Promotor metylering och uttryck av TIMP3 genen i gastric cancer

Promoter metylering och uttryck av TIMP3 genen i magcancer Bild Sammanfattning
Bakgrund
Gastric cancer utveckling är en flerstegsprocess som involverar mer än en gen. Avvikande förändringar i DNA-metylering anses vara den tredje mekanism som leder till anti-onkogen inaktive, som spelar en viktig roll i tumörutveckling. I denna studie bedömde vi förhållandet mellan den avvikande metylering av promotor CpG-öar av vävnad hämmare av metalloproteinas 3 (TIMP3) genen, dess proteinuttryck, och kliniskt patologiska egenskaper hos gastriskt adenokarcinom.
Metoder
metyleringsstatus av promotor CpG-öar och proteinuttryck av TIMP3 genen i tumörer och angränsande normala slemhinnevävnader av 78 patienter med magcancer upptäcktes genom metylering-specifik PCR (MSP) och immunohistokemi.
Resultat
CpG-ö metylering av TIMP3 detekterades i tumörvävnader, cancer-angränsande vävnader, och lymfkörtlar med metastaser. I stigande ordning, den hypermethylation frekvensen av dessa vävnader var 35,9% (28 av 78 icke-neoplastiska vävnader), 85% (fall 17 av 20 tidigt skede), 89,7% (fall 52 av 58 progressiv stegs), och 100% (78 av 78 metastatisk lymfkörtel). En markant skillnad konstaterades mellan tumörer och icke-neoplastiska vävnader (P Hotel < 0,05), men ingen skillnad förelåg bland de undergrupper av tumörer (P Hotel > 0,05). Immunohistokemi analys bekräftade TIMP3 nedreglering i tumörvävnad. Hastigheten för TIMP3 genuttryck var 100% i icke-neoplastiska vävnader men minskade uppenbarligen i olika utsträckning i olika skeden, dvs., minskade till 30% (20/06) i ett tidigt skede, till 3,4% (2/58) vid den progressiv fas, och till 0% (0/78) i metastatiska lymfkörtlar. Bland de 70 tumörvävnad med negativ TIMP3 uttryck, 64 (91,4%) var hypermethylated och 6 var ometylerade (8,6%), vilket indikerar ett signifikant samband mellan hypermetylering och minskad eller negativ TIMP3 uttryck (P Hotel < 0,01).
Slutsats
hypermetylering av promotorregionen i CpG-öar är den viktigaste mekanismen för TIMP3 genuttryck och kan ge bevis för molekylär diagnostik och scen utvärdering av magcancer. Review, Virtual diabilder sälja The virtuella glider för detta artikeln kan hittas här: http:... //www diagnosticpathol nik diagnomx eu /vs /1756134016954958
Nyckelord
adenocarcinom Tissue Inhibitor av metalloproteinas 3 (TIMP3) metylering bakgrund
magcancer (eller magcancer) är en av de vanligaste maligniteter i världen. Sjukdom utveckling i magcancer är en flerstegsprocess som involverar mer än en gen. Sjukdoms faktorer verkar ytterst på olika gener i olika skeden, vilket orsakar en förändring i genstruktur och uttrycksnivåer som leder till utvecklingen av gastric cancer. Förlust av funktion av en anti-onkogen kan ske genom olika kanaler. Förutom deletioner och mutationer, är avvikande förändringar i DNA-metylering betraktas som den tredje mekanism som leder till anti-onkogen inaktive [1, 2], som spelar en viktig roll i tumörutveckling. CpG-öar, som är CpG-rika sekvenser belägna i uppströmspromotorregionen av en gen hushållning, är regioner där cytosin-metylering i allmänhet inte förekommer, även om stimulering av vissa faktorer leder till dess metylering. Följaktligen är DNA-expressions inhiberas i denna region [3]. Inaktivering av många tumörassocierade gener såsom P16, THBS1, TIMP3, hMLH1, och MGMT är relaterade till metylering av deras respektive promotorregioner [4-8]. Vävnadsinhibitor av metalloproteinas-3 (TIMP3) är relaterad till tumörutveckling, speciellt antagonisera aktiviteten av matrismetalloproteinaser, liksom hämning av tumörtillväxt, angiogenes, invasion och metastas [9].
I detta arbete detekterades vi metyleringen av TIMP3 genpromotorn CpG-ö och proteinuttryck i normal magslemhinna vävnader, magsäckscancer vävnader och metastatiska lymfkörtlar av 78 patienter med magcancer med användning av metylering-specifik PCR (MSP) och immunohistokemi. Vi undersökt sambandet mellan genpromotorn metylering med dess motsvarande proteinuttryck och sedan analyserat förhållandet mellan TIMP3 gen CpG ö onormal metylering med utveckling, liksom kliniska och patologiska funktioner, av magcancer.
Material och metoder
material
alla 78 fall av magsäcks normal vävnad, magcancer, och metastatiska lymfkörtlar verifierades genom patologisk diagnos. Tumörprover togs mellan mars 1998 till maj 2005 på första Anslutna sjukhuset och Liaoning-provinsen tumör sjukhus från postoperativa patienter med magsäckscancer (hane: n
= 54; hona: n
= 24) med en medelålder 56,2 ± 7,5 år. Bland de prover som erhållits, 20 var av magcancer tidig, 58 var av avancerad magsäckscancer, 44 var av differentiering, och 14 var odifferentierad. Tumör iscensättning baserades på International Union Against Cancer TNM mellan standarder, maskinskrivning för magcancer Growth Way och stadgan för Staging och magcancer skriva i Japan [10-12] från Kina Medical University Cancer Institute. Hydrokinon (10 mmol /L) och natriumvätesulfat (3,9 mol /L) köptes från Sigma. En DNA Clean-up systemet köptes från Promega. TIMP3 antikropp och SP-kit inköptes från Boster Biological Engineering Co, Ltd (Dalian). Alla prover hanteras och avidentifieras enligt de etiska och rättsliga normer. Protokollet godkändes av den medicinska etikkommitté Liaoning Provincial Tumör Hospital och Kina Medical University.
MSP
I MSP-metoden [13], var metylas bearbetning skett på perifera blodceller och användes som positiva kontroller. Obehandlade celler användes som negativa kontroller. Sekvenserna för de metylerade (TIMP3-M) och ometylerade (TIMP3-U) primrarna var enligt följande: (1) TIMP3-M primersekvenser, 5'CGTTTCGTTATTTTTTGTTTTTCGGTTTTC-3 'och 5'-CCGAAAACCCCGCCTCG-3'; och (2) TIMP3-U primersekvenser, 5'-TTTTGTTTTGTTATTTTTTGTTTTTGGTTTT-3 'och 5'-CCCCCCAAAAACCCCACCTCA-3'. PCR-reaktionsbetingelserna var enligt följande: 95 ° C initial denaturering under 5 min, 95 ° C, denaturering under 30 s (40 cykler), 59 ° C hybridisering under 60s (40 cykler), 72 ° C förlängning för 60s (40 cykler ), och 72 ° C förlängning under 10 min. Agarosgelelektrofores och EB-färgning utfördes därefter. Data från gelerna samlades med en laser densitet scanner (Pharmacia LKB Ultroscan) och därefter analyseras. Alla experiment upprepades tre gånger, och medelvärdet användes för statistisk analys.
Immunohistokemi Hus Till immunohistokemi använde vi streptomycesavidin-peroxidas färgningsmetoden. Immunhistokemisk färgning utfördes i enlighet med tillverkarens instruktioner. Som ett diagnostiskt kriterium var observationen av en brungul cytoplasman efter färgning anses ett positivt resultat för TIMP3 uttryck. För kontrollerna gjordes en normal vävnad område färgas som den positiva kontrollen, och en normal vävnadssektion användes som den negativa kontrollen och färgades med PBS i stället för en primär antikropp. Scoring standard utfördes enligt den metod som beskrivits av Shimizu [14]. Vi observerade färgningsintensitet och distribution av positiva celler vid hög förstoring; ingen färgning bedömdes som 0, svag färgning men betydligt starkare än den negativa kontrollen gjordes som en, är en tydlig fläck gjorde som 2, och en stark fläck räknas som 3. positiv kontroll cell räknas som 0. Det erforderliga antalet positiva celler, det vill säga, < 30%, 30% -60%, och > 60%, räknades som ett, två, respektive 3. Baserat på den totala poängen, proverna bedömdes för TIMP3 uttryck. En poäng på ≤2 klassificerades som negativa, en poäng av tre var svagt positiv, en poäng i intervallet 4-5 var positiv, och en poäng av 6 var starkt positivt.
Statistisk analys sälja The skillnader mellan TIMP3 genpromotor metylering hastighet och proteinuttryck av proven detekteras och analyseras statistiskt genom att de ×
2 och Fisher metoder. Alla data analyserades med SPSS12 statistisk programvara.
Resultat
TIMP3 genpromotor metyleringsanalys
Extraherade genomiskt DNA från provet amplifierades med MSP. Storlekarna på de metylerade och ometylerade PCR-produkter var 116 och 122 bp, respektive. TIMP3 genpromotor metylering fenomen allmänt förekommer i normala mag vävnader, magcancer och lymfkörtel metastasering prover. De positiva upptäckten hastigheten var följande: 85% (17/20) för magcancer tidig, 89,7% (52/58) för avancerad magsäckscancer, 98,7% (77/78) för metastatiska lymfkörtlar, och endast 35,9% (28 /78) för den normala gastrisk vävnad. En betydande ökning av TIMP3 genpromotor metylering observerades i alla magcancer grupper (P Hotel < 0,01; figur 1 och tabell 1), vilket tyder på att metylering av TIMP3 genen kan vara inblandade i cancer och metastasering av gastric cancertumörer och metastatiska lymfkörtlar vävnader. Figur 1 Metylering-specifik PCR (MSP): 1, normal kontroll (normal gastric vävnad); 2, magsäckscancer tidigt; 3, avancerad magsäckscancer; 4, överföring av lymfkörtel. M, Marker DL2000; m, Metylering förstärkning fragment; u, unmethylation amplifiering fragmentet.
Tabell 1 Gastric carcinoma TIMP3 promotor metylering och proteinuttryck
organisationer
n (%)
TIMP3 promotor metylering
TIMP3 protein uttryck
Positiv
Positiv
Normal mage
78
28 (35,9) Review 78 (100,0) Review tidig magcancer
20
17 (85,0) Review 9 (45,0) Review Avancerad magsäckscancer
58
52 (89,7) Review 21 (36,2) Review lymfnodmetastaser
78
77 (98,7) Review 12 (15,4) Review Immunohistokemi analys av TIMP3 proteinuttryck
TIMP3 proteinuttryck var positiv i samtliga 78 fall av normal gastrisk vävnad (100%). Bland de magcancer fall 9 i 20 patienter var positiva för magcancer tidigt; 11 fall var negativa (55%), 21 fall var positiv, och 37 var negativa (63,8%) i 58 fall av avancerad magsäckscancer; och 12 fall var positiva och 66 fall var negativ (84,6%) i 78 patienter med magsäcks lymfkörtlar. Den reducerade TIMP3 uttryck som observerades i magcancer grupperna befanns vara statistiskt signifikant (P Hotel < 0,01; Figur 2 och tabell 1), vilket tyder på att TIMP3 proteinuttryck sjönk i mag cancertumörer och metastaser lymfkörtel vävnader . Denna reducerade uttryck av genen proteinet kan bero på den tidigare observerade ökningen av TIMP3 metylering i magsäckens cancerprov eftersom metylering är känt för att undertrycka proteinexpression. TIMP3 proteinuttryck var huvudsakligen belägna i cytoplasman hos normala körtlar. I några få celler, tillsattes en liten mängd av expression hittas i cellmembranen (Figur 2). I normala magslemhinnan celler, ingen körtel struktur förstörelse observeras och färg var inte signifikant. De tidiga magcancer körtlar visade strukturella skador och svag cancercell färg. De avancerad magsäckscancer vävnader visade stora områden av massiv tillväxt (odifferentierade karcinom) och bortsett från de individuella cellerna, resten var färgade. Figur 2 TIMP3 protein immunohistochemisty (SP 400 ×): a normal gastrisk vävnad; b, magsäckscancer tidigt; c, avancerad magsäckscancer; d, överföring av lymfkörtel.
Förhållande mellan TIMP3 genpromotor metylering och TIMP3 proteinuttryck
I den avancerade magcancer grupp, graden av TIMP3 metylering var betydligt högre än de DUM och kapslade växande vävnader (100% mot 77,8%, respektive; P
< 0,01). Den TIMP3 metylering takten i metastaserande lymfkörtlar i ≥7 vävnadsgruppen var signifikant högre än < 7 vävnadsgruppen (100% jämfört med 83,3%, respektive; P Hotel < 0,05). Den subserosal och serosala vävnadsgruppen var signifikant högre än den vävnadsgruppen submukosal och myometrium (91,3% och 96,6% mot 50%, respektive; P
< 0,05). Ökad TIMP3 genen metylering hastigheten i allmänhet observerats i diffusa liknande tillväxtfaktor, lymfkörtelmetastaser (≥7), och subserosal och serös tumörer, vilket innebär att inget samband fanns mellan TIMP3 gen metylering och tumörstorlek, makroskopiska typ, och histologiska typen. Den positiva hastighet av 58 fall av avancerad magsäckscancer vävnader var 36,2% (21). TIMP3 proteinuttryck i massiva och kapslade växande vävnader var signifikant högre än den för diffusa liknande tillväxtfaktorer vävnader (55,6% vs.19.4%, respektive; P
< 0,01). TIMP3 proteinuttryck i metastaserande lymfkörtel ≥7 vävnader var betydligt högre än den < 7 vävnad (47,2% jämfört med 18,2%, respektive; P Hotel < 0,05) (tabell 2). Dessa resultat tyder på att minskad TIMP3 proteinuttryck var mer vanligt i diffus-like growth och lymfkörtel metastaserande (≥7) tumörer, men minskat uttryck var inte relaterad till tumörstorlek, grov typ, histologiska typ och djup av invasion.Table 2 Förhållande mellan avancerad magsäckscancer patologi TIMP3 metylering och dess proteinuttryck nivå
index
n
TIMP3 promotor metylering
TIMP3 proteintumörstorlek

Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP (cm) Hotel < 5
5
3 (60,0) Review en (20,0) Review 5-10
45
42 (93,3)
18 (40,0) Hotel > 10
8
7 (87,5) Review 2 (25,0) katalog Allmänna typer
Borr.2
12
10 (83,3 ) katalog 4 (33,3) Review Borr.3
37
33 (89,2) Review 15 (40,5) Review Borr.4
9
9 (100,0)
2 (22,2) Review Histologisk differentiering
differentierade
44
39 (88,6) Review 17 (38,6) Review odifferentierad
14
13 (92,9)
4 (28,6) Review tillväxtmönster
Klumpar + kapslade
27
21 (77,8) Review 15 (55,6) Review Diffusa liknande
31
31 (100,0 ) b
6 (19,4) miljarder
Lymfkörtel metastaser Hotel < 7
36
30 (83,3) Review 17 (47,2) katalog ≥7
22
22 (100,0) en
4 (18,2) en
Infiltration
submukosala muscularis
6
3 (50,0) Review en (16,7) katalog Subserosal
23
21 (91,3) en
9 (39,1) Review slemhinnorna
29
28 (96,6) Review 11 (37,9) Review aP Hotel < 0,05, BP Hotel < 0,01.
Diskussion
Bildandet av malignitet är multifaktoriell och sker i flera steg. De biologiska egenskaperna hos maligna tumörer innefattar invasiv tillväxt och metastaser. Mekanismen bakom tumörutveckling innebär onormala förändringar i genstruktur och funktion i det inre av cellen. Moderna teoretiker anser att processen för tumörbildning består av två stora mekanismer: den första är på genetisk nivå, dvs orsakar genmutation DNA-nukleotidsekvensen ändras; och den andra är på den epigenetiska nivå. Tidigare studier har fokuserat på förändringar i genuttryck som ärvs genom meios och inte innebär en förändring i DNA-sekvens men påverkar uttrycket och genen reglerande funktion av DNA, huvudsakligen genom kemisk modifiering. Denna mekanism vinner ökad uppmärksamhet från forskare tumörbildningsprocesser [15, 16].
I DNA av tumörvävnad är abberant metyleringar ofta observerats i gen promotorregioner, inklusive hypometylering i onkogenen. Denna gen är nära besläktad med celltillväxt cykeln och hypermethylation i tumörsuppressorgener. Dessa onormala metylering förändringar kan aktivera onkogener [17-19] och hämmar mRNA transkriptionen av tumörsuppressorgener [20], vilket leder till geninaktivering. Aberrant metylering i DNA sker genom närvaron av starkt metylerade CpG-öar i 5'-änden av en promotorkontrollregion. TIMP familjen har fyra protein medlemmar: TIMP-1, 2, 3, och 4. TIMP-1, 2, och 4 är lösliga sekretoriska proteiner. Däremot är TIMP-3 ett icke-lösligt protein som kombinerar med den extracellulära matrisen, ligger i det yttre cellmembranet [21], och kan ha ett nära samband med basilarmembranet. Funktionen hos TIMP är hämningen av tumörnekrosfaktor-α (TNF-α) -converting enzymer och induktionen av programmerad celldöd genom den stabila cellytan TNF-α-receptorn [22]. Induktion av apoptos genom TIMP sker genom två vägar: MMP beroende och oberoende. Även om TIMP-3 och 4 har en hög affinitet för MMP-2, proteinerna inhiberar effektivt MT1-MMP, vilket därigenom aktiverar MMP-2-zymogen processen och inhibering av tumörcelltillväxt och metastasering. Smith et al. [23] fann att uttrycket av TIMP-3 i humana koloncancercellinjer är sällsynta i mitos. De flesta celler greps i G1-fasen, även om tillämpningen av TNF-α-antikropp minskar mitotiska arrestering med 70%.
Att utforska förhållandet mellan TIMP3 och magcancer, liksom dess mekanism i gastrisk inaktive upptäckte vi TIMP3 gen 5 'CpG-ö hypermethylation i normal magslemhinna, magcancer, och metastaserande lymfkörtlar. Vi fann att i > 85% av alla magcancer vävnader, den TIMP3 gen 5 'CpG-ö uppvisade avvikande metylering som var betydligt högre (P Hotel < 0,01) än den normala gastric vävnad grupp, vilket innebar att TIMP3 genpromotorn CpG-ö metylering reducerad TIMP3 genuttryck och var därmed huvud tumörsuppressor-inaktive mekanism i magcancer. Gagnon et al. [24] rapporterade att i alla MCF-7 lungcancercellinjer med TIMP3 mRNA-uttryck förlust och TIMP3 genpromotorn CpG-ö metylering ades demetylering inducerad av 5-aza-CdR. TIMP3 uttryck före och efter 5-aza-CdR induktion bedömdes genom RT-PCR, som visade att demetylering resulterade i TIMP3 återuttryck av gener, som överensstämmer med våra resultat.
I den aktuella studien, samtliga 78 fall av normal gastrisk vävnad var positiva för TIMP3 proteinuttryck. Bland dessa 78 fall, endast 28 (35,9%) var positiva för metylering. Bland de 20 patienter med magcancer tidigt, 9 var positiva för TIMP3 proteinuttryck och 17 (85%) var positiva för metylering. Bland de 58 fall av avancerad magsäckscancer, 21 var positiva för TIMP3 proteinuttryck och 52 (89,7%) var positiva för metylering. Bland de 78 fall av metastatiska lymfkörtlar, 12 var positiva för TIMP3 proteinuttryck och 77 fall (98,7%) var positiva för metylering. Ökad metylering hastigheten var signifikant bland tidig cancer, avancerad cancer och metastatiska lymfkörtelprover jämfört med normala vävnadsprover (P Hotel < 0,01), vilket bekräftar att förlusten av TIMP3 proteinuttryck var nära besläktad med TIMP3 genpromotorn CpG-ö metylering. Feng HF et al. [25] rapporterade samma resultat i JAR och JEG-3 koriokarcinom cellinjer. Därför bekräftade vår studie att TIMP3 genpromotorn CpG-ö metylering var den främsta orsaken till den minskade TIMP3 proteinuttryck i magcancer.
Bland de 58 avancerad magsäckscancer prover, 52 var positiva för TIMP3 promotor CpG-ö metylering och 21 var positiva för TIMP3 proteinuttryck. Detta fynd antydde att förutom CpG-ö metylering, andra faktorer såsom genetisk variation orsakad frånvaro av TIMP3 genexpression. I våra experiment, 34 prover var positiva för metylering och unmethylation var oftast tolkas på följande sätt: ofullständig metylering status av gener kan existera, och om tumörvävnaden blandas med icke-tumörceller, en positiv PCR-produkt för unmethylation (av MSP med ometylerade primer) kan observeras. TIMP3 proteinuttryck i provet var negativt, så dessa prover definierades som metylering positiv.
I Kina är den 5-års överlevnad på magcancer patienter endast ca 40% efter resektion. Den dåliga prognosen är förknippad med omfattande lokal invasion och /eller regional lymfkörtel metastas [26]. Lokalt återfall kvarstår som en viktig orsak till cancerrelaterade dödsfall efter resektion i mag cancerpatienter [27]. Därför måste tillförlitliga kriterier för att förutsäga återfall och identifiering av tumörer inrättas för att förstå molekylära och cellulära processer, samt upptäcka nya och möjliga terapeutiska molekylära mål [28].
Kerbel [29] rapporterade att subkloning tumörceller med metastatisk potential har en tillväxtfördel i ett tidigt skede av primär fokus. Skälet för en sådan tillväxt fördel är att den metastatiska subklonen cellpopulationen kan utsöndra en specifik faktor eller lokala celltillväxtfaktor och därigenom orsakar en speciell reaktion som resulterar i selektiv tillväxt. Detektion av molekylära markörnivåer i primära tumörprover kan återspegla de allmänna metastatiska egenskaperna hos hela tumören. I denna grupp, metylering priser var endast 35,9% för de normala mag vävnader, 85% och 89,7% för de tidiga och avancerad cancer, respektive 98,7% för metastaserad lymfkörtlar. Genomgående hög TIMP3 proteinuttryck iakttogs endast i normala mag vävnader. Tidiga och avancerad magsäckscancer uppvisade fokal svag uttryck, och metastatiska lymfkörtlar visade nästan ingen positiv uttryck. Denna upptäckt antydde att TIMP3 metylering ökade med tumörprogression och proteinuttryck trappas ned successivt. Följaktligen den metastatiska potentialen och tillväxtfördel av celler successivt ökat, vilket slutligen resulterar i metastas. Yegnasubramanian et al. [30] rapporterade att tumörmetastas var relaterad till TIMP3 metylering i prostatacancercellinjer som framgår av den realtid MSP av prover från 73 patienter med tidig prostatacancer, 91 patienter med metastaserande prostatacancer, och 25 fall med prostatavävnad. Detta resultat antydde ett samband mellan CpG-metylering och klassificering och utvecklingen av prostatacancer. TIMP3 gen metylering spelar enligt uppgift en viktig roll i den metastatiska processen, och detektion av TIMP3 CpG-metylering har något praktiskt värde för att förutsäga den metastatiska potentialen av primärtumören.
TIMP3 har en hög frekvens av genetisk variation i många typer av mänsklig maligna tumörer, innefattande mutationer, deletioner, metylering, kromosomal translokation och så vidare [31]. Dessa mutationer resulterar i förlust av den normala funktionen av en tumörsuppressorgen, nämligen inhibition av cellproliferation (dvs., geninaktivering) och är nära relaterade till utvecklingen av cancer [32]. Emellertid har få studier gjorts på TIMP3 genmodifiering i primär gastric cancer, och resultaten av dessa studier visar avvikande resultat från en låg gendeletion hastighet till ingen mutation alls. Följaktligen har andra inaktiveringsmekanismer magcancer involverar TIMP3 gen undersökts [33]. Således är komplexiteten i tumör patogenes inte bara en återspegling av genetisk förändring genom mutation eller deletion utan också en återspegling av epigenetiska förändringar, såsom DNA-metylering. En fördjupad studie av sambandet mellan DNA-metylering och genuttryck, samt dess motsvarande mekanism, rekommenderas eftersom resultaten kan vägleda klinisk behandling av cancer.
Förklaringar
Finansiering
Studien finansierades av National Natural Science Foundation i Kina (nr 30.271.477) och projekt som stöds av vetenskaplig forskning Stiftelsen för den returnerade utomeuropeiska kinesiska forskare, statliga utbildningsministeriet (nr 2002-247).
Författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna bilder
Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 13000_2013_791_MOESM1_ESM.jpeg Författaroriginalfilen för figur 1 13000_2013_791_MOESM2_ESM.tiff Författaroriginalfilen för figur 2 Konkurrerande intresse
Författarna förklarar härmed att de har inga konkurrerande intressen med varandra.
Författarnas bidrag
ZG och JZ utfört de patologiska och PCR-undersökningar, DD och ZG analyserade data, och ZG utarbetade manuskriptet. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• En jämförelse av endoskopisk submukosala dissektion (ESD) och radikal kirurgi för magcancer tidig: en retrospektiv studie
• Korrelation av hK6 uttryck med tumörrecidiv och prognos i avancerad magsäckscancer