significado clínico-patológico do fator nuclear (eritróide-2) fator -relacionados 2 expressão (Nrf2) em cancer

significado clínico-patológico gástrica do fator nuclear (eritróide-2) fator relacionados com 2 expressão (Nrf2) no câncer gástrico da arte abstracta
Fundo relacionados com
O factor nuclear factor de transcrição (eritróide-2) factor de 2 (Nrf2) foi originalmente identificada como um regulador crítico de anti-oxidantes intracelulares e de fase II enzimas de desintoxicação de transcrição através da sua sobre-regulação de muitas resposta anti-oxidante elemento (ARE) molecular contendo genes. Nrf2 protege não apenas as células normais, mas também as células cancerosas de stress celular, e aumenta a sobrevivência de células de cancro. Alguns estudos têm demonstrado que a expressão Nrf2 em pacientes com câncer tem significado clínico. No entanto, não houve nenhuma análise abrangente do nível de expressão nuclear de Nrf2 em células de cancro gastrointestinal. Neste estudo teve como objetivo avaliar imunohistoquímica da expressão de Nrf2, e para avaliar a sua relevância clínica em câncer gástrico.
Métodos
Um total de 175 pacientes com câncer gástrico que receberam gastrectomia R0 com dissecção de linfonodos padrão foram inscritos. Nós imunohistoquímica avaliada expressão Nrf2 nas amostras cirurgicamente ressecados embebidos em parafina desses 175 pacientes. diferenças entre os grupos foram analisados ​​utilizando o χ
2, teste exato de Fisher e Mann-Whitney U
teste. As associações entre a expressão Nrf2 e características clínico-patológicas, incluindo o resultado clínico, foram avaliados através de uni e multivariadas, e as curvas de Kaplan-Meier com o teste log-rank, respectivamente.
Resultados
Nrf2 imunorreatividade foi predominantemente identificado no núcleo de células de câncer gástrico. positividade Nrf2 foi intimamente associado com o tamanho do tumor, a profundidade do tumor, metástases em linfonodos, invasão linfática, histologia e estágio (p < 0,05 para todos). Um teste de log-rank indicou que a sobrevivência global do grupo Nrf2-positiva foi significativamente mais pobre do que a do grupo Nrf2-negativo (p < 0,01). E, expressão Nrf2 positiva foi significativamente associada com a resistência à quimioterapia adjuvante com 5-FU (p = 0,024).
Conclusões
expressão Nrf2 foi positivamente associado com o comportamento do tumor agressivo em câncer gástrico. Este resultado sugere que a expressão Nrf2 no ​​câncer gástrico é um potencial indicador de pior prognóstico.
Relacionadas com a NF-E2 Palavras-chave
fator de 2 Antioxidantes câncer gástrico fundo
O câncer gástrico é o quarto câncer mais comum gastrointestinal eo câncer gastrointestinal fatal segundo mais comum no mundo. países do Leste Asiático, incluindo o Japão estão entre as áreas de maior risco para o câncer gástrico [1,2]. No Japão, o estabelecimento de rastreamento em massa utilizando fluoroscopia foto ou fibroscopia gastrointestinal levou ao câncer gástrico ser diagnosticado em estágios iniciais. Um prognóstico favorável é esperado para esses pacientes com câncer gástrico após a cirurgia curativa ou de tratamento endoscópico. No entanto, alguns pacientes apresentam um curso desfavorável apesar de receber ressecção curativa. O resultado pós-operatório de câncer gástrico depende fortemente de fatores TNM [3,4]. Em adição a estes factores críticos clinicopatológicas, o prognóstico de carcinoma gástrico é influenciada por várias variáveis ​​biológicas. Neste contexto, é necessário encontrar novos factores relacionados com o cancro que podem ser utilizados como marcadores para o diagnóstico e tratamento do cancro gástrico. É geralmente aceite que o stress oxidativo (SO) está envolvido na patofisiologia de doenças degenerativas. Além disso, a geração e aumento de OS e danos oxidativos do ADN secundário também são conhecidos por estar relacionada com a transformação maligna e dano da mucosa gástrica [5]. Assim, OS tem sido considerada a desempenhar papéis importantes na carcinogénese do cancro gástrico [5,6].
O factor nuclear factor de transcrição (eritróide-2) factor de -relacionados 2 (Nrf2), que é uma base de redox-sensível factor de transcrição bZIP, foi originalmente identificado como um regulador crítico de antioxidantes intracelulares e de fase II enzimas de desintoxicação através da sobre-regulação da transcrição de muitos elemento de resposta antioxidante (são) os genes molecular contendo [7-9]. Em condições basais, Nrf2 está ligado à proteína kelch-associado como ECH-1 (Keap1), um adaptador de ubiquitina-ligase E3-base cul3 que regula Nrf2 ubiquitinação e degradação de proteassoma dependente de [10].
Após a exposição das células a estresse oxidativo ou compostos quimiopreventivos, Nrf2 transloca para o núcleo, forma um heterodímero com o seu parceiro de aplicabilidade Maf, liga-se às sequências de ADN e estão em activa a transcrição dos genes a jusante, tais como antioxidantes e enzimas de desintoxicação de fase II [8,11-13] . O papel biológico importante do Nrf2 é sublinhada pelos resultados que demonstram a proteção Nrf2-dependente contra muitas doenças humanas ou estados patológicos tais como o cancro, doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares, inflamação, fibrose pulmonar, lesão pulmonar aguda e Nrf2 também retarda o processo de envelhecimento [14 -18]. Assim Nrf2 tem sido considerada como um factor de "bom" de transcrição que é essencial para a protecção contra o stress oxidativo [19]. No entanto, dados emergentes revelou o lado escuro da Nrf2 [20]. Foi recentemente mostrado que a activação aberrante da via Nrf2 ocorre frequentemente em células cancerosas e tecidos de tumores. Nrf2 protege as células normais não apenas a partir de transformar em células cancerosas, mas também protege as células cancerosas de stress celular, aumenta a sobrevivência de células de cancro e está associado com o crescimento e a progressão [18] do cancro. Uma vez que essas revelações, não houve nenhuma análise abrangente do nível de expressão de Nrf2 no ​​núcleo das células cancerosas gástricas, e não houve estudos destinadas a clarificar a relação entre o nível de Nrf2 expressão no núcleo das células cancerosas gástricas e clínica resultado. No presente estudo, foi realizado o primeiro exame do nível de Nrf2 expressão no núcleo das células cancerosas gástricas e discutir o significado clínico de expressão Nrf2 com respeito a direitos anti-estresse oxidativo.
Métodos
Detecção de Nrf2 expressão em linhas celulares de cancro gástrico por análise Western blot
as linhas celulares de carcinoma gástrico MKN74, MNK45, KATO-III e NUGC4 foram adquiridos a partir da japonesa Física e química Instituto, Tóquio, Japão. As células foram incubadas em meio RPMI 1640 com 10% de soro fetal de bovino (FBS), 100 unidades /ml de penicilina, e 100 ug /ml de estreptomicina a 37 ° C num incubador celular. Todas as células foram colhidas por centrifugação, lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e a proteína total foi extraída em tampão de lise. Os extractos nucleares e citoplasmáticos fracções de Western blotting de Nrf2 foram preparados utilizando um Kit Nuclear /Citosol Fraccionamento (K266-25, BioVison, Califórnia, EUA). A análise por Western blot da expressão de Nrf2 em linhas celulares de cancro gástrico foi realizada como se segue. proteína desnaturada extraiu-se a partir do núcleo ou citoplasma foi separada num gel de SDS-poliacrilamida e transferidos para uma membrana Hybond, o qual foi, em seguida, bloqueadas durante a noite em leite desnatado a 5% em solução salina tamponada com Tris (TBS). A membrana foi então incubada com o anticorpo monoclonal de ratinho contra Nrf2 (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, EUA) na diluição de 1: 500, durante a noite. A membrana foi lavada com TBS-Tween 20 (TBST) e incubadas com IgG anti-ratinho conjugado com peroxidase de rábano (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, EUA) durante 15 minutos. bandas imuno foram visualizados em filme de raios X (Fuji, Japão), utilizando reagentes de detecção ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Inglaterra). Subsequentemente, para confirmar fracções nucleares e citoplasmáticos, a membrana foi lavada com WB Decapagem Solução (Nakalai Tesque, Tóquio, Japão) durante 15 minutos e re-sondados para marcadores nucleares e citoplasmáticos, utilizando o anticorpo B1 anti-Lamin (ab16048, Abcam, Cambridge , EUA, 1: 1000) e o anticorpo anti-α-tubulina (CP06, Calbiochem, MA, EUA, 1:. 1000), respectivamente
pacientes e amostras
Este estudo incluiu 175 pacientes com adenocarcinoma gástrico que tinham invadido na camada submucosa ou mais profundo. Todos os pacientes foram submetidos a gastrectomia curativa com dissecção de linfonodos no Hospital Universitário de Kagoshima a partir de janeiro de 1995 a dezembro de 2004. Entre os 175 pacientes, 57, 14, 99 e 5 pacientes receberam distal, proximal, gastrectomia total e parcial, respectivamente. O rácio entre homens e mulheres foi de 116 a 59, ea média de idade foi de 66 anos, variando de 31 a 84 anos. O número de pacientes com estágio I, II e III câncer gástrico foi de 47, 33 e 95, respectivamente. Histopatologicamente, 71 casos foram diferenciado (papilar, bem diferenciado e moderadamente diferenciado adenocarcinoma tubular) e 104 foram indiferenciado (adenocarcinoma pouco diferenciado, adenocarcinoma mucinoso e carcinoma de células em anel de sinete) carcinomas de acordo com o 7 th edição do nó tumor metástase classificação. Nenhum destes pacientes recebeu quimioterapia antes da cirurgia. consentimento informado por escrito foi obtido dos pacientes eo estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Universitário de Kagoshima (número de registo 35-24). Esta investigação conformados com os princípios enunciados na Declaração de Helsinki. Achados clínicopatológicos são descritos de acordo com o 7 th edição da classificação do tumor metástase.
análise imuno-histoquímica de Nrf2 no ​​câncer gástrico e sua avaliação
amostras tumorais foram fixadas com formol a 10% em PBS, embebidos em parafina, seccionados em 4 mm de espessura e montadas em lâminas de vidro para análise imuno-histoquímica. As secções foram deparaffinised em xileno e desidratadas numa série de etanol graduada. A actividade de peroxidase endógena das amostras foi bloqueada por imersão das lâminas numa solução de peroxidase de hidrogénio a 3% metanol durante 10 min à temperatura ambiente. Após lavagem três vezes com PBS (5 min por lavagem), as secções foram tratadas com 1% de albumina de soro de bovino durante 30 min à temperatura ambiente para bloquear as reacções inespecíficas. Para a coloração com anticorpos anti-Nrf2, as secções foram pré-tratadas com tampão citrato, durante 10 min a 121 ° C num forno de micro-ondas para recuperar a antigenicidade. As secções foram lavadas três vezes com PBS durante 5 min de cada vez, e foram então bloqueados por tratamento com PBS contendo 3% de leite desnatado durante 10 minutos à temperatura ambiente. As secções bloqueadas foram incubadas com o anticorpo anti-Nrf2 primário diluído (SC-365949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) em PBS a 4 ° C durante a noite, seguido de coloração com um kit de estreptavidina-biotina-peroxidase ( Nichirei, Tóquio, Japão). As secções foram lavadas três vezes em PBS durante 5 minutos por lavagem, e o complexo imune foi visualizada por incubação das secções com cloridrato de tetra diaminobenzidina. As secções foram enxaguadas brevemente em água, contra-coradas com hematoxilina e montadas. tecido placentário não cancerosas foi utilizada como controlo positivo para Nrf2. Nrf2 expressão foi determinada através da contagem do número de células cancerosas, em que o núcleo foi corado com o anticorpo anti-Nrf2. Todas as lâminas imunocoradas foram avaliados por dois observadores independentes (YK e SI), que desconheciam os dados clínicos e evolução da doença. Para avaliar a expressão de Nrf2, foram seleccionados 10 campos representativos dentro do tumor, e expressão num total de 1000 células cancerosas (100 células por campo) foi avaliada utilizando alta potência (400 ×) microscopia. No caso da coexistência de área diferenciada e indiferenciada na mesma secção, foi avaliado o nível de expressão do Nrf2 na área indiferenciada, embora a área de células indiferenciadas é menor do que a área diferenciada. O índice de média rotulagem de Nrf2 foi avaliada de acordo com a proporção de células positivas em cada campo. Expressão de Nrf2 foi avaliada com base em ambos, a proporção de células positivas e a intensidade de coloração. A intensidade de coloração Nrf2 foi quantificada utilizando uma pontuação de intensidade de três valor (0, 1+, ou 2+). O grau de reactividade foi avaliada de acordo com Solis et ai. [21] e foi expressa como uma percentagem (0-100%). pontuações de imuno-histoquímica, que variaram de 0 a 200, foram calculados pela multiplicação dos valores da intensidade e da extensão da reatividade. Estas pontuações foram utilizadas para determinar os níveis de expressão Nrf2. Uma vez que a pontuação média de expressão Nrf2 no ​​câncer gástrico foi de 110 no presente estudo, um valor de corte de 100 foi decidida.
Associação entre o nível de expressão de Nrf2 em câncer gástrico e chemoresistance
Para avaliar se o nível de Nrf2 no ​​câncer gástrico expressão afeta chemoresistance, comparamos o nível de expressão de Nrf2 em pacientes com câncer gástrico que receberam 5-fluorouracil (5-FU) quimioterapia adjuvante baseada. Definimos "resistência 5FU", como câncer gástrico que recorreram após a quimioterapia adjuvante. Como um protocolo padrão, administramos à base de 5-FU quimioterapia adjuvante para pacientes com estágio II ou III do câncer. Foram excluídos os pacientes que não foram capazes de continuar a quimioterapia adjuvante, devido aos efeitos colaterais. Como resultado, 72 pacientes foram incluídos nesta análise.
Análise estatística
análise estatística de diferenças entre os grupos foi realizada através do χ
2, teste exato de Fisher e Mann-Whitney U
teste. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para a análise de sobrevivência, e as diferenças na sobrevivência foram estimadas usando o teste log-rank. fatores prognósticos foram examinadas por análises uni e multivariada (Cox riscos proporcionais do modelo de regressão). Um valor p <
; 0,05 foi considerado como indicativo de significância estatística. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o StatFlex versão 6.0 for Windows (StatFlex versão 6.0; Artec Inc., Osaka, Japão).
Resultados
expressão Nrf2 em linhas de células de carcinoma gástrico
A expressão de Nrf2 no ​​nuclear e fracções citoplasmáticos de linhas celulares de carcinoma gástrico foi analisada por Western blotting. Nrf2 foi expresso principalmente no núcleo de todas as linhas celulares de cancro gástrico e pouca expressão foi observada no citoplasma (Figura 1). Figura 1 fator Nuclear (eritróide-2) relacionados com o fator 2 expressão (Nrf2) em linhas de células de carcinoma gástrico. a expressão da proteína Nrf2 em extractos nucleares e citoplasmáticos das linhas de células gástricas MKN74, MNK45, KATO-III, e NUGC4 foi analisada por Western blotting. A membrana foi re-sondado com anticorpos anti-Lamin B1 e anti-α-tubulina que foram utilizados como controlos positivos para o núcleo e do citoplasma, respectivamente. frações nuclear e citoplasmática foram claramente separados. A proteína foi identificada Nrf2 principalmente no núcleo de todas as linhas celulares de cancro gástrico. Pouco Nrf2 foi detectada no citoplasma.
Expressão imuno-histoquímica Nrf2 no ​​câncer gástrico e sua associação com características clinicopatológicas
Nós próxima determinaram a expressão e localização subcelular de Nrf2 em 175 arquivo tecidos com cancro gástrico embebidos em parafina, utilizando imuno-histoquímica. As características clinicopatológicas dos pacientes são mostradas na Tabela 1. Nrf2 imunorreactividade foi detectada principalmente no núcleo (Figura 2). Outra avaliação de imuno Nrf2 nuclear indicou que o padrão imunorreativo Nrf2 diferiu entre as células cancerosas gástricas diferenciadas e células cancerosas gástricas indiferenciados nas mesmas amostras. Assim, as células gástricas cancerosas indiferenciadas foram mais propensos a exibir imunoreactividade Nrf2 positiva em comparação com células de cancro gástrico diferenciadas. Dos 175 pacientes, 108 (61,7%) apresentaram uma pontuação imunohistoquímica Nrf2 superior a 100 e foram classificados como Nrf2 positivo. Os 67 (38,3%) pacientes restantes foram classificados como o grupo negativo Nrf2. A Tabela 2 mostra a correlação entre a expressão de Nrf2 e características clínico-patológicas. expressão positiva Nrf2 foi significativamente associada com o sexo, tamanho do tumor, a profundidade do tumor, metástases em linfonodos, invasão linfática, classificação histológica e estágio clínico da cancer.Table gástrica 1 Características dos pacientes
No.
género
Masculino
116
Feminino
59
idade
média
66
Faixa
31-84
Operação
99
total gastrectomia
distal
56
proximal
14
parcial
6
Stage
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Histologia
Diferenciada
71
indiferenciado
104
Stage foi avaliada de acordo com a 7ª edição do tumor nó de classificação de metástase.
Figura 2 imunocoloração do fator nuclear (eritróide-2) fator -relacionados 2 (Nrf2) em amostras de câncer gástrico clínicos. imunocoloração representante da Nrf2 no ​​(a) O controlo positivo, tecido placentário não canceroso; (B) tecido do estômago normal; (c - e) tecidos de câncer gástrico; (C) Coloração negativa de Nrf2, (d) coloração fraca (1) de Nrf2, (e) coloração forte (2) de Nrf2 (ampliação original, 400x). Expressão de Nrf2 em amostras clínicas. Imunocoramento Nrf2 (ampliação original, × 400)
Tabela 2 Correlação entre a expressão do fator nuclear fator (eritróide-2) relacionados com 2 (Nrf2) e fatores clínico-patológicos
fatores clínicos
expressão de Nrf2
P- valor
negativo
positiva
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
Idade
ns Art < 65
22
47
≧ 65
45
61
Sexo Art < 0,05
masculino
51
65
feminino
16
43
tamanho do tumor Art < 0,01 Art < 5 cm
36
27
≧ 5 centímetros
profundidade 31
81
Tumor Art < 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
metástases linfonodais Art < 0,05
Sim
35
74
Sem
32
34
Stage Restaurant < 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
linfovascular invasão Art < 0,05
Sim
49
90
Sem
18
14
Histologia Art < 0,01
Diferenciada
37
34
indiferenciado
30
74
expressão imuno-histoquímica Nrf2 no ​​câncer gástrico e sua associação com a resistência 5FU
Tabela 3 mostra a correlação entre expressão Nrf2 e resistência 5FU nas 72 pacientes que foram tratados com quimioterapia adjuvante com 5-FU. Destes 72 pacientes, 59 foram Nfr2 positivo e 13 foram Nfr2 negativo. Dos 59 pacientes positivos Nfr2, 43 (72,9%) pacientes eram resistentes 5FU, enquanto apenas 5 (38,5%) dos 13 pacientes negativas Nrf2 eram resistentes 5FU. A diferença entre a percentagem de pacientes positivos e negativos Nrf2 Nrf2 no ​​grupo de resistência 5FU foi estatisticamente significativa (p = 0,024) .table 3 correlação entre a expressão do factor nuclear (eritróide-2) factor de 2 relacionados com (Nrf2) e 5-Fluorouracil (5-FU) chemosensitivity
sensibilidade 5FU
expressão de Nrf2
P- valor
negativo
positiva
resistente
5
43
0,024
Sensitive
8
16
análise de sobrevida
análise de Kaplan Meier indicou que a sobrevida global do grupo positiva Nrf2 foi significativamente mais pobres do que que o grupo de Nrf2 negativo (61% vs 79%, respectivamente) (P < 0,01) (Figura 3). Figura 3 resultados pós-operatórios de 175 pacientes com câncer gástrico, de acordo com factor nuclear (eritróide-2) fator -relacionados 2 expressão (Nrf2). A análise de Kaplan Meier dos resultados pós-operatórios de 175 pacientes com câncer gástrico de acordo com a expressão de Nrf2. As curvas de sobrevida foram construídas para os 175 pacientes que foram divididos em grupos Nrf2-positivos e Nrf2-negativos. O grupo Nrf2-positivos tiveram um resultado significativamente pior do que o grupo Nrf2-negativo (p < 0,01).
Além disso, a profundidade do tumor, tamanho do tumor, metástases em linfonodos, classificação histológica, invasão linfática também foram fatores importantes para a sobrevivência com base na análise univariada (Tabela 4) .table 4 univariada e multivariada de fatores prognósticos em câncer gástrico
fatores clínicos
univariada
multivariada
p

multivariada P
Hazard relação
intervalo de confiança de 95%

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11,44
Tumor tamanho Art < 0,01
0,35
1,58
0,61 - 4,09
envolvimento ganglionar Art < 0,01
0,03
5,02
1,18 - 21,41
linfovascular invasão Art < 0,05
0,27
0,35
0,05-2,26
Histologia Art < 0,05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2 Art < 0,05
0,40
1,37
0,66-2,87
Nrf2, factor nuclear (eritróide-2) fator -relacionados 2.
também realizamos análise multivariada desses seis fatores, incluindo Nrf2 como um marcador de prognóstico independente. metástases linfáticas foi escolhida como marcador prognóstico independente. Contudo, a expressão não foi seleccionado Nrf2 (Tabela 4).

Discussão O antioxidante Nrf2, que funciona para proteger as células normais a partir de numerosas condições oxidantes nocivos, foi considerado um dos principais mecanismos de defesa celular. No entanto, muitos trabalhos têm indicado a sobre-expressão de Nrf2 e os seus genes a jusante em muitos tipos de cancro humano [19-25]. Estes relatórios demonstraram que Nrf2 não só protege as células normais de se transformar em células cancerosas, mas também podem facilitar a proliferação das células cancerosas e prolongar a sobrevivência [18]. O presente relatório é o primeiro estudo a demonstrar uma associação entre o nível de expressão de Nrf2 no ​​núcleo das células cancerosas gástricas e achados clínico-patológicos.
No estudo atual, Nrf2 imunorreatividade foi detectada predominantemente no núcleo, não apenas in vivo, mas também in vitro em uma série de linhas celulares de cancro gástrico. Tem sido especulado que a expressão nuclear de Nrf2 persistente em linhas celulares de cancro gástrico resulta na produção de antioxidantes, que conferem a estas linhas celulares de cancro uma elevada capacidade de resistir espécies reactivas de oxigénio (ROS). Um fenômeno semelhante foi relatado por Ma et al. de tecido de cancro do colo do útero Eles relataram que upstaging de cancro do colo do útero, não só conduz a uma maior concentração de Nrf2 no ​​núcleo das células cancerosas, mas também a uma maior concentração de proteínas de resposta antioxidante a jusante [22]. Pode, portanto, ser teoricamente propôs que as linhas celulares de cancro gástrico com expressão Nrf2 nuclear teria um maior potencial de malignização por meio desse mecanismo.
Nós imunohistoquímica identificaram uma elevada taxa de expressão Nrf2 no ​​câncer gástrico espécimes clínicos (Tabela 2). Assim, 61,7% dos espécimes foram Nrf2 positiva, que foi mais elevada do que a percentagem de espécimes positivos relatado em carcinoma do pulmão de células não pequenas (26%) [21] ou no cancro da vesícula biliar (23%) [23].
Além disso, houve correlações significativas entre a expressão Nrf2 e vários fatores clínico-patológicos, tais como o tamanho do tumor, a profundidade do tumor, invasão linfática, metástases em linfonodos e histologia do tumor. Nossos resultados estão de acordo com aqueles de Wang et al. que relataram que a expressão de Nrf2 em câncer de vesícula biliar foi significativamente associada com a diferenciação, palco, e de metástases linfáticas, [23].
recentemente Xiu-Freg Hu et al. investigado semelhante expressão Nrf2 no ​​câncer gástrico [26]. Eles também sugeriram um significado prognóstico da expressão Nrf2 de acordo com os nossos resultados. No entanto, eles relataram que Nrf2 imunorreactividade foi detectada no citoplasma, mas que não foi detectado no núcleo. Este resultado diferente pode ser devido ao facto de que se usaram anticorpos diferentes daqueles usados ​​no presente estudo. Tem sido bem documentado que Nrf2 exerce a sua capacidade antioxidante apenas quando se transloca para o núcleo a partir do citoplasma [27]. A nossa análise de imunotransferência mostrou que Nrf2 era predominantemente presente no núcleo das células de linhas celulares de cancro gástrico. Por isso, considerado que a sobre-expressão persistente de Nrf2 no ​​núcleo de células de cancro gástrico provável trabalhou como um antioxidante que protegeu as células do cancro gástrico de ROS, e que a expressão nuclear de Nrf2 podem reflectir o comportamento agressivo de cancro gástrico. Com base nessa teoria, considerou-se essencial avaliar nuclear, mas não a expressão citoplasmática de Nrf2 em espécimes clínicos de câncer gástrico.
Neste estudo, nós mostramos o valor prognóstico da expressão Nrf2 por análise univariada. Embora Nrf2 positividade não foi selecionada como um marcador de prognóstico independente por meio de análise multivariada, este achado pode ser explicado pela possibilidade de que Nrf2 positividade foi significativamente afetada pelo envolvimento nodal que foi considerado como fator prognóstico pobre. Solis et ai. e Wang et al. Do mesmo modo relatado que a expressão do Nrf2 foi associada com a sobrevivência global pobre em carcinoma de células não-pequenas do pulmão de células [21] e no cancro da vesícula biliar [23], respectivamente. Estes dados sugerem que a expressão do Nrf2 pode ser utilizado como um parâmetro de prognóstico significativo para a predição da sobrevivência de doentes com cancro gástrico pós-operatórias.
Foi recentemente relatado que a expressão elevada do Nrf2 podem facilitar e prolongar a sobrevivência de células de cancro na sequência de quimioterapia anticancro e terapia de radiação [14,16,19-22,28-33]. Nossos resultados também mostraram que a expressão Nrf2 positiva foi significativamente associada com a resistência à quimioterapia adjuvante à base de 5-FU. Estes resultados combinados podem implicar que, através da avaliação do nível de expressão de Nrf2 no ​​núcleo de células de cancro gástrico, que poderia ser possível prever os melhores candidatos que podem beneficiar de receber não só a quimioterapia adjuvante, mas também a quimioterapia neoadjuvante.
Genética ou a inibição funcional de Nrf2 foi mostrado para provocar a repressão de enzimas antioxidantes Nrf2 -regulated celulares, incluindo a glutationa celular, tioredoxina e tióis não proteicos. Em última análise, estas alterações podem restaurar a sensibilidade das células cancerosas à droga anticancerígenos e terapia de radiação. Assim, Cho et al. relataram que a inibição funcional de Nrf2 leva a sensibilização de células de cancro a agentes anticancerígenos alquilantes [31]. Além disso, Ma et al. relataram que a combinação de cisplatina e knockdown de Nrf2 dramaticamente e o crescimento do tumor significativamente inibida in vivo [22].
Tomando estas evidências em consideração, é muito provável que um novo protocolo quimioterapêutico que envolve a regulação do Nrf2 será introduzido no próximo futuro. Por exemplo, a eficácia da quimioterapia pode ser previsto pela primeira vez por meio da avaliação da expressão do Nrf2 e, se for o caso de pacientes positivos Nrf2 são considerados como sendo resistentes à quimioterapia, em seguida, pode ser possível de atingir eficácia suficiente de quimioterapia pela inibição concomitante de Nrf2. Portanto, um novo protocolo quimioterápico que inclui terapia antioxidante pode ser um método útil para resolver um problema clínico.
Conclusões
expressão Nrf2 está associada aos fatores de clínicas e o prognóstico dos pacientes com câncer gástrico. Nrf2 expressão em cancro gástrico podem ser úteis para a avaliação do potencial maligno biológico, que pode ser mediado em parte por Nrf2 melhoria da capacidade antioxidante de células de cancro gástrico. terapia antioxidante pode ser uma abordagem promissora para o tratamento de pacientes com câncer gástrico positivos Nrf2
abreviações
Nrf2:.
relacionadas com a NF-E2 fator 2
OS:
estresse oxidativo
Keap 1:
Kelch-como proteína associada a ECH 1
são:
elemento de resposta antioxidante
FBS:
soro fetal bovino
PBS:
Tampão fosfato

TBS:
solução tampão salina Tris
TBST:
TBS-Tween 20
5-FU:
5-fluorouracil
ROS:
espécies reativas de oxigênio
Declarações
Agradecimentos
declaramos que cada autor não recebeu nenhuma Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

• Linfangiogênese no câncer gástrico regulada através de Akt /mTOR-VEGF C-eixo /VEGF-D
• Determinantes do câncer gástrico triagem atendimento na Coréia: uma análise multi-nível