Kliinis merkitys ydin- tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyvien kertoimella 2 (Nrf2) ilmentyminen mahalaukun cancer

kliinis merkitystä ydin- tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyviä kertoimella 2 (Nrf2) ilmentyminen mahasyövän
Abstract
tausta
transkriptiotekijä Nukleaaritekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyviä kertoimella 2 (Nrf2) tunnistettiin alun perin kriittinen säätelijänä solunsisäisen antioksidantteja ja vaiheen II detoksifikaatioentsyymejä kautta transkription säätely ylöspäin monien antioksidanttia vaste elementti (ARE) sisältävä geenejä. Nrf2 suojaa paitsi normaaleissa soluissa, mutta myös syöpäsolujen solustressiä, ja tehostaa syöpäsolun selviytymistä. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että Nrf2 ilmaisu syöpäpotilailla on kliinistä merkitystä. Kuitenkin ei ole kattava analyysi ydinvoiman ekspressiotason Nrf2 ruoansulatuskanavan syöpäsoluja. Tässä tutkimuksessa pyrittiin immunohistokemiallisesti arvioida ilmaus Nrf2, ja arvioida sen kliinistä merkitystä mahasyövän. Tool Menetelmät
yhteensä 175 mahasyövän potilailla, jotka saivat R0 gastrectomy standardin imusolmukedissektiossa otettiin. Me immunohistokemiallisesti arvioitiin Nrf2 ilmaisun parafinoidut kirurgisesti resektoitiin yksilöitä näistä 175 potilasta. Ryhmä erot analysoitiin käyttämällä χ
2 testiä, Fisherin testiä, ja Mann-Whitneyn U
testi. Associations välillä Nrf2 ilmaisun ja kliinis ominaisuuksia, kuten kliinisistä tuloksista, arvioitiin käyttäen yhden ja usean analyysit, ja Kaplan-Meier käyrät log-rank-testi, vastaavasti.
Tulokset
Nrf2 immunoreaktiivisuus pääasiassa tunnistettu ydin mahalaukun syöpäsoluja. Nrf2 positiivisuus oli tiiviisti kasvaimen koko, kasvain syvyys, imusolmukemetastaaseja, lymphovascular invaasio, histologian ja vaihe (p < 0,05 kaikille). Log-rank-testi osoitti, että eloonjäämisaste Nrf2-positiivisten ryhmässä oli merkittävästi huonompi kuin Nrf2-negatiivinen (p < 0,01). Ja positiivinen Nrf2 ilmentyminen merkitsevästi yhteydessä vastustuskykyä 5FU kemoterapiaa liitännäishoitona (p = 0,024).
Johtopäätökset
Nrf2 ilmaisua positiivisesti liittyy aggressiivinen kasvain käyttäytymistä mahasyövässä. Tämä tulos viittaa siihen, että Nrf2 ilmentyminen mahasyövässä on mahdollisena indikaattorina huonompi ennuste.
Avainsanat
NF-E2 liittyvä tekijä 2 Mahasyöpää Antioksidantit Background
Mahasyöpä on neljänneksi yleisin ruoansulatuskanavan syöpä ja toiseksi yleisin kuolemaan johtava ruoansulatuskanavan syöpä maailmassa. Itä-Aasian maissa kuten Japani ovat korkeimpia riskin alueilla mahasyövän [1,2]. Japanissa perustaminen massaseulontaohjelmien käyttävät foto fluoroskopiaa tai maha fibroscopy on johtanut mahasyövän on diagnosoitu varhaisessa vaiheessa. Suotuisa ennuste odotetaan näillä mahalaukun syöpäpotilailla parantavaan leikkaukseen tai endoskooppinen hoito. Jotkut potilaat osoittavat epäsuotuisa kurssi huolimatta vastaanottaa parantavaa resektio. Leikkauksen tulos mahasyövän riippuu vahvasti TNM tekijöistä [3,4]. Sen lisäksi, että nämä kriittiset kliinis tekijät, ennuste mahalaukun karsinooma vaikuttavat monet biologisten muuttujien. Tässä yhteydessä on välttämätöntä löytää uusia syöpään liittyviä tekijöitä, joita voidaan käyttää markkereina diagnostiikassa ja hoidossa mahasyövässä. On yleisesti hyväksytty, että oksidatiivinen stressi (OS) on mukana patofysiologiassa rappeuttavia sairauksia. Lisäksi sukupolvi ja kasvu käyttöjärjestelmän ja toisen DNA hapettumista tiedetään myös liittyvän vahingon ja pahanlaatuisiin mahalaukun limakalvon [5]. Siten käyttöjärjestelmä on pidetty olevan tärkeitä rooleja karsinogeneesi mahasyövän [5,6].
Transkriptiotekijä Nukleaaritekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyvien kertoimella 2 (Nrf2), joka on perus redox-herkkien bZIP transkriptiotekijän, tunnistettiin alun perin kriittinen säätelijänä solunsisäisen antioksidantteja ja vaiheen II detoksifikaatioentsyymejä läpi transkription säätelyä monia antioksidantti vaste-elementin (ARE) sisältävä geeni [7-9]. Perusolosuhteissa, Nrf2 on sidottu Kelch kaltainen ECH-liittyvä proteiini 1 (Keap1), joka on cul3-pohjainen E3 ubikitiinipromoottori ligaasilla sovitin, joka säätelee Nrf2 ubikitinaation ja proteasomin riippuva hajoaminen [10].
Kun altistuminen solujen oksidatiivisen stressin tai chemopreventive yhdisteitä, Nrf2 siirtyy tumaan, muodostaa heterodimeerin kanssa pakollinen kumppanin Maf, sitoutuu ARE sekvenssien DNA: ta ja aktivoi transkription alavirran geenien, kuten antioksidantteja ja vaiheen II detoksifikaatioentsyymejä [8,11-13] . Tärkeä biologinen rooli Nrf2 korostavat havainnot osoittavat Nrf2-riippuvainen suojaa monien ihmisen sairauksien tai patologisten tilojen kuten syövän, hermoston sairauksien, sydän- ja verisuonisairaudet, tulehdus, keuhkofibroosi, akuutti keuhkovaurion ja Nrf2 myös hidastaa prosessia ikääntymisen [14 -18]. Siten Nrf2 on pidetty "hyvä", transkriptiotekijä, joka on tärkeä suoja oksidatiivista stressiä vastaan ​​[19]. Kuitenkin kehittyvien data paljasti pimeän puolen Nrf2 [20]. Se on äskettäin osoitettu, että poikkeava aktivaatio Nrf2 reitin esiintyy usein syövän solujen ja kasvaimen kudokset. Nrf2 suojaa ei ainoastaan ​​normaalit solut muuttumista syöpäsoluja, vaan myös suojaa syöpäsolujen solustressiä, parantaa syövän solujen eloonjäämistä ja liittyy syövän kasvua ja etenemistä [18]. Koska nämä paljastukset, ei ole kattava analyysi ilmentymistason Nrf2 tumassa mahalaukun syöpäsolujen, ja ei ole ollut tutkimuksia, joiden tarkoituksena on selventää suhdetta ilmentymistason Nrf2 tumassa mahasyövän solujen ja kliinisen tulokset. Nykyisessä tutkimuksessa, toteutimme ensimmäisen tutkimuksen ilmentymistason Nrf2 tumassa mahasyövän solujen ja edelleen keskustella kliinistä merkitystä Nrf2 ilmaisun suhteen anti oksidatiivista stressiä. Tool Menetelmät
toteaminen Nrf2 ilmentyminen mahasyövän solulinjojen Western blot-analyysi
mahasyöpä solulinjat MKN74, MNK45, KATO III ja NUGC4 ostettiin Japanin Fysikaaliset ja kemialliset Institute, Tokio, Japani. Soluja inkuboitiin RPMI 1640, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 yksikköä /ml penisilliiniä, ja 100 ug /ml streptomysiiniä 37 ° C: soluinkubaattorissa. Kaikki solut otettiin talteen sentrifugoimalla, huuhdottiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja yhteensä proteiini uutettiin lyysipuskurissa. Nuclear tiivisteet ja sytoplasman jakeet Western blottaus Nrf2 valmistettiin käyttämällä Nuclear /sytosoliin fraktiointi Kit (K266-25, BioVison, Kalifornia, USA). Western blot-analyysi Nrf2 ilmentymisen mahasyövän solulinjoissa suoritettiin seuraavasti. Denaturoitu proteiini uutetaan tumasta tai sytoplasmaan erotettiin SDS-polyakryyliamidigeelillä ja siirrettiin Hybond-kalvo, joka blokattiin sitten yön yli 5% rasvatonta maitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS). Sitten membraania inkuboitiin hiiren monoklonaalisella vasta-aineella Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) 1: 500 laimennus yli yön. Kalvo huuhdeltiin TBS-Tween 20 (TBST), ja inkuboitiin anti-hiiri-IgG: llä konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) 15 minuutin ajan. Immunoreaktiivisia bändit tehtiin näkyviksi röntgenfilmille (Fuji, Japani) käyttämällä ECL-Plus detektioreagensseja (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Englanti). Myöhemmin vahvistaa ydin- ja sytoplasman jakeet, kalvo pestiin WB kuoriminen Solution (Nakalai Tesque, Tokio, Japani) 15 minuuttia ja uudelleen tutkittiin ydin- ja sytoplasman markkereita käyttäen anti-Lamin B1-aineella (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) ja anti-α-Tubulin vasta-aineella (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1: 1000) vastaavasti.
potilaat ja näytteet
tutkimuksessa mukana 175 potilasta mahalaukun adenokarsinoomaa että olivat tunkeutuneet osaksi limakalvon alaista kerros tai syvemmälle. Kaikki potilaat saivat parantava gastrectomy kanssa imusolmukedissektiossa Kagoshima yliopistollisessa sairaalassa tammikuusta 1995 joulukuuhun 2004. Niistä 175 potilasta, 57, 14, 99, ja 5 potilasta sai distaalinen, proksimaalinen, kokonais- ja osittainen gastrektomia. Uros ja naisten suhde oli 116-59, ja keski-ikä oli 66 vuotta, vaihdellen 31-84 vuotta. Potilaiden määrä vaiheen I, II ja III mahasyövistä oli 47, 33 ja 95, tässä järjestyksessä. Histopatologisesti 71 tapausta eriytetty (papillaarinen, hyvin erilaistunut ja kohtuullisesti erilaistunut putkimainen adenokarsinooma) ja 104 olivat erilaistumaton (huonosti eriytetty adenokarsinooma, mucinous adenokarsinooma ja sinettisormus-rengas karsinooma) karsinoomat mukaan 7 painos kasvaimen etäpesäke luokittelu. Kukaan näistä potilaista sai kemoterapiaa ennen leikkausta. Kirjallinen suostumus saatiin potilaiden ja tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea Kagoshima yliopistollisen sairaalan (rekisterinumero 35-24). Tämä tutkimus sopeutui esitettyjä periaatteita Helsingin julistus. Kliinis havainnot kuvataan mukaan 7 painos kasvaimen etäpesäke luokitus.
Immunohistokemiallinen analyysi Nrf2 mahasyövän ja sen arviointi
Tuumorinäytteet kiinnitettiin 10% formaldehydillä PBS: ssä, upotettiin parafiiniin, leikattiin 4 um: n paksuisia leikkeitä ja kiinnitettiin objektilaseille immunohistokemiallista analyysia varten. Leikkeitä deparaffinised ksyleeniin ja dehydratoidaan sarjassa porrastettu etanolia. Endogeeninen peroksidaasi aktiivisuus näytteiden estetty upottamalla objektilasit 3% vetyä peroksidaasi-metanoliliuosta 10 min huoneen lämpötilassa. Kun oli pesty kolme kertaa PBS: llä (5 min per pesu), leikkeet käsiteltiin 1% naudan seerumin albumiinia 30 minuuttia huoneenlämpötilassa estää epäspesifisen reaktioita. Värjäystä varten anti-Nrf2-vasta-aineita, osat esikäsiteltiin sitraattipuskurilla 10 min 121 ° C: ssa mikroaaltouunissa hakea antigeenisyyttä. Leikkeitä pestiin kolme kertaa PBS: llä 5 minuuttia joka kerta, ja estettiin sitten käsittelemällä PBS, joka sisälsi 3% rasvatonta maitoa 10 min huoneen lämpötilassa. Estetty leikkeitä inkuboitiin laimennetun ensisijainen anti-Nrf2-vasta-ainetta (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) PBS: ssä 4 ° C: ssa yön yli, mitä seurasi värjäys streptavidiini-biotiini-peroksidaasi-kittiä ( Nichirei, Tokio, Japani). Leikkeitä pestiin kolme kertaa PBS: ssä 5 minuutin ajan per pesu ja immuunikompleksi visualisoitiin inkuboimalla kohdat diaminobentsidiinillä tetra-hydrokloridi. Leikkeet huuhdeltiin lyhyesti vettä, vastavärjättiin hematoksyliinillä ja asennettu. Noncancerous istukkakudos käytettiin positiivisena kontrollina Nrf2. Nrf2 ilmentyminen määritettiin laskemalla syöpäsolujen, joissa tuma värjättiin anti-Nrf2-vasta-ainetta. Kaikki immunovärjättiin objektilasit arvioitiin kaksi riippumatonta tarkkailijaa (YK ja SI), jotka olivat tietoisia kliiniset tiedot ja sairauksien lopputulos. Arvioida Nrf2 lauseke, 10 edustaja kentät sisällä kasvain valittiin, ja ilmaisun yhteensä 1000 syöpäsolujen (100 solua per kenttä) arvioitiin käyttämällä korkean tehon (× 400) mikroskopialla. Kun on kyse rinnakkaiselon eriytetyn ja eriyttämätön alueella samassa jaksossa, arvioimme ilmentymistason Nrf2 on erilaistumattoman alueella, vaikka alue erilaistumattoman on pienempi kuin eriytetty alueella. Keskimääräinen merkintöjä indeksi Nrf2 arvioitiin mukaan osuus positiivisten solujen jokaiseen kenttään. Expression of Nrf2 on arvioitu sekä osuuden positiivisia soluja ja värjäytymisen intensiteetti. Intensiteetti Nrf2 värjäytyminen kvantitoitiin käyttäen kolmen arvon intensiteetin pisteet (0, 1+, tai 2+). Laajuus reaktiivisuus arvioitiin mukainen Solis et ai. [21], ja se ilmaistiin prosentteina (0-100%). Immunohistokemiallista tulokset, jotka vaihtelivat 0-200, laskettiin kertomalla arvot voimakkuus ja laajuus reaktiivisuus. Nämä tulokset käytettiin määrittämään Nrf2 ekspressiotasot. Koska mediaanipisteet Nrf2 ilmaisun mahasyövän oli 110 esillä olevassa tutkimuksessa, cut-off-arvo 100 päätettiin.
Välisestä assosiaatiosta ekspressiotason Nrf2 mahasyövän ja chemoresistance
Sen arvioimiseksi, onko ilmentymisen taso Nrf2 mahalaukun syöpä vaikuttaa chemoresistance vertasimme ilmentymistason Nrf2 mahasyövän, jotka saivat 5-fluoriurasiili (5FU), joka adjuvanttihoitoa. Me määritelty "5FU kestävyys", kuten mahasyövän uusiutui jälkeen adjuvanttihoitoa. Vakiona protokolla, hallinnoimme 5FU kemoterapiaa liitännäishoitona potilaille, joilla on vaiheen II tai III syöpä. Me poissuljettu potilaat, jotka eivät pysty jatkamaan adjuvanttihoitoa takia sivuvaikutuksia. Tämän seurauksena 72 potilasta otettiin tässä analyysissä.
Tilastollinen analyysi
Tilastollinen analyysi ryhmäeroja suoritettiin käyttäen χ
2 testiä, Fisherin testiä ja Mann-Whitney U
testi. Kaplan-Meier menetelmää käytettiin selviytymisen analyysin ja eroja selviytymistä arvioitiin käyttäen log-rank-testi. Ennustetekijöiden tutkittiin yhden ja usean analyysit (Coxin suhteellisen vaarat regressiomallin). A s
arvo < 0,05 katsottiin osoittavan tilastollista merkittävyyttä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen StatFlex version 6.0 for Windows-ohjelmiston (StatFlex versio 6.0; Artec Inc., Osaka, Japani).
Tulokset
Nrf2 ilmentymistä mahan sinoomasolulinjoja
ilmentymistä Nrf2 ydin- ja sytoplasminen jakeet mahalaukun sinoomasolulinjoja analysoitiin Western-blottauksella. Nrf2 ilmaistiin pääasiassa tumassa kaikkien mahasyövän solulinjat ja vähän ekspressiota havaittiin sytoplasmassa (kuvio 1). Kuva 1 Nuclear factor (Erytroidispesifiset 2) liittyviä kertoimella 2 (Nrf2) ilmentyminen mahalaukun sinoomasolulinjoja. Nrf2-proteiinin ilmentyminen ydin- ja sytoplasman uutteet mahalaukun solulinjojen MKN74, MNK45, KATO III, ja NUGC4 analysoitiin Western-blottauksella. Blot uudelleen tutkittiin anti-Lamin B1 ja anti-α-Tubulin vasta-aineita, joita käytettiin positiivisina kontrolleina tumassa ja sytoplasmassa, vastaavasti. Nuclear ja sytoplasminen jakeet erottuivat selvästi. Nrf2-proteiinin tunnistettiin pääasiassa tumassa kaikkien mahasyövän solulinjoissa. Pieni Nrf2 havaittiin solulimassa.
Nrf2 immunohistokemiallisella ilmentymistä mahasyövän ja sen yhdessä kliinis-
Me seuraavaksi määrittää ilmaisun ja solunosasijaintia Nrf2 175 parafinoidut arkistointia mahasyövässä kudoksia käyttäen immunohistokemia. Kliinis potilaiden ominaisuuksiin on esitetty taulukossa 1. Nrf2 immunoreaktiivisuus havaittiin pääasiassa tumassa (kuvio 2). Lisäarviointia ydinaseiden Nrf2 immunoreaktiivisuus osoitti, että Nrf2 immunoreaktiiviset kuvio vaihteli eriytetty mahasyövässä solujen ja eriytymättömiä mahasyövän solujen samasta näytteestä. Siten eriytymättömiä mahalaukun syöpäsolut olivat todennäköisesti näyttää positiivista Nrf2 immunoreaktiivisuus verrattuna eriytetty mahalaukun syöpäsoluja. 175 potilasta, 108 (61,7%) näkyy Nrf2 immunohistokemiallinen pistemäärä on suurempi kuin 100 ja luokiteltiin Nrf2 positiivinen. Loput 67 (38,3%) potilaista luokiteltiin Nrf2 negatiivinen ryhmä. Taulukossa 2 esitetään korrelaatio Nrf2 ilmaisun ja kliinis. Nrf2 positiivinen ilmentyminen merkitsevästi yhteydessä sukupuoleen, kasvaimen koko, kasvain syvyys, imusolmukemetastaaseja, lymphovascular invaasio, histologisen luokituksen ja kliinisessä vaiheessa mahalaukun cancer.Table 1 Potilasominaisuudet
nro
Sukupuoli
Mies
116
Female
59
Ikä
Mean
66
Range
31-84
Operation
99
Yhteensä gastrectomy
Distal
56
proksimaalinen
14
Osittainen
6
Stage
IA, IB
47
II A, II B
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histologia
Differentiated
71
eriyttämätön
104
Stage arvioitiin mukaisesti 7. painos kasvaimen etäpesäke luokitus.
Kuvio 2 immunovärjäys ydin- tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyvien kertoimella 2 (Nrf2) kliinisissä mahasyövän näytteitä. Edustavia immunovärjäys Nrf2 (a) Positiivinen kontrolli, noncancerous istukkakudos; (B) normaali mahan kudos; (C - e) Mahasyöpää kudoksiin; (C) negatiivinen värjäys Nrf2, (d) heikkoa värjäytymistä (+1) ja Nrf2, (e) voimakas värjäytyminen (+2) ja Nrf2 (alkuperäinen suurennos, × 400). Expression of Nrf2 kliinisissä näytteissä. Immunovärjäystä Nrf2 (alkuperäinen suurennos, × 400) B Taulukko 2 korrelaatio ilmaisu ydinvoiman tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyviä kertoimella 2 (Nrf2) ja kliinis tekijät
Kliiniset tekijät
Expression of Nrf2
P- arvo
Negatiivinen
Positiivinen
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)

Ikä
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Sukupuoli
< 0,05
mies
51
65
female
16
43
Tuumorikoko
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Kasvain syvyys
< 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
imusolmukemetastaaseja
< 0,05
Kyllä
35
74
Ei
32
34
Stage
< 0,01
IA, IB
28
19
II A, II B
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invaasio
< 0,05
Kyllä
49
90
Ei
18
14
Histologia
<0,01
Differentiated
37
34
eriyttämätön
30
74
Nrf2 immunohistokemiallisella ilmentymistä mahasyövän ja sen yhdessä 5FU vastus
taulukossa 3 esitetään korrelaatio Nrf2 ilmaisun ja 5FU vastus 72 potilaalla, joita hoidettiin 5FU kemoterapiaa liitännäishoitona. Näistä 72 potilasta, 59 olivat Nfr2 positiivisia ja 13 olivat Nfr2 negatiivisia. Niistä 59 Nfr2 positiivisten potilaiden, 43 (72,9%) potilaista oli 5FU resistenttejä, kun taas vain 5 (38,5%) ja 13 Nrf2 negatiivinen potilaista oli 5FU resistenttejä. Ero prosenttiosuuden Nrf2 positiivisia ja Nrf2 negatiivinen potilasta 5FU vastarintaryhmän oli tilastollisesti merkitsevä (p = 0,024) .table 3 välinen korrelaatio ilmaisu ydinvoiman tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyviä kertoimella 2 (Nrf2) ja 5-fluorourasiilia (5FU) kemosensitiivisyys
5FU herkkyys

ilmentäminen Nrf2
P- arvo
Negative
Positiivinen
Kestää
5
43
0,024
Sensitive
8
16
Survival analyysi
Kaplan Meier-analyysi osoitti, että eloonjäämisaste Nrf2 positiivisen ryhmässä oli merkitsevästi heikompi kuin Nrf2 negatiivisten ryhmässä (61% vs. 79% vastaavasti) (p < 0,01) (kuvio 3). Kuva 3 Leikkauksen jälkeiset tulokset 175 mahasyöpäpotilaista mukaan ydinaseiden tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyvien kertoimella 2 (Nrf2) lauseke. Kaplan Meier analyysin postoperatiivisen tuloksista 175 mahasyöpäpotilaista mukaan Nrf2 ilme. Survival konstruoitiin varten 175 potilasta, jotka jaettiin Nrf2-positiivisia ja Nrf2-negatiivisia ryhmiä. Nrf2-positiivinen ryhmä oli merkitsevästi huonompi tulos kuin Nrf2-negatiivinen (p < 0,01).
Lisäksi kasvaimen syvyys, kasvaimen koon, imusolmukemetastaaseja, histologinen luokitus, lymphovascular invaasio olivat myös merkittäviä tekijöitä hengissä perustuvat yhden muuttujan analyysiin (taulukko 4) .table 4 yhden ja usean analyysejä ennustetekijöiden mahasyövän
Kliiniset tekijät
univariate
Monimuuttujatestaus
p

Monimuuttujatestaus P
Riskisuhde
95%: n luottamusväli

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tuumorikoko
< 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
solmukohtien osallistuminen
< 0,01
0,03
5,02
1,18 - 21.41
Lymphovascular invaasio
< 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
Histologia
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, ydin- tekijä (Erytroidispesifiset 2) liittyvien tekijä 2.
myös suorittaa monimuuttujamenetelmin näistä kuudesta tekijät, kuten Nrf2 itsenäisenä prognostinen markkeri. Imusolmukemetastaaseja valittiin itsenäisinä ennustetekijöiden merkki. Kuitenkin Nrf2 ilmentyminen ei ole valittu (taulukko 4).
Keskustelu
antioksidantti Nrf2, joka toimii suojaamaan normaaleja soluja lukuisia vahingoittamatta Hapettavissa olosuhteissa, on pidetty merkittävä solun puolustusmekanismi. Kuitenkin monet paperit ovat osoittaneet yli-ilmentyminen Nrf2 ja sen loppupään geenejä monenlaisissa ihmisen syövän [19-25]. Nämä raportit osoittivat, että Nrf2 ei ainoastaan ​​suojaa normaaleja soluja muuttumassa syöpäsoluja, mutta voi myös helpottaa syöpäsolujen lisääntymistä ja pidentää elinaikaa [18]. Tämä raportti on ensimmäinen raportti osoittaa yhdistyksen välillä ilmentymistason Nrf2 tumassa mahasyövän solujen ja kliinis havainnoista.
Nykyisessä tutkimuksessa Nrf2 immunoreaktiivisuus havaittiin pääasiallisesti tumassa, paitsi in vivo vaan myös in vitro useita mahasyövän solulinjoissa. On arveltu, että jatkuva ydin- ilmentyminen Nrf2 mahasyövän solulinjoissa tuloksia tuotannossa antioksidantteja, jotka antavat nämä syöpäsolulinjoissa korkea kyky vastustaa reaktiivisen hapen (ROS). Samanlainen ilmiö raportoivat Ma et al. kohdunkaulan syövän kudoksen He kertoivat, että upstaging kohdunkaulasyövän johtaa paitsi korkeamman pitoisuuden Nrf2 tumassa syöpäsoluja, mutta myös suurempaa loppupään antioksidantti vasteen proteiinit [22]. Se voi siis olla teoriassa ehdotetaan, että mahasyövän solulinjoissa ydin- Nrf2 ilme olisi korkeampi pahanlaatuinen potentiaalia tämän mekanismin kautta.
Meillä immunohistokemiallisesti tunnistaneet korkea Nrf2 ilmaisun mahasyövän kliinisissä näytteissä (taulukko 2). Siten 61,7% näytteiden olivat Nrf2 positiivisia, mikä oli korkeampi kuin osuus positiivisissa näytteissä raportoitu ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (26%) [21] tai sappirakon syöpä (23%) [23].
Lisäksi oli merkittäviä korrelaatioita Nrf2 ilmaisun ja useat kliinispatologiset tekijät, kuten kasvaimen koko, kasvain syvyys, imusuonten invaasio, imusolmukemetastaaseja, ja kasvainhistologiaa. Meidän havainnot ovat sopusoinnussa kuin Wang et al. jotka ilmoittivat, että ilmentyminen Nrf2 sappirakon syöpä oli merkitsevästi yhteydessä erilaistumista vaiheessa ja imusolmukemetastaaseja [23].
Äskettäin Xiu-freg Hu et al. Samoin tutkittiin Nrf2 ilmentymistä mahasyövässä [26]. He ehdottivat myös ennusteen merkitys Nrf2 ilmaisun mukaisesti tuloksemme. Ne kuitenkin raportoitu, että Nrf2 immunoreaktiivisuus havaittiin sytoplasmassa, mutta että sitä ei ole havaittu tumassa. Tämä erilainen tulos voi johtua siitä, että niitä käytetään eri vasta-aineet, joita käytettiin tässä tutkimuksessa. On hyvin dokumentoitu, että Nrf2 kykenee sen antioksidantti kyky vain silloin, kun se siirtyy tumaan, sytoplasmasta [27]. Meidän immunoblottauksella analyysi osoitti, että Nrf2 on pääasiassa läsnä solujen tumiin mahasyövän solulinjoissa. Siksi katsotaan, että jatkuva yliekspressio Nrf2 tumassa mahasyövän solujen todennäköisesti toimi antioksidantti, joka suojasi mahan syöpäsolujen ROS, ja että Nrf2 ydin- ilmaisu voi heijastaa aggressiivinen käytös mahasyövän. Tämän teorian pohjalta, me pidetään välttämättömänä arvioida ydinaseiden, mutta ei sytoplasmista ekspressiota Nrf2 kliinisistä näytteistä mahasyövän.
Tässä tutkimuksessa osoitimme ennustetyöväline arvon Nrf2 ilmentymisen univariate analyysi. Vaikka Nrf2 positiivisuus ei valittu itsenäisenä prognostinen markkerin Monimuuttuja-analyysissä, tämä havainto voidaan selittää mahdollisuutta, että Nrf2 positiivisuus vaikuttanut huomattavasti solmukohtien osallistuminen jota pidettiin huono ennustetekijä. Solis et ai. ja Wang et ai. Samoin raportoitu että Nrf2 ilmentyminen liittyy huono yleistä eloonjäämistä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [21] ja sappirakon syöpä [23], tässä järjestyksessä. Nämä tiedot viittaavat siihen, että Nrf2 ilmaisua voidaan käyttää merkittävästi prognostisia parametrin ennustamiseksi selviytymisen leikkauksen jälkeen mahalaukun syöpäpotilailla.
Viime aikoina on raportoitu, että korkea Nrf2 ekspressio voi helpottaa ja pidentää syövän solujen eloonjäämistä seuraavat syövän kemoterapian ja sädehoidon [14,16,19-22,28-33]. Tuloksemme osoittivat myös, että positiivinen Nrf2 ilmentyminen merkitsevästi yhteydessä vastustuskykyä 5FU kemoterapiaa liitännäishoitona. Nämä yhdistetyt tulokset voivat merkitä sitä, että, arvioimalla ilmentymistason Nrf2 tumassa mahalaukun syövän solujen, se voisi olla mahdollista ennustaa parhaat ehdokkaat, jotka voivat hyötyä saavien paitsi adjuvanttihoitoa vaan myös neoadjuvanttikemoterapian.
Genetic tai toiminnallinen esto Nrf2 on osoitettu johtavan tukahduttaminen solujen Nrf2 -regulated antioksidanttientsyymejä, kuten solujen glutationi, tioredoksiini ja ei-proteiini tiolit. Lopulta, nämä muutokset voivat palauttaa herkkyys syöpäsolujen syöpälääkkeiden ja sädehoitoa. Näin ollen, Cho et ai. raportoitu, että toiminnallinen inhibitio Nrf2 johtaa herkistymistä syöpäsolujen alkyloivat syöpälääkkeiden kanssa [31]. Lisäksi Ma et ai. raportoitu, että yhdistelmä sisplatiinin ja knockdovvn Nrf2 dramaattisesti ja merkittävästi esti kasvaimen kasvua in vivo [22].
Kun nämä todisteet otetaan huomioon, on hyvin todennäköistä, että uusi kemoterapeuttisen protokolla, joka liittyy Nrf2 asetus otetaan käyttöön lähitulevaisuudessa tulevaisuudessa. Esimerkiksi teho kemoterapian voitaisiin ensin ennustaa arviointi Nrf2 ilmaisun ja jos jokin Nrf2 positiivisten potilaiden arvioidaan olevan resistenttejä kemoterapiaa, niin se voi olla mahdollista saavuttaa riittävä tehokkuus kemoterapian Samanaikainen estämällä Nrf2. Siksi uuden kemoterapeuttisen protokolla, joka sisältää antioksidantti hoito voi olla hyödyllinen menetelmä ratkaista kliinisen ongelman.
Johtopäätökset
Nrf2 ilmentyminen liittyy läheisesti kliinis tekijät ja ennusteen mahasyövän potilaille. Nrf2 ilmentymistä mahasyövän voivat olla hyödyllisiä arvioida biologisia pahanlaatuistumisriskin, joka voi välittää osittain Nrf2 parantaminen antioksidantti kyky mahalaukun syöpäsoluja. Antioksidantit hoito saattaa olla lupaava lähestymistapa hoitoon Nrf2 positiivisen mahasyövän potilailla.
Lyhenteet
Nrf2:
NF-E2 liittyvä tekijä 2
OS:
Oksidatiivinen stressi
KEAP 1:
Kelch kaltainen ECH liittyvä proteiini 1
ARE:
antioksidantti-elementti
FBS:
sikiön seerumia
PBS:
Fosfaattipuskuroitu suolaliuos

TBS:
Tris-puskuroitua suolaliuosta
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-fluorourasiili
ROS:
reaktiivisia happiradikaaleja
julistukset
Kiitokset
Ilmoitamme, että jokainen kirjoittaja saanut Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Lymfangiogeneesiä mahasyövän säännellään Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D akseli
• Taustatekijöitä mahasyöpä seulonnan läsnäolo Koreassa: monitasoinen analyysi