Promotor methylering og ekspressionen af ​​TIMP3 genet i gastrisk cancer

Promoter methylering og ekspressionen af ​​TIMP3 gen i mavekræft
Abstract
Baggrund
Gastric carcinom udvikling er en multi-trins proces, der involverer mere end ét gen. Afvigende ændringer i DNA-methylering betragtes som den tredje mekanisme, der fører til anti-onkogen inaktivering, som spiller en væsentlig rolle i tumorudvikling. I denne undersøgelse vurderede vi forholdet mellem den afvigende methylering af promotor CpG-øer væv inhibitor af metalloproteinase 3 (TIMP3) genet, dets proteinekspression, og de klinisk-patologiske træk ved gastrisk adenocarcinom. Salg Metoder
status for methylering af promoter CpG øer og protein ekspressionen af ​​TIMP3 gen i tumorer og tilstødende normale slimhinde væv af 78 patienter med gastrisk adenocarcinom blev opdaget af methylering-specifik PCR (MSP) og immunhistokemi.
Resultater
CpG ø methylering af TIMP3 blev detekteret i tumorvæv, kræft-tilstødende væv og lymfeknuder med metastase. I stigende orden, hypermethyleringen hyppigheden af ​​disse væv var 35,9% (28 af 78 ikke-neoplastiske væv), 85% (17 af 20 tidlige fase tilfælde), 89,7% (52 af 58 progressive-trins tilfælde), og 100% (78 ud af 78 metastatisk lymfeknude). En markant forskel blev fundet mellem tumorer og ikke neoplastiske væv (P
< 0,05), men ingen forskel fandtes blandt undergrupperne af tumorer (P
&0,05). Immunhistokemi analyse bekræftede TIMP3 nedregulering i tumorvæv. Hastigheden for TIMP3 genekspression var 100% i ikke neoplastiske væv men tilsyneladende faldt i forskellig udstrækning på forskellige stadier, dvs. faldt til 30% (6/20) på det tidlige stadium, til 3,4% (2/58) på progressive fase, og til 0% (0/78) i metastatiske lymfeknuder. Blandt de 70 tumorvæv med negativ TIMP3 udtryk, 64 (91,4%) var hypermethyleret og 6 var umethyleret (8,6%), hvilket indikerer en signifikant sammenhæng mellem hypermethylering og reduceret eller negativ TIMP3 udtryk (P
< 0,01).
Konklusion
hypermethylering af promotor-regionen i CpG øer er den vigtigste mekanisme TIMP3 genekspression og kan bevis for den molekylære diagnose og stadie evaluering af mavekræft.
Virtuelle slides
den virtuelle slides for dette artiklen kan findes her: http:... //www diagnosticpathol nologi diagnomx eu /vs /1756134016954958
Emneord
gastrisk adenocarcinom Tissue Inhibitor af metalloproteinase 3 (TIMP3) Methylering Baggrund
gastrisk kræft (eller gastrisk karcinom) er en af ​​de mest almindelige maligne sygdomme i verden. sygdomsudvikling i gastrisk cancer er en flertrinsproces, der involverer mere end et gen. Sygdomstilstande faktorer i sidste ende virker på forskellige gener på forskellige stadier, der forårsager en ændring i gen struktur og ekspressionsniveauer, der fører til udviklingen af ​​gastrisk carcinogenese. Tab af funktion af et anti-onkogen kan forekomme via forskellige kanaler. Foruden deletioner og mutationer, er afvigende ændringer i DNA-methylering betragtes som den tredje mekanisme, der fører til anti-onkogen inaktivering [1, 2], som spiller en væsentlig rolle i tumorudvikling. CpG øer, som er CpG-rige sekvenser beliggende i den opstrøms promotor-regionen i en husholdning gen, er regioner, hvor cytosin methylering ikke generelt opstår, selv om stimulering af visse faktorer fører til dets methylering. Følgelig er DNA-ekspression inhiberes i denne region [3]. Inaktivering af mange tumorassocierede gener, såsom P16, THBS1, TIMP3, hMLH1, og MGMT er relateret til methylering af deres respektive promotorregioner [4-8]. Tissue inhibitor af metalloproteinase-3 (TIMP3) er relateret til tumorudvikling, specielt antagonisere aktiviteten af ​​matrixmetalloproteinaser samt inhibering af tumorvækst, angiogenese, invasion og metastase [9].
I dette arbejde, vi har registreret methyleringen af TIMP3 genpromotoren CpG øen og proteinekspression i normale gastriske mucosa væv, gastrisk cancer væv og metastatiske lymfeknuder fra 78 patienter med gastrisk cancer under anvendelse methylering-specifik PCR (MSP) og immunhistokemi. Vi udforsket sammenhængen af ​​gen promotor methylering med dens tilsvarende protein-ekspression og derefter analyseret forholdet mellem TIMP3 gen CpG ø unormal methylering med udvikling, samt kliniske og patologiske træk, af gastrisk adenocarcinom.
Materialer og metoder
Materialer
Alle 78 tilfælde af gastrisk normalt væv, gastrisk karcinom, og metastatisk lymfeknuder blev verificeret ved patologisk diagnose. De tumor prøver blev opnået fra marts 1998 til maj 2005 på First Affiliated Hospital og Liaoning Provincial Tumor Hospital fra postoperative patienter med mavekræft (mand: n
= 54; kvinde: n
= 24) med en gennemsnitsalder af 56,2 ± 7,5 år. Blandt prøverne opnåede, 20 var af tidlig mavekræft, 58 var af fremskreden mavekræft, 44 var af differentiering, og 14 var udifferentierede. Tumor iscenesættelse var baseret på de Internationale Union Against Cancer TNM mellemstationer standarder, Typing af mavekræft Vækst Way og statut Iscenesættelse, og gastrisk cancer skrive i Japan [10-12] fra Kina Medical University Cancer Institute. Hydroquinon (10 mmol /l) og natriumbisulfat (3,9 mol /L) blev indkøbt fra Sigma. En DNA Clean-up system blev købt fra Promega. TIMP3 antistof og SP-kit blev købt fra Boster biologiske Engineering Co, Ltd (Dalian). Alle prøver blev håndteret og anonymiseres i henhold til de etiske og juridiske standarder. Protokollen blev godkendt af Medical Ethics Committee of Liaoning-provinsen Tumor Hospital og Kina Medical University.
MSP Salg In MSP-metoden [13], blev methylase behandling udført på normale perifere blodceller og bruges som positive kontroller. Ubehandlede celler blev anvendt som negative kontroller. Sekvenserne af methylerede (TIMP3-M) og umethylerede (TIMP3-U) primere var som følger: (1) TIMP3-M primersekvenser, 5'CGTTTCGTTATTTTTTGTTTTTCGGTTTTC-3 'og 5'-CCGAAAACCCCGCCTCG-3'; og (2) TIMP3-U primersekvenser, 5'-TTTTGTTTTGTTATTTTTTGTTTTTGGTTTT-3 'og 5'-CCCCCCAAAAACCCCACCTCA-3'. PCR-reaktionen var som følger: 95 ° C indledende denaturering i 5 min, 95 ° C, denaturering i 30 s (40 cyklusser), 59 ° C annealing i 60s (40 cyklusser), 72 ° C forlængelse i 60s (40 cyklusser ), og 72 ° C forlængelse i 10 minutter. Agarosegelelektroforese og EB-farvning blev dernæst udført. Data fra gelerne blev opsamlet med en laser densitet scanner (Pharmacia LKB Ultroscan) og efterfølgende analyseret. Alle forsøg blev gentaget tre gange, og den gennemsnitlige værdi blev anvendt til statistisk analyse.
Immunhistokemi
For immunhistokemi, vi brugte streptomycesavidin-peroxidase farvning metode. Immunhistokemisk farvning blev udført ifølge producentens anvisninger. Som et diagnostisk kriterium, blev observation af en brunlig gul cytoplasma efter farvning betragtes et positivt resultat for TIMP3 udtryk. For kontrollerne, blev en normal vævsområde farvet som den positive kontrol, og en normal vævssnit blev anvendt som negativ kontrol og farvet med PBS i stedet for et primært antistof. Scoring standard blev udført ifølge fremgangsmåden beskrevet af Shimizu [14] metode. Vi observerede farvning intensitet og fordeling af positive celler ved stor forstørrelse; ingen farvning blev scoret som 0, svag farvning men betydeligt stærkere end den negative kontrol blev scoret som en, der er en klar plet scoret som 2, og en stærk plet er scoret som 3. Ingen positiv kontrol celle scoret som 0. Det krævede antal af positive celler, dvs., < 30%, 30% -60%, og > 60%, blev bedømt som 1, 2, og 3, henholdsvis. Baseret på de totale scorer blev prøverne vurderet for TIMP3 ekspression. En score på ≤2 blev klassificeret som negativ, en score på 3 var svagt positiv, en score mellem 4 og 5 blev positiv, og en score på 6 var stærkt positiv.
Statistisk analyse
Forskellene blandt TIMP3 genpromotor methylering sats og proteinekspression af prøverne blev detekteret og analyseret statistisk ved ×
2 og Fisher metoder. Alle data blev analyseret med SPSS12 statistisk software.
Resultater
TIMP3 gen promoter methylering analyser
Udvundet genomisk DNA fra prøven blev forstærket af MSP. Størrelserne af de methylerede og ikke-methylerede PCR-produkter var 116 og 122 bp. TIMP3 genpromotor methylering fænomen blev generelt observeret i normale gastriske væv, gastrisk karcinom og lymfeknudemetastase prøver. De positive afsløring satser var som følger: 85% (17/20) for tidlig mavekræft, 89,7% (52/58) til avanceret gastrisk kræft, 98,7% (77/78) for metastatiske lymfeknuder, og kun 35,9% (28 /78) til den normale gastriske væv. En betydelig stigning i TIMP3 genpromotor methylering blev observeret i alle gastrisk cancer grupper (P
< 0,01; figur 1 og tabel 1), hvilket antyder, at methylering af TIMP3 genet kan være involveret i carcinogenese og metastase af gastriske cancertumorer og metastatiske lymfeknudevæv. Figur 1 Methylering-specifik PCR (MSP): 1, normal kontrol (normal gastrisk væv); 2, tidlig gastrisk cancer; 3, avanceret gastrisk kræft; 4, overførsel af lymfeknude. M, Marker DL2000; m, Methylering amplificering fragment; u, unmethylation forstærkning fragment.
Tabel 1 Gastric carcinom TIMP3 promotor methylering og proteinekspression
Organisationer
n (%)
TIMP3 promotor methylering
TIMP3 protein udtryk
Positiv
Positiv
Normal mave
78
28 (35,9)
78 (100,0)
Tidlig mavekræft
20
17 (85,0)
9 (45,0)
Avanceret mavekræft
58
52 (89,7)
21 (36,2)
lymfeknudemetastaser
78
77 (98,7)
12 (15,4)
Immunhistokemi analyse af TIMP3 proteinekspression
TIMP3 proteinekspression var positiv i alle 78 tilfælde af normal gastrisk væv (100%). Blandt de gastrisk karcinom sager, 9 i 20 patienter var positive for tidlig mavekræft; 11 sager var negative (55%), 21 tilfælde var positive, og 37 var negative (63,8%) i 58 tilfælde af fremskreden mavekræft; og 12 tilfælde var positive og 66 tilfælde var negative (84,6%) i 78 patienter med metastatisk gastrisk lymfeknuder. Den reducerede TIMP3 ekspression, der blev observeret i de gastrisk cancer grupper blev fundet at være statistisk signifikant (P
< 0,01, figur 2 og tabel 1), hvilket antyder, at TIMP3 proteinekspression faldt i gastrisk cancer tumorer og metastatiske lymfeknudevæv . Denne reducerede ekspression af genet protein kan skyldes den tidligere observerede stigning i TIMP3 methylering i gastrisk cancer prøver, fordi methylering er kendt for at undertrykke proteinekspression. TIMP3 proteinekspression blev hovedsageligt placeret i cytoplasmaet af normale kirtler. I nogle få celler, blev en lille mængde af ekspression findes i cellemembranerne (figur 2). I de normale gastriske slimhindeceller, blev der ikke glandulær struktur ødelæggelse observeret og farve blev ikke signifikant reduceret. De tidlige mavekræft kirtler viste strukturelle skader og svage cancercellelinie farve. De avancerede mavekræft væv viste store områder med massiv vækst (udifferentierede karcinom), og bortset fra de enkelte celler, blev resten farvet. Figur 2 TIMP3 protein immunohistochemisty (SP 400 ×): a, normal gastrisk væv; b, tidlig gastrisk cancer; c, avanceret gastrisk kræft; d, overførsel af lymfeknude.
Forholdet mellem TIMP3 gen promoter methylering og TIMP3 proteinekspression
I den avancerede mavekræft gruppe, satsen for TIMP3 methylering var betydeligt højere end de lumpish og indlejrede voksende væv (100% vs. 77,8%, henholdsvis; P
< 0,01). Den methylering rate TIMP3 i metastatiske lymfeknuder i ≥7 væv gruppen var signifikant højere end den < 7 væv (100% vs. 83,3%, henholdsvis; P
< 0,05). Den subserosal og serosale væv-gruppen var signifikant højere end det submukøse og myometrium væv gruppe (91,3% og 96,6% versus 50%, henholdsvis; P
< 0,05). Øget methylering rate TIMP3 genet blev generelt observeret i diffust-lignende vækst, lymfeknudemetastaser (≥ 7), og subserosal og serøse tumorer, hvilket indebærer, at ingen sammenhæng var mellem TIMP3 gen methylering og tumorstørrelse, makroskopisk type, og histologisk type. Den positive rate af de 58 tilfælde af fremskreden ventrikelkræft væv var 36,2% (21). TIMP3 proteinekspression i massive og indlejret voksende væv var signifikant højere end for diffuse-lignende vækst væv (55,6% vs.19.4%, henholdsvis; P
< 0,01). TIMP3 proteinekspression i metastatisk lymfeknude ≥ 7 væv var betydeligt højere end den < 7 væv (47,2% vs. 18,2%, henholdsvis; P
< 0,05) (Tabel 2). Disse resultater antydede, at faldet TIMP3 proteinekspression sats var mere almindelig i diffust-lignende vækst og lymfeknude metastatisk (≥7) tumorer, men reduceret ekspression var ikke relateret til tumorstørrelse, grov type, histologisk type, og dybden af ​​invasion.Table 2 forholdet mellem fremskreden mavekræft patologi TIMP3 methylering og protein udtryk niveau
Index
n
TIMP3 promotor methylering
TIMP3 protein tumorstørrelse

Tumor størrelse (cm)
< 5
5
3 (60,0)
1 (20,0)
5 - 10
45
42 (93,3)
18 (40,0)
> 10
8
7 (87,5)
2 (25,0)
generelle typer
Borr.2
12
10 (83,3 )
4 (33,3)
Borr.3
37
33 (89,2)
15 (40,5)
Borr.4
9
9 (100,0)
2 (22,2)
Histologisk differentiering
Differentieret
44
39 (88,6)
17 (38,6)
Udifferentieret
14
13 (92,9)
4 (28,6)
vækst mønster
Klumper + indlejrede
27
21 (77,8)
15 (55,6)
diffus-lignende
31
31 (100,0 ) b
6 (19,4) b
Lymfeknude metastaser
< 7
36
30 (83,3)
17 (47,2)
≥7
22
22 (100,0) en
4 (18.2) et
Infiltration
Submukøs muscularis
6
3 (50,0)
1 (16,7)
Subserosal
23
21 (91,3) en
9 (39,1)
serosa
29
28 (96,6)
11 (37,9)
aP
< 0,05, BP
< 0.01.
Diskussion
Dannelsen af ​​malignitet skyldes mange faktorer og forekommer i flere stadier. Biologiske karakteristika maligne tumorer indbefatter invasiv vækst og metastase. Mekanismen bag tumorudvikling involverer unormale ændringer i genstruktur og funktion i det indre af cellen. Moderne doktrin er processen med tumordannelse omfatter to større mekanismer: den første er på det genetiske niveau, dvs. genmutation forårsager DNA nukleotidsekvensændringer; og den anden er på den epigenetiske niveau. Tidligere undersøgelser har fokuseret på ændringer i genekspression, der er nedarvet gennem meiose og ikke involverer en ændring i DNA-sekvens, men påvirker udtryk og gen regulerende funktion af DNA, hovedsagelig ved kemisk modifikation. Denne mekanisme er at få øget opmærksomhed fra forskere tumordannelsesmekanisme processer [15, 16].
I DNA tumorvæv, er abberant methyleringer ofte observeret i gen-promotorregioner, herunder hypometylering i onkogen. Dette gen er nært beslægtet med celledeling cyklus og hypermethylering i tumorsuppressorgener. Disse unormale methylering ændringer kan aktivere oncogener [17-19] og inhibere mRNA-transkription af tumorsuppressorgener [20], hvilket fører til gen-inaktivering. Aberrant methylering i DNA sker gennem tilstedeværelsen af ​​stærkt methylerede CpG-øer i 5'-enden af ​​en promotor kontrolregion. TIMP familien har fire protein medlemmer: TIMP-1, 2, 3, og 4. TIMP-1, 2, og 4 er opløselige sekretoriske proteiner. Derimod TIMP-3 er et ikke-opløseligt protein, der kombinerer med den ekstracellulære matrix, er beliggende i den ydre cellemembran [21], og kan være tæt forbundet med basilarmembranen. Funktionen af ​​TIMP'er er inhiberingen af ​​tumornekrosefaktor-α (TNF-α) -converting enzymer og induktion af programmeret celledød gennem den stabile celleoverflade TNF-α-receptor [22]. Induktionen af ​​apoptose gennem TIMP sker ved to veje: MMP afhængige og uafhængige. Selvom TIMP-3 og 4 har en høj affinitet for MMP-2, proteinerne effektivt at hæmme MT1-MMP, hvorved aktivering af MMP-2 zymogen proces og inhibering af tumorcellevækst og metastase. Smith et al. [23] fandt, at ekspression af TIMP-3 i humane coloncancer-cellelinjer er sjældne i mitose. De fleste celler er anholdt i G1 fasen, selv om anvendelsen af ​​TNF-α-antistof falder mitosestandsning med 70%.
At udforske forholdet mellem TIMP3 og mavekræft, samt dens mekanisme i gastrisk inaktivering, vi har registreret TIMP3 gen 5'CpG island hypermethylering i normal gastrisk mucosa, gastrisk karcinom, og metastatiske lymfeknuder. Vi fandt, at i > 5 'CpG ø 85% af alle mavekræft væv, TIMP3 gen udviste afvigende methylering, der var signifikant højere (P
< 0,01) end den normale gastriske væv gruppe, der indebar, at TIMP3 gen promoter CpG ø methylering reduceret TIMP3 genekspression og var således den største tumor suppressor-inaktivering mekanisme mavekræft. Gagnon et al. [24] rapporterede, at i alle MCF-7 lung cancer cellelinjer med TIMP3 mRNA-ekspression tab og TIMP3 genpromotor CpG ø metylering, blev demethylering induceret af 5-aza-CdR. TIMP3 ekspression før og efter 5-aza-CdR induktion blev bestemt ved RT-PCR, som viste, at demethylering resulterede i TIMP3 gen re-ekspression, i overensstemmelse med vores resultater.
I den foreliggende undersøgelse, alle 78 tilfælde af normalt gastrisk væv var positive for TIMP3 proteinekspression. Blandt disse 78 sager, kun 28 (35,9%) var positive for methylering. Blandt de 20 patienter med tidlig mavekræft, 9 var positive for TIMP3 proteinekspression og 17 (85%) var positive for methylering. Blandt de 58 tilfælde af fremskreden mavekræft, 21 var positive for TIMP3 proteinekspression og 52 (89,7%) var positive for methylering. Blandt de 78 tilfælde af metastatiske lymfeknuder, 12 var positive for TIMP3 protein-ekspression og 77 tilfælde (98,7%) var positive for methylering. Øget methylering sats var signifikant blandt de tidlige kræft, fremskreden kræft, og metastatisk lymfeknude prøver sammenlignet med normale vævsprøver (P
< 0,01), hvilket bekræfter, at tabet af TIMP3 proteinekspression blev tæt knyttet til TIMP3 gen promoter CpG island methylering. Feng HF et al. [25] rapporterede de samme resultater i JAR og JEG-3 choriocarcinom cellelinier. Derfor er vores undersøgelse bekræftede, at TIMP3 gen promoter CpG ø methylering var hovedårsagen til den reducerede TIMP3 proteinekspression i mavekræft.
Blandt de 58 avancerede mavekræft prøver, 52 var positive for TIMP3 promoter CpG ø methylering og 21 var positive for TIMP3 proteinekspression. Dette fund antydede, at bortset fra CpG ø methylering, andre faktorer såsom genetisk variation forårsaget fraværet af TIMP3 genekspression. I vores eksperimenter, 34 prøver var positive for methylering, og unmethylation blev normalt fortolkes som følger: ufuldstændig methylering status gener kan eksistere, og hvis tumorvævet er blandet med ikke-tumorceller, en positiv PCR-produkt for unmethylation (ved MSP med umethyleret primer) kan observeres. TIMP3 proteinekspression af prøven var negativ, så disse prøver blev defineret som methylering positiv.
I Kina, 5-års overlevelse på gastrisk karcinom patienter er kun omkring 40% efter resektion. Den dårlig prognose er forbundet med omfattende lokal invasion og /eller regional lymfeknude metastaser [26]. Lokalt recidiv forbliver som en væsentlig årsag til cancer-relaterede dødsfald efter resektion i mavecancerpatienter [27]. Derfor skal der etableres pålidelige kriterier for forudsigelse af tilbagefald og identifikation af tumorer til at forstå molekylære og cellulære processer, samt finde nye og mulige terapeutiske molekylære mål [28].
Kerbel [29] rapporterede, at subkloning tumorceller med metastatisk potentiale har en vækstfordel i den tidlige fase af primær foci. Årsagen til en sådan vækst fordel er, at den metastatiske subklon cellepopulationen kan udskille en særlig faktor eller lokal celle vækstfaktor, hvorved en særlig reaktion, der resulterer i selektiv vækst. Påvisning af molekylære markør niveauer i primære tumorprøver kan afspejle de generelle metastatiske karakteristika hele tumoren. I denne gruppe er de methylering satser var kun 35,9% for de normale gastriske væv, 85% og 89,7% for de tidlige og fremskredne kræftformer, henholdsvis 98,7% for metastatiske lymfeknuder. Konstant høj TIMP3 proteinekspression blev kun observeret i normale gastriske væv. Tidlige og avancerede gastrisk kræft udstillet omdrejningspunkt svag udtryk, og metastatiske lymfeknuder viste næsten ingen positivt udtryk. Dette fund antydede, at TIMP3 methylering steg med tumorprogression og at proteinekspression faldt gradvist. Følgelig metastatiske potentiale og vækstfordel af celler gradvist, i sidste ende resulterer i metastase. Yegnasubramanian et al. [30] rapporterede, at tumormetastase var relateret til TIMP3 methylering i prostata cancercellelinier som afsløret af det tidstro MSP af prøver fra 73 patienter med tidlig prostatacancer, 91 patienter med metastatisk prostatacancer, og 25 tilfælde med prostatavæv. Dette resultat indebar en sammenhæng mellem CpG methylering og sortering og fremskridt for prostatakræft. TIMP3 gen methylering angiveligt spiller en vigtig rolle i den metastatiske proces, og påvisning af TIMP3 CpG methylering har en praktisk betydning forudsige metastatiske potentiale af den primære tumor.
TIMP3 har en høj hyppighed af genetisk variation i mange typer humant maligne tumorer, herunder mutationer, deletioner, methylering, kromosomal translokation, og så videre [31]. Disse mutationer resulterer i tab af den normale funktion af et tumorsuppressorgen, nemlig inhibering af celleproliferation (dvs. gen inaktivering) og er nært forbundet med udviklingen af ​​cancer [32]. Imidlertid har kun få undersøgelser udført på TIMP3 gen modifikation i den primære gastrisk cancer, og resultaterne af disse undersøgelser viser afvigende resultater fra en lav gendeletion sats til ingen mutation overhovedet. Derfor har andre inaktiveringsprocedurer mekanismer i gastrisk cancer involverer TIMP3 genet blevet undersøgt [33]. Således kompleksiteten af ​​tumor patogenese er ikke kun en afspejling af genetisk ændring ved mutation eller deletion, men også en afspejling af epigenetiske ændringer, såsom DNA-methylering. En grundig undersøgelse af forholdet mellem DNA methylering og genekspression, samt dens tilsvarende mekanisme, anbefales fordi resultaterne kan guide den kliniske behandling af cancer.
Erklæringer
Finansiering
Undersøgelsen blev finansieret af National Natural Science Foundation of China (nr 30.271.477), og projektet Sponsoreret af den Videnskabelige Research Foundation for det returnerede Overseas Chinese Scholars, Statens Uddannelsesstøtte Ministeriet (nr 2002-247).
Forfattere 'originale indsendte filer til billeder
Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 13000_2013_791_MOESM1_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 1 13000_2013_791_MOESM2_ESM.tiff Forfatternes oprindelige fil til figur 2 Konkurrerende interesse
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser med hinanden.
Forfattere bidrag
ZG og JZ gennemført de patologiske og PCR undersøgelser, DD og ZG analyserede data, og ZG udarbejdet manuskriptet. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• En sammenligning af endoskopisk submucosa dissektion (ESD) og radikal kirurgi for tidlig mavekræft: en retrospektiv undersøgelse
• Korrelation af HK6 udtryk med tumor tilbagefald og prognose i fremskreden ventrikelkræft