Klinicko význam nukleárneho faktora (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) expresie v karcinómu žalúdka

Klinicko význam nukleárneho faktora (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) expresie v karcinómu žalúdka
abstraktné
pozadia
Jadrový faktor transkripčný faktor (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) bol pôvodne identifikovaný ako rozhodujúci regulátor intracelulárnych antioxidantov a fázy II detoxikačných enzýmov prostredníctvom transkripčný up-regulácia mnohých prvku anti-oxidant odozvy (sú) Obsahujúca génov. Nrf2 chráni nielen normálne bunky, ale aj nádorových buniek z bunkového stresu, a zlepšuje prežitie nádorových buniek. Niektoré štúdie ukázali, že Nrf2 expresie u pacientov s rakovinou je klinický význam. Avšak, nedošlo k žiadnej komplexná analýza jadrovej úrovne expresie Nrf2 v gastrointestinálnych nádorových buniek. V tejto štúdii sme sa zamerali na imunohistochemicky vyhodnotiť výraz Nrf2, a posúdiť jeho klinický význam u karcinómu žalúdka.
Metódy
celkovo 175 pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí dostávali R0 gastrektómii sa štandardným lymfadenektómia boli zaradení. imunohistochemicky sme hodnotili Nrf2 výraz v parafínových chirurgickej resekcii vzoriek takýchto 175 pacientov. Rozdiely Skupina boli analyzované pomocou χ
2 test, Fisherovho exaktného testu a Mann-Whitney U
test. Asociácia medzi Nrf2 prejavu a klinicko-funkcií vrátane klinického výsledku, boli hodnotené pomocou jednorozmerné a mnohorozmerné analýzy a Kaplan-Meierove krivky s log-rank testu, resp.
Výsledky
Nrf2 imunoreaktivity bola identifikovaná prevažne v jadre buniek karcinómu žalúdka. Nrf2 pozitivita bola úzko spojená s veľkosťou nádoru, hĺbku nádorov, metastáz lymfatických uzlín, lymphovascular invázie, histológie a fázy (p menšie ako 0,05 pre všetky). Protokol-rank test ukázal, že celkové prežitie Nrf2-pozitívnej skupiny bolo významne horšie ako u Nrf2-negatívne skupinou (p 0,01). A pozitívne Nrf2 expresie bola signifikantne spojená s rezistenciou voči 5-FU na báze adjuvantnej chemoterapie (p = 0,024).
Závery
Nrf2 prejavu bol pozitívne spojená s agresívnym správaním nádoru u rakoviny žalúdka. Tento výsledok naznačuje, že Nrf2 expresie v karcinómu žalúdka je potenciálny ukazovateľ horšia prognózou.
Kľúčové
NF-E2 súvisiace s faktorom 2 rakovinou žalúdka Antioxidanty pozadí
rakovina žalúdka je štvrtým najbežnejším gastrointestinálne rakovina a druhým najčastejším-fatálne gastrointestinálne rakoviny na svete. Krajina východnej Ázie vrátane Japonska patrí medzi najrizikovejších oblastí pre rakovinu žalúdka [1,2]. V Japonsku, zavedenie skríningu pomocou fotografií rtg alebo gastrointestinálneho fibroskopie viedlo k rakovine žalúdka, čo bol diagnostikovaný v skorých štádiách. Priaznivá prognóza sa očakáva, že u týchto pacientov s karcinómom žalúdka nasledujúce liečebné chirurgie alebo endoskopickú liečbu. Avšak, niektorí pacienti vykazujú nepriaznivý priebeh Napriek tomu, že prijme kuratívne resekcii. Pooperačné výsledky karcinómu žalúdka silne závisí od faktorov, TNM [3,4]. Okrem týchto kritických klinicko-faktory, prognózu karcinómu žalúdka je ovplyvnený niekoľkých biologických premenných. V tejto súvislosti je nutné nájsť nové faktory súvisiace s rakovinou, ktoré môžu byť použité ako markery pre diagnózu a liečenie rakoviny žalúdka. Je všeobecne známe, že oxidačný stres (OS) je zapojený do patofyziológie degeneratívnych ochorení. Okrem toho, výroba a zvýšenie OS a sekundárne DNA oxidačným poškodením sú tiež známe, že vo vzťahu k poškodeniu a malígne transformáciu žalúdočnej sliznice [5]. Tak, OS bol považovaný za hrajú dôležité úlohy v karcinogenéze karcinómu žalúdka [5,6].
Transkripční faktor jadrový faktor (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2), čo je základný redox-senzitívne BZIP transkripčný faktor, bol pôvodne identifikovaný ako kritické regulátor intracelulárnych antioxidantov a fázy II detoxikačných enzýmov cez transkripčný up-reguláciu mnohých elementu antioxidant odozvy (sú) Obsahujúca gény [7-9]. Za bazálnych podmienok, Nrf2 je viazaná na ECH proteín asociovaný Kelch-like 1 (Keap1), čo je cul3 báze E3 ubiquitin ligázu adaptér, ktorý reguluje Nrf2 ubikvitinace a proteazómu závislé na degradácii [10].
Po vystavení buniek oxidačný stres alebo chemopreventivní zlúčeniny, Nrf2 premiestnia do jadra, tvorí heterodiméry s jeho povinnej partnerom MAF, sa viaže na sekvencie v DNA a aktivuje transkripciu downstream génov, ako sú antioxidanty a fázy II detoxikačné enzýmy [8,11-13] , Dôležitú biologickú úlohu Nrf2 je podčiarknutý poznatky preukazujú Nrf2 závislú na ochranu proti mnohých ľudských ochorení alebo patologických stavov, ako je rakovina, neurodegeneratívnych ochorení, kardiovaskulárnych ochorení, zápalov, pľúcna fibróza, akútny pľúcny poranenia a Nrf2 tiež spomaľuje proces starnutia [14 -18]. Takto Nrf2 je považovaný za "dobrý", transkripčný faktor, ktorý je nevyhnutný pre ochranu proti oxidačnému stresu [19]. Avšak, vznikajúce dát odhalila temnú stránku Nrf2 [20]. V poslednej dobe bolo preukázané, že sa odchyľujú aktivácia dráhy Nrf2 sa často vyskytuje v rakovinových bunkách a nádorových tkanivách. Nrf2 chráni nielen normálne bunky od transformuje do nádorových buniek, ale tiež chráni nádorové bunky z bunkovej stres, zlepšuje prežitie rakovinových buniek a je spojená s rastom a progresie rakoviny [18]. Pretože tieto odhalenia, nedošlo k žiadnemu komplexná analýza úrovní expresie Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka, a tam boli žiadne štúdie zamerané na objasnenie vzťahu medzi úrovňou expresie Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka a klinickej výsledok. V tejto štúdii sme vykonali prvé vyšetrenie úrovňou expresie Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka a ďalej rokovať o klinický význam Nrf2 vyjadrenia, pokiaľ ide o boj proti oxidačnému stresu.
Metódy
Detekcia Nrf2 expresie v žalúdočných nádorových bunkových línií Western blot analýzou
karcinómu žalúdka bunkových línií MKN74, MNK45, Kato III-a NUGC4 boli zakúpené od japonskej fyzikálnych a chemických Institute, Tokio, Japonsko. Bunky boli inkubované v médiu RPMI 1640 s 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS), 100 jednotiek /ml penicilínu a 100 ug /ml streptomycínu pri 37 ° C v inkubátore. Všetky bunky boli zozbierané centrifugáciou, premyje fyziologickým roztokom pufrovaným fosfáty (PBS), a celkový proteín bol extrahovaný v lyzačním pufri. Jadrové extrakty a cytoplazmatickej frakcie určené westernovým prenosom Nrf2 boli pripravené za použitia nukleárnej /cytosolu do frakcií Kit (K266-25, BioVison, Kalifornia, USA). Analýza Western blot Nrf2 expresie v žalúdočnej nádorových bunkových línií bola vykonaná nasledujúcim spôsobom. Denaturovaný proteín získaný z jadra a cytoplazmy sa oddelí na SDS-polyakrylamidovom gélu a prenesené na membránu Hybond, ktorá potom bola blokovaná cez noc v 5% odstredeného mlieka v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku (TBS). Membrána bola potom inkubovaná s myšou monoklonálnou protilátkou proti Nrf2 (sc-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) pri 1: 500 riedenie cez noc. Membrána bola opláchnutá TBS-Tween 20 (TBST) a inkubované s anti-myšou IgG konjugovanou s chrenovou peroxidázou (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) po dobu 15 minút. Imunoreaktívnych pásy boli vizualizované na röntgenový film (Fuji, Japonsko) za použitia detekčné činidla ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Anglicko). Následne, pre potvrdenie jadrové a cytoplazmatické frakcie bola membrána premytá WB odstránenie izolácie roztoku (Nakalai Tesque, Tokyo, Japonsko) po dobu 15 minút a znovu testované pre jadrové a cytoplazmatické markerov s použitím anti-Lamin B1 protilátky (ab16048, abca, Cambridge , USA, 1: 1000) a anti-α-tubulínu protilátka (cp06, Calbiochem, MA, USA., 1: 1000) v tomto poradí
Pacienti a vzorky
tejto štúdie bolo zaradených 175 pacientov s adenokarcinómom žalúdka, ktoré napadli do submukóznu vrstvy alebo hlbšie. Všetci pacienti podstúpili kuratívny gastrektómii s lymfadenektómia v Kagošima fakultnej nemocnici od januára 1995 do decembra 2004. Medzi 175 chorých, 57, 14, 99 a 5 pacienti dostávali distálnej proximálnej, celkové a čiastočné gastrektómii. Pomer mužov a žien bolo 116 až 59 a priemerný vek bol 66 rokov, v rozmedzí od 31 do 84 rokov. Počet pacientov s štádiu I, II a III, karcinómov žalúdka bol 47, 33 a 95, v uvedenom poradí. Histopatologicky, 71 prípadov bolo diferencované (papilárna, dobre diferencovaný a stredne diferencovaný tubulárnej adenokarcinóm) a 104 boli nediferencovaného (zle diferencovaný adenokarcinóm, mucinózní adenokarcinóm a karcinóm Signet-bunka prsteňa) karcinómy podľa 7. ročník nádor uzlín klasifikácie. Žiadny z týchto pacientov chemoterapii pred operáciou. Písomný informovaný súhlas bol získaný od pacientov a štúdia bola schválená etickou komisiou Kagoshima fakultnej nemocnice (registračné číslo 35-24). Toto vyšetrovanie zodpovedalo zásad uvedených v Helsinskej deklarácie. Klinicko-patologické nálezy sú popísané v závislosti na 7 ročníka nádoru klasifikácie uzlín.
Imunohistochemické analýzou Nrf2 v karcinómu žalúdka a jeho vyhodnotenie
vzorky nádorov boli fixované 10% formaldehydu v PBS, vložené do parafínu, rozdelená do 4 um silné oddiely a upevnené na sklíčka pre imunohistochemické analýzu. Rezy boli deparaffinised v xyléne a dehydrovaná v sérii etanolové. Endogénnej peroxidázy aktivita vzoriek bola zablokovaná ponorením sklíčok do 3% vodíka s peroxidáze metanolu počas 10 minút pri teplote miestnosti a. Po trojnásobnom premytí PBS (5 min na premytie), rezy boli ošetrené s 1% hovädzieho sérového albumínu počas 30 minút pri teplote miestnosti, aby sa blokovanie nešpecifických reakcií. Na farbenie s protilátkami anti-Nrf2, rezy boli vopred ošetrené citrátového pufru po dobu 10 minút pri teplote 121 ° C v mikrovlnnej rúre na získanie antigenicity. Rezy boli trikrát premyté PBS po dobu 5 minút zakaždým, a potom boli blokované reakciou s PBS obsahujúcom 3% odstredené mlieko počas 10 minút pri teplote miestnosti. Blokované rezy inkubované sa zriedeným primárnej anti-Nrf2 protilátky (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) v PBS pri teplote 4 ° C cez noc, potom farbením s streptavidín-biotín-peroxidáza kit ( Nichirei, Tokyo, Japonsko). Rezy boli trikrát premyté v PBS po dobu 5 minút na umývanie, a imunitný komplex bola vizualizované inkubáciou úseky s Diaminobenzidine tetra-hydrochloridu. Rezy boli krátko opláchnu vo vode, kontrastne hematoxylínom a montáž. Noncancerous placentárnu tkaniva bola použitá ako pozitívna kontrola pre Nrf2. Nrf2 expresia bola stanovená počítaním počtu nádorových buniek, v ktorých bol jadro zafarbených anti-Nrf2 protilátky. Všetky imunologicky sklíčka bola hodnotená dvoma nezávislými pozorovateľmi (yk a Si), ktorí boli vedomí klinických údajov a výsledok ochorení. Na vyhodnotenie expresie Nrf2, bolo vybraných 10 reprezentatívnych poľa vnútri nádoru a expresie v celkom 1000 nádorových buniek (100 buniek na poli), bola hodnotená za použitia vysokého výkonu (x 400) mikroskopia. V prípade, že koexistencia diferencované a nediferencované oblasti v rovnakej časti, sme vyhodnotili hladinu expresie Nrf2 v nediferencovaných oblasti, aj keď oblasť nediferencovanej je menšia ako diferencované oblasti. Priemerný index Označenie Nrf2 bola hodnotená podľa podielu pozitívnych buniek v každej oblasti. Expresia Nrf2 bola hodnotená na základe oboch podielu pozitívnych buniek a intenzity farbenia. Intenzita Nrf2 farbenie bola kvantifikovaná pomocou intenzity skóre tri hodnoty (0, 1+ alebo 2+). Rozsah reaktivity bola hodnotená podľa Solis et al. [21] a bol vyjadrený ako percentuálny (0-100%). Imunohistochemické skóre, ktoré sa pohybovali v rozmedzí od 0 do 200, sa vypočíta vynásobením hodnoty intenzity a rozsah reaktivity. Tieto výsledky boli použité pre stanovenie hladiny expresie Nrf2. Vzhľadom k tomu, medián skóre Nrf2 expresie v karcinómu žalúdka bol 110 v tejto štúdii, je hodnota cut-off 100 bolo rozhodnuté.
Pridruženie medzi hladinou expresie Nrf2 vo rakovinou žalúdka a chemorezistence
Na vyhodnotenie, či je úroveň expresie Nrf2 v karcinómu žalúdka ovplyvňuje chemorezistenci sme porovnávali expresiu Nrf2 u pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí dostávali 5-fluorouracil (5-FU) na adjuvantnú chemoterapiu. Definovali sme "odpor 5FU" ako žalúdočné rakovina, ktorá sa vracal po adjuvantnej chemoterapii. Ako štandardný protokol, budeme spravovať 5FU založené na adjuvantnej chemoterapii u pacientov s karcinómom v štádiu II alebo III. Vylúčili sme pacientov, ktorí neboli schopní pokračovať v adjuvantnej chemoterapii kvôli vedľajším účinkom. V dôsledku toho 72 pacientov bolo zaradených do tejto analýzy.
Štatistická analýza
Štatistická analýza rozdielov skupiny sa vykonáva za použitia ×
2 testy, Fisherovho exaktného testu a Mann-Whitney U
test. Spôsob podľa Kaplan-Meiera bol použitý pre analýzu prežitie, a rozdiely v prežitie sa odhadli pomocou log-rank testu. Prognostické faktory boli skúmané jednorozmerné a viacrozmerné analýzy (Cox pomerného rizika regresného modelu). P
hodnota < 0,05 bola považovaná za označujú štatistickú významnosť. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou StatFlex verzie 6.0 pre Windows softvér (StatFlex verzia 6.0; Artec Inc., Osaka, Japan).
Výsledky
Nrf2 expresie v karcinómu žalúdka bunkových línií
vyjadrenie Nrf2 do jadrových a cytoplazmatickej frakcie bunkových línií karcinómu žalúdka bola analyzovaná metódou Western blotting. Nrf2 bol exprimovaný hlavne v jadre všetkých bunkových línií karcinómu žalúdka a malá expresie bola pozorovaná v cytoplazme (Obrázok 1). Obrázok 1 Nukleárna faktor (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) expresie v karcinómu žalúdka bunkových línií. Nrf2 expresie proteínu v jadrových a cytoplazmatických extraktov bunkových línií žalúdočných MKN74, MNK45, KATO-III, a NUGC4 bola testovaná metódou Western blot. Blot bol znovu testované s anti-Lamin B1 a anti-α-tubulín protilátky, ktoré boli použité ako pozitívne kontroly pre jadru a cytoplazme, v danom poradí. Jadrové a cytoplazmatickej frakcie boli zreteľne oddelené. Nrf2 proteín bol identifikovaný predovšetkým v jadre všetkých žalúdočných nádorových bunkových línií. Malý Nrf2 bola detekovaná v cytoplazme.
Nrf2 imunohistochemické expresiu v karcinómu žalúdka a jeho vzťah s klinicko-funkciami
Ďalej sme stanovená expresie a subcelulárnu lokalizácia Nrf2 v 175 parafínových archívnych žalúdočné rakovinové tkanive pomocou imunohistochémia. Tieto klinicko-patologické charakteristiky pacientov sú uvedené v tabuľke 1. Nrf2 imunoreaktivity bol zistený hlavne v jadre (obrázok 2). Ďalšie vyhodnotenie jadrového Nrf2 imunoreaktivity je uvedené, že Nrf2 imunoreaktívnych vzorka sa líši od diferencovaných buniek karcinómu žalúdka a nediferencovaných buniek karcinómu žalúdka v rovnakom vzorke. Tak, nediferencovaných buniek karcinómu žalúdka sa častejšie zobrazovať pozitívne Nrf2 imunoreaktivitu v porovnaní s diferencovaných buniek karcinómu žalúdka. Zo 175 pacientov, 108 (61,7%) vykazovala Nrf2 imunohistochemické skóre väčší ako 100 a bola klasifikovaná ako Nrf2 pozitívne. Zvyšných 67 (38,3%) pacientov boli klasifikované ako negatívne skupiny Nrf2. Tabuľka 2 ukazuje koreláciu medzi expresiou Nrf2 a klinicko-funkcií. Nrf2 pozitívny expresia bola významne spojená s pohlavím, veľkosť nádoru, hĺbku nádoru, metastáz do lymfatických uzlín, lymphovascular invázie, histologické klasifikáciu a klinickej fáze žalúdočné cancer.Table 1 charakteristiky pacienta
č ​​
Pohlavie
Muž
116
Žena
59
Vek
Stredná
66
rozsah
31 až 84
Prevádzka
99
Celkom gastrektómia
distálnej
56
Proximálna
14
Čiastočné
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
histológia
diferencovaných
71
bližšie
104
etapa bola hodnotená podľa 7. vydanie nádorové uzla klasifikácie metastáz.
obrázok 2 imunologickej jadrového faktora (erytroidné-2) by teda faktora 2 (Nrf2) v klinických vzorkách s karcinómom žalúdka. Reprezentatívny imunologické Nrf2 v (A) na pozitívnu kontrolu, nenádorové placentárnu tkaniva; (B) normálne tkanivo žalúdok; (C - e) Žalúdočné rakovinové tkanivá; (C) negatívne farbenie Nrf2, (d) slabé farbenie (1) Nrf2, (e) silné farbenie (2) Nrf2 (pôvodné zväčšenie, × 400). Expresie Nrf2 v klinických vzorkách. Imunologické Nrf2 (pôvodné zväčšenie, × 400)
Tabuľka 2 korelácia medzi expresiou jadrového faktora faktor (erytroidné-2) by teda 2 (Nrf2) a klinicko-faktory
Klinické faktory
Vyjadrenie Nrf2
P- hodnota
záporná
spoločností Pozitívne
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
Age
ns Hotel < 65
22
47
≧ 65 45
61
Pohlavie Hotel < 0,05
male
51
65
žena
16
43
veľkosť nádoru Hotel < 0,01 Hotel < 5 cm
36
27
≧ 5 cm
31
81
Tumor hĺbka Hotel < 0,01
T1a, T1B, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
metastáz do lymfatických uzlín Hotel < 0,05
Áno
35
74
Nie
32
34
Stage Hotel < 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
Lymphovascular invázie Hotel < 0,05
Áno
49
90
Nie
18
14
histológia Hotel < 0,01
rozlíšené
37
34
bližšie
30
74
Nrf2 imunohistochemické expresie v karcinómu žalúdka a jej vzťah s 5FU odolnosťou proti
tabuľke 3 ukazuje koreláciu medzi Nrf2 expresie a odolnosť voči 5-FU v 72 pacientov, ktorí boli liečení 5-FU na báze adjuvantnej chemoterapie. Z týchto 72 pacientov, 59 bolo Nfr2 pozitívne a 13 boli Nfr2 negatívne. Z celkového počtu 59 pozitívnych pacientov Nfr2, 43 (72,9%) pacientov boli rezistentné 5FU, zatiaľ čo iba 5 (38,5%) zo 13 Nrf2 negatívnych pacientov boli rezistentné 5-FU. Rozdiel medzi percentom Nrf2 pozitívnych a negatívnych pacientov Nrf2 v skupine odporu 5-FU bol štatisticky významný (p = 0,024) .Table 3. Korelácia medzi expresiou nukleárneho faktora (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) a 5-fluóruracilu sú (5-FU) chemosenzitivity
citlivosť 5FU
Vyjadrenia Nrf2
P- hodnoty
Negatívny
Pozitívna
odolný
5
43
0,024
Sensitive
8
16
analýza prežitie
Kaplan Meierovej analýzy vyplynulo, že celkové prežívanie pozitívneho skupiny Nrf2 bola výrazne horšia ako že negatívne skupiny Nrf2 (61% vs. 79% v uvedenom poradí), (p < 0,01) (Obrázok 3). Obrázok 3 Pooperačné výsledky 175 pacientov s karcinómom žalúdka podľa nukleárneho faktora (erytroidné-2) by teda faktor 2 (Nrf2) výrazu. Kaplan Meier analýza pooperačných výsledkov 175 pacientov s karcinómom žalúdka podľa Nrf2 výrazu. Krivky prežitia boli konštruované pre 175 pacientov, ktorí boli rozdelení do Nrf2-pozitívnych a negatívnych Nrf2-skupín. Nrf2-pozitívne skupina mala významne horšie výsledky než Nrf2-negatívne skupinou (p 0,01).
Okrem toho hĺbka tumor, veľkosť nádoru, lymfatických uzlín, histologické klasifikácie, lymphovascular invázie boli tiež významné faktory pre prežitie založené na jednorozmerné analýze (tabuľka 4) .Table 4 jednorozmerná a viacrozmerné analýza prognostických faktorov u karcinómu žalúdka
Klinické faktory
jednorozmerných
spoločností Multivariate
p

Multivariate P
pomer rizika
spoločností 95% interval spoľahlivosti

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11,44
Tumor veľkosti Hotel < 0,01
0,35
1,58
0,61-4,09
uzlín Hotel < 0,01
0,03
5,02 1,18
- 21,41
Lymphovascular invázie Hotel < 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
histológia Hotel < 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2 Hotel < 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, nukleárna faktor 2.
sme tiež vykonať (erytroidné-2) by preto faktor multivariačný analýza týchto šiestich faktorov, vrátane Nrf2 ako nezávislý prognostický marker. Metastázy do lymfatických uzlín bola vybraná ako nezávislý prognostický marker. Avšak, Nrf2 expresia nebola vybraná (tabuľka 4).
Diskusia
antioxidant Nrf2, ktorý funguje tak, že chráni normálne bunky z mnohých škodlivých oxidačných podmienok, bol považovaný za hlavný bunkový obranný mechanizmus. Avšak, mnoho prác ukázali na zvýšenú expresiu Nrf2 a jeho následnými génov u mnohých typov rakoviny u ľudí [19-25]. Tieto správy ukázali, že Nrf2 nielen chráni normálne bunky z transformuje do rakovinových buniek, ale môžu tiež uľahčiť šírenie rakovinových bunkových a predĺžiť prežitie [18]. Táto správa je prvá správa žiadnu súvislosť medzi úrovňou expresie Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka a klinicko-zistenia.
V súčasnej štúdii, Nrf2 imunoreaktivita bola detekovaná prevažne v jadre, a to nielen v in vivo, ale tiež in vitro v celej rade bunkových línií karcinómu žalúdka. To bolo špekuloval, že pretrvávajúce nukleárna expresiu Nrf2 v žalúdočnej rakovinové bunkové línie vedie k produkcii antioxidantov, pre ktoré z týchto bunkových línií rakovinových vysokú schopnosť odolávať reaktívne formy kyslíka (ROS). Podobný jav bol hlásený Ma et al. pre tkanivá, rakoviny krčka maternice Oni hlásili, že upstaging rakoviny krčka maternice vedie nielen k vyššou koncentráciou Nrf2 v jadre z nádorových buniek, ale aj k vyššej koncentrácii nadväzujúcich proteínov antioxidačných reakcie [22]. Preto môže byť teoreticky navrhuje, aby žalúdočné rakovina bunkové línie s expresiou jadrového Nrf2 by mali vyššie malígneho potenciálu prostredníctvom tohto mechanizmu.
Imunohistochemické sme identifikovali vysokú mieru Nrf2 expresie u karcinómu žalúdka klinických vzoriek (tabuľka 2). Tak, 61,7% zo vzoriek bolo pozitívnych Nrf2, ktorý bol vyšší než percento pozitívnych vzoriek hlásené v non-small cell lung karcinómu (26%) [21] alebo u rakoviny žlčníka (23%) [23].
ďalej bolo významné korelácie medzi expresiou Nrf2 a niekoľko klinicko-faktory, ako je veľkosť nádoru, hĺbku nádoru, lymfatické invázia metastáz lymfatických uzlín, a histológiu. Naše zistenia sú v súlade s tými Wang et al. ktorí uviedli, že expresia Nrf2 v rakoviny žlčníka bola významne spojená s diferenciáciou, javisko a metastáz do lymfatických uzlín [23].
Nedávno Xiu-fregata Hu et al. Podobne skúmali Nrf2 výraz v rakoviny žalúdka [26]. Oni tiež navrhol prognostický význam Nrf2 prejavu v súlade s našimi výsledkami. Avšak, oni hlásili, že Nrf2 imunoreaktivita bola detekovaná v cytoplazme, ale že nebol detekovaný v jadre. Tento rozdielny výsledok môže byť vzhľadom k tomu, že používané rôzne protilátky od tých, použitých v tejto štúdii. Bolo dobre zdokumentované, že Nrf2 vykonáva svoj antioxidačnú schopnosť len vtedy, keď sa premiestni do jadra z cytoplazmy [27]. Naše imunoblotu analýza ukázala, že Nrf2 je prevažne prítomný v jadre buniek žalúdku nádorových bunkových línií. Preto sme sa za to, že nadmerná expresia pretrvávajúce Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka pravdepodobne pracoval ako antioxidant, ktorý chránil žalúdočné rakovinové bunky od ROS, a že Nrf2 nukleárnej expresie môže odrážať agresívne správanie karcinómu žalúdka. na tejto teórii, sme považovali za potrebné vyhodnotiť nukleárna, ale nie cytoplazmatická expresie Nrf2 v klinických vzoriek rakoviny žalúdka.
V tejto štúdii sme ukázali, prognózovanie hodnotu Nrf2 výrazu jednorozmerné analýze. Aj keď Nrf2 pozitivita nebola vybraná ako nezávislý prognostický marker u viacrozmerné analýzy, môže byť tento nález vysvetliť možnosti, že Nrf2 pozitivita bola významne ovplyvnená uzlín, ktorá bola považovaná za zlé prognostický faktor. Solis et al. a Wang et al. Podobne hlásil, že Nrf2 expresia bola spojená so zlou celkové prežívanie u nemalobunkového karcinómu pľúc [21] a u rakoviny žlčníka [23], v danom poradí. Tieto údaje naznačujú, že Nrf2 expresia by mohla byť použitá ako významný prognostický parametrom pre predikciu prežitie u pacientov s rakovinou žalúdka pooperačných.
Nedávno bolo oznámené, že vysoká expresia Nrf2 môže uľahčiť a predĺžiť prežitie rakovinových buniek po chemoterapiu a rádioterapiu [14,16,19-22,28-33]. Naše výsledky tiež ukazujú, že pozitívny Nrf2 expresie bola významne spojená s odolnosťou proti 5-FU na báze adjuvantnej chemoterapie. Tieto kombinované výsledky môžu znamenať, že, na základe vyhodnotenia hladiny expresie Nrf2 v jadre buniek karcinómu žalúdka, to by mohlo byť možné predvídať najlepších kandidátov, ktorí môžu mať prospech z príjmu nielen adjuvantnej chemoterapii, ale aj neoadjuvantnej chemoterapii.
Genetic alebo funkčná inhibícia Nrf2 bolo preukázané, že dôjde k potlačeniu bunkových Nrf2 -regulated antioxidačných enzýmov, vrátane bunkového glutatiónu, thioredoxin a non-proteín tioly. V konečnom dôsledku tieto zmeny môžu obnoviť citlivosť nádorových buniek k protinádorovej látky a rádioterapiu. Tak, Cho et al. uvádzajú, že funkčné inhibícia Nrf2 vedie senzibilizácia nádorových buniek do alkylačné protinádorová činidla [31]. Okrem toho, Ma et al. uvádzajú, že kombinácia cisplatina a Knockdown Nrf2 výrazne a významne inhibovala nádorový rast in vivo [22].
S ohľadom na tieto dôkazy do úvahy, je veľmi pravdepodobné, že nové chemoterapeutické protokol, ktorý zahŕňa reguláciu Nrf2 bude predstavený v blízkej budúcnosť. Napríklad účinnosť chemoterapie by mohla byť najprv predpovedal vyhodnotenie Nrf2 prejavu a, ak je niektorý z pozitívnych pacientov Nrf2 sú hodnotené ako odolné voči chemoterapii, potom to môže byť možné dosiahnuť dostatočnú účinnosť chemoterapie pri súčasnom inhibíciu Nrf2. Preto nový chemoterapeutický protokol, ktorý obsahuje antioxidačné terapia môže byť užitočná metóda pre riešenie klinický problém.
Závery
Nrf2 výraz je úzko spojená s klinicko-faktormi a prognózu pacientov s rakovinou žalúdka. Nrf2 expresie v karcinómu žalúdka, môže byť užitočné pre hodnotenie biologickej malígneho potenciálu, ktoré môžu byť sprostredkované čiastočne Nrf2 zvýšenie antioxidačné schopnosti buniek karcinómu žalúdka. Antioxidačné terapia by mohla byť sľubným prístupom k liečbe pozitívnych pacientov s rakovinou žalúdka Nrf2
Skratky
Nrf2 :.
NF-E2 v súvislosti s faktorom 2
OS:
Oxidačný stres
Keap 1:
Kelch-like ECH-spojený proteín 1
SÚ:
antioxidant element sprostredkovateľský odpoveď
FBS:
Fetálne hovädzie sérum
PBS:
tlmený soľný roztok fosfáty

TBS:
Tris-pufrovaný soľný roztok
TBST:
TBS-Tween 20
5FU:
5-Fluorouracil
ROS:
reaktívnych kyslíkových
deklarácia
Poďakovanie
Prehlasujeme, že každý autor prijaté žiadne Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Lymfangiogeneze v rakoviny žalúdka regulovať pomocou Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D axis
• Determinanty rakoviny žalúdka skríningu účasti v Kórei: multi-level analysis