractéristiques clinico-pathologiques. expression positive Nrf2 a été associée de manière significative avec le sexe, la taille de la tumeur, la profondeur de la tumeur, les métastases des ganglions lymphatiques, invasion lymphovasculaire, la classification histologique et le stade clinique de cancer.Table gastrique 1 Caractéristiques des patients
No.
de genre 59
Age 116
Femme
Homme
moyenne
66
Gamme
31-84
opération
99
total gastrectomie
distal
56
proximal
14
partiel 6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
histologie
71
indifférencié de Différenciation
104
Stage a été évaluée selon la 7ème édition de la tumeur noeud classification des métastases.
Figure 2 immunocoloration du facteur nucléaire (érythroïde-2) facteur 2 la PI (Nrf2) dans des échantillons de cancer gastrique cliniques. immunocoloration représentant de Nrf2 dans (a) contrôle positif, le tissu placentaire noncancerous; (B) des tissus de l'estomac normal, (c - e) les tissus de cancer gastrique; (C) de coloration négative de Nrf2, (d) de coloration faible (+1) de Nrf2, (e) une forte coloration (+2) de Nrf2 (grossissement original, × 400). Expression de Nrf2 dans les échantillons cliniques. Immunomarquage de Nrf2 (de grossissement, × 400)
Tableau 2 Corrélation entre l'expression du facteur nucléaire facteur (érythroïde-2) 2 concernant la PI (Nrf2) et les facteurs clinicopathologiques
facteurs cliniques
Expression de Nrf2
P- valeur
négatif
positive
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
Age
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Sexe
< 0,05
51
65
femme de sexe masculin
16
43
taille de la tumeur
< 0,01
< la profondeur 31
81
tumorale de 36
27
≧ 5 cm de 5 cm de
< 0,01
T1a, T1b, 31
T2 19
T3, T4a, T4b
36
89
métastases ganglionnaires
< 0,05
Oui
35
74
Non
32
34
Stage
< 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
invasion lymphovasculaire
< 0,05
Oui
49
90
No
18
14
histologie
<0,01
Differentiated
37
34
indifférencié
30
74
Nrf2 expression immunohistochimique dans le cancer gastrique et son association avec le tableau de 5FU résistance 3 montre la corrélation entre expression de Nrf2 et de résistance 5FU dans les 72 patients qui ont été traités avec une chimiothérapie adjuvante à base de 5FU. Parmi ces 72 patients, 59 étaient Nfr2 positifs et 13 étaient Nfr2 négative. Sur les 59 patients positifs Nfr2, 43 (72,9%) patients étaient résistants 5FU, alors que seulement 5 (38,5%) des 13 patients Nrf2 négatifs étaient résistants 5FU. La différence entre le pourcentage de Nrf2 patients positifs et négatifs Nrf2 dans le groupe de résistance à la 5-FU était statistiquement significative (p = 0,024) .Tableau 3 corrélation entre l'expression du facteur nucléaire (érythrocytaire-2) concernant la PI facteur 2 (Nrf2) et le 5-fluorouracil (5FU) chimiosensibilité
sensibilité de 5FU
expression de Nrf2
P- valeur
négative positive


Resistant 5
43
0,024
Sensitive 8
16
Survival analyse
analyse de Kaplan Meier a indiqué que la survie globale du groupe positif Nrf2 a été significativement plus faible que celle du groupe Nrf2 négatif (61% contre 79%, respectivement) (p < 0,01) (figure 3). Figure 3 résultats postopératoires de 175 patients atteints de cancer gastrique selon le facteur nucléaire (érythroïde-2) facteur 2 la PI (Nrf2) d'expression. L'analyse de Kaplan Meier des résultats postopératoires de 175 patients atteints de cancer gastrique selon l'expression Nrf2. Les courbes de survie ont été construites pour les 175 patients qui ont été divisés en groupes Nrf2-positifs et Nrf2-négatives. Le groupe Nrf2 positif a eu un résultat nettement plus pauvres que le groupe Nrf2-négatif (p < 0,01).
En outre, la profondeur de la tumeur, la taille de la tumeur, les métastases des ganglions lymphatiques, la classification histologique, l'invasion lymphovasculaire étaient également des facteurs importants pour la survie basée sur l'analyse univariée (Tableau 4) .Table 4 univariée et multivariée analyse des facteurs pronostiques dans le cancer gastrique
facteurs cliniques
p de
univariée
multivariée
multivariée P
Hazard Ratio
95% intervalle de confiance

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11,44
Tumor taille
< 0,01
0,35
1,58
0,61 à 4,09
participation Nodal
< 0,01
0,03
5.02
1.18 - 21,41
lymphovasculaire invasion
< 0,05
0,27
0,35
0,05 à 2,26
histologie
< 0,05
0,17
01/01/62
0,81 à 3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1,37
0,66 à 2,87
Nrf2, facteur nucléaire (érythroïde-2) facteur 2.
la PI Nous avons également procédé analyse multivariée de ces six facteurs, y compris Nrf2 comme un marqueur pronostique indépendant. Métastases ganglionnaires a été choisi comme marqueur pronostique indépendant. Cependant, l'expression Nrf2 n'a pas été choisie (voir le tableau 4) le rapport The antioxydant Nrf2, qui sert à protéger les cellules normales de nombreuses conditions d'oxydation nocifs., A été considéré comme un mécanisme de défense majeur cellulaire. Cependant, de nombreux rapports ont indiqué la surexpression de Nrf2 et les gènes en aval dans de nombreux types de cancer humain [19-25]. Ces rapports ont montré que Nrf2 protège non seulement les cellules normales de se transformer en cellules cancéreuses, mais elles peuvent également faciliter prolifération des cellules cancéreuses et de prolonger la survie [18]. Le présent rapport est le premier rapport pour montrer une association entre le niveau d'expression de Nrf2 dans le noyau des cellules de cancer gastrique et les résultats clinico.
Dans l'étude actuelle, Nrf2 immunoréactivité a été détectée principalement dans le noyau, non seulement in vivo, mais également in vitro dans un certain nombre de lignées cellulaires de cancer gastrique. Il a été émis l'hypothèse que l'expression nucléaire de Nrf2 persistant dans l'estomac des lignées cellulaires du cancer conduit à la production d'anti-oxydants, qui confèrent à ces lignées de cellules cancéreuses une grande capacité à résister aux espèces réactives de l'oxygène (ROS). Un phénomène similaire a été rapporté par Ma et al. pour le tissu du cancer du col Ils ont rapporté que PETite du cancer du col conduit non seulement à une concentration plus élevée de Nrf2 dans le noyau des cellules cancéreuses, mais également à une plus forte concentration de protéines de la réponse anti-oxydants en aval [22]. Il peut donc être théoriquement proposé que les lignées cellulaires de cancer gastrique avec expression Nrf2 nucléaire aurait un potentiel de malignité plus élevé grâce à ce mécanisme.
Nous immunohistochimie identifié un taux élevé d'expression Nrf2 dans le cancer gastrique échantillons cliniques (tableau 2). Ainsi, 61,7% des échantillons étaient Nrf2 positif, ce qui était plus élevé que le pourcentage d'échantillons positifs rapportés dans carcinome non à petites cellules du poumon (26%) [21] ou dans le cancer de la vésicule biliaire (23%) [23].
en outre, il y avait des corrélations significatives entre l'expression Nrf2 et plusieurs facteurs clinicopathologiques tels que la taille de la tumeur, la profondeur de la tumeur, l'invasion lymphatique, métastases ganglionnaires, et l'histologie de la tumeur. Nos résultats sont conformes à ceux de Wang et al. qui ont déclaré que l'expression de Nrf2 dans le cancer de la vésicule biliaire était significativement associée à la différenciation, le stade et les métastases ganglionnaires [23].
Récemment Xiu-Freg Hu et al. une enquête similaire expression Nrf2 dans le cancer gastrique [26]. Ils ont également suggéré une signification pronostique d'expression Nrf2 conformément à nos résultats. Cependant, ils ont indiqué que Nrf2 immunoréactivité a été détectée dans le cytoplasme, mais qu'il n'a pas été détecté dans le noyau. Ce résultat peut être différent en raison du fait qu'ils utilisent des anticorps différents de ceux utilisés dans la présente étude. Il a été bien documenté que Nrf2 exerce sa capacité antioxydante que lorsqu'il subit une translocation vers le noyau à partir du cytoplasme [27]. Notre analyse immunoblot a montré que Nrf2 était présent de manière prédominante dans le noyau des cellules des lignées cellulaires de cancer gastrique. Nous avons donc considéré que la surexpression persistante de Nrf2 dans le noyau des cellules cancéreuses gastriques probablement travaillé comme un antioxydant qui protège les cellules de cancer gastrique de ROS, et que Nrf2 expression nucléaire peut refléter un comportement agressif du cancer gastrique. Sur la base de cette théorie, nous avons considéré qu'il est essentiel d'évaluer nucléaire, mais pas l'expression cytoplasmique de Nrf2 dans les échantillons cliniques de cancer de l'estomac.
Dans cette étude, nous avons montré la valeur pronostique de l'expression Nrf2 par analyse univariée. Bien que Nrf2 positivité n'a pas été sélectionné comme un marqueur pronostique indépendant par une analyse multivariée, cette constatation peut être expliquée par la possibilité que Nrf2 positivité a été significativement affectée par l'envahissement ganglionnaire qui était considéré comme pauvre facteur pronostique. Solis et al. et Wang et al. a rapporté la même façon que l'expression Nrf2 a été associée à la survie globale pauvre en carcinome non à petites cellules du poumon [21] et dans le cancer de la vésicule biliaire [23], respectivement. Ces données suggèrent que l'expression Nrf2 peut être utilisée en tant que paramètre pronostique pour la prédiction de la survie des patients atteints de cancer gastrique post-opératoires.
Il a été récemment rapporté que l'expression élevée Nrf2 peut faciliter et prolonger la survie de cellules cancéreuses après une chimiothérapie anti-cancéreuse et la radiothérapie [14,16,19-22,28-33]. Nos résultats ont également montré que l'expression Nrf2 positif était significativement associée à la résistance à la chimiothérapie adjuvante à base de 5FU. Ces résultats combinés peuvent impliquer que, en évaluant le niveau d'expression de Nrf2 dans le noyau des cellules de cancer de l'estomac, il pourrait être possible de prédire les meilleurs candidats qui peuvent bénéficier de recevoir non seulement une chimiothérapie adjuvante mais aussi la chimiothérapie néoadjuvante.
Génétique ou une inhibition fonctionnelle de Nrf2 a été montré pour aboutir à la répression des enzymes cellulaires antioxydantes Nrf2 régulés, notamment glutathion cellulaire, la thiorédoxine et les thiols non protéiques. Au final, ces modifications peuvent restaurer la sensibilité des cellules cancéreuses aux médicaments anticancéreux et la radiothérapie. Ainsi, Cho et al. a rapporté que l'inhibition fonctionnelle de Nrf2 conduit à la sensibilisation des cellules cancéreuses à des agents alkylants anti-cancéreux [31]. En outre, Ma et al. a rapporté que la combinaison de cisplatine et knockdown de Nrf2 considérablement et la croissance tumorale a inhibé significativement in vivo [22].
Compte tenu de ces preuves en compte, il est très probable qu'un nouveau protocole chimiothérapeutique qui implique la régulation Nrf2 sera introduit dans un proche avenir. Par exemple, l'efficacité de la chimiothérapie peut être prédite par la première évaluation de l'expression Nrf2 et, le cas échéant des patients positifs Nrf2 sont évalués comme étant résistantes à la chimiothérapie, alors il peut être possible d'obtenir une efficacité suffisante de la chimiothérapie par l'inhibition concomitante de Nrf2. Par conséquent, un nouveau protocole chimiothérapeutique qui comprend un traitement antioxydant peut être une méthode utile pour résoudre un problème clinique.
Conclusions
expression Nrf2 est étroitement associée à des facteurs clinicopathologiques et le pronostic des patients atteints de cancer gastrique. nrf2 expression dans le cancer gastrique peut être utile pour l'évaluation du potentiel de malignité biologique, qui peut être médiée en partie par nrf2 amélioration de la capacité antioxydante des cellules cancéreuses gastriques. la thérapie antioxydante pourrait être une approche prometteuse pour le traitement des patients atteints de cancer gastrique positifs Nrf2
abréviations
Nrf2.
NF-E2-facteur lié 2
OS: stress oxydatif
KEAP 1:
Kelch-like protein ECH-1 associé
sont:
élément de réponse antioxydant
FBS: sérum bovin fœtal
PBS: phosphate
solution saline tamponnée

TBS:
solution saline tamponnée au Tris
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-fluorouracile
ROS:
espèces réactives de l'oxygène
Déclarations de les Remerciements
Nous déclarons que chaque auteur n'a reçu aucune Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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