Promoottori metylaatio ja ilmentyminen TIMP-3 geenin mahasyövän

Promoottori metylaatio ja ilmentyminen TIMP-3 geenin mahasyövässä
tiivistelmä
tausta
mahakarsinoo- kehitys on monivaiheinen prosessi, joka sisältää enemmän kuin yhden geenin. Poikkeava muutoksia DNA: n metylaatio pidetään kolmantena mekanismi, joka johtaa anti-onkogeenin inaktivaation, joka on keskeinen rooli kasvainten kehittymiseen. Tässä tutkimuksessa arvioimme väliset suhteet poikkeava metylaatio promoottorin CpG-saarekkeiden kudoksen estäjä metalloproteinaasi 3 (TIMP-3) -geenin, sen proteiinin ilmentyminen, ja kliinis-mahalaukun adenokarsinooman.
Menetelmät
metylaatiostatuksen promoottorin CpG-saarekkeiden ja proteiinin ilmentymistä TIMP-3-geenin kasvaimia ja viereisten normaali limakalvokudosten 78 mahalaukun adenokarsinoomaa sairastavien potilaiden havaittiin metylaatiospesifistä PCR (MSP) ja immunohistokemia.
tulokset
CpG-saarekkeen metylaation TIMP-3 havaittiin kasvain kudoksissa, syöpä-viereisten kudosten ja imusolmukkeiden metastasiaa. Lisäämisessä järjestyksessä, hypermetylaation taajuus näiden kudosten oli 35,9% (28 78 ei-neoplastiset kudokset), 85% (17 20 alkuvaiheen tapauksista), 89,7% (52 58 progressiivisen vaiheen tapaukset), ja 100% (78 78 metastaattisen imusolmuke). Merkittävä ero välillä todettiin kasvaimia ja ei-neoplastisia kudoksia (P
< 0,05), mutta ei eroa ollut joukossa alaryhmien kasvaimet (P
> 0,05). Immunohistokemia analyysi vahvisti TIMP-3 alassäätöä kasvainkudoksissa. Nopeus TIMP-3-geenin ilmentyminen oli 100% ei-neoplastisia kudoksia mutta ilmeisesti laski eriasteisesti eri vaiheissa, eli laski 30% (6/20) alkuvaiheessa, 3,4% (2/58) klo progressiivinen vaiheessa ja 0% (0/78) metastaattisessa imusolmukkeisiin. Niistä 70 tuumorikudoksista negatiivisin TIMP-3 ilme, 64 (91,4%) oli hypermetyloitunut ja 6 olivat metyloitumattomia (8,6%), mikä osoittaa merkittävää yhdistyksen välillä hypermetylaation ja vähentää tai negatiivinen TIMP-3 lauseke (P
< 0,01).
Johtopäätös
hypermetylaation promoottorialueen CpG saarilla on tärkein mekanismi TIMP-3-geenin ilmentymisen ja voivat tarjota todisteita molekyyli- diagnoosi ja arviointivaiheen mahasyövän.
Virtual dioja
virtuaalinen dioja tähän artikkeli löytyy täältä: http: //www. diagnosticpathol logia. diagnomx. eu /vs /1756134016954958
avainsanat
Mahalaukun adenokarsinooma kudosestäjä Metalloproteinase 3 (TIMP-3) metylointi Background
Mahasyöpää (tai mahalaukun karsinooma) on yksi yleisimmistä pahanlaatuisten maailmassa. Taudin kehitys mahalaukun syöpä on monivaiheinen prosessi, joka sisältää enemmän kuin yhden geenin. Sairaustekijöiden lopulta toimimaan erilaisten geenien eri vaiheissa, aiheuttaen muutoksen geenin rakenteessa ja ekspressiotasoja, jotka johtavat kehitystä mahasyövän. Lakkaa toimimasta anti-onkogeenin voi tapahtua eri kanavien kautta. Lisäksi deleetioita ja mutaatioita, poikkeava muutokset DNA: n metylaatio pidetään kolmas mekanismi johtaa anti-onkogeenin inaktivaation [1, 2], joka on keskeinen rooli kasvaimen kehittymisen. CpG-saarekkeiden, jotka ovat CpG-rikas, jotka sijaitsevat ylävirran promoottorialue taloudenhoito geeni, ovat alueita, jotka sytosiinin metylaatio ei yleensä tapahdu, vaikka stimulaation tietyt tekijät johtaa sen metylointi. Näin ollen, DNA-ilmentyminen inhiboituu tällä alueella [3]. Inaktivoinnin monia kasvaimeen liittyviä geenejä, kuten P16, THBS1, TIMP-3, hMLH1: n, ja MGMT liittyvät metylaatio niiden promoottorialueiden [4-8]. Tissue estäjä metalloproteinaasi-3 (TIMP-3) liittyy kasvainten kehittymiseen, erityisesti antagonisoivaa aktiivisuutta matriksin metalloproteinaasien sekä estämällä kasvaimen kasvua, angiogeneesiä, hyökkäystä, ja etäpesäkkeiden [9].
Tässä työssä olemme havainneet metylointi että TIMP-3-geenin promoottori-CpG-saarekkeen ja proteiinin ilmentyminen normaaleissa mahan limakalvoa kudoksissa, mahasyövän kudoksiin, ja metastaattisen imusolmukkeiden 78 potilaalla on mahasyöpä käyttäen metylaatiospesifistä PCR (MSP) ja immunohistokemia. Olemme tutkineet korrelaatio geenin promoottorin metylaation sen vastaavan proteiinin ilmentymisen ja sitten analysoitiin suhde TIMP-3-geenin CpG-saarekkeen poikkeava metylaatio kehittämiseen, sekä kliinisiä ja patologisia piirteitä, mahalaukun adenokarsinooman.
Materiaalit ja menetelmät
materiaalit
Kaikki 78 tapausta mahan normaalia kudosta, mahasyöpä, ja metastaattinen imusolmukkeiden varmistettiin patologinen diagnoosi. Kasvain näytteet saatiin maaliskuun 1998 toukokuuta 2005 First Affiliated sairaala ja Liaoningin maakunnan Kasvain sairaalan leikkauksesta toipuvien potilaiden mahalaukun syöpä (uros: n
= 54, nainen: n
= 24), joiden keski-ikä 56,2 ± 7,5 vuotta. Niistä saatujen näytteiden, 20 oli varhaisen mahasyöpä, 58 oli edennyt mahasyöpä, 44 olivat erilaistumisen, ja 14 oli erilaistumaton. Tuumorin luokitus perustui International Union syöpää vastaan ​​TNM pysähdyspaikan standardeja, Kirjoittamalla mahasyövän Kasvu Way ja ohjesäännön Staging, ja mahasyövän kirjoittamalla Japanissa [10-12] Kiinasta Medical University Cancer Institute. Hydrokinoni (10 mmol /l) ja natrium- bisulfaatin (3,9 mol /l) ostettiin yhtiöltä Sigma. DNA puhdistusjärjestelmää hankittiin Promega. TIMP-3-vasta-aine ja SP pakki ostettiin Boster Biological Engineering Co, Ltd (Dalian). Kaikki näytteet käsiteltiin ja tehdään nimettömiä mukaan eettisiä ja oikeudellisia normeja. Protokolla hyväksyttiin Medical Ethics komitean Liaoningin maakunnan Kasvaimen Hospital ja Kiinan Medical University.
MSP
MSP menetelmässä [13], metylaasi käsittely suoritettiin normaaleilla ääreisverisoluissa ja käytettiin positiivisina verrokkeina. Käsittelemättömiä soluja käytettiin negatiivisina kontrolleina. Sekvenssit metyloitu (TIMP-3-M) ja metyloimattoman (TIMP-3-U) alukkeet olivat seuraavat: (1) TIMP-3-M alukesekvenssejä, 5'CGTTTCGTTATTTTTTGTTTTTCGGTTTTC-3 'ja 5'-CCGAAAACCCCGCCTCG-3'; ja (2) TIMP-3-U alukesekvenssejä, 5'-TTTTGTTTTGTTATTTTTTGTTTTTGGTTTT-3 'ja 5'-CCCCCCAAAAACCCCACCTCA-3'. PCR-reaktio-olosuhteet olivat seuraavat: 95 ° C alkudenaturaation 5 min, 95 ° C, denaturaatio 30 s (40 sykliä), 59 ° C annealing 60s (40 sykliä), 72 ° C: ssa laajennus 60 (40 sykliä ), ja 72 ° C: ssa laajennus 10 min. Agaroosigeelielektroforeesilla ja EB värjäys suoritettiin sitten. Tiedot geelit kerättiin laserilla tiheys skanneri (Pharmacia LKB Ultroscan) ja tämän jälkeen analysoitiin. Kaikki kokeet toistettiin kolme kertaa, ja keskiarvo käytettiin tilastolliseen analyysiin.
Immunohistokemia
Immunohistokemiaa käytimme streptomycesavidin peroksidaasi värjäysmenetelmällä. Immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Diagnostisena kriteerinä, havainto ruskehtavan keltainen solulimassa värjäyksen jälkeen pidettiin positiivisen tuloksen TIMP-3 ilmaisua. Hallintalaitteiden, normaali kudos alueen värjättiin positiivisena kontrollina, ja normaalin kudoksen osassa käytettiin negatiivisena kontrollina ja värjättiin PBS: sen sijaan, että ensisijainen vasta-aine. Tilanne standardi suoritettiin kuvatun menetelmän Shimizu [14]. Havaitsimme värjäytymisintensiteettiä ja jakelu positiivisten solujen suurennos on suuri; värjäytymistä pisteytettiin 0, heikkoa värjäytymistä mutta huomattavasti vahvempi kuin negatiivinen kontrolli pisteytettiin 1, selkeä tahra on pisteytetään 2, ja vahva tahra on pisteytetään 3. Ei positiivisena kontrollina solun pisteytetään 0. tarvittava määrä positiivisten solujen, toisin sanoen, < 30%, 30% -60%, ja > 60%, pisteytettiin 1, 2, ja 3, vastaavasti. Kokonaispainon tulokset näytteet arvioitiin TIMP-3 ilmaisua. Pistemäärä ≤2 luokiteltiin negatiiviseksi, pisteet 3 oli heikosti positiivinen, pisteet vaihtelee 4-5 oli positiivinen, ja pisteet 6 oli vahvasti positiivinen.
Tilastollinen analyysi
erot TIMP-3 -geenin promoottorin metylaation määrä ja proteiinin ilmentymistä näytteiden havaittiin tilastollisesti analysoidaan χ
2 ja Fisher menetelmillä. Kaikki tiedot analysoitiin SPSS12 tilasto-ohjelmalla.
Tulokset
TIMP-3-geenin promoottori metylointianalyysi
Extracted genominen DNA näyte monistettiin MSP. Koot metyloitu ja metyloitumaton PCR-tuotteet olivat 116 ja 122 bp, vastaavasti. TIMP-3-geenin promoottori metylaatio ilmiö havaittiin yleisesti normaaleissa mahan kudoksissa, mahasyöpä ja imusolmuke etäpesäke näytteitä. Positiivinen havaitseminen hinnat olivat seuraavat: 85% (17/20) varhaisen mahasyövän, 89,7% (52/58) pitkälle mahasyövän, 98,7% (77/78) metastasoineeseen imusolmukkeiden, ja vain 35,9% (28 /78) normaalin mahalaukun kudosta. Merkittävä kasvu TIMP-3-geenin promoottori metylaatio havaittiin kaikissa mahasyövässä ryhmissä (P
< 0,01, kuvio 1 ja taulukko 1), mikä viittaa siihen, että metylointi TIMP-3 geeni voidaan osallistua syövän synnyn ja etäpesäke mahasyövän kasvaimia ja metastaattinen imusolmuke kudoksiin. Kuva 1 Metylaatiospesifinen PCR (MSP): 1, normaali kontrolli (normaali mahan kudos); 2, varhainen mahasyöpä; 3, kehittynyt mahasyöpä; 4, siirto imusolmuke. M, Marker DL2000; m, Metylointi amplifikaatiofragmenttiin; u, unmethylation amplifikaatiofragmenttiin.
Taulukko 1 mahakarsinoo- TIMP-3 promoottori metylaatio ja proteiinin ilmentyminen
organisaatiot
n (%)
TIMP-3 promoottori metylaatio
TIMP-3-proteiini ilmaisu
Positiivinen
Positiivinen
Normaali vatsa
78
28 (35,9)
78 (100,0) B Early mahasyöpä
20
17 (85,0) B 9 (45,0) B Advanced mahasyöpä
58
52 (89,7)
21 (36,2) B imusolmukemetastaaseja
78
77 (98,7)
12 (15,4) B immunohistokemia-analyysi TIMP-3-proteiinin ilmentymisen
TIMP-3-proteiinin ekspressio oli positiivinen kaikissa 78 tapauksissa normaalin mahalaukun kudoksesta (100%). Niistä mahasyöpä tapauksissa 9 20 potilaalla oli positiivinen varhaisen mahasyövän; 11 tapausta olivat negatiivisia (55%), 21 tapausta olivat positiivisia, ja 37 olivat negatiivisia (63,8%) 58 tapauksessa edennyt mahasyöpä; ja 12 tapausta olivat positiivisia ja 66 tapausta olivat negatiivisia (84,6%) 78 metastasoituneen mahalaukun imusolmukkeet. Alentunut TIMP-3 lauseke havaittiin mahasyövän ryhmien todettiin olevan tilastollisesti merkitsevä (P
< 0,01, kuvio 2 ja taulukko 1), mikä viittaa siihen, että TIMP-3-proteiinin ilmentyminen laski mahasyövän kasvaimia ja metastasoitunut imusolmuke kudoksia . Tämä vähensi geenin ekspressio-proteiini voi johtua aikaisemmin havaitusta sisään TIMP-3 metylaatio mahasyövän näytteitä, koska metylaatio tiedetään tukahduttaa proteiinin ilmentymisen. TIMP-3-proteiinin ilmentyminen sijaitsevat pääasiassa solulima normaalin rauhaset. Muutaman solut, pieni määrä ekspressio havaittiin solukalvojen (kuvio 2). Normaalissa mahan limakalvon soluista, ei rauhas rakenne tuhoa havaittiin ja väritys ei merkittävästi vähentää. Varhainen mahasyöpä rauhaset osoitti rakenteellinen vaurio ja heikko syöpäsolun väritys. Kehittynyt mahasyöpä kudosten osoitti laajoja alueita valtava kasvu (erilaistumaton karsinooma), ja lukuun ottamatta yksittäisten solujen, loput värjätty. Kuvio 2 TIMP-3-proteiinin immunohistochemisty (SP 400 x): a, normaali maha kudos; b, varhainen mahasyöpä; c, kehittynyt mahasyöpä; d, siirto imusolmuke.
suhde TIMP-3-geenin promoottorin metylaation ja TIMP-3-proteiinin ilmentymisen
kehittynyt mahasyöpä ryhmä, määrä TIMP-3 metylaatio oli huomattavasti korkeampi kuin lumpish ja sisäkkäisiä kasvava kudosten (100% vs. 77,8%, tässä järjestyksessä; P
< 0,01). TIMP-3 metylaatio kurssi metastaattisessa imusolmukkeet ≥7 kudosryhmässä oli huomattavasti korkeampi kuin < 7 kudosryhmässä (100% vs. 83,3%, tässä järjestyksessä; P
< 0,05). Subserosal ja seröösisiä kudosryhmässä oli huomattavasti korkeampi kuin limakalvon alaista ja myometrium kudosryhmässä (91,3% ja 96,6% vs. 50%, vastaavasti; P
< 0,05). Lisääntynyt TIMP-3-geenin metylaatio oli yleisesti havaittiin diffuusi kaltainen kasvu, imusolmukemetastaaseja (≥7), ja subserosal ja seröösisiä kasvaimia, mikä tarkoittaa, että mitään suhdetta välillä ollut TIMP-3-geenin metylaatio ja kasvaimen kokoa, makroskooppinen tyyppi, ja histologinen tyyppi. Positiivinen nopeus on 58 tapausta edennyt mahasyöpä kudoksiin oli 36,2% (21). TIMP-3-proteiinin ekspressio massiivinen ja sisäkkäin kasvaa kudoksiin oli merkittävästi korkeampi kuin hajanainen kaltainen kasvu kudoksissa (55,6% vs.19.4%, vastaavasti, P
< 0,01). TIMP-3-proteiinin ekspressio metastaattisen imusolmuke ≥7 kudoksissa oli huomattavasti korkeampi kuin < 7 kudoksen (47,2% vs. 18,2%, vastaavasti, P
< 0,05) (taulukko 2). Nämä tulokset viittaavat siihen, vähentynyt TIMP-3-proteiinin ilmentyminen oli yleisempää diffuusi kaltainen kasvun ja imusolmuke metastaattinen (≥7) kasvaimia, mutta vähensi ilmentymistä ei liity kasvaimen kokoa, brutto tyyppi, histologinen tyyppi, ja syvyys invasion.Table 2 suhde edennyt mahasyöpä patologian TIMP-3 metylaatio ja sen ekspressiotaso
Index
n
TIMP-3 promoottori metylaatio
TIMP-3-proteiinin kasvaimen koko

Tuumorin koko (cm) B < 5
5
3 (60,0) B 1 (20,0) B 5 - 10
45
42 (93,3)
18 (40,0) B > 10
8
7 (87,5) B 2 (25,0) B Yleinen tyypit
Borr.2
12
10 (83,3 )
4 (33,3) B Borr.3
37
33 (89,2)
15 (40,5) B Borr.4
9
9 (100,0)
2 (22,2)
Histologinen erilaistuminen
Differentiated
44
39 (88,6)
17 (38,6) B eriyttämätön
14
13 (92,9)
4 (28,6) B Growth kuvio
Möhkäleitä + sisäkkäin
27
21 (77,8)
15 (55,6) B Diffuusi kaltainen
31
31 (100,0 ) b
6 (19,4) b
Imusolmuke etäpesäke
< 7
36
30 (83,3)
17 (47,2) b ≥7
22
22 (100,0)
4 (18,2)
soluttautuminen
Submukosaalinen muscularis
6
3 (50,0) B 1 (16,7) B Subserosal
23
21 (91,3)
9 (39,1) B herakalvojen
29
28 (96,6)
11 (37,9)
aP
< 0,05 BP
< 0.01.
Keskustelu
muodostuminen maligniteetin on monitekijäinen ja tapahtuu useissa vaiheissa. Biologiset ominaisuudet pahanlaatuisia kasvaimia ovat invasiivisia kasvua ja etäpesäkkeiden. Mekanismia kasvaimen kehittymisen liittyy epänormaali muutoksia geenien rakenne ja toiminta sisätilojen solun. Modernit teoreetikot katsovat, että prosessi kasvaimen muodostumisen käsittää kaksi päämekanismia: ensimmäinen on geneettisellä tasolla, eli geenin mutaatio aiheuttaa DNA-nukleotidisekvenssin muutokset; ja toinen on epigeneettisenä tasolla. Aiemmat tutkimukset ovat keskittyneet muutoksia geenien ilmentyminen, jotka periytyvät kautta meioosi eikä niihin liity muutosta DNA-sekvenssin, mutta vaikuttavat ilmaisun ja geenin säätötoiminnassa DNA, pääasiassa kemiallisesti muuntamalla. Tämä mekanismi on saamassa yhä enemmän huomiota tutkijoiden kasvaimen muodostumisen prosessien [15, 16].
DNA: ssa kasvaimen kudokset, abberant metylaatioita usein havaittu geenin promoottori alueilla, mukaan lukien hypometylaatio onkogeenin. Tämä geeni liittyy läheisesti solujen lisääntymisen kierron ja hypermetylaation kasvaimen synnyssä. Nämä epänormaalit metylaatiomuutokset voi aktivoida onkogeenien [17-19] ja estävät mRNA transkriptio tuumorisuppressorigeeneille [20], joka johtaa geenin toiminnan. Poikkeava metylaatio DNA tapahtuu läsnäolon kautta korkeasti metyloitu CpG saaria 5 'päähän promoottorin valvonnan alueella. TIMP perhe on neljä proteiinia jäsentä: TIMP-1, 2, 3, ja 4. TIMP-1, 2, ja 4 ovat liukoisia erittyviä proteiineja. Sitä vastoin, TIMP-3 on ei-liukoinen proteiini, joka yhdistyy soluväliaineen, sijaitsee ulomman solukalvon [21], ja se voidaan liittyy läheisesti basilaarisen kalvo. Funktio TIMP on esto tuumorinekroositekijä-α (TNF-α) -converting entsyymejä ja induktio ohjelmoidun solukuoleman kautta vakaa solun pinnan TNF-α-reseptorin [22]. Apoptoosin kautta TIMP tapahtuu kahta reittiä: MMP riippuvainen ja riippumaton. Vaikka TIMP-3 ja 4 on suuri affiniteetti MMP-2, proteiinit estävät tehokkaasti MT1-MMP, siten aktivoimaan MMP-2 -tsymogeeni prosessi ja inhiboimaan kasvainsolujen kasvua ja etäpesäkkeitä. Smith et ai. [23] havaitsivat, että ilmentyminen TIMP-3: ihmisen paksusuolen syövän solulinjat ovat harvinaisia ​​mitoosin. Useimmat solut pidätettiin G1 vaiheessa, vaikka sovellus TNF-α-vasta pienenee mitoosi pidättäneet 70%.
Tutkitaan suhdetta TIMP-3 ja mahasyövän sekä sen mekanismi mahan inaktivaatioon, havaitsimme TIMP-3-geenin 5 'CpG-saarekkeen hypermetylaation normaaleissa mahan limakalvoa, mahasyöpä, ja metastaattinen imusolmukkeiden. Huomasimme, että > 85% kaikista mahasyövän kudoksia, TIMP-3-geenin 5 'CpG-saarekkeen näytteillä poikkeava metylaatio, joka oli merkitsevästi suurempi (P
< 0,01) kuin normaali mahalaukun kudoksesta ryhmä, joka merkitsi sitä, että TIMP-3 geenin promoottori-CpG-saarekkeen metylaation pienentää TIMP-3-geenin ilmentyminen ja oli siten tärkein tuumorisuppressori inaktivaatiota mekanismi mahasyövässä. Gagnon et ai. [24] ilmoitti, että kaikissa MCF-7 keuhkosyövän solulinjoja TIMP-3 mRNA: n ilmentymisen menetyksen ja TIMP-3-geenin promoottori-CpG-saarekkeen metylaation, demetylaatio indusoitiin 5-AZA-CdR. TIMP-3 ilmentyminen ennen ja jälkeen 5-AZA-CdR induktio määritettiin RT-PCR: llä, joka osoitti, että demetylaatio johti TIMP-3-geeni uudelleen ilmentymisen, vastaa meidän tuloksia.
Tässä tutkimuksessa kaikki 78 tapauksissa normaalin mahalaukun kudoksesta oli positiivisia TIMP-3-proteiinin ilmentymisen. Näistä 78 tapausta, vain 28 (35,9%) oli positiivinen metylaation. Niistä 20: llä aikaisin mahalaukun syöpä, 9 oli positiivisia TIMP-3-proteiinin ilmentymisen ja 17 (85%) oli positiivinen metylaation. Niistä 58 tapausta edennyt mahasyöpä, 21 oli positiivisia TIMP-3-proteiinin ilmentymisen ja 52 (89,7%) oli positiivinen metylaation. Niistä 78 tapausta Etäpesäkkeisen imusolmukkeiden, 12 oli positiivisia TIMP-3-proteiinin ilmentymisen ja 77 tapausta (98,7%) oli positiivinen metylaation. Lisääntynyt metylaatio oli merkittävä joukossa alussa syöpä, pitkälle edennyt syöpä, ja metastasoitunut imusolmuke näytteitä verrattuna normaaliin kudosnäytteistä (P
< 0,01), mikä vahvistaa, että menetys TIMP-3-proteiinin ilmentyminen liittyi läheisesti TIMP-3-geenin promoottori CpG-saarekkeen metylaatio. Feng HF et ai. [25] ilmoitetaan samat tulokset JAR ja JEG-3 choriocarcinoma solulinjoissa. Siksi tutkimuksemme vahvisti, että TIMP-3-geenin promoottori-CpG-saarekkeen metylaation oli tärkein syy alennetun TIMP-3-proteiinin ilmentymistä mahasyövässä.
Joukossa 58 kehittyneet mahasyövän näytteitä, 52 oli positiivisia TIMP-3 promoottori CpG-saarekkeen metylaation ja 21 olivat positiivisia for TIMP-3-proteiinin ilmentymisen. Tämä havainto viittasi siihen, että lisäksi CpG-saarekkeen metylaation, muut tekijät, kuten geneettinen vaihtelu aiheutti puuttuessa TIMP-3-geenin ilmentymisen. Meidän kokeissa 34 näytettä oli positiivisia metylaation, ja unmethylation on yleensä tulkitaan seuraavasti: epätäydellinen metylaatiostatuksen geenejä voi olla olemassa, ja jos kasvain kudos sekoitetaan ei-kasvainsoluja, positiivinen PCR-tuote unmethylation (MSP kanssa metyloitumaton pohjamaali) voidaan havaita. TIMP-3-proteiinin ilmentyminen näytteen oli negatiivinen, niin nämä näytteet määriteltiin metylointi positiivinen.
Kiinassa 5 vuoden eloonjäämisaste mahakarsinooman potilaista on vain noin 40%, kun resektion. Köyhät ennuste liittyy laaja paikallinen invaasio ja /tai alueellisen imusolmuke etäpesäke [26]. Paikallinen uusiutuminen on edelleen keskeinen syy syöpään liittyvien kuolemien jälkeen resektio mahalaukun syöpäpotilailla [27]. Siksi luotettava kriteerit ennustamiseen toistumisen ja tunnistaminen kasvaimia on perustettava ymmärtää molekyyli- ja solutason prosesseja, sekä löytää uusia ja mahdollisia terapeuttisia molekyylikohteista [28].
Kerbel [29] ilmoitti, että alakloonauksessa kasvainsolujen metastaattinen potentiaali on kasvua etu alkuvaiheessa ensisijainen pesäkkeitä. Syy tällaiseen kasvun etu on, että metastaattinen subkloonista solupopulaatio voi erittää tietyn tekijän tai paikallisen solun kasvutekijä, mikä aiheuttaa erityinen reaktio, joka johtaa selektiivisen kasvun. Havaitseminen molekulaarinen merkkiaine tasojen primaarikasvaimen yksilöitä voidaan heijastaa yleistä metastaattisen ominaisuudet koko kasvain. Tässä ryhmässä metylointi hinnat olivat vain 35,9% normaalin mahan kudoksissa, 85% ja 89,7% varhaiseksi ja kehittyneitä syöpiä, vastaavasti 98,7% metastasoineeseen imusolmukkeet. Tasaisen korkea TIMP-3-proteiinin ilmentymistä havaittiin vain normaaleissa mahan kudoksissa. Varhainen ja kehittynyt mahasyövistä näytteillä polttoväli heikko ilmaisu, ja metastaattinen imusolmukkeiden osoittivat lähes mitään positiivista ilmaisua. Tämä havainto viittasi siihen, että TIMP-3 metylaatio kasvoi kasvainprogression ja että proteiinin ilmentyminen vähitellen. Näin ollen metastaattista potentiaalia ja kasvuetua solujen vähitellen kasvanut, mikä johtaa lopulta etäpesäkkeitä. Yegnasubramanian et ai. [30] ilmoitetaan, että kasvaimen etäpesäke liittyi TIMP-3 metylaation eturauhassyövän solulinjoissa kuin paljasti reaaliaikaisen MSP näytteitä 73 potilaasta, joilla varhaisvaiheen eturauhassyöpä, 91 Metastasoivassa eturauhassyöpä, ja 25 tapausta, joissa eturauhasen kudosta. Tämä tulos merkitsi suhde CpG metylaation ja arvosteluasteikko ja etenemistä eturauhassyöpää. TIMP-3-geenin metylaatio kuulemma tärkeä rooli metastaattisen prosessin ja havaitseminen TIMP-3 CpG metylaation on käytännön arvoa ennustaa metastaattisen potentiaalin primaarikasvaimen.
TIMP-3 on tiheä geneettistä vaihtelua monenlaisia ​​ihmisen pahanlaatuisia kasvaimia, mukaan lukien mutaatiot, deleetiot, metylaatio, kromosomaalinen translokaatio, ja niin edelleen. [31] Nämä mutaatiot johtavat menetys normaalia toimintaa kasvainsuppressorigeenin, nimittäin soluproliferaation inhibointi (eli geenin inaktivointi) ja läheisesti liittyvät syövän kehittymiseen [32]. Kuitenkin vain harvat tutkimukset on suoritettu TIMP-3 Geenimuunnoksen perusterveydenhuollossa mahasyövän, ja näiden tutkimusten tulokset osoittavat poikkeavia johtuu vähäisestä geenideleetio- nopeudella mitään mutaatiota lainkaan. Näin ollen muut inaktivointi mekanismeja mahasyövän liittyy TIMP-3-geeni on tutkittu [33]. Siten monimutkaisuus kasvain synnyssä ei ole vain heijastus geneettinen muutos mutaatio tai deleetio, mutta myös heijastus epigeneettiset muutokset, kuten DNA: n metylaatio. Perusteellinen tutkimus suhdetta DNA metylaatio ja geenien ilmentymisen, sekä sen vastaava mekanismi, on suositeltavaa, koska tuloksia voidaan ohjata kliininen syövän hoidossa.
Julistukset
Rahoitus
Tutkimuksen rahoittivat National Natural Science Foundation of China (nro 30271477) ja hankkeen Sponsored by tieteellisen tutkimuksen säätiön Palautetut Overseas Kiinan Scholars, State Opetusministeriö (nro 2002-247).
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 13000_2013_791_MOESM1_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 13000_2013_791_MOESM2_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 Kilpailevat kiinnostusta
Kirjoittajat täten ilmoittavat, että ne eivät ole kilpailevia intressejä keskenään.
Tekijät osuudet
ZG ja JZ suorittaa patologisen ja PCR tutkimukset, DD ja ZG analysoi datan, ja ZG laadittu käsikirjoitus. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Vertailu endoskoopeille submukosaalisen leikkely (ESD) ja radikaaleja varhaisen mahasyövän: retrospektiivinen tutkimus
• Korrelaatio hK6 ilmaisutapoja kasvaimen uusiutumisen ja ennusteeseen edenneen mahasyövän cancer