Klinisk-patologisk betydning af nuklear faktor (erythroid-2) -relateret faktor 2 (Nrf2) udtryk i gastrisk cancer

klinisk-patologisk betydning af nuklear faktor (erythroid-2) relateret faktor 2 (Nrf2) udtryk i mavekræft
Abstract
Baggrund
transkriptionsfaktoren nuklear faktor (erythroid-2) relateret faktor 2 (Nrf2) blev oprindeligt identificeret som en kritisk regulator af intracellulære antioxidanter og af fase II-afgiftning enzymer gennem sin transkriptionelle opregulering af mange antioxidant respons element (ARE) -holdige gener. Nrf2 beskytter ikke kun normale celler, men også kræftceller fra cellulært stress, og øger kræftcelle overlevelse. Nogle undersøgelser har vist, at Nrf2 ekspression i cancerpatienter har klinisk betydning. Imidlertid har der ikke været nogen omfattende analyse af den nukleare udtryk niveau Nrf2 i gastrointestinale kræftceller. I denne undersøgelse sigter vi til immunhistokemisk evaluere udtrykket af Nrf2, og at vurdere den kliniske betydning i mavekræft.
Metoder
En alt 175 mavecancerpatienter som fik R0 gastrektomi med standard lymfeknude dissektion blev inkluderet. Vi immunhistokemisk evalueret Nrf2 udtryk i paraffinindlejrede kirurgisk resektion enheder af disse 175 patienter. Gruppeforskelle blev analyseret ved anvendelse af χ
2 test, Fishers eksakte test, og Mann-Whitney U
test. Foreninger mellem Nrf2 udtryk og klinisk-patologiske funktioner, herunder kliniske resultat, blev vurderet ved hjælp af univariate og multivariate analyser, og Kaplan-Meier kurver med log-rank test, hhv.
Resultater
Nrf2 immunoreaktivitet blev overvejende identificeret i kernen af gastriske cancerceller. Nrf2 positivitet blev tæt forbundet med tumorstørrelse, tumor dybde, lymfeknudemetastaser, lymphovascular invasion, histologi og scene (p < 0,05 for alle). En log-rank-test viste, at den samlede overlevelse Nrf2-positive gruppe var signifikant dårligere end den for Nrf2-negative (p < 0,01). Og blev positivt Nrf2 udtryk signifikant forbundet med resistens over for 5FU adjuverende kemoterapi (p = 0,024).
Konklusioner
Nrf2 udtryk var positivt associeret med aggressiv tumor adfærd i mavekræft. Dette resultat tyder på, at Nrf2 udtryk i gastrisk kræft er en mulig indikator for dårligere prognose.
Nøgleord
NF-E2-relateret faktor 2 mavekræft Antioxidanter Baggrund
mavekræft er den fjerde mest almindelige gastrointestinal cancer og næstmest almindelige dødelige gastrointestinal cancer i verden. Østasiatiske lande, herunder Japan er blandt de områder højeste risiko for mavekræft [1,2]. I Japan har etableringen af ​​masse-screening ved hjælp af foto fluoroskopi eller gastrointestinal fibroscopy ført til mavekræft bliver diagnosticeret på et tidligt tidspunkt. Der forventes en positiv prognose for disse mavekræft patienter efter kurativ kirurgi eller endoskopisk behandling. Men nogle patienter viser en ugunstig kurs trods modtage helbredende resektion. Den postoperative resultat af mavekræft afhænger stærkt af TNM faktorer [3,4]. Ud over disse kritiske klinisk-patologiske faktorer, er prognosen for gastrisk carcinoma påvirket af flere biologiske variabler. I denne forbindelse er det nødvendigt at finde hidtil ukendte kræftrelaterede faktorer, der kan anvendes som markører til diagnose og behandling af gastrisk cancer. Det er almindeligt accepteret, at oxidativt stress (OS) er involveret i patofysiologien af ​​degenerative sygdomme. Desuden er den generation og forøgelse af OS og sekundær DNA oxidative skader også kendt for at være relateret til skaden og malign transformation af maveslimhinden [5]. Således har OS blevet anset for at spille en vigtig rolle i carcinogenese af gastrisk cancer [5,6].
Transkriptionsfaktoren nuklear faktor (erythroid-2) -relateret faktor 2 (Nrf2), som er en grundlæggende redox-sensitive bzip transskriptionsfaktor, blev oprindeligt identificeret som en kritisk regulator af intracellulære antioxidanter og fase II-afgiftning enzymer gennem transkriptionel opregulering af mange antioxidant responselement (ARE) -holdige gener [7-9]. Under basale betingelser, er Nrf2 bundet til Kelch-lignende ECH-associeret protein 1 (Keap1), en cul3-baserede E3 ubiquitin ligase adapter, der regulerer Nrf2 ubiquitinering og proteasom-afhængige nedbrydning [10].
Ved udsættelse af celler for oxidativt stress eller kemoforebyggende forbindelser, Nrf2 translokeres til kernen, danner en heterodimer med sin obligatorisk partner Maf, binder til de er sekvenser i DNA og aktiverer transkriptionen af ​​nedstrøms gener, såsom antioxidanter og fase II-afgiftning enzymer [8,11-13] . Den vigtige biologiske rolle Nrf2 understreges af fund demonstrerer Nrf2-afhængig beskyttelse mod mange humane sygdomme eller patologiske tilstande som kræft, neurodegenerative sygdomme, hjerte-kar-sygdomme, inflammation, lungefibrose, akut pulmonær skade og Nrf2 også forsinker processen med aldring [14 -18]. Nrf2 er således blevet betragtet som en "god" transkriptionsfaktor, der er afgørende til beskyttelse mod oxidativ stress [19]. Men nye data har afsløret den mørke side af Nrf2 [20]. Det har for nylig vist, at afvigende aktivering af Nrf2-vejen ofte opstår i cancerceller og tumorvæv. Nrf2 beskytter ikke kun normale celler fra omdanne til kræftceller, men også beskytter kræftceller fra cellulært stress, øger kræftcellen overlevelse og er forbundet med vækst kræft og progression [18]. Da disse afsløringer, har der ikke været nogen omfattende analyse af udtrykket niveau Nrf2 i kernen af ​​gastriske kræftceller, og der har ikke været nogen undersøgelser med henblik på at afklare forholdet mellem ekspressionsniveauet af Nrf2 i kernen af ​​gastriske kræftceller og klinisk resultat. I den aktuelle undersøgelse, vi gennemførte den første undersøgelse af udtrykket niveau Nrf2 i kernen af ​​gastriske kræftceller og yderligere at drøfte den kliniske betydning af Nrf2 udtryk med hensyn til anti-oxidativ stress.
Metoder
Påvisning af Nrf2 udtryk i gastrisk cancer cellelinjer ved Western blot-analyse
den gastrisk karcinom cellelinjer MKN74, MNK45, KATO-III og NUGC4 blev købt fra den japanske Fysiske og kemiske Institute, Tokyo, Japan. Cellerne blev inkuberet i RPMI 1640 med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 enheder /ml penicillin, og 100 ug /ml streptomycin ved 37 ° C i en celle inkubator. Alle celler blev høstet ved centrifugering, skyllet med phosphatbufret saltvand (PBS) og totalt protein blev ekstraheret i lysepuffer. Nukleare ekstrakter og cytoplasmatiske fraktioner til Western blotting af Nrf2 blev fremstillet ved anvendelse af en Nuclear /Cytosol Fraktionering Kit (K266-25, BioVison, Californien, USA). Western blot analyse af Nrf2 ekspression i gastriske cancercellelinier blev udført som følger. Denatureret protein ekstraheret fra kernen eller cytoplasmaet blev separeret på en SDS-polyacrylamidgel og overført til Hybond membran, som derefter blev blokeret natten over i 5% skummetmælk i Tris-bufret saltvand (TBS). Membranen blev derefter inkuberet med monoklonalt muse-antistof mod Nrf2 (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) ved 1: 500 fortynding for overnight. Membranen blev skyllet med TBS-Tween 20 (TBST) og inkuberet med anti-muse IgG konjugeret til peberrodsperoxidase (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) i 15 minutter. Immunoreaktive bånd blev visualiseret på røntgenfilm (Fuji, Japan) ved hjælp af ECL-Plus afsløring reagenser (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, England). Efterfølgende at bekræfte nukleare og cytoplasmiske fraktioner blev membranen vasket med WB Stripping Solution (Nakalai Tesque, Tokyo, Japan) i 15 minutter og igen probet for nukleare og cytoplasmiske markører under anvendelse af anti-Lamin B1 antistof (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) og anti-α-tubulin antistof (KP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000) henholdsvis
patienter og prøver
Denne undersøgelse omfattede 175 patienter med gastrisk adenocarcinom, som havde invaderet i submukøst lag eller dybere. Alle patienter gennemgik helbredende gastrektomi med lymfeknude dissektion ved Kagoshima Universitetshospital fra januar 1995 til december 2004. Blandt 175 patienter, 57, 14, 99, og 5 patienter fik distal, proksimal, total og partiel gastrektomi hhv. Den mandlige og kvindelige forholdet var 116-59, og den gennemsnitlige alder var 66 år, der spænder fra 31 til 84 år. Antallet af patienter med stadium I, II og III gastriske cancere var 47, 33 og 95, henholdsvis. Histopatologisk, blev 71 sager differentierede (papillær, veldifferentieret og moderat differentieret rørformet adenocarcinom) og 104 var udifferentierede (dårligt differentieret adenocarcinom, mucinøs adenocarcinom og signet-ring celle karcinom) carcinomer efter 7 th udgave af tumor node metastase klassifikation. Ingen af ​​disse patienter fik kemoterapi før kirurgi. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra patienterne og undersøgelsen blev godkendt af Etisk Komité Kagoshima Universitetshospital (registreringsnummer 35-24). Denne undersøgelse var i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen. Klinisk-patologisk fund beskrives efter 7 th udgave af tumor node metastaser klassificering.
Immunhistokemisk analyse af Nrf2 i mavekræft og evalueringen
Tumor prøver blev fikseret med 10% formaldehyd i PBS, indlejret i paraffin, opdelt i 4-um tykke snit og monteret på objektglas til immunhistokemisk analyse. Snit blev deparaffinised i xylen og dehydreret i en serie af gradueret ethanol. Den endogene peroxidase aktivitet af prøverne blev blokeret ved nedsænkning af objektglassene i en 3% hydrogen peroxidase-methanolopløsning i 10 minutter ved stuetemperatur. Efter vask tre gange med PBS (5 min per vask) blev sektionerne behandlet med 1% bovint serumalbumin i 30 minutter ved stuetemperatur for at blokere ikke-specifikke reaktioner. Til farvning med anti-Nrf2 antistoffer blev snit forbehandlet med citratpuffer i 10 minutter ved 121 ° C i en mikrobølgeovn for at hente antigenicitet. Snittene blev vasket tre gange med PBS i 5 minutter hver gang, og blev derefter blokeret ved behandling med PBS indeholdende 3% skummetmælk i 10 minutter ved stuetemperatur. De blokerede snit blev inkuberet med det fortyndede primære anti-Nrf2 antistof (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) i PBS ved 4 ° C natten over, efterfulgt af farvning med en streptavidin-biotin-peroxidase kit ( Nichirei, Tokyo, Japan). Snittene blev vasket tre gange i PBS i 5 minutter pr vask, og immunkomplekset blev visualiseret ved at inkubere sektionerne med diaminobenzidin tetra-hydrochlorid. Snittene blev skyllet kort i vand, modfarvet med hematoxylin, og monteret. Noncancerous placentavæv blev anvendt som positiv kontrol for Nrf2. Nrf2 ekspression blev bestemt ved at tælle antallet af cancerceller, hvori kernen blev farvet med anti-Nrf2 antistof. Alle immunofarvede slides blev evalueret af to uafhængige observatører (YK og SI), som var uvidende om de kliniske data og resultatet sygdom. Til bedømmelse Nrf2 ekspression, 10 repræsentative felter i tumoren blev selekteret, og ekspression i alt 1000 cancerceller (100 celler pr) blev evalueret ved hjælp af høj effekt (× 400) mikroskopi. I tilfælde af sameksistensen af ​​differentierede og udifferentierede område i samme sektion, vi evaluerede ekspressionsniveauet for Nrf2 i udifferentierede område, selv om området af udifferentierede er mindre end differentieret område. Den gennemsnitlige mærkning indeks Nrf2 blev vurderet i forhold til andelen af ​​positive celler i hvert felt. Ekspression af Nrf2 blev vurderet baseret på både andelen af ​​positive celler og intensiteten af ​​farvning. Intensiteten af ​​Nrf2 farvning blev kvantificeret ved anvendelse af en tre-værdi intensitet score (0, 1+, eller 2+). Omfanget af reaktivitet blev vurderet ifølge Solis et al. [21] og blev udtrykt som en procentdel (0-100%). Immunohistokemiske scores, som lå mellem 0 til 200, blev beregnet ved at gange værdierne af intensiteten og omfanget af reaktivitet. Disse scorer blev anvendt til at bestemme Nrf2 ekspressionsniveauer. Da medianen score på Nrf2 udtryk i mavekræft var 110 i nærværende undersøgelse blev en cut-off værdi på 100 besluttet.
Associering mellem ekspressionsniveauet af Nrf2 i mavekræft og kemoresistens
at vurdere, om ekspressionsniveauet for Nrf2 i gastrisk cancer påvirker kemoresistens sammenlignede vi ekspressionsniveauet af Nrf2 i mavecancerpatienter der fik 5-fluorouracil (5FU) adjuverende kemoterapi. Vi definerede "5FU modstand" som mavekræft, der gentog efter adjuverende kemoterapi. Som standard protokol, vi administrerer 5FU adjuverende kemoterapi til patienter med stadie II eller III cancer. Vi ekskluderede patienter, der ikke var i stand til at fortsætte med adjuverende kemoterapi på grund af bivirkninger. Som følge heraf blev 72 patienter inkluderet i denne analyse.
Statistisk analyse
Statistisk analyse af gruppeforskelle blev udført ved hjælp af χ
2 test, Fishers eksakte test og Mann-Whitney U
test. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til overlevelse analyse, og forskelle i overlevelse blev estimeret ved hjælp af log-rank test. Prognostiske faktorer blev undersøgt ved univariate og multivariate analyser (Cox proportionel risiko regressions model). En p
værdi < 0,05 blev anset for at indikere statistisk signifikans. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af StatFlex version 6.0 til Windows-software (StatFlex version 6.0, Artec Inc., Osaka, Japan).
Resultater
Nrf2 udtryk i gastrisk karcinom cellelinjer
udtryk for Nrf2 i nukleare og cytoplasmiske fraktioner af gastriske carcinoma cellelinier blev analyseret ved Western blotting. Nrf2 blev hovedsageligt udtrykt i kernen af ​​alle de gastriske cancercellelinjer og lidt ekspression blev observeret i cytoplasmaet (figur 1). Figur 1 Nuclear faktor (erythroid-2) relateret faktor 2 (Nrf2) ekspression i gastriske carcinoma cellelinier. Nrf2 proteinekspression med nukleare og cytoplasmatiske ekstrakter af gastrisk cellelinjer MKN74, MNK45, KATO-III, og NUGC4 blev analyseret ved Western blotting. Blottet blev igen undersøgt med anti-Lamin B1 og anti-α-tubulin-antistoffer som blev anvendt som positive kontroller til kernen og cytoplasmaet, hhv. Nukleare og cytoplasmatiske fraktioner blev klart adskilt. Den Nrf2 protein blev identificeret hovedsagelig i kernen af ​​alle gastriske cancercellelinier. Lille Nrf2 blev påvist i cytoplasmaet.
Nrf2 immunhistokemisk ekspression i gastrisk cancer og dets associering med klinisk-patologiske træk
Derefter bestemte vi ekspressionen og subcellulær lokalisering af Nrf2 i 175 paraffinindlejrede arkiv mavekræft væv, ved anvendelse af immunohistokemi. De klinisk-patologiske karakteristika patienterne er vist i tabel 1. Nrf2 immunreaktivitet blev påvist primært i kernen (figur 2). Yderligere evaluering af nukleare Nrf2 immunoreaktivitet viste, at Nrf2 immunoreaktive mønster afveg mellem differentierede gastriske kræftceller og udifferentierede gastriske kræftceller i samme prøve. Således udifferentierede gastriske cancerceller var mere tilbøjelige til at vise positiv Nrf2 immunreaktivitet sammenlignet med differentierede gastriske cancerceller. Af de 175 patienter, 108 (61,7%), der vises en Nrf2 immunhistokemisk score på mere end 100 og blev klassificeret som Nrf2 positiv. De resterende 67 (38,3%) patienter blev klassificeret som Nrf2 negative gruppe. Tabel 2 viser sammenhængen mellem Nrf2 udtryk og klinisk-patologiske træk. Nrf2 positivt udtryk var signifikant forbundet med køn, tumorstørrelse, tumor dybde, lymfeknudemetastaser, lymphovascular invasion, histologisk klassifikation og klinisk fase af gastrisk cancer.Table 1 patient karakteristika
Nej
Køn
Mand
116
Female
59
Alder
Mean
66
Range
31-84
Operation
99
alt gastrektomi
Distal
56
proksimale
14
Delvis
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histologi
Differentieret
71
Udifferentieret
104
Stage blev vurderet i henhold til 7. udgave af tumor node metastaser klassificering.
Figur 2 immunfarvning af nuklear faktor (erythroid-2) -relateret faktor 2 (Nrf2) i kliniske gastrisk kræft prøver. Repræsentative immunfarvning af Nrf2 i (a) Positiv kontrol, noncancerous placentavæv; (B) normal mave væv; (c - e) mavekræft væv; (C) negativ farvning af Nrf2, (d) svag farvning (+1) i Nrf2, (e) stærk farvning (+2) af Nrf2 (oprindelig forstørrelse, × 400). Ekspression af Nrf2 i kliniske prøver. Immunfarvning af Nrf2 (original forstørrelse, × 400)
Tabel 2 Sammenhæng mellem udtryk for nuklear faktor (erythroid-2) relateret faktor 2 (Nrf2) og klinisk-patologiske faktorer
Kliniske faktorer
ekspression af Nrf2
P- værdi
Negativ
Positiv
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)

Age
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
Køn
< 0,05
mandlige
51
65
kvindelige
16
43
Tumor størrelse
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor dybde
< 0,01
T1A, T1b, T2
31
19
T3, T4A, T4B
36
89
lymfeknudemetastaser
< 0,05
Ja
35
74
Ingen
32
34
Stage
< 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invasion
< 0,05
Ja
49
90
Ingen
18
14
Histologi
< 0,01
Differentieret
37
34
Udifferentieret
30
74
Nrf2 immunhistokemisk udtryk i gastrisk kræft og dens association med 5FU modstand
tabel 3 viser sammenhængen mellem Nrf2 udtryk og 5FU modstand i de 72 patienter, der blev behandlet med 5FU adjuverende kemoterapi. Af disse 72 patienter, 59 var Nfr2 positive og 13 var Nfr2 negative. Ud af de 59 Nfr2 positive patienter, 43 (72,9%) patienter var 5FU resistente, mens kun 5 (38,5%) af de 13 Nrf2 negative patienter var 5FU resistente. Forskellen mellem procentdelen af ​​Nrf2 positive og Nrf2 negative patienter i 5FU modstand gruppen var statistisk signifikant (p = 0,024) .table 3 Sammenhæng mellem ekspression af nuklear faktor (erythroid-2) relateret faktor 2 (Nrf2) og 5-fluoruracil (5FU) kemosensitivitet
5FU følsomhed
Angivelse af Nrf2
P- værdi
Negativ
Positiv
Resistent
5
43
0,024
Sensitive
8
16
Survival analyse
Kaplan Meier analyse viste, at den samlede overlevelse Nrf2 positive gruppe var markant dårligere end den for Nrf2 negative gruppe (61% vs. 79% henholdsvis) (p < 0,01) (figur 3). Figur 3 Postoperative resultater af 175 mavecancerpatienter henhold til nuklear faktor (erythroid-2) -relateret faktor 2 (Nrf2) udtryk. Kaplan Meier analyse af de postoperative resultater af 175 patienter gastrisk cancer ifølge Nrf2 ekspression. Overlevelseskurver blev konstrueret til de 175 patienter, der var opdelt i Nrf2-positive og Nrf2-negative grupper. Den Nrf2-positive gruppe havde en betydeligt dårligere resultat end Nrf2-negative (p < 0,01).
Desuden tumor dybde, tumorstørrelse, lymfeknudemetastaser, histologisk klassifikation, lymphovascular invasion var også væsentlige faktorer for overlevelse baseret på univariat analyse (tabel 4) .table 4 univariate og multivariate analyser af prognostiske faktorer i mavekræft
Kliniske faktorer
univariate
multivariate
p

Multivariat P
Hazard ratio
95% konfidensinterval

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tumor størrelse
< 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
lymfeknudeinvolvering
< 0,01
0,03
5,02
1,18 - 21,41
Lymphovascular invasion
< 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
Histologi
< 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2
< 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, nuklear faktor (erythroid-2) -relateret faktor 2.
Vi har også udført multivariat analyse af disse seks faktorer, herunder Nrf2 som en selvstændig prognostisk markør. Lymfeknudemetastaser blev valgt som uafhængig prognostisk markør. Nrf2 ekspression blev imidlertid ikke valgt, (tabel 4).
Diskussion
antioxidant Nrf2, som tjener til at beskytte normale celler fra talrige skadelige oxidative betingelser, er blevet anset for at være en væsentlig cellulær forsvarsmekanisme. Men mange papirer indikeret overekspression af Nrf2 og dens downstream gener i mange typer af human cancer [19-25]. Disse rapporter viste, at Nrf2 ikke kun beskytter normale celler fra omdanne til kræftceller, men kan også lette cancercelleproliferation og forlænge overlevelsen [18]. Denne rapport er den første rapport, der viser en sammenhæng mellem ekspressionsniveauet af Nrf2 i kernen af ​​gastriske kræftceller og klinisk-patologiske fund.
I den aktuelle undersøgelse blev Nrf2 immunreaktivitet detekteret overvejende kernen, ikke blot in vivo, men også in vitro i en række af gastriske cancercellelinier. Det er blevet spekuleret, at vedvarende nuklear ekspression af Nrf2 i gastriske cancercellelinier resulterer i produktion af antioxidanter, der tildeler disse cancercellelinier en høj evne til at modstå reaktive oxygenarter (ROS). En lignende fænomen blev rapporteret af Ma et al. for livmoderhalskræft væv De rapporterede, at upstaging af livmoderhalskræft ikke blot fører til en højere koncentration af Nrf2 i kernen af ​​cancercellerne, men også til en højere koncentration af downstream antioxidant respons proteiner [22]. Det kan derfor være teoretisk foreslået, at gastrisk cancer cellelinjer med nukleare Nrf2 udtryk ville have en højere malignt potentiale gennem denne mekanisme.
Vi immunhistokemisk identificeret en høj Nrf2 udtryk i gastrisk kræft kliniske prøver (Tabel 2). Således 61,7% af prøverne var Nrf2 positive, hvilket var højere end procentdelen af ​​positive prøver rapporteret i ikke-småcellet lungekræft (26%) [21], eller i galdeblæren cancer (23%) [23].
Endvidere var der signifikante korrelationer mellem Nrf2 ekspression og flere klinisk-patologiske faktorer såsom tumorstørrelse, tumor dybde, lymfe invasion, lymfeknudemetastaser, og tumor histologi. Vores resultater er i overensstemmelse med de af Wang et al. der rapporterede, at ekspressionen af ​​Nrf2 i galdeblæren kræft var signifikant associeret med differentiering, scene, og lymfeknudemetastaser [23].
nylig Xiu-freg Hu et al. ligeledes undersøgt Nrf2 ekspression i gastrisk cancer [26]. De foreslog også en prognostisk betydning af Nrf2 udtryk i overensstemmelse med vores resultater. rapporterede imidlertid de, at Nrf2 immunreaktivitet blev påvist i cytoplasmaet, men at det ikke blev påvist i kernen. Dette andet resultat kan skyldes det faktum, at de brugte forskellige antistoffer fra dem, der bruges i den foreliggende undersøgelse. Det er blevet veldokumenteret, at Nrf2 udøver sin antioxidant evne, når det translokerer til kernen fra cytoplasmaet [27]. Vores immunoblotting-analyse viste, at Nrf2 var overvejende til stede i kernen af ​​cellerne af gastriske cancercellelinier. Vi mente derfor, at den vedvarende overekspression af Nrf2 i kernen af ​​gastriske kræftceller sandsynligvis arbejdet som en antioxidant, der er beskyttet mavens kræftceller fra ROS, og at Nrf2 nukleare udtryk kan afspejle aggressiv adfærd mavekræft. Baseret på denne teori, vi fandt det væsentligt at evaluere nukleare, men ikke cytoplasmatisk ekspression af Nrf2 i kliniske prøver af gastrisk cancer.
I denne undersøgelse viste vi den prognostiske værdi af Nrf2 ekspression ved univariat analyse. Selvom Nrf2 positivitet ikke blev valgt som en uafhængig prognostisk markør ved multivariat analyse, kan dette resultat forklares ved den mulighed, at Nrf2 positivitet var væsentligt påvirket af lymfeknudeinvolvering, der blev anset for dårlig prognostisk faktor. Solis et al. og Wang et al. ligeledes rapporteret, at Nrf2 ekspression blev forbundet med dårlig total overlevelse i ikke-småcellet lungekræft [21] og i galdeblæren cancer [23], hhv. Disse data antyder, at Nrf2 ekspression kan anvendes som en væsentlig prognostisk parameter for forudsigelse af overlevelsen af ​​postoperative mavecancerpatienter.
Det er for nylig blevet rapporteret, at høje Nrf2 ekspression kan lette og forlænge cancercelleoverlevelse efter anticancer kemoterapi og strålebehandling [14,16,19-22,28-33]. Vores resultater viste også, at positiv Nrf2 ekspression blev signifikant associeret med resistens over for 5FU adjuverende kemoterapi. Disse kombinerede resultater kan betyde, at, ved at vurdere ekspressionsniveauet af Nrf2 i kernen af ​​gastriske cancerceller, kan det være muligt at forudsige de bedste kandidater, der kan drage fordel af at modtage ikke kun adjuvans kemoterapi, men også neoadjuverende kemoterapi.
Genetisk eller funktionel inhibering af Nrf2 har vist sig at resultere i undertrykkelse af cellulære Nrf2 -regulated antioxidant enzymer, herunder cellulær glutathion, thioredoxin og ikke-protein thioler. I sidste ende kan disse ændringer genoprette følsomheden af ​​cancerceller til anticancerlægemidler og strålebehandling. Således Cho et al. rapporterede, at funktionel inhibering af Nrf2 fører til sensibilisering af cancerceller for alkylerende anticancermidler [31]. Endvidere Ma et al. rapporterede, at kombinationen af ​​cisplatin og knockdown af Nrf2 dramatisk og signifikant hæmmede tumorvækst in vivo [22].
Under disse beviser i betragtning, er det meget sandsynligt, at en ny kemoterapeutisk protokol, der involverer Nrf2 forordning vil blive indført i den nærmeste fremtid. For eksempel kunne effektiviteten af ​​kemoterapi skal først forudsagt af evaluering af Nrf2 ekspression og, hvis nogen af ​​Nrf2 positive patienter vurderes for resistent over for kemoterapi, så kan det være muligt at opnå tilstrækkelig effekt af kemoterapi ved samtidig inhibering af Nrf2. Derfor en ny kemoterapeutisk protokol, der omfatter antioxidant terapi kan være en nyttig fremgangsmåde til løsning af et klinisk problem.
Konklusioner
Nrf2 ekspression er tæt forbundet med klinisk-patologiske faktorer og prognosen af ​​mavecancerpatienter. Nrf2 ekspression i gastrisk cancer kan være nyttig til evaluering af den biologiske malignt potentiale, som kan medieres delvist af Nrf2 forøgelse af antioxidanten evne gastriske cancerceller. Antioxidant terapi kan være en lovende metode til behandling af Nrf2 positive mavecancerpatienter
Forkortelser
Nrf2:.
NF-E2-relateret faktor 2
OS:
Oxidativ stress
Keap 1:
Kelch-lignende ECH-associeret protein 1
ER:
antioxidant svar element
FBS:
oksefosterserum
PBS:
Fosfat saltopløsning

TBS:
Tris saltvand
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-fluorouracil
ROS:
Reaktive ilt arter
erklæringer
Taksigelser
Vi erklærer, at hver forfatter modtaget nogen Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Lymfangiogenese i Gastric Cancer reguleret gennem Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D-aksen
• Determinanter for gastrisk kræftscreening fremmøde i Korea: en multi-level analyse