metilación del promotor y la expresión de genes en el cáncer gástrico TIMP3

metilación del promotor y expresión de genes en el cáncer gástrico TIMP3
Resumen Antecedentes

el desarrollo de carcinoma gástrico es un proceso de múltiples etapas que implica más de un gen. cambios aberrantes en la metilación del ADN se consideran como el tercer mecanismo que conduce a la inactivación anti-oncogén, que desempeña un papel esencial en el desarrollo de tumores. En este estudio, se evaluó la relación entre la metilación aberrante del promotor CpG islas del inhibidor tisular de la metaloproteinasa 3 gen (TIMP3), la expresión de la proteína, y las características clinicopatológicas de adenocarcinoma gástrico.
Métodos comentario El estado de metilación del promotor islas CpG y la expresión de la proteína del gen TIMP3 en tumores y tejidos de las mucosas normales adyacentes de 78 pacientes con adenocarcinoma gástrico fueron detectados por PCR específica de metilación (MSP) e inmunohistoquímica.
resultados
la isla CpG metilación de TIMP3 se detectó en los tejidos tumorales, tejidos de cáncer adyacentes, y los ganglios linfáticos con metástasis. En orden creciente, la frecuencia de hipermetilación de estos tejidos fueron 35,9% (28 de 78 tejidos no neoplásicos), 85% (17 de 20 casos en etapa temprana), 89,7% (52 de 58 casos en fase progresiva), y 100% (78 de 78 ganglios linfáticos metastásico). Se encontró una marcada diferencia entre los tumores y tejidos no neoplásicos (P Hotel < 0,05), pero no hubo diferencia existía entre los subgrupos de tumores (P Hotel > 0,05). análisis de inmunohistoquímica confirmó TIMP3 regulación a la baja en los tejidos tumorales. La tasa de la expresión génica TIMP3 fue del 100% en los tejidos no neoplásicos pero aparentemente disminuyó en diversos grados en diferentes etapas, es decir, se redujo hasta el 30% (6/20) en la primera etapa, a 3,4% (2/58) en el etapa progresiva, y a 0% (0/78) en los ganglios linfáticos metastásicos. Entre los 70 tejidos tumorales con expresión TIMP3 negativo, 64 (91,4%) fueron hypermethylated y 6 eran no metilado (8,6%), lo que indica una asociación significativa entre la hipermetilación y reduce o expresión TIMP3 negativo (P Hotel < 0,01).
Conclusión México la hipermetilación de la región promotora en las islas CpG es el principal mecanismo de la expresión génica TIMP3 y puede proporcionar pruebas para la evaluación y el diagnóstico molecular de la etapa del cáncer gástrico.
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Palabras clave
adenocarcinoma gástrico inhibidor tisular de la metaloproteinasa 3 (TIMP3) Antecedentes La metilación
el cáncer gástrico (o carcinoma gástrico) es una de las neoplasias más frecuentes en el mundo. desarrollo de la enfermedad en el cáncer gástrico es un proceso de múltiples etapas que implica más de un gen. factores de la enfermedad en última instancia actúan sobre diferentes genes en diferentes etapas, provocando un cambio en la estructura de genes y expresión de los niveles que conducen al desarrollo de la carcinogénesis gástrica. La pérdida de función de un anti-oncogén se puede producir a través de diversos canales. Además de las deleciones y mutaciones, cambios aberrantes en la metilación del ADN se consideran como el tercer mecanismo que conduce a la inactivación anti-oncogén [1, 2], que desempeña un papel esencial en el desarrollo de tumores. islas CpG, que son secuencias ricas en CpG ubicados en la región del promotor corriente arriba de un gen de mantenimiento, son regiones en las que no se produce en general de metilación de citosina, aunque la estimulación por ciertos factores conduce a su metilación. En consecuencia, la expresión del ADN se inhibe en esta región [3]. La inactivación de muchos genes asociados a tumores, tales como P16, THBS1, TIMP3, hMLH1, y MGMT están relacionadas con la metilación de sus respectivas regiones promotoras [4-8]. inhibidor tisular de la metaloproteinasa-3 (TIMP3) está relacionado con el desarrollo de tumores, particularmente antagonizar la actividad de las metaloproteinasas de la matriz, así como inhibir el crecimiento tumoral, la angiogénesis, la invasión y la metástasis [9].
En este trabajo, hemos detectado la metilación del promotor del gen TIMP3 isla CpG y la expresión de proteínas en tejidos normales gástricas de la mucosa, los tejidos de cáncer gástrico y los ganglios linfáticos metastásicos de 78 pacientes con cáncer gástrico mediante PCR específica de metilación (MSP) e inmunohistoquímica. Exploramos la correlación de promotor del gen de metilación con su expresión de la proteína correspondiente y después se analizó la relación del gen TIMP3 isla CpG metilación anormal con el desarrollo, así como las características clínicas y patológicas, de adenocarcinoma gástrico.
Materiales y métodos
Todos los materiales
78 casos de tejido gástrica normal, carcinoma gástrico, y los ganglios linfáticos metastásicos fueron verificadas por el diagnóstico patológico. Se obtuvieron las muestras de tumores entre marzo 1998 a mayo 2005 en el Primer Hospital Afiliado y Liaoning Tumor Hospital Provincial de pacientes postoperatorios con cáncer gástrico (macho: n = 54
; femenino: n
= 24) con una edad media de 56,2 ± 7,5 años. Entre las muestras obtenidas, 20 eran del cáncer gástrico precoz, 58 eran del cáncer gástrico avanzado, 44 ​​eran de la diferenciación, y 14 eran indiferenciada. La estadificación del tumor se basa en las normas de estadificación Unión Internacional contra el Cáncer TNM, la tipificación de cáncer gástrico Crecimiento Camino y el Estatuto de la estadificación, y escribiendo el cáncer gástrico en Japón [10-12] en el Instituto de Cáncer de la Universidad de Medicina China. Hidroquinona (10 mmol /L) y bisulfato de sodio (3,9 mol /L) se adquirieron de Sigma. Un Sistema de ADN de limpieza se adquirió de Promega. TIMP3 anticuerpo y el kit de SP fueron adquiridos de Boster Biological Engineering Co., Ltd. (Dalian). Todas las muestras se manipulan y hacen anónimos de acuerdo con las normas éticas y legales. El protocolo fue aprobado por el Comité de Ética Médica del Hospital Provincial de Liaoning del tumor y la Universidad de Medicina China.
MSP
En el método MSP [13], el procesamiento metilasa se llevó a cabo en las células de sangre periférica normales y se utiliza como controles positivos. Se utilizaron células no tratadas como controles negativos. Las secuencias de los cebadores metilados (TIMP3-M) y no metilados (TIMP3-U) fueron los siguientes: (1) secuencias de cebadores TIMP3-M, 5'CGTTTCGTTATTTTTTGTTTTTCGGTTTTC-3 'y 5'-CCGAAAACCCCGCCTCG-3'; y (2) secuencias de cebadores TIMP3-U, 5'-TTTTGTTTTGTTATTTTTTGTTTTTGGTTTT-3 'y 5'-CCCCCCAAAAACCCCACCTCA-3'. Las condiciones de reacción PCR fueron las siguientes: 95 ° C de desnaturalización inicial de 5 min, 95 ° C, la desnaturalización durante 30 s (40 ciclos), 59 ° C recocido durante 60s (40 ciclos), 72 ° C de extensión para los 60 (40 ciclos ), y 72 ° C de extensión de 10 min. a continuación, se llevaron a cabo electroforesis en gel de agarosa y tinción con EB. Datos de los geles se recogieron con un escáner de densidad de láser (Pharmacia LKB Ultroscan) y posteriormente analizada. Todos los experimentos se repitieron tres veces, y se utilizó el valor medio para el análisis estadístico.
Inmunohistoquímica
Por inmunohistoquímica, se utilizó el método de tinción streptomycesavidin-peroxidasa. La tinción inmunohistoquímica se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Como criterio de diagnóstico, la observación de un citoplasma de color amarillo parduzco después de la tinción se consideró un resultado positivo para la expresión TIMP3. Para los controles, una zona de tejido normal se tiñó como control positivo, y una sección de tejido normal se usó como el control negativo y se tiñó con PBS en lugar de un anticuerpo primario. estándar de puntuación se realizó de acuerdo con el método descrito por Shimizu [14]. Se observó la intensidad y la distribución de células positivas en la alta ampliación tinción; ninguna tinción se puntuó como 0, la tinción débil pero significativamente más fuerte que el control negativo se puntuó como 1, una mancha clara se obtuvo como 2, y una fuerte mancha se anotó como 3. No de células de control positivo se anotó como 0. El número requerido de células positivas, es decir, < 30%, 30% -60%, y > 60%, se anotó como 1, 2, y 3, respectivamente. Con base en las puntuaciones totales, las muestras se evaluaron para la expresión TIMP3. Una puntuación de ≤2 se clasificó como negativo, una puntuación de 3 era débilmente positivo, una puntuación de 4 a 5 fue positiva, y una puntuación de 6 fue muy positiva.
El análisis estadístico
Las diferencias entre el TIMP3 tasa de metilación del promotor del gen y la expresión de proteínas de las muestras se detectaron y analizaron estadísticamente por los chi
2 y los métodos de Fisher. Todos los datos fueron analizados con el programa estadístico SPSS12.
Resultados
gen TIMP3 análisis de la metilación del promotor
extrajeron el ADN genómico de la muestra se amplificó por MSP. Los tamaños de los productos de PCR metilados y no metilados eran 116 y 122 pb, respectivamente. gen TIMP3 fenómeno de la metilación del promotor general, se observó en los tejidos normales gástrico, carcinoma gástrico, y las muestras de metástasis en los ganglios linfáticos. Las tasas de detección positivas fueron las siguientes: 85% (17/20) para el cáncer gástrico precoz, 89,7% (52/58) para el cáncer gástrico avanzado, 98,7% (77/78) de los ganglios linfáticos metastáticos, y sólo 35,9% (28 /78) para el tejido gástrico normal. Un aumento significativo en el gen TIMP3 promotor de la metilación se observó en todos los grupos de cáncer gástrico (P
< 0,01; Figura 1 y Tabla 1), lo que sugiere que la metilación del gen de TIMP3 puede estar implicado en la carcinogénesis y la metástasis de tumores de cáncer gástrico y tejidos de ganglios linfáticos metastásicos. Figura 1 La metilación específica de PCR (MSP): 1, control normal (tejido gástrico normal); 2, el cáncer gástrico precoz; 3, el cáncer gástrico avanzado; 4, la transferencia de los ganglios linfáticos. M, marcador DL2000; m, fragmento de amplificación metilación; u, fragmento de amplificación no metilación.
Tabla 1 carcinoma gástrico TIMP3 la metilación del promotor y expresión de proteínas
Organizaciones
n (%) guía empresas TIMP3 la metilación del promotor
proteína TIMP3 expresión
positivo positivo

normal del estómago
78
28 (35,9)
78 (100,0)
temprana del cáncer gástrico
20
17 (85,0) página 9 (45,0)
cáncer gástrico avanzado
58
52 (89,7)
21 (36,2)
metástasis en los ganglios linfáticos
78
77 (98,7) página 12 (15,4)
análisis inmunohistoquímico de la expresión de la proteína TIMP3
expresión de la proteína TIMP3 fue positivo en todos los 78 casos de tejido gástrico normal (100%). Entre los casos de carcinoma gástrico, 9 de cada 20 pacientes fueron positivos para el cáncer gástrico precoz; 11 casos fueron negativos (55%), 21 casos fueron positivos, y 37 fueron negativos (63,8%) en 58 casos de cáncer gástrico avanzado; y 12 casos fueron positivos y 66 casos fueron negativos (84,6%) en 78 pacientes con ganglios linfáticos gástricos metastásicos. La expresión TIMP3 reducido que se observó en los grupos de cáncer gástrico se encontró que era estadísticamente significativa (P
< 0,01; Figura 2 y Tabla 1), lo que sugiere que la tasa de expresión de la proteína TIMP3 disminuyó en los tumores de cáncer gástrico y tejidos de ganglios linfáticos metastásicos . Esta expresión reducida de la proteína del gen puede ser debido al aumento observado previamente en la metilación TIMP3 en las muestras de cáncer gástrico debido a la metilación es conocido para suprimir la expresión de proteínas. expresión de la proteína TIMP3 se encuentra principalmente en el citoplasma de las glándulas normales. En unas pocas células, se encontró una pequeña cantidad de expresión en las membranas de las células (Figura 2). En las células de la mucosa gástrica normal, no se observó destrucción de la estructura glandular y el colorante no se redujo significativamente. Los primeros glándulas de cáncer gástrico mostraron daño estructural y débil coloración de las células cancerosas. El avanzado cáncer gástrico tejidos mostraron grandes áreas de crecimiento masivo (carcinoma indiferenciado) y, aparte de las células individuales, el resto no eran de color. Figura 2 TIMP3 proteína inmunohistoquímica (SP 400 ×): a, tejido gástrica normal; b, cáncer gástrico precoz; c, cáncer gástrico avanzado; d, la transferencia de los ganglios linfáticos.
Relación entre el gen TIMP3 metilación del promotor y expresión de proteínas TIMP3
En el grupo de cáncer gástrico avanzado, la tasa de metilación TIMP3 fue significativamente mayor que los tejidos en crecimiento torpes y anidados (100% vs. 77,8%, respectivamente; P
< 0,01). La tasa de metilación TIMP3 en los ganglios linfáticos metastásicos en el grupo ≥7 tejido fue significativamente más alto que el < 7 grupo tejido (100% vs. 83,3%, respectivamente; P
< 0,05). El grupo subserosos y el tejido serosal fue significativamente mayor que el grupo de tejido submucoso y miometrio (91,3% y 96,6% vs. 50%, respectivamente; P
< 0,05). Aumento de la tasa de metilación del gen TIMP3 general, se observó en el crecimiento difuso-como, metástasis de ganglios linfáticos (≥ 7), y los tumores subserosos y serosa, lo que implica que no existía ninguna relación entre TIMP3 metilación de genes y el tamaño del tumor, el tipo macroscópico, y el tipo histológico. La tasa positiva de los 58 casos de tejidos avanzados de cáncer gástrico fue de 36,2% (21). expresión de la proteína en los tejidos en crecimiento TIMP3 masivas y anidados fue significativamente mayor que la de los tejidos de crecimiento difuso similar (55,6% vs.19.4%, respectivamente; P
< 0,01). expresión de la proteína TIMP3 en el ganglio linfático metastásico ≥7 tejidos fue significativamente más alto que el < 7 de tejido (47,2% vs. 18,2%, respectivamente; P
< 0,05) (Tabla 2). Estos resultados sugieren que la disminución de la tasa de expresión de proteínas TIMP3 fue más común en el crecimiento y metástasis de ganglios linfáticos difusa-como (≥7) tumores, pero la reducción de expresión no estaba relacionada con el tamaño del tumor, el tipo bruto, tipo histológico, y la profundidad de 2 invasion.Table relación entre la metilación avanzada patología del cáncer gástrico y TIMP3 su nivel de expresión de proteínas
Índice
n
promotor metilación TIMP3
proteína TIMP3 el tamaño del tumor

El tamaño del tumor (cm) Hotel < 5 página 5 página 3 (60,0)
1 (20,0)
de 5 - 10
45
42 (93,3)
18 (40,0) Hotel > 10 página 8 página 7 (87,5) página 2 (25.0)
tipos generales
Borr.2 página 12
10 (83,3 ): perfil 4 (33,3)
Borr.3
37
33 (89,2)
15 (40,5)
Borr.4 página 9 página 9 (100,0)
2 (22.2)
diferenciación histológica
diferenciada
44
39 (88,6)
17 (38,6)
indiferenciado página 14 página 13 (92,9)
4 (28,6)
patrón de crecimiento
Los montones + anidada
27
21 (77,8)
15 (55,6)
difuso como
31
31 (100,0 ) b página 6 (19,4) b
metástasis de ganglios linfáticos Hotel < 7
36
30 (83,3)
17 (47,2)
≥7
22
22 (100,0) una página 4 (18,2)
una infiltración submucosa
muscular página 6 página 3 (50,0)
1 (16,7)
Subserosos
23
21 (91,3) una página 9 (39,1)
serosa
29
28 (96,6) página 11 (37,9)
aP Hotel < 0,05, BP Hotel < 0.01.
Discusión sobre The formación de tumores malignos es multifactorial y se produce en varias etapas. Las características biológicas de los tumores malignos incluyen el crecimiento invasivo y la metástasis. El mecanismo detrás de desarrollo del tumor implica cambios anormales en la estructura y la función del gen en el interior de la célula. Los teóricos modernos consideran que el proceso de formación de tumores comprende dos mecanismos principales: la primera es a nivel genético, es decir, la mutación del gen causa cambios secuencia de nucleótidos de ADN; y el segundo es a nivel epigenético. Estudios anteriores se han centrado en los cambios en la expresión de genes que se heredan a través de la meiosis y no implican un cambio en la secuencia de ADN, pero afectan la expresión génica y la función reguladora del ADN, principalmente por modificación química. Este mecanismo está ganando cada vez más atención de los investigadores de los procesos de la formación de tumores [15, 16].
En el ADN de los tejidos tumorales, metilaciones de Abberant se observan a menudo en regiones promotoras de genes, incluyendo la hipometilación en el oncogén. Este gen está estrechamente relacionado con ciclo de la proliferación celular y la hipermetilación de los genes supresores de tumores. Estos cambios de metilación anormales pueden activar oncogenes [17-19] e inhibir la transcripción del mRNA de los genes supresores de tumores [20], lo que lleva a la inactivación de genes. metilación aberrante en el ADN se produce a través de la presencia de islas CpG altamente metilados en el extremo 5 'de una región de control del promotor. La familia de TIMP tiene cuatro miembros de proteína: TIMP-1, 2, 3, y 4. TIMP-1, 2, y 4 son proteínas secretoras solubles. Por el contrario, TIMP-3 es una proteína no soluble que se combina con la matriz extracelular, se encuentra en la membrana celular externa [21], y puede estar estrechamente relacionada con la membrana basilar. La función de TIMP es la inhibición de factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) enzimas -converting y la inducción de la muerte celular programada a través de la superficie de la célula estable TNF-α del receptor [22]. La inducción de la apoptosis a través de TIMP se produce por dos vías: MMP dependientes e independientes. Aunque TIMP-3 y 4 tienen una alta afinidad por MMP-2, las proteínas de inhibir eficazmente MT1-MMP, activando de este modo el proceso de MMP-2 zimógeno y la inhibición de crecimiento de células tumorales y la metástasis. Smith et al. [23] encontró que la expresión de TIMP-3 en líneas celulares de cáncer de colon humano son raros en la mitosis. La mayoría de las células están detenidas en la fase G1, aunque la aplicación de anticuerpo TNF-α disminuye detención de la mitosis por 70%.
A explorar la relación entre TIMP3 y cáncer gástrico, así como su mecanismo de inactivación gástrica, detectamos gen TIMP3 5 'hipermetilación isla CpG en la mucosa normal gástrico, carcinoma gástrico, y los ganglios linfáticos metastásicos. Se encontró que en > 85% de todos los tejidos de cáncer gástrico, el gen TIMP3 5 'isla CpG mostró metilación aberrante que fue significativamente mayor (P
< 0,01) que la del grupo de tejido gástrico normal, lo que implicaba que TIMP3 promotor del gen de la isla CpG de metilación reduce la expresión de genes TIMP3 y era por lo tanto el principal mecanismo tumor supresor de la inactivación en el cáncer gástrico. Gagnon et al. [24] informó de que en todas las líneas celulares de cáncer de pulmón MCF-7 con la pérdida de la expresión de ARNm TIMP3 y promotor del gen TIMP3 isla CpG metilación, desmetilación fue inducida por 5-aza-CDR. TIMP3 expresión antes y después de 5-aza-CDR de inducción se evaluó mediante RT-PCR, que mostró que dio lugar a la desmetilación TIMP3 gen re-expresión, consistente con nuestros resultados.
En el presente estudio, los 78 casos de tejido gástrico normales fueron positivos para la expresión de proteínas TIMP3. Entre estos 78 casos, sólo el 28 (35,9%) fueron positivos para la metilación. Entre los 20 pacientes con cáncer gástrico precoz, 9 fueron positivos para la expresión de proteínas TIMP3 y 17 (85%) fueron positivos para la metilación. Entre los 58 casos de cáncer gástrico avanzado, 21 fueron positivos para la expresión de proteínas TIMP3 y 52 (89,7%) fueron positivos para la metilación. Entre los 78 casos de ganglios linfáticos metastásicos, 12 fueron positivos para la expresión de proteínas TIMP3 y 77 casos (98,7%) fueron positivos para la metilación. Aumento de la tasa de metilación fue significativa entre el cáncer a tiempo, el cáncer avanzado, y las muestras de ganglios linfáticos metastásicos en comparación con las muestras normales de tejido (P Restaurant < 0,01), lo que confirma que la pérdida de expresión de la proteína TIMP3 estaba estrechamente relacionado con el promotor del gen TIMP3 isla CpG metilación. Feng HF et al. [25] informó de los mismos resultados en el vaso y JEG-3 líneas de células coriocarcinoma. Por lo tanto, nuestro estudio confirma que el promotor del gen TIMP3 la isla CpG metilación fue la razón principal para la expresión de la proteína TIMP3 reducción en el cáncer gástrico. Estar entre las 58 muestras de cáncer gástrico avanzado, 52 fueron positivos para el promotor TIMP3 la isla CpG metilación y 21 fueron positivos para la expresión de proteínas TIMP3. Este hallazgo sugiere que, aparte de la isla CpG metilación, otros factores tales como la variación genética causada la ausencia de la expresión génica TIMP3. En nuestros experimentos, 34 muestras fueron positivas para la metilación, y no metilación se suelen interpretarse como sigue: puede existir estado de metilación incompleta de genes, y si el tejido tumoral se mezcla con células no tumorales, un producto de PCR positivos para no metilación (por MSP con cebador no metilado) se puede observar. expresión de la proteína TIMP3 de la muestra fue negativa, por lo que estas muestras se define como la metilación positivo.
En China, la tasa de supervivencia a 5 años de los pacientes con carcinoma gástrico es sólo alrededor del 40% después de la resección. El mal pronóstico se asocia con una amplia invasión local y /o la metástasis de ganglios linfáticos regionales [26]. La recidiva local se mantiene como la principal causa de muerte por cáncer después de la resección en pacientes con cáncer gástrico [27]. Por lo tanto, deben establecerse criterios fiables para la predicción de riesgo y la identificación de los tumores para comprender los procesos moleculares y celulares, así como descubrir nuevas dianas moleculares y las posibles terapéuticas [28].
Kerbel [29] informó de que las células tumorales con subclonación potencial metastásico tiene una ventaja de crecimiento en la etapa temprana de focos primaria. La razón de tal ventaja de crecimiento es que la población de células subclón metastásico puede secretar un factor particular o factor de crecimiento celular local, lo que provoca una reacción especial que resulta en el crecimiento selectivo. La detección de los niveles de marcadores moleculares en muestras de tumores primarios puede reflejar las características metastásicas general de todo el tumor. En este grupo, las tasas de metilación fueron sólo 35,9% para los tejidos gástricos normales, 85% y 89,7% para los cánceres tempranos y avanzados, respectivamente, 98,7% para los ganglios linfáticos metastásicos. Constantemente se observó la expresión de proteínas de alta TIMP3 sólo en tejidos normales gástricas. Tempranas y avanzadas de cáncer gástrico mostraron la debilidad de expresión focal, y los ganglios linfáticos metastásicos casi no mostraron expresión positiva. Este hallazgo sugiere que la metilación TIMP3 aumenta con la progresión del tumor y que la expresión de proteínas disminuyó gradualmente. En consecuencia, la ventaja potencial y el crecimiento metastásico de las células aumentó gradualmente, lo que se traduce en la metástasis. Yegnasubramanian et al. [30] informaron de que la metástasis tumoral está relacionada con la metilación TIMP3 en líneas celulares de cáncer de próstata como se reveló por el tiempo real MSP de muestras de 73 pacientes con cáncer de próstata temprano, 91 pacientes con cáncer de próstata metastásico, y 25 casos con tejido prostático. Este resultado implicó una relación entre la metilación CpG y la nivelación y el progreso del cáncer de próstata. TIMP3 gen metilación según los informes, juega un papel importante en el proceso metastásico, y la detección de la metilación CpG TIMP3 tiene algún valor práctico en la predicción del potencial metastásico del tumor primario.
TIMP3 tiene una alta frecuencia de variación genética en muchos tipos de humano tumores malignos, incluyendo mutaciones, deleciones, metilación, translocación cromosómica, y así en [31]. Estas mutaciones dan como resultado la pérdida de la función normal de un gen supresor de tumores, a saber, la inhibición de la proliferación celular (es decir, la inactivación de genes) y están estrechamente relacionados con el desarrollo del cáncer [32]. Sin embargo, se han realizado pocos estudios sobre la modificación genética en el cáncer gástrico TIMP3 primaria, y los resultados de estos estudios muestran resultados discrepantes de una tasa de supresión de genes de baja o ninguna mutación en absoluto. En consecuencia, se han investigado otros mecanismos de inactivación de cáncer gástrico que implican gen TIMP3 [33]. Por lo tanto, la complejidad de la patogénesis del tumor no es sólo un reflejo de cambio genético por mutación o deleción sino también un reflejo de las alteraciones epigenéticas, tales como la metilación del ADN. Declaraciones de un estudio en profundidad de la relación entre la metilación del ADN y la expresión génica, así como su correspondiente mecanismo, se recomienda
porque los resultados pueden guiar el tratamiento clínico del cáncer.
Financiación
se financió el estudio por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30.271.477) y el proyecto patrocinado por la Fundación de Investigación Científica para los estudiosos chinos de Ultramar Repatriados, Ministerio de Educación del Estado (Nº 2002-247). originales presentados archivos
de los autores de las imágenes
a continuación se presentan los enlaces a los archivos presentados originales de los autores de las imágenes. 'archivo original de la figura 1 13000_2013_791_MOESM2_ESM.tiff autores 13000_2013_791_MOESM1_ESM.jpeg Autores archivo original de la figura 2 Competir Grupos de interés Los autores declaran que no tienen intereses en competencia unos con otros.
contribuciones de los autores y
ZG JZ llevó a cabo los exámenes patológicos y PCR, DD y ZG analizaron los datos, y redactó el manuscrito ZG. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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