Promotore metilazione e l'espressione del gene TIMP3 nel carcinoma gastrico

Promotore metilazione e l'espressione del gene TIMP3 nel carcinoma gastrico
Abstract
sfondo
sviluppo del carcinoma gastrico è un processo a più stadi che coinvolge più di un gene. cambiamenti aberrante metilazione del DNA sono considerati come terzo meccanismo che porta alla inattivazione anti-oncogene, che svolge un ruolo essenziale nello sviluppo del tumore. In questo studio, abbiamo valutato la relazione tra la metilazione aberrante del promotore CpG isole di tessuto inibitore della metalloproteinasi 3 (TIMP3) gene, la sua espressione della proteina, e le caratteristiche clinico-patologici di adenocarcinoma gastrico.
Metodi
Il stato di metilazione del promotore isole CpG e l'espressione proteica del gene TIMP3 nei tumori e adiacenti normali tessuti della mucosa di 78 pazienti con adenocarcinoma gastrico sono stati rilevati da specifici metilazione PCR (MSP) e immunoistochimica.
Risultati
CPG isola di metilazione TIMP3 è stato rilevato nei tessuti tumorali, i tessuti tumorali adiacenti, e linfonodi con metastasi. In ordine crescente, la frequenza ipermetilazione di questi tessuti sono stati il ​​35,9% (28 su 78 tessuti non neoplastici), 85% (17 su 20 casi in fase iniziale), 89,7% (52 su 58 casi di progressiva stadio), e il 100% (78 di 78 linfonodi metastatici). Una differenza marcata è stata trovata tra tumori e tessuti non-neoplastici (P
< 0,05), ma nessuna differenza esisteva tra i sottogruppi di tumori (P
> 0,05). analisi immunoistochimica ha confermato TIMP3 down-regulation nei tessuti tumorali. Il tasso di espressione genica TIMP3 è stata del 100% nei tessuti non neoplastiche, ma a quanto pare è sceso in varia misura in diverse fasi, vale a dire, è scesa al 30% (6/20) nella fase iniziale, al 3,4% (2/58) al fase progressiva e allo 0% (0/78) nei linfonodi metastatici. Tra i 70 tessuti tumorali con l'espressione TIMP3 negativo, 64 (91,4%) sono stati hypermethylated e 6 erano non metilato (8,6%), che indica una significativa associazione tra metilazione e ridotta o espressione TIMP3 negativo (P
< 0,01).
Conclusione
l'ipermetilazione della regione del promotore di isole CpG è il principale meccanismo di espressione genica TIMP3 e può fornire la prova per la diagnosi e la fase di valutazione molecolare del cancro gastrico
. diapositive virtuale
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Parole
Adenocarcinoma gastrico Tissue Inhibitor di Metalloproteinase 3 (TIMP3) metilazione Sfondo
cancro gastrico (o carcinoma gastrico) è una delle neoplasie più comuni nel mondo. sviluppo della malattia nel cancro gastrico è un processo a più stadi che coinvolge più di un gene. fattori di malattia definitiva agiscono su geni differenti nelle diverse fasi, causando una variazione di livelli di struttura genica e di espressione che portano allo sviluppo della carcinogenesi gastrica. La perdita della funzione di un anti-oncogene può avvenire attraverso diversi canali. Oltre a delezioni e mutazioni, variazioni aberranti nella metilazione del DNA sono considerati il ​​terzo meccanismo che porta alla inattivazione anti-oncogene [1, 2], che svolge un ruolo essenziale nello sviluppo del tumore. isole CpG, che sono sequenze CpG-ricchi ubicata nella regione del promotore a monte di un gene housekeeping, sono regioni in cui citosina metilazione non si verifica generalmente, anche se la stimolazione da alcuni fattori porta alla sua metilazione. Di conseguenza, l'espressione del DNA è inibita in questa regione [3]. L'inattivazione di molti geni associati al tumore, come P16, THBS1, TIMP3, hMLH1, e MGMT sono legati alla metilazione delle rispettive regioni promotrici [4-8]. inibitore tissutale delle metalloproteinasi-3 (TIMP3) è legata allo sviluppo dei tumori, in particolare inimicarsi l'attività della metalloproteinasi della matrice, così come inibire la crescita tumorale, angiogenesi, l'invasione e metastasi [9].
In questo lavoro, abbiamo rilevato la metilazione del promotore del gene TIMP3 isola CPG e l'espressione della proteina in tessuti normali mucosa gastrica, tessuti di cancro gastrico, e linfonodi metastatici di 78 pazienti con cancro gastrico mediante metilazione-specifica PCR (MSP) e immunoistochimica. Abbiamo esplorato la correlazione del gene promotore metilazione con la sua espressione della proteina corrispondente e poi analizzato il rapporto tra gene TIMP3 CpG isola metilazione anomala con lo sviluppo, così come le caratteristiche cliniche e patologiche, di adenocarcinoma gastrico.
Materiali e metodi
materiali in tutte le nazioni 78 casi di tessuto gastrico normale, carcinoma gastrico, e linfonodi metastatici sono stati verificati dalla diagnosi patologica. I campioni tumorali sono stati ottenuti tra il marzo 1998 al maggio 2005 presso il Primo Ospedale Affiliato e Liaoning Provincial Tumor Hospital di pazienti post-operatorio con carcinoma gastrico (maschile: n
= 54; femminile: n
= 24), con un'età media di 56,2 ± 7,5 anni. Tra i campioni ottenuti, 20 sono stati di cancro gastrico precoce, 58 erano di carcinoma gastrico avanzato, 44 ​​erano di differenziazione, e 14 erano indifferenziata. Tumore messa in scena si è basata sugli standard di sosta Unione internazionale contro il cancro TNM, digitando di cancro gastrico Way crescita e statuto della messa in scena, e digitando cancro gastrico in Giappone [10-12] dal China Medical University Cancer Institute. Idrochinone (10 mmol /L) e bisolfato di sodio (3,9 mol /L) sono stati acquistati da Sigma. A-up Clean System DNA è stato acquistato da Promega. anticorpo TIMP3 e kit SP sono stati acquistati da Boster Biological Engineering Co., Ltd. (Dalian). Tutti i campioni sono stati gestiti e resi anonimi secondo gli standard etici e legali. Il protocollo è stato approvato dal Comitato di Etica Medica dell'Ospedale Liaoning Provinciale del tumore e China Medical University.
MSP
Nel metodo MSP [13], l'elaborazione methylase è stato condotto su cellule normali del sangue periferico e utilizzati come controlli positivi. cellule non trattate sono stati usati come controlli negativi. Le sequenze dei (TIMP3-U) primers (TIMP3-M) e non metilato metilati sono stati i seguenti: (1) TIMP3-M sequenze primer, 5'CGTTTCGTTATTTTTTGTTTTTCGGTTTTC-3 'e 5'-CCGAAAACCCCGCCTCG-3'; e (2) TIMP3-U sequenze primer, 5'-TTTTGTTTTGTTATTTTTTGTTTTTGGTTTT-3 'e 5'-CCCCCCAAAAACCCCACCTCA-3'. Le condizioni di reazione PCR erano le seguenti: 95 ° C denaturazione iniziale per 5 min, 95 ° C, denaturazione per 30 s (40 cicli), 59 ° C ricottura per 60 (40 cicli), 72 ° C estensione per 60s (40 cicli ), e 72 ° C estensione per 10 min. Agarosio elettroforesi su gel e EB colorazione sono stati poi eseguiti. I dati i gel sono stati raccolti con uno scanner laser densità (Pharmacia LKB Ultroscan) e successivamente analizzati. Tutti gli esperimenti sono stati ripetuti tre volte, e il valore medio è stato utilizzato per l'analisi statistica.
Immunoistochimica
Per l'immunoistochimica, abbiamo usato il metodo di colorazione streptomycesavidin-perossidasi. La colorazione immunoistochimica è stata eseguita secondo le istruzioni del produttore. Come criterio diagnostico, l'osservazione di un citoplasma giallo brunastro dopo la colorazione era considerato un risultato positivo per l'espressione TIMP3. Per i controlli, una superficie tessuto normale era macchiato come controllo positivo, e una sezione di tessuto normale è stato utilizzato come controllo negativo e trattata con PBS invece di un anticorpo primario. standard di punteggio è stato eseguito secondo il metodo descritto da Shimizu [14]. Abbiamo osservato l'intensità e la distribuzione di cellule positive ad alto ingrandimento colorazione; nessuna colorazione è stato segnato come 0, colorazione debole, ma significativamente più forte rispetto al controllo negativo è stato segnato come 1, una macchia chiara è segnato come 2, e una forte macchia è segnato come 3. Nessuna cella controllo positivo è segnato come 0. Il numero richiesto di cellule positive, cioè, < 30%, 30% -60%, e > 60%, sono stati ottenuti come 1, 2, e 3, rispettivamente. Sulla base dei punteggi totali, i campioni sono stati valutati per l'espressione TIMP3. Un punteggio di ≤2 è stato classificato come negativo, un punteggio di 3 era debolmente positivo, un punteggio che va da 4 a 5 è stato positivo, e un punteggio di 6 era fortemente positiva.
Analisi statistica
Le differenze tra il TIMP3 tasso di metilazione del gene promotore e l'espressione delle proteine ​​dei campioni sono stati rilevati e analizzati statisticamente dai ×
2 e metodi di Fisher. Tutti i dati sono stati analizzati con il software statistico SPSS12.
Risultati
gene TIMP3 analisi metilazione del promotore
estratto il DNA genomico dal campione è stato amplificato da MSP. Le dimensioni dei prodotti di PCR metilato e non metilato erano 116 e 122 bp, rispettivamente. gene TIMP3 fenomeno metilazione del promotore è stata generalmente osservata in tessuti normali gastrico, carcinoma gastrico, e campioni di metastasi linfonodali. I tassi di rilevamento positivi sono stati i seguenti: 85% (17/20) per il cancro gastrico precoce, 89,7% (52/58) per il cancro gastrico avanzato, 98,7% (77/78) per linfonodi metastatici, e solo il 35,9% (28 /78) per il tessuto gastrico normale. Un aumento significativo del gene TIMP3 metilazione del promotore è stato osservato in tutti i gruppi di cancro gastrico (P
< 0,01; Figura 1 e Tabella 1), suggerendo che la metilazione del gene TIMP3 può essere coinvolto nella carcinogenesi e le metastasi dei tumori di cancro gastrico e metastatici tessuti linfonodali. Figura 1 metilazione-specifica PCR (MSP): 1, il controllo normale (tessuto gastrico normale); 2, all'inizio del cancro gastrico; 3, il cancro gastrico avanzato; 4, il trasferimento di linfonodo. M, Marker DL2000; m, metilazione frammento di amplificazione; u, frammento unmethylation amplificazione.
Tabella 1 gastrica carcinoma TIMP3 metilazione del promotore e l'espressione della proteina
Organizzazioni
n (%)
TIMP3 metilazione del promotore
proteine ​​TIMP3 espressione
positivo
positivo
normale stomaco
78
28 (35,9)
78 (100,0)
precoce del cancro gastrico
20
17 (85,0)
9 (45,0)
avanzata cancro gastrico
58
52 (89,7)
21 (36,2)
metastasi linfonodali
78
77 (98,7)
12 (15.4)
analisi immunoistochimica dell'espressione della proteina TIMP3
espressione della proteina TIMP3 è stata positiva in tutti i 78 casi di tessuto gastrico normale (100%). Tra i casi di carcinoma gastrico, 9 in 20 pazienti sono stati positivi per cancro gastrico precoce; 11 casi sono risultati negativi (55%), 21 casi sono stati positivi, e 37 sono risultati negativi (63,8%) in 58 casi di cancro gastrico avanzato; e 12 casi sono stati positivi e 66 casi sono risultati negativi (84,6%) in 78 pazienti con metastasi dei linfonodi gastrici. L'espressione TIMP3 ridotto che è stato osservato nei gruppi di cancro gastrico è risultata essere statisticamente significativa (P
< 0,01; Figura 2 e Tabella 1), suggerendo che il tasso di espressione della proteina TIMP3 diminuito nei tumori di cancro gastrico e tessuti linfonodali metastatiche . Questa ridotta espressione della proteina gene può essere dovuto all'aumento precedentemente osservato in TIMP3 metilazione nei campioni di cancro gastrico perché metilazione è noto per sopprimere l'espressione della proteina. espressione della proteina TIMP3 è principalmente situata nel citoplasma delle ghiandole normali. In poche cellule, una piccola quantità di espressione è stato trovato nelle membrane cellulari (Figura 2). Nelle normali cellule della mucosa gastrica, nessuna distruzione struttura ghiandolare è stata osservata e la colorazione non è stato significativamente ridotto. I primi ghiandole cancro gastrico hanno mostrato danni strutturali e debole colorazione delle cellule tumorali. I tessuti di cancro gastrico avanzata mostrato grandi aree di crescita massiccia (carcinoma indifferenziato) e, a parte le singole celle, il resto non erano colorati. Figura proteine ​​immunohistochemisty 2 TIMP3 (SP 400 ×): un tessuto gastrico normale; b, precoce cancro gastrico; C, carcinoma gastrico avanzato; d, trasferimento di linfonodo.
Relazione tra gene TIMP3 metilazione del promotore e l'espressione della proteina TIMP3
Nel avanzato gruppo cancro gastrico, il tasso di metilazione TIMP3 era significativamente più alta rispetto ai tessuti in crescita lumpish e annidati (100% vs 77,8%, rispettivamente; p
< 0,01). Il tasso di metilazione TIMP3 nei linfonodi metastatici nel gruppo ≥7 tessuto era significativamente più alta rispetto alla < 7 gruppo di tessuto (100% vs 83,3%, rispettivamente; P
< 0,05). Il gruppo sottosierosa e il tessuto sierosa era significativamente più alta rispetto al gruppo dei tessuti sottomucosa e miometrio (91,3% e 96,6% vs 50%, rispettivamente; P
< 0,05). Aumento della frequenza di metilazione del gene TIMP3 è stata generalmente osservata nella crescita diffusa simile, metastasi linfonodali (≥ 7), e tumori sottosierosi e sierose, il che implica che nessuna relazione esisteva tra TIMP3 gene metilazione e le dimensioni del tumore, il tipo macroscopica, e il tipo istologico. Il tasso positivo dei 58 casi di tessuti carcinoma gastrico avanzato è stata del 36,2% (21). espressione della proteina nei tessuti TIMP3 massicce e nidificate crescita è stata significativamente superiore a quello dei tessuti di crescita diffuse simile (55,6% vs.19.4%, rispettivamente; P
< 0,01). espressione della proteina TIMP3 nel linfonodo metastatico ≥ 7 tessuti era significativamente più alta rispetto alla < 7 tessuto (47,2% vs 18,2%, rispettivamente; P
< 0,05) (Tabella 2). Questi risultati suggeriscono che è diminuito tasso di espressione della proteina TIMP3 era più comune nella crescita e linfonodi metastatici diffusa simile (≥7) tumori, ma l'espressione ridotta non era correlato alle dimensioni del tumore, il tipo di lordo, tipo istologico, e la profondità di invasion.Table 2 relazione tra avanzato gastrica metilazione patologia cancro TIMP3 e indice il suo livello di espressione della proteina
n
TIMP3 metilazione del promotore
proteine ​​TIMP3 dimensioni del tumore

Le dimensioni del tumore (cm)
< 5
5 Pagina 3 (60,0)
1 (20,0)
5 - 10
45
42 (93,3)
18 (40,0)
> 10 Pagina 8 Pagina 7 (87,5) Pagina 2 (25,0)
tipi generali
Borr.2
12
10 (83.3 ) Pagina 4 (33,3)
Borr.3
37
33 (89,2)
15 (40,5)
Borr.4
9
9 (100,0)
2 (22.2)
differenziazione istologico
differenziata
44
39 (88,6)
17 (38,6)
indifferenziato
14
13 (92,9)
4 (28,6)
modello di crescita
Ciuffi +
annidata 27
21 (77,8)
15 (55,6)
Diffondere le simil-
31
31 (100.0 ) b
6 (19,4) b
metastasi linfonodali
< 7
36
30 (83,3)
17 (47,2)
≥7
22
22 (100,0)
a 4 (18.2)
a infiltrazione
sottomucosa muscolare Pagina 6 Pagina 3 (50.0)
1 (16,7)
sottosierosa
23
21 (91,3)
a 9 (39,1)
sierosa
29
28 (96,6)
11 (37,9)
aP
< 0.05, BP
< 0.01.
Discussione
La formazione di tumori maligni è multi-fattoriale e si verifica in più fasi. Le caratteristiche biologiche dei tumori maligni includono la crescita invasiva e metastasi. Il meccanismo alla base dello sviluppo del tumore comporta cambiamenti anomali nella struttura genica e la funzione nell'interno della cellula. I teorici moderni ritengono che il processo di formazione del tumore comprende due meccanismi principali: il primo è a livello genetico, cioè mutazione del gene provoca sequenza nucleotidica del DNA cambia; e il secondo è a livello epigenetica. Studi precedenti si sono concentrati su cambiamenti nell'espressione genica che sono ereditati attraverso la meiosi e non comportano una variazione di sequenza del DNA, ma influenzano la funzione di regolazione dell'espressione genica e del DNA, principalmente dalla modificazione chimica. Questo meccanismo sta guadagnando una maggiore attenzione da parte dei ricercatori di processi di formazione del tumore [15, 16].
Nel DNA di tessuti tumorali, metilazioni abberant sono spesso osservate in regioni gene promotore, tra cui ipometilazione nel oncogene. Questo gene è strettamente legato al ciclo di proliferazione cellulare e hypermethylation in geni oncosoppressori. Questi cambiamenti di metilazione anormali possono attivare oncogeni [17-19] e di inibire la trascrizione di mRNA di geni oncosoppressori [20], con conseguente inattivazione del gene. metilazione aberrante in DNA avviene attraverso la presenza di isole CpG metilati altamente nell'estremità 5 'di una regione di controllo promotore. La famiglia TIMP ha quattro membri di proteine: TIMP-1, 2, 3, e 4. TIMP-1, 2, e 4 sono solubili proteine ​​secretorie. Per contro, TIMP-3 è una proteina non-solubile che si combina con la matrice extracellulare, si trova nella membrana cellulare esterna [21], e può essere strettamente collegata con la membrana basilare. La funzione del TIMP è l'inibizione del fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α) enzimi -Conversione e l'induzione della morte cellulare programmata attraverso la superficie cellulare dei recettori TNF-α stabile [22]. L'induzione di apoptosi attraverso TIMP avviene per due vie: MMP dipendenti e indipendenti. Sebbene TIMP-3 e 4 hanno una elevata affinità per MMP-2, le proteine ​​effettivamente inibire MT1-MMP, attivando così il processo di MMP-2 zimogeno e inibendo la crescita delle cellule tumorali e metastasi. Smith et al. [23] hanno trovato che l'espressione di TIMP-3 in linee cellulari di cancro del colon umano sono rari nella mitosi. La maggior parte delle cellule sono arrestati nella fase G1, anche se l'applicazione di anticorpo TNF-α diminuisce arresto mitotico del 70%.
Per esplorare la relazione tra TIMP3 e cancro gastrico, così come il suo meccanismo in inattivazione gastrica, abbiamo rilevato gene TIMP3 5 'isola hypermethylation CpG nel normale mucosa gastrica, carcinoma gastrico, e linfonodi metastatici. Abbiamo scoperto che in > 85% di tutti i tessuti di cancro gastrico, il gene TIMP3 5 'isola CpG esposto metilazione aberrante che era significativamente più alta (P
< 0,01) rispetto a quella del gruppo di tessuto gastrico normale, il che implicava che TIMP3 gene promotore isola CpG metilazione ridotta espressione genica TIMP3 ed era quindi il meccanismo di soppressore del tumore-inattivazione principale di cancro gastrico. Gagnon et al. [24] hanno riportato che in tutte le linee di cellule di cancro del polmone MCF-7 con perdita di espressione di mRNA e TIMP3 gene promotore TIMP3 CpG isola metilazione, demetilazione è stata indotta da 5-AZA-CdR. espressione TIMP3 prima e dopo 5-AZA-CdR induzione è stata valutata mediante RT-PCR, che ha dimostrato che demetilazione ha provocato TIMP3 gene ri-espressione, in linea con i nostri risultati.
Nel presente studio, tutti i 78 casi di tessuto gastrico normale sono risultati positivi per l'espressione della proteina TIMP3. Tra questi 78 casi, solo il 28 (35,9%) sono risultati positivi per la metilazione. Tra i 20 pazienti con cancro gastrico precoce, 9 sono risultati positivi per l'espressione della proteina TIMP3 e 17 (85%) sono risultati positivi per la metilazione. Tra i 58 casi di cancro gastrico avanzato, 21 sono risultati positivi per l'espressione della proteina TIMP3 e 52 (89,7%) sono risultati positivi per la metilazione. Tra i 78 casi di linfonodi metastatici, 12 sono risultati positivi per l'espressione della proteina TIMP3 e 77 casi (98,7%) sono risultati positivi per la metilazione. Aumento della frequenza di metilazione è stata significativa tra la precoce del cancro, cancro avanzato e metastatico campioni linfonodali rispetto a campioni di tessuto normale (P
< 0,01), confermando che la perdita di espressione della proteina TIMP3 era strettamente legato al gene promotore TIMP3 isola CpG metilazione. Feng HF et al. [25] hanno riportato gli stessi risultati in vaso e JEG-3 linee di cellule coriocarcinoma. Pertanto, il nostro studio ha confermato che gene promotore TIMP3 CpG isola metilazione è stata la ragione principale per l'espressione della proteina TIMP3 ridotta nel cancro gastrico. Con gli avanzati campioni di cancro gastrico 58, 52 sono risultati positivi per TIMP3 promotore CpG isola metilazione e 21 sono risultati positivi per l'espressione della proteina TIMP3. Questa scoperta suggerisce che oltre a CpG isola metilazione, altri fattori come la variazione genetica ha causato l'assenza dell'espressione genica TIMP3. Nei nostri esperimenti, 34 campioni erano positivi per metilazione e unmethylation stato generalmente interpretati come segue: stato di metilazione incompleta dei geni può esistere, e se il tessuto tumorale è mescolato con cellule non tumorali, un prodotto di PCR positiva per unmethylation (da MSP con non metilato primer) si può osservare. espressione della proteina TIMP3 del campione è risultato negativo, in modo da questi campioni sono stati definiti come metilazione positivo.
In Cina, il tasso di sopravvivenza a 5 anni dei pazienti con carcinoma gastrico è solo circa il 40% dopo la resezione. La prognosi infausta è associata con una vasta invasione locale e /o metastasi linfonodali regionali [26]. recidiva locale rimane come una delle principali cause di decessi correlati al cancro dopo resezione in pazienti affetti da cancro gastrico [27]. Pertanto, i criteri affidabili per la previsione della recidiva e l'identificazione dei tumori devono essere stabiliti di comprendere i processi molecolari e cellulari, nonché scoprire nuovi e possibili bersagli molecolari terapeutici [28].
Kerbel [29] hanno riportato che le cellule tumorali con subcloning potenziale metastatico hanno un vantaggio di crescita nella fase iniziale di focolai primari. La ragione di tale vantaggio della crescita è che la popolazione di cellule subclone metastatico può secernere un particolare fattore o il fattore di crescita cellulare locale, causando una reazione speciale che si traduce in una crescita selettiva. Il rilevamento di livelli di marcatori molecolari in campioni tumorali primarie può riflettere le caratteristiche metastatiche generale di tutto il tumore. In questo gruppo, i tassi di metilazione sono stati solo 35,9% per i tessuti normali gastriche, 85% e 89,7% per le prime e avanzate tumori, rispettivamente, 98,7% per linfonodi metastatici. Coerentemente l'espressione di proteine ​​di alta TIMP3 è stata osservata solo in tessuti normali gastrici. I primi e avanzati tumori gastrici esposti debole espressione focale, e linfonodi metastatici hanno mostrato quasi nessuna espressione positiva. Questa scoperta suggerisce che TIMP3 metilazione aumenta con la progressione del tumore e che l'espressione della proteina gradualmente diminuita. Di conseguenza, il potenziale metastatico e la crescita vantaggio di cellule gradualmente aumentata, che si traduce in metastasi. Yegnasubramanian et al. [30] ha riferito che la metastasi del tumore era legato a TIMP3 metilazione in linee cellulari di cancro alla prostata, come rivelato dal tempo reale MSP di campioni da 73 pazienti affetti da cancro alla prostata, 91 pazienti con carcinoma della prostata metastatico, e 25 casi con tessuto prostatico. Questo risultato ha comportato una relazione tra CpG metilazione e la classificazione e il progresso di cancro alla prostata. TIMP3 gene metilazione riferito svolge un ruolo importante nel processo metastatico, e il rilevamento di TIMP3 CpG methylation ha qualche valore pratico nel predire il potenziale metastatico del tumore primario.
TIMP3 ha un'alta frequenza di variazione genetica in molti tipi di umana tumori maligni, tra cui le mutazioni, delezioni, metilazione, traslocazione cromosomica, e così via [31]. Queste mutazioni provocano la perdita della normale funzione di un gene soppressore del tumore, cioè, l'inibizione della proliferazione cellulare (cioè inattivazione genica) e sono strettamente correlati allo sviluppo del cancro [32]. Tuttavia, pochi studi sono stati condotti sulla modificazione genetica TIMP3 nel carcinoma gastrico primaria, ed i risultati di questi studi mostrano risultati discrepanti da un basso tasso di gene delezione di mutazione a tutti. Di conseguenza, altri meccanismi di inattivazione di cancro gastrico che coinvolgono TIMP3 gene sono state studiate [33]. Pertanto, la complessità della patogenesi del tumore non è solo un riflesso del cambiamento genetico da mutazione o delezione ma anche una riflessione di alterazioni epigenetiche quali la metilazione del DNA. Uno studio approfondito del rapporto tra metilazione del DNA e l'espressione genica, così come il suo meccanismo corrispondente, è raccomandato perché i risultati possono guidare il trattamento clinico di cancro.
Dichiarazioni
Finanziamento
Lo studio è stato finanziato dalla National Science Foundation naturale della Cina (n ° 30.271.477) e il progetto promosso dalla Fondazione ricerca scientifica per la restituiti Overseas studiosi cinesi, Stato Ministero della Pubblica Istruzione (n ° 2002-247). presentati file originali
d'autore per le immagini
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Gli autori dichiarano di avere interessi in gioco uno con l'altro.
contributi degli autori
ZG e JZ effettuati gli esami patologici e PCR, DD e ZG hanno analizzato i dati, e ZG ha redatto il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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