importanza clinicopatologica del fattore nucleare (eritroide-2) -related fattore 2 (Nrf2) espressione in cancro gastrico

Clinicopatologica importanza del fattore nucleare (eritroide-2) Fattore -related 2 (Nrf2) espressione nel carcinoma gastrico
Abstract
sfondo
Il fattore nucleare fattore di trascrizione (eritroide-2) Fattore -related 2 (Nrf2) è stato originariamente identificato come un regolatore critico della intracellulari anti-ossidanti e di enzimi di fase II di disintossicazione attraverso la sua trascrizionale up-regolazione di molti elementi risposta anti-ossidante (ARE) geni -contenenti. Nrf2 protegge non solo le cellule normali, ma anche le cellule tumorali di stress cellulare, e migliora la sopravvivenza delle cellule tumorali. Alcuni studi hanno dimostrato che l'espressione Nrf2 nei pazienti con cancro ha un significato clinico. Tuttavia, non vi è stata alcuna analisi completa del livello di espressione nucleare di Nrf2 nelle cellule tumorali gastrointestinali. In questo studio abbiamo voluto valutare immunoistochimica l'espressione di Nrf2, e di valutare il suo significato clinico nel carcinoma gastrico.
Metodi
Un totale di 175 pazienti affetti da cancro gastrico che hanno ricevuto R0 gastrectomia con standard di dissezione dei linfonodi sono stati arruolati. Abbiamo valutato immunohistochemically espressione Nrf2 nei campioni inclusi in paraffina resezione chirurgica di questi 175 pazienti. differenze tra i gruppi sono stati analizzati utilizzando il test di 2 χ
, test esatto di Fisher, e il Mann-Whitney U
test. Le associazioni tra espressione Nrf2 e le caratteristiche clinico-patologici, tra cui l'esito clinico, sono stati valutati utilizzando univariata e multivariata analisi, e le curve di Kaplan-Meier con il log-rank test, rispettivamente,
. Risultati
Nrf2 immunoreattività era prevalentemente identificato nel nucleo di cellule di cancro gastrico. Nrf2 positività è stata strettamente associata con le dimensioni del tumore, la profondità del tumore, metastasi linfonodali, l'invasione linfovascolare, istologia e fase (p < 0.05 per tutti). Un test log-rank indicato che la sopravvivenza del gruppo Nrf2-positivo era significativamente più scadente di quella del gruppo Nrf2-negativi (p < 0.01). E, espressione Nrf2 positivo era significativamente associato con la resistenza alla chemioterapia adiuvante a base di 5FU (p = 0,024).
Conclusioni
espressione Nrf2 era positivamente associato con un comportamento aggressivo del tumore nel cancro gastrico. Questo risultato suggerisce che l'espressione Nrf2 nel cancro gastrico è un potenziale indicatore di prognosi peggiore.
Parole
NF-E2 legate fattore 2 antiossidanti cancro gastrico Sfondo
cancro gastrico è la quarta più comune di cancro gastrointestinale e il cancro gastrointestinale fatale secondo più comune nel mondo. paesi dell'Asia orientale, tra cui il Giappone sono tra le aree più a rischio per il cancro gastrico [1,2]. In Giappone, la creazione di uno screening di massa utilizzando fluoroscopia foto o fibroscopia gastrointestinale ha portato al cancro gastrico viene diagnosticato nelle fasi iniziali. Una prognosi favorevole è previsto per questi pazienti affetti da cancro gastrico dopo un intervento chirurgico curativo o trattamento endoscopico. Tuttavia, alcuni pazienti mostrano un corso sfavorevole pur avendo ricevuto una resezione curativa. L'esito post-operatorio di cancro gastrico dipende fortemente da fattori TNM [3,4]. In aggiunta a questi fattori clinicopatologici critici, la prognosi del carcinoma gastrico è influenzato da diverse variabili biologiche. In questo contesto, è necessario trovare fattori correlati al cancro nuovi che possono essere utilizzate come marcatori per la diagnosi e il trattamento del cancro gastrico. E 'generalmente accettato che lo stress ossidativo (OS) è coinvolto nella fisiopatologia di malattie degenerative. Inoltre, sono noti anche la generazione e l'aumento di OS e danno ossidativo del DNA secondario essere correlato al danno e trasformazione maligna della mucosa gastrica [5]. Così, OS è stato considerato a svolgere ruoli importanti nella carcinogenesi del cancro gastrico [5,6].
Il fattore nucleare fattore di trascrizione (eritroide-2) Fattore -related 2 (Nrf2), che è una base redox-sensibili fattore di trascrizione bZIP, è stato originariamente identificato come regolatore fondamentale di antiossidanti intracellulari e di enzimi di fase II di disintossicazione attraverso la sovraregolazione trascrizionale di molti elementi di risposta antiossidante (ARE) geni contenenti, [7-9]. In condizioni basali, Nrf2 è legato alla ECH-proteina associata kelch-simile 1 (Keap1), un adattatore E3 ubiquitina ligasi cul3-based che regola Nrf2 ubiquitinazione e proteasoma-dipendente di degradazione [10].
Dopo l'esposizione delle cellule a lo stress ossidativo o composti chemiopreventivi, Nrf2 trasloca al nucleo, forma un eterodimero con il suo partner obbligatoria Maf, si lega alle sequenze sono nel DNA e attiva la trascrizione dei geni a valle, come gli antiossidanti e gli enzimi di fase II di disintossicazione [8,11-13] . L'importante ruolo biologico di Nrf2 è sottolineata dai risultati che dimostrano la protezione Nrf2-dipendente nei confronti di molte malattie umane o stati patologici come il cancro, le malattie neurodegenerative, malattie cardiovascolari, infiammazioni, fibrosi polmonare, lesioni polmonari acute e Nrf2 rallenta anche il processo di invecchiamento [14 -18]. Così Nrf2 è stato considerato come un "buono" fattore di trascrizione che è essenziale per la protezione contro lo stress ossidativo [19]. Tuttavia, emergono dati ha rivelato il lato oscuro della Nrf2 [20]. È stato recentemente dimostrato che l'attivazione aberrante del pathway Nrf2 si verifica frequentemente in cellule tumorali e tessuti tumorali. Nrf2 protegge non solo le cellule normali da trasformare in cellule tumorali, ma protegge anche le cellule tumorali di stress cellulare, aumenta la sopravvivenza delle cellule tumorali ed è associata con la crescita del cancro e nella progressione [18]. Dal momento che queste rivelazioni, non c'è stata un'analisi globale del livello di espressione di Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico, e non ci sono stati studi volti a chiarire la relazione tra il livello di espressione di Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico e clinica risultato. In questo studio, abbiamo effettuato il primo esame del livello di espressione di Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico e discutere ulteriormente il significato clinico di espressione Nrf2 rispetto al anti- stress ossidativo.
Metodi
Rilevamento di espressione Nrf2 in linee cellulari di cancro gastrico mediante analisi Western blot
le linee di cellule di carcinoma gastrico MKN74, MNK45, Kato-III e NUGC4 sono stati acquistati dalla giapponese fisiche e chimiche Institute, Tokyo, Giappone. Le cellule sono state incubate in RPMI 1640 con siero 10% bovino fetale (FBS), 100 unità /ml di penicillina, e 100 ug /ml di streptomicina a 37 ° C in un incubatore cella. Tutte le cellule sono state raccolte per centrifugazione, sciacquati con tampone fosfato salino (PBS) e proteine ​​totali è stato estratto in tampone di lisi. estratti nucleari e citoplasmatici frazioni di Western blotting di Nrf2 sono stati preparati utilizzando un kit Nucleare /Cytosol frazionamento (K266-25, BioVison, California, USA). Analisi Western blot dell'espressione Nrf2 in linee cellulari di cancro gastrico è stata eseguita come segue. proteina denaturata estratta dal nucleo o nel citoplasma è stato separato su un gel SDS-poliacrilammide e trasferiti Hybond membrana, che è stato poi bloccato durante la notte in 5% latte scremato in soluzione salina tamponata con Tris (TBS). La membrana è stata poi incubata con l'anticorpo monoclonale di topo contro Nrf2 (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) in 1: 500 diluizione per una notte. La membrana è stata risciacquata con TBS-Tween 20 (TBST) e incubato con anti-IgG di topo coniugato con perossidasi di rafano (HAF007, RD Syestems, Minneapolis, USA) per 15 minuti. Le bande immunoreattive sono state visualizzate su pellicola a raggi X (Fuji, Giappone) utilizzando reagenti di rilevazione ECL-Plus (RPN2132, GE Healthcare, Buckinghamshire, Inghilterra). Successivamente, per confermare le frazioni nucleari e citoplasmatici, la membrana è stata lavata con WB Spogliarello Solution (Nakalai Tesque, Tokyo, Giappone) per 15 minuti e ri-sondato per i marcatori nucleari e citoplasmatici utilizzando l'anticorpo B1 anti-Lamin (ab16048, Abcam, Cambridge , USA, 1: 1000) e l'anticorpo anti-α-tubulina (CP06, Calbiochem, MA, USA, 1:. 1000), rispettivamente
pazienti e campioni
Questo studio ha incluso 175 pazienti con adenocarcinoma gastrico che avevano invaso in strato di sottomucosa o più in profondità. Tutti i pazienti sono stati sottoposti a gastrectomia curativa con dissezione linfonodale a Kagoshima University Hospital dal gennaio 1995 al dicembre 2004. Tra 175 pazienti, 57, 14, 99, e 5 pazienti hanno ricevuto distale, prossimale, gastrectomia totale e parziale, rispettivamente. Il rapporto maschi-femmine era di 116 a 59, e l'età media era di 66 anni, che vanno da 31 a 84 anni. Il numero di pazienti con stadio I, II e III tumori gastrici era 47, 33 e 95, rispettivamente. Istopatologico, 71 casi sono stati differenziati (papillari, ben differenziato e moderatamente differenziato adenocarcinoma tubolare) e 104 sono stati indifferenziati (adenocarcinoma scarsamente differenziato, adenocarcinoma mucinoso e carcinoma a cellule ad anello con castone) carcinomi secondo il 7 edizione del nodo di tumore metastasi classificazione. Nessuno di questi pazienti ha ricevuto la chemioterapia prima dell'intervento chirurgico. Consenso informato scritto è stato ottenuto dai pazienti e lo studio è stato approvato dal Comitato Etico di Kagoshima University Hospital (numero di registrazione 35-24). Questa indagine conforme ai principi delineati nella Dichiarazione di Helsinki. risultati clinicopatologici sono descritte in base al 7 edizione del tumore classificazione metastasi linfonodali.
analisi immunoistochimica di Nrf2 nel carcinoma gastrico e la sua valutazione
campioni tumorali sono stati fissati con il 10% di formaldeide in PBS, inclusi in paraffina, sezionato in sezioni spesse 4 micron e montati su vetrini per l'analisi immunoistochimica. Le sezioni sono state deparaffinised in xilene e disidratato in una serie di etanolo graduata. L'attività perossidasica endogena dei provini è stata bloccata immergendo i vetrini in una soluzione di idrogeno perossidasi-metanolo al 3% per 10 min a temperatura ambiente. Dopo aver lavato tre volte con PBS (5 min per lavaggio), le sezioni sono state trattate con 1% di sieroalbumina bovina per 30 minuti a temperatura ambiente per bloccare reazioni aspecifiche. Per colorazione con anticorpi anti-Nrf2, sezioni sono state pretrattate con tampone citrato per 10 min a 121 ° C in un forno a microonde per recuperare antigenicità. Le sezioni sono state lavate tre volte con PBS per 5 minuti ogni volta, e sono stati poi bloccati mediante trattamento con PBS contenente il 3% di latte scremato per 10 min a temperatura ambiente. Le sezioni bloccate sono state incubate con l'anticorpo anti-Nrf2 primario diluito (sc-365.949, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1: 200,) in PBS a 4 ° C durante la notte, seguito da colorazione con un kit streptavidina-biotina-perossidasi ( Nichirei, Tokyo, Giappone). Le sezioni sono state lavate tre volte in PBS per 5 minuti per lavaggio, e il complesso immunitario è stato visualizzato incubando le sezioni con diaminobenzidina tetra cloridrato. Le sezioni sono state risciacquate brevemente in acqua, di contrasto con ematossilina e montate. tessuto placentare non tumorali è stato utilizzato come controllo positivo per Nrf2. espressione Nrf2 è stato determinato contando il numero di cellule tumorali in cui il nucleo era macchiato con l'anticorpo anti-Nrf2. Tutte le diapositive immunostained sono stati valutati da due osservatori indipendenti (YK e SI), che erano a conoscenza dei dati clinici e esito della malattia. Per valutare l'espressione Nrf2, 10 campi rappresentativi all'interno del tumore sono stati selezionati, e l'espressione in un totale di 1000 cellule tumorali (100 cellule per campo) è stata valutata utilizzando ad alta potenza (× 400) microscopia. In caso di coesistenza della superficie differenziato e indifferenziato stessa sezione, abbiamo valutato il livello di espressione del Nrf2 nell'area indifferenziata, anche se l'area di indifferenziata è più piccola dell'area differenziata. L'indice medio di etichettatura di Nrf2 è stata valutata in base alla percentuale di cellule positive in ogni campo. Espressione dei Nrf2 è stata valutata sulla base sia la percentuale di cellule positive e l'intensità della colorazione. L'intensità della colorazione Nrf2 è stato quantificato con un punteggio di intensità tre valori (0, 1+ o 2+). Il grado di reattività è stata valutata secondo Solis et al. [21] ed è stata espressa come percentuale (0-100%). punteggi immunoistochimici, che variavano da 0 a 200, sono stati calcolati moltiplicando i valori di intensità e la misura della reattività. Questi punteggi sono stati usati per determinare i livelli di espressione Nrf2. Dal momento che il punteggio mediano di espressione Nrf2 nel carcinoma gastrico era di 110 nel presente studio, un valore di cut-off di 100 è stato deciso
. Associazione tra il livello di espressione di Nrf2 nel carcinoma gastrico e chemioresistenza
Per valutare se la livello di espressione di Nrf2 nel carcinoma gastrico colpisce chemioresistenza, abbiamo confrontato il livello di espressione di Nrf2 in pazienti affetti da cancro gastrico che hanno ricevuto 5-fluorouracile (5-FU) chemioterapia adiuvante a base. Abbiamo definito "resistenza 5FU" come cancro gastrico che recidiva dopo chemioterapia adiuvante. Come un protocollo standard, amministriamo 5FU a base di chemioterapia adiuvante per i pazienti con stadio II o III cancro. Abbiamo escluso i pazienti che non erano in grado di continuare a chemioterapia adiuvante causa di effetti collaterali. Come risultato, 72 pazienti sono stati arruolati in questa analisi.
Analisi statistica
L'analisi statistica delle differenze di gruppo è stata effettuata utilizzando il χ
2 prova, il test esatto di Fisher e il Mann-Whitney U
test. Il metodo di Kaplan-Meier è stato utilizzato per l'analisi di sopravvivenza, e le differenze in termini di sopravvivenza sono stati stimati utilizzando il test log-rank. I fattori prognostici sono stati esaminati da analisi univariata e multivariata (rischi proporzionali di Cox modello di regressione). Un valore di <p
; 0,05 è stato considerato per indicare la significatività statistica. Tutte le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando la versione StatFlex 6.0 for Windows (StatFlex versione 6.0; Artec Inc., Osaka, Giappone).
Risultati
espressione Nrf2 in linee cellulari di carcinoma gastrico
L'espressione di Nrf2 nel nucleare e frazioni citoplasmatici di linee cellulari di carcinoma gastrico è stato analizzato mediante Western blotting. Nrf2 è stato espresso principalmente nel nucleo di tutte le linee di cellule di cancro gastrico e poco espressione è stata osservata nel citoplasma (Figura 1). Figura 1 Fattore Nucleare (eritroide-2) -related fattore 2 (Nrf2) espressione in linee cellulari di carcinoma gastrico. espressione della proteina Nrf2 in estratti nucleari e citoplasmatici delle linee di cellule gastriche MKN74, MNK45, KATO-III, e NUGC4 è stato analizzato mediante Western blotting. La macchia è stato nuovamente sondato con anticorpi anti-Lamin B1 e anti-α tubulina che sono stati utilizzati come controlli positivi per il nucleo e il citoplasma, rispettivamente. frazioni nucleari e citoplasmatici sono stati nettamente separati. La proteina Nrf2 è stato identificato principalmente nel nucleo di tutte le linee di cellule di cancro gastrico. Poco Nrf2 è stato rilevato nel citoplasma.
Nrf2 espressione immunoistochimica di cancro gastrico e la sua associazione con le caratteristiche clinico-patologici
Abbiamo poi determinato l'espressione e la localizzazione subcellulare di Nrf2 in 175 tessuti di cancro gastrico archivio inclusi in paraffina, con immunoistochimica. Le caratteristiche clinicopatologici dei pazienti sono mostrate nella Tabella 1. Nrf2 immunoreattività è stata rilevata principalmente nel nucleo (Figura 2). Ulteriori valutazioni del nucleare immunoreattività Nrf2 ha indicato che il modello immunoreattiva Nrf2 differiva tra le cellule di cancro gastrico differenziate e cellule di cancro gastrico indifferenziate nelle stesse campione. Così, indifferenziate cellule di cancro gastrico sono stati più probabile per visualizzare positivo immunoreattività Nrf2 rispetto alle cellule di cancro gastrico differenziate. Dei 175 pazienti, 108 (61,7%) appare un punteggio Nrf2 immunoistochimica maggiore di 100 e sono stati classificati come Nrf2 positivo. I rimanenti 67 (38,3%) pazienti sono stati classificati come il gruppo negativo Nrf2. La tabella 2 mostra la correlazione tra l'espressione Nrf2 e le caratteristiche clinico-patologici. Nrf2 espressione positiva era significativamente associato con il sesso, dimensioni del tumore, la profondità del tumore, metastasi linfonodali, l'invasione linfovascolare, la classificazione istologica e stadio clinico di cancer.Table gastrica 1 Le caratteristiche dei pazienti
No.
di genere
Maschio
116
femminile
59
Età
Significa
66
Gamma
31-84
Operazione
99
totale gastrectomia distale

56
prossimale
14
parziale 6
fase
IA, IB
47
IIA, IIB
33
IIIA, IIIB, IIIC
95
Istologia
differenziata
71
indifferenziato
104
fase è stata valutata in base alla 7 ° edizione del tumore nodo classificazione metastasi.
Figura 2 immunocolorazione del fattore nucleare (eritroide-2) fattore -related 2 (Nrf2) in cliniche campioni di cancro gastrico. immunocolorazione Rappresentante di Nrf2 in (a) Controllo positivo, tessuto placentare non cancerosa; (B) normale tessuto dello stomaco; (c - e) i tessuti tumorali gastrico; (C) colorazione negativa di Nrf2, (d) colorazione debole (+1) di Nrf2, (e) una forte colorazione (+2) di Nrf2 (ingrandimento originale, × 400). Espressione dei Nrf2 in campioni clinici. Immunocolorazione di Nrf2 (ingrandimento originale, × 400)
Tabella 2 Correlazione tra l'espressione del fattore nucleare fattore (eritroide-2) -related 2 (Nrf2) e fattori clinico-patologici
fattori clinici
Espressione di Nrf2
P- valore
negativo
positivo
n = 67 (38,3%)
n = 108 (61,7%)
Età
ns
< 65
22
47
≧ 65
45
61
genere
< 0.05
maschio
51
65
femminile
16
43
Le dimensioni del tumore
< 0,01
< 5 cm
36
27
≧ 5 centimetri
31
81
Tumore profondità
< 0,01
T1a, T1b, T2
31
19
T3, T4a, T4b
36
89
linfonodali metastasi
< 0.05
Sì
35
74
No
32
34
fase
< 0,01
IA, IB
28
19
IIA, IIB
12
21
IIIA, IIIB, IIIC
27
68
linfovascolare invasione
< 0.05
Sì
49
90
No
18
14
Istologia
< 0,01
differenziata
37
34
indifferenziato
30
74
Nrf2 espressione immunoistochimica di cancro gastrico e la sua associazione con la resistenza 5FU
la tabella 3 mostra la correlazione tra espressione Nrf2 e resistenza 5FU nei 72 pazienti che sono stati trattati con chemioterapia adiuvante a base di 5FU. Di questi 72 pazienti, 59 erano Nfr2 positivi e 13 erano Nfr2 negativo. Dei 59 pazienti positivi Nfr2, 43 (72,9%) pazienti erano resistenti 5-FU, mentre solo 5 (38,5%) dei 13 pazienti negativi Nrf2 erano resistenti 5-FU. La differenza tra la percentuale di Nrf2 pazienti negativi positivi e Nrf2 nel gruppo di resistenza 5FU era statisticamente significativa (p = 0,024) .table 3 Correlazione tra l'espressione del fattore nucleare (eritroide-2) -related fattore 2 (Nrf2) e 5-fluorouracile (5-FU) chemiosensibilità
sensibilità 5FU
Espressione di Nrf2
P- valore
negativo positivo

resistente
5
43
0.024
sensibile
8
16
l'analisi di sopravvivenza
analisi di Kaplan Meier ha indicato che la sopravvivenza globale del gruppo positivo Nrf2 era significativamente più poveri di quello del gruppo Nrf2 negativo (61% vs. 79%, rispettivamente) (p < 0.01) (Figura 3). Figura 3 esiti postoperatori di 175 pazienti affetti da cancro gastrico in base al fattore nucleare (eritroide-2) Fattore -related 2 (Nrf2) espressione. analisi di Kaplan Meier degli esiti postoperatori di 175 pazienti affetti da cancro gastrico secondo l'espressione Nrf2. Le curve di sopravvivenza sono state costruite per i 175 pazienti che sono stati divisi in gruppi Nrf2-positivi e Nrf2-negativi. Il gruppo Nrf2-positivo ha avuto un esito significativamente peggiore rispetto al gruppo di Nrf2-negativi (p < 0,01).
Inoltre, la profondità del tumore, le dimensioni del tumore, metastasi linfonodali, la classificazione istologica, invasione linfovascolare sono stati anche fattori significativi per la sopravvivenza sulla base di analisi univariata (Tabella 4) .table 4 univariata e multivariata analisi dei fattori prognostici nel carcinoma gastrico
fattori clinici
univariata
multivariata
p

multivariata P
hazard ratio
95% intervallo di confidenza

Age
0.42
-
-
-
Gender
0.50
-
-
-
Depth
<0.01
0.25
2.44
0.52 - 11.44
Tumore dimensioni
< 0,01
0.35
1.58
0,61-4,09
coinvolgimento linfonodale
< 0,01
0,03
5.02
1.18 - 21.41
linfovascolare invasione
< 0.05
0,27
0.35
0,05-2,26
Istologia
< 0.05
0,17
1.1.62
0,81-3,24
Nrf2
< 0.05
0,40
1.37
0,66-2,87
Nrf2, fattore nucleare 2.
Abbiamo eseguito anche (eritroide-2) fattore -related analisi multivariata di questi sei fattori, tra cui Nrf2 come un marcatore prognostico indipendente. Metastasi linfonodali è stato selezionato come marcatore prognostico indipendente. Tuttavia, l'espressione Nrf2 non è stato selezionato (Tabella 4)
. Discussione
L'antiossidante Nrf2, che funziona per proteggere le cellule normali da numerose condizioni ossidative che danneggiano, è stato considerato come un importante meccanismo di difesa cellulare. Tuttavia, molti giornali hanno indicato la sovraespressione di Nrf2 e dei suoi geni a valle in molti tipi di cancro umano [19-25]. Questi rapporti hanno mostrato che Nrf2 non solo protegge le cellule normali da trasformare in cellule tumorali, ma può anche facilitare la proliferazione delle cellule tumorali e prolungare la sopravvivenza [18]. La presente relazione è il primo rapporto a mostrare un'associazione tra il livello di espressione di Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico e risultati clinico-patologici.
Nel corso di studio, Nrf2 immunoreattività è stato rilevato prevalentemente nel nucleo, non solo in vivo, ma anche in vitro in un certo numero di linee di cellule di cancro gastrico. Si è ipotizzato che l'espressione nucleare persistente Nrf2 in gastriche linee di cellule di cancro risultati nella produzione di antiossidanti, che conferiscono queste linee cellulari tumorali di elevata capacità di resistere specie reattive dell'ossigeno (ROS). Un fenomeno simile è stato segnalato da Ma et al. per il tessuto cancro cervicale Essi hanno riferito che upstaging del cancro cervicale comporta non solo una maggiore concentrazione di Nrf2 nel nucleo delle cellule tumorali, ma anche ad una maggiore concentrazione di proteine ​​risposta antiossidante valle [22]. Si può quindi essere teoricamente proposto che le linee di cellule di cancro gastrico con l'espressione Nrf2 nucleare avrebbe un potenziale maligno superiore attraverso questo meccanismo.
Abbiamo immunoistochimica identificato un alto tasso di espressione Nrf2 in campioni clinici di cancro gastrico (Tabella 2). Così, il 61,7% dei campioni erano positivi Nrf2, che era superiore alla percentuale di campioni positivi riportati in non a piccole cellule di carcinoma del polmone (26%) [21] o nel cancro della colecisti (23%) [23].
Inoltre, vi erano correlazioni significative tra espressione Nrf2 e diversi fattori clinico-patologici come ad esempio le dimensioni del tumore, la profondità del tumore, invasione linfatica, metastasi linfonodali, e istologia del tumore. I nostri risultati sono in accordo con quelli di Wang et al. che ha riferito che l'espressione di Nrf2 nel cancro della colecisti era significativamente associato con la differenziazione, lo stadio, e metastasi linfonodali [23].
Recentemente Xiu-Freg Hu et al. Allo stesso modo indagato espressione Nrf2 nel cancro gastrico [26]. Hanno anche suggerito un significato prognostico di espressione Nrf2 in accordo con i nostri risultati. Tuttavia, hanno riferito che Nrf2 immunoreattività è stata rilevata nel citoplasma, ma che non è stato rilevato nel nucleo. Questo risultato diverso può essere dovuto al fatto che essi utilizzati anticorpi diversi da quelli utilizzati nel presente studio. E 'stato ben documentato che Nrf2 esercita la sua capacità antiossidante solo quando trasloca al nucleo dal citoplasma [27]. La nostra analisi ha mostrato che immunoblotting Nrf2 era prevalentemente presente nel nucleo delle cellule di linee cellulari di cancro gastrico. Abbiamo pertanto ritenuto che la sovraespressione persistente Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico probabilmente ha lavorato come un antiossidante che proteggeva le cellule di cancro gastrico da ROS, e che l'espressione nucleare Nrf2 può riflettere il comportamento aggressivo di cancro gastrico. In base a questa teoria, abbiamo ritenuto essenziale valutare nucleare, ma non citoplasmatica espressione di Nrf2 in campioni clinici di cancro gastrico.
In questo studio, abbiamo dimostrato il valore prognostico di espressione Nrf2 mediante analisi univariata. Anche se Nrf2 positività non è stato selezionato come marcatore prognostico indipendente attraverso l'analisi multivariata, questo risultato può essere spiegato con la possibilità che Nrf2 la positività è stata significativamente influenzata dal coinvolgimento linfonodale, che è stato considerato come fattore prognostico negativo. Solis et al. e Wang et al. Allo stesso modo ha riferito che l'espressione Nrf2 è stato associato a scarsa sopravvivenza globale a non a piccole cellule di carcinoma del polmone [21] e nel cancro della colecisti [23], rispettivamente. Questi dati suggeriscono che l'espressione Nrf2 potrebbe essere usata come parametro prognostico significativo per la previsione della sopravvivenza dei pazienti affetti da cancro gastrico post-operatorio.
E 'stato recentemente riportato che un'alta espressione Nrf2 può facilitare e prolungare la sopravvivenza delle cellule tumorali dopo la chemioterapia e la radioterapia antitumorale [14,16,19-22,28-33]. I nostri risultati hanno anche mostrato che l'espressione Nrf2 positivo era significativamente associata con la resistenza alla chemioterapia adiuvante a base 5FU. Questi risultati combinati potrebbero implicare che, valutando il livello di espressione di Nrf2 nel nucleo delle cellule di cancro gastrico, potrebbe essere possibile prevedere i migliori candidati che possono beneficiare di ricevere non solo la chemioterapia adiuvante, ma anche la chemioterapia neoadiuvante.
Genetica o l'inibizione funzionale di Nrf2 ha dimostrato di portare alla repressione dei cellulari Nrf2 enzimi -regulated antiossidanti, tra cui il glutatione cellulare, tioredossina e tioli non proteici. In ultima analisi, queste alterazioni possono ripristinare la sensibilità delle cellule tumorali di farmaci antitumorali e radioterapia. Così, Cho et al. ha riferito che l'inibizione funzionale di Nrf2 porta alla sensibilizzazione delle cellule tumorali agli agenti antitumorali alchilanti [31]. Inoltre, Ma et al. ha riferito che la combinazione di cisplatino e atterramento di Nrf2 drammaticamente e la crescita tumorale significativamente inibito in vivo [22].
Prendendo queste evidenze in considerazione, è molto probabile che un nuovo protocollo chemioterapico che coinvolge regolazione Nrf2 sarà introdotta nel prossimo futuro. Per esempio, l'efficacia della chemioterapia potrebbe essere prima predetto da valutazione dell'espressione Nrf2 e, se uno di pazienti positivi Nrf2 vengono valutate come resistenti alla chemioterapia, allora può essere possibile ottenere una sufficiente efficacia della chemioterapia inibendo concomitante di Nrf2. Quindi un nuovo protocollo chemioterapico che include la terapia antiossidante può essere un metodo utile per la risoluzione di un problema clinico.
Conclusioni
espressione Nrf2 è strettamente associata a fattori clinico-patologici e la prognosi dei pazienti affetti da cancro gastrico. espressione Nrf2 nel cancro gastrico può essere utile per la valutazione del potenziale maligno biologica, che può essere mediato in parte da Nrf2 potenziamento della capacità antiossidante delle cellule di cancro gastrico. terapia antiossidante potrebbe essere un approccio promettente per il trattamento di pazienti positivi Nrf2 cancro gastrico
Abbreviazioni
Nrf2:.
NF-E2 legate fattore 2
OS:
Lo stress ossidativo
Keap 1:
Kelch-like proteina ECH-associata 1
sono:
elemento di risposta antiossidante
FBS:
siero fetale bovino
PBS:
fosfato tamponata salina

TBS:
salina Tris-buffered
TBST:
TBS-Tween 20
5-FU:
5-fluorouracile
ROS:
Le specie reattive dell'ossigeno
Dichiarazioni
Ringraziamenti
dichiariamo che ogni autore ha ricevuto alcuna Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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