Xpert MTB /RIF analys kan användas på arkiverad gastric aspirera och inducerad sputumprov för känslig diagnos av pediatrisk tuberkulos

Xpert MTB /RIF analys kan användas på arkiverad gastric aspirera och inducerad sputumprov för känslig diagnos av pediatrisk tuberkulos Bild Sammanfattning
Bakgrund
Tuberkulos (TB) hos barn försummas, främst på grund av brist på känsliga diagnostiska verktyg . Nyligen Xpert MTB /RIF analys har revolutionerat det diagnostiska området, men dess användbarhet i pediatrisk TB har inte rapporterats från Indien och ingen Rapporten finns tillgänglig på dess användning på lång sikt arkiverade prover.
Metoder
Vi rekryterade 130 pediatriska patienter med trolig intrathorakal tuberkulos och deras gastric aspirera (GA) och inducerat sputum (IS) prov på 2 dagar i följd samlades in mellan januari 2009 och december 2012. Alla prover (n = 520) utsattes för smeta undersökning, BACTEC-MGIT kultur och -house
multiplex PCR. En alikvot av varje prov förvarades vid -80 ° C och testades i Xpert MTB /RIF-analys 2013.
Resultat
Sample kloka och patienten klokt träffsäkerhet på smear mikroskopi var 4,4% och 10%, medan den för BACTEC -MGIT kultur här takten var 24,4% och 46,9%, respektive. Av de 130 dagars 1 GA prover, 31,5% och 27,7% Dag 2 GA prover var odlingspositiva. Endast 17,7% GA prover var positiva på båda dagarna. Av de 130 IS prover som tagits på dag 1 och dag 2, 15,4% och 23,1% prover var odlingspositiva. En kombination av GA och gav bäst resultat. Kombinera både GA och är den totala känsligheten av Xpert MTB /RIF om smear och odlingspositiva prover var 95,6%. I smear negativa och kultur positiva prov dess känslighet var 62,5%. Varaktigheten av provförvaring påverkade Xpert MTB /RIF testa prestanda (p = 0,0001). I smeta positiva prover som lagrats för 650-849 dagar, dess känslighet var 85,7% och 77,1% för IS och GA prover som sjönk till 33,3% och 50%, respektive, om den förvaras i mer än 1050 dagar.
Diskussion
bekräftande diagnos av tuberkulos särskilt hos barn är en medicinsk utmaning. Ingen laboratorium eller radiologisk prov kan nå en tillfredsställande nivå av diagnostisk känslighet. Men i denna studie har vi foundthat kombination av multipla prover och multipla diagnostiska tester kan ge mycket bättre utbyte, även om notoptimum. I denna studie, en kombination av 2 ventrikelsköljvätska (GA) och 2 inducerat sputum (IS) prover på två dagar i följd, och testas på tre diagnostiska metoder gav en signifikant hög träffsäkerhet. Trots långtidsförvaring, förblev den totala känsligheten för Xpert MTB /RIF om smeta och -kultur positiva prov mycket hög. Men efter lagring dessa prov under subfreezing förhållanden thesensitivity av Xpert MTB /RIF minskat betydligt. Detta förväntas eftersom även om provet är smear och kultur positiv, går räkningen att överleva mykobakterier ned, efter flera år denna räkning kan nå till en odetekterbar nivå.
Slutsats
denna rapport visar att smeta och kultur positiva prov lagrades vid subfreezing betingelser under flera år kan användas i Xpert MTB /RIF-analys, medan märkbar diagnostiskt test känslighet och specificitet bibehålls.
Nyckelord
Pediatrics Tuberculosis Indien Gastric Aspirera inducerat sputum arkiverade Prover mPCR MGIT Kultur, Xpert MTB /RIF bakgrund
Världshälsoorganisationen (WHO) beräknas den globala bördan av tuberkulos (TB) på 9 miljoner nya fall och 1,5 miljoner dödsfall i 2013 [1]. Detta inkluderade upp till 15% belastning av pediatriska fall. Cirka 74.000 barn dör av TB varje år och det finns omkring en halv miljon nya fall årligen [2]. Liksom hos vuxna, de flesta (70-80%) av barn TB-fall förekommer med lungtuberkulos (PTB). Tuberkulos hos barn har relativt eftersatt, främst på grund av utmaningar i tillgången till effektiva diagnostiska verktyg [3]. Indien är 17 bland 22 drabbade länder när det gäller total TB incidensen, men mycket lite information angående epidemiologi TB hos barn, dess diagnos och behandling [4, 5].
I de flesta inställningar diagnos av pediatrisk tuberkulos på grundval av kontaktspårning, och mycket få försök har gjorts för aktivt fall upptäckt. Detta beror främst på grund av brist på en patognomona klinisk presentation i pediatrisk TB och brist på känsliga diagnostiska verktyg [3, 4, 6, 7]. Hotell med begränsade verktyg för bekräftande laboratoriediagnostik, utvärdering av medicinsk historia, tuberkulin hudtest, lungröntgen och en bristande respons på antibiotika bidrar till att göra den kliniska diagnosen. Smear mikroskopi och mikrobiologisk bekräftelse sällan uppnås på grund av dålig känslighet för dessa tester, bland annat på grund av den paucibacillary sjukdomens art och oförmåga barn för att ge en optimal sputumprov [6]. Alternativa prover inkluderar gastric aspirera (GA), inducerat sputum (IS), nasofarynxaspirat, bronchio-alveolär sköljning, struphuvud kompress, sträng test och avföringsprover [3, 7-10]. Beroende på den diagnostiska test som används, har dessa prover visat varierande känslighet och specificitet. Det har rapporterats att gastric lavage prover ger högsta (40-92%) upptäckten hastighet, beroende på känsligheten hos laboratorietest antagits. Andra prover har visat sämre priser upptäckt sträcker sig 4-43% för bronkoalveolär sköljning, 24-30% för nasofaryngeal aspiration, 27-63 för struphuvud svabb och 20-30% genom att använda inducerat sputum. Vissa forskare har också använt sträng testet men resultaten har inte varit uppmuntrande [3, 7, 11-13].
Nyligen införda Xpert MTB /RIF analys (Cepheid, USA) har väsentligt förändrat diagnostik av tuberkulos hos vuxna , men dess tillämpning för diagnos av pediatrisk TB är under utvärdering. Denna analys är snabb och ger resultat inom 2 h [14]. I ett policyuttalande Världshälsoorganisationen (WHO) 2011, rekommenderat användning av Xpert MTB /RIF analys som ett preliminärt diagnostiskt verktyg bland barn, vuxna med misstänkt humant immunbristvirus (HIV) tillhörande tuberkulos och i alla MDR TB misstänkta fall [ ,,,0],15]. Därefter har flera arbetare börjat använda Xpert MTB /RIF analys för diagnos av pediatrisk tuberkulos [10, 16-18]. Men fortfarande ett avlägset alternativ utbredd användning av Xpert MTB /RIF för diagnos av pediatrisk TB på ett rutinmässigt. Hittills finns det bara ett fåtal studier om tillämpningen av Xpert MTB /RIF för diagnos av pediatrisk TB. Två studier rapport om användningen av Xpert MTB /RIF om inducerat sputum två på dess användning i mag sköljprover. Det finns inga studier som rapporterar om användning av Xpert MTB /RIF i både GA och prover samtidigt på samma patient. Vidare finns det ingen studie från Indien om utvärderingen av Xpert MTB /RIF för diagnos av pediatrisk lungtuberkulos. Dessutom nyttan av Xpert MTB /RIF om arkiverade GA och prover har tidigare inte undersökts. Eftersom Xpert MTB /RIF blev tillgängliga förrän efter 2011, det finns ingen annan snabbtest som kan upptäcka tuberkulos och RIF motstånd samtidigt i prover som togs före 2011. Denna studie undersöker också effekten av långtidslagring av kliniska prover på för detektering av TB av Xpert MTB /RIF analys.
Vi har tidigare rapporterat att GA prover ger bättre avkastning än vad prover [19]. I en efterföljande rapport visade vi också att neutralisera pH-värdet i magsäcken aspirera innan behandlingen leder till en högre grad av förorening utan att förbättra upptäckten hastighet [20]. I den aktuella studien rapporterar vi om utförandet av Xpert MTB /RIF om arkiverade GA och prover på två dagar i följd från barn med trolig intratorakala TB, rekryterats som en del av en dubbelblind randomiserad kontrollerad studie för att studera betydelsen av mikro tillskott hos barn med metoder
inom bröstkorg tuberkulos.
studie~~POS=TRUNC och ämne rekrytering
studien genomfördes mellan januari 2009 till december 2012 på All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) och Kalawati Saran Barnsjukhus ( KSCH), både i New Delhi, Indien. Detta arbete var en del av en dubbelblind randomiserad kontrollerad studie för att studera betydelsen av mikro tillskott hos barn med intra-bröstkorg tuberkulos [19-22]. Totalt 403 barn (58,2% flickor), i åldern 6 månader till 14 år [Medianålder, 120 månader; kvartilavståndet (IQR), 7-168 månader], med trolig inom thorax TB inkluderades. Standardklinik radiologiska kriterier att misstänka inom bröst tuberkulos användes i denna studie som publicerats tidigare [19-22]. Diagnosen intratorakala tuberkulos baserades på rekommendationer från Indian Academy of Pediatrics. Alla barn med hosta och feber på mer än 2 veckor utan förbättring under sju till tio dagar amoxicillin kurs och nyligen oförklarlig viktminskning eller historia av kontakt med TB-patient under de senaste två åren. Alla misstänkta tuberkulos genomgick en lungröntgen (lateral och posterior-anterior). I närvaro av ihållande röntgen avvikelser, med icke-upplösning av kliniska symptom och ingen alternativ orsak till symtom och lungröntgen fynd, en trolig diagnos av intratorakala tuberkulos gjordes. Alla barn med trolig tuberkulos utsattes för tuberkulintest (TST), ambulatorisk ventrikelsköljvätska (GA) och inducerat sputum (IS) undersökning för AFB smear och kultur. Barn inleddes på ATT enligt rekommendationerna från RNTCP [5]. I korthet: Alla barn med trolig inom thorax tuberkulos utsattes för gastric aspiration (GA) och inducerat sputum (IS) kollektion för två på varandra följande dagar (D1 & D2). Barnen ombads att rapportera 6 h fasta på morgonen till den utsedda kliniken. Efter att ha förklarat förfarandet och erhålla samtycke från föräldrarna och verbal samtycke från barnen, var en lämplig storlek matningssond (10-12 g) in genom ena näsborren tills den nådde magen. Positionen för röret kontrollerades genom insufflation av luft in magen. Innehållet i magen aspirerades fullständigt, förvaras i steril behållare. Vanligt volym samlas var cirka 10 ml. Prover transporterades till laboratoriet för vidare bearbetning inom 1-2 timmar.
I samma sitter gastric aspiration följdes av inducerat sputum med ett gap på cirka halv timme. För sputum induktion, var barnet primas med 2 puffar salbutamolinhalation av dosaerosol (MDI Asthalin, 100 mikrogram /puff, Cipla, Indien)) och distansen (Zeroastat VT spacer, Cipla, Indien) följt av finfördelning med 3 ml 3 % saltlösning under de kommande 15-20 min. Alla prover gavs unika kodnummer; och sänds till laboratoriet utan en länk till kliniska och patientuppgifter. Prover bearbetades på samma dag för AFB smear, BACTEC-MGIT kultur och in-house
PCR [23]. Kliniska och andra patient detaljer registrerades i Excel-blad genom att behandla barnläkare och laboratoriet var inte medveten om den kliniska diagnosen av ämnena.
Etiska överväganden
Studien godkändes av Institutional etisk kommitté av All India Institute of Medical Sciences , New Delhi och Kalawati Saran Children Hospital, New Delhi, Indien, och försöket registrerades vid clinicaltrials.gov (NCT 00.801.606). Skriftligt informerat samtycke erhölls från föräldrar /vårdnadshavare för varje barn.
Laboratoriemetoder
Beredning av prover
IS och GA (pH icke-neutraliserad) prover bearbetades såsom beskrivits tidigare [19, 21, 23, 24] . I korthet, centrifugerades proven vid 10.000 x g under 10 min, vid 4 ° C; Supernatanten dekanterades och pelleten återsuspenderades i en lika stor volym 0,5% NALC-4% NaOH-blandningen i 50 ml ridge capped rundbottnade bearbetnings rör. Suspensionen var grundligt (4 x 10 s vardera intervall) virvlades för att säkerställa korrekt blandning och inkuberades vid 37 ° C under 10 min. Efter inkubation tillsattes alkaliskt pH neutraliserades med fosfatbuffert [PBS (pH 6,8, total volym av 50 ml)] följt av en slutlig centrifugering vid 10000 x g under 10 min, vid 4 ° C. Supernatanten dekanterades; pelleten re- suspenderades i 2 ml av PBS och 0,5 ml volym alikvoteras i 4 sterila rör. En alikvot användes för framställning utstryk, en för en kultur och en annan för att testas i en in-house
multiplex PCR (m-PCR). En alikvot förvarades vid -80 ° C för vidare användning. Från ett prov, var en 500 pl suspension ympades i BACTEC MGIT-960 flytande odlingssystemet (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA), med hjälp av standardprotokoll [25]. Oavsett en positiv eller en negativ fångs resultat var alla kulturer undersöktes genom Ziehl-Neelsen färgning. Differentieringen av isolat i Mycobacterium tuberculosis
(MTB) eller icke-tuberkulos mykobakterier (NTM) gjordes av en artspecifik internt
m-PCR [23]. IS och GA provalikvoter, lagrade vid -80 ° C, i efterhand granskas i Xpert MTB /RIF analys Xpert MTB /RIF Test
Under 2013 var de lagrade proverna utsattes för Xpert MTB /RIF testning.
. Det fanns 520 saneras GA och paras prover (130x2 GA & 130x2 IS) som var lämpliga för testning, medan andra var antingen inte tillräcklig kvantitet eller kvalitet (förorenad). Provet reagensbuffert innehållande NaOH och isopropanol tillsattes i förhållandet 3: 1 (totalt 2 ml), och inkuberades under 15 min vid rumstemperatur. Det behandlade provet (2 ml) överfördes därefter in i Xpert MTB /RIF patron innehållande tvättbufferten, lyofiliserade reagens för DNA-extraktion och PCR-amplifiering. Efter ordentlig blandning, var patronen laddad i Xpert MTB /RIF instrument, enligt tillverkarens anvisningar (Cepheid, USA). Instrumentet utför prov blandning ultraljudsbehandling i mykobakteriens baciller och intern kontroll (sporer), DNA release och blandning med PCR-reagens, automatiskt. Detta följs av ett hemi-kapslad realtid-PCR-amplifiering, rikta detektering av fem-färg fluorescens molekylär ledstjärna prober och intern kontroll in situ
. Resultat genereras efter 2 timmar och rapporteras som M. tuberculosis Omdömen - negativt eller positivt med halv kvantifierad bakteriell belastning som hög, medel, medel eller låg och om patogenen är RIF känslig eller resistent [14]. Patientuppgifterna var kopplade till de testade endast efter slutförandet av Xpert MTB /RIF utvärdering prover.
Statistisk analys
känslighet Xpert MTB /RIF bestämdes genom att betrakta MGIT kultur bekräftade prover som sant positiva. För att bestämma specificiteten av Xpert MTB /RIF, smeta, MGIT kultur och in-house
m-PCR negativa prover betraktades som sanna negativa prover. Positiva prediktiva värden (PPV), negativt prediktivt värde (NPV) och sannolikhet förhållande för positiv (LRP) Xpert MTB /RIF beräknades med 95% CI (konfidensintervall). LRP större än ett indikerar att testresultatet är troligen sant positiva och mindre än ett innebär att testresultatet är sannolikt sant negativa [26]. Pearson chi square test utfördes för jämförelse av patient klok analys. För att utesluta den andel av avtalet av en slump, var Cohens kappa
test som används. En p-värde av. ≪ 0.05.was anses statistiskt signifikant [STATA 11,0 (College Station, Texas, USA) mjukvara användes för all statistisk analys]
Resultat
I denna studie, som genomfördes mellan januari 2009 till december 2012. totalt 403 barn (58,2% flickor), i åldern 6 månader till 14 år [Medianålder, 120 månader; kvartilavståndet (IQR), 7-168 månader], med trolig inom thorax TB inkluderades. Endast de barn ingick från vilken både GA och IS prover på två dagar i följd fanns tillgängliga. Därför kopplats ihop och GA prover erhållna på två på varandra följande dagar från 130 barn analyserades med Xpert MTB /RIF analys. De sanerade prover lagrades vid -80 ° C under 21,4 till 51,9 månader (median lagringsperioden 32,5 månader, IQR 27-35,1) innan dessa utsattes för Xpert MTB /RIF-analys. Laboratoriet arbetsflöde och sammanfattning av resultaten visas i fig. 1. Fig. Ett flödesschema som visar införandet av prover med flödet av prov behandling, metoder som används och resultat som per Strobe riktlinjer
Diagnostic resultatet av IS och GA prover som tagits på två dagar i följd
Endast 23 av 520 (4,4%) prov från 13 (10%) barn var AFB smeta positiva (fig. 1). Av dessa 23 prover, 9 var D1 och 8 var D2 GA prover. Andra dagen (D2) GA prover 3 upptäckta ytterligare AFB smeta positiva fall medan det missade 4 fall som var positiva på D1, varför det inte fanns någon inkrementell nettovärde från en D2 GA prov. Endast 3 prover var positiva på antingen D1 eller D2. D2-IS prov tillsatt ett fall men också missat ett fall. Sextio en av 130 (46,9%) barn [127 av 520 (24,4%) prover] diagnostiserades ha kultur bekräftade tuberculosis antingen genom smeta eller kultur (tabell 1). Av 130 D1-GA prover 41 (31,5%), medan 36 (27,7%) av D2-GA prover var odlingspositiva. Tjugo tre (17,7%) barn hade en kultur positiv GA båda dagarna (tabell 2). Utbytet från inducerade sputumprov var dålig. Av 130 IS prover som tagits på D1, endast 20 prover (15,4%) var positiva medan D2, 30 (23,1%) prover var odlingspositiva (tabell 3). Sexton (12,3%) barn hade en kultur positiv IS på båda dagarna. De MGIT odlings avkastningen från GA och prover som tagits på två dagar i följd visas i (Tabell 2 & 3, respektive). Det fanns ingen extra värde av en andra dag GA prov för smeta mikroskopi (9 vs 8), kultur (41 vs 36), eller Xpert MTB /RIF analys (33 vs
34). Dock är prover som tagits på två på varandra följande dagar gav en betydande extra värde i kultur (20 vs
30) men en obetydlig ytterligare ökning i Xpert MTB /RIF analys (22 vs
25). En kombination av ett GA och en IS prov gav bäst diagnostiskt verktyg, oavsett D1 eller D2. Nästan 50% prov (antingen GA eller IS) var Xpert MTB /RIF positiv på båda dagarna (Fig. 2) .table en föreställning av Xpert MTB /RIF analys i bakteriologiskt positiva och bakteriologiskt negativa prover [kombination av ventrikelsköljvätska (n
= 260) och inducerade sputa (n
= 260)] samlas in från barn med trolig intratorakala tuberkulos
bakteriologiska kriterier (N = 520)
underkriterier
Nej . (%)
Xpert MTB /RIF resultat
Positiv (%)
Negativ (%)
Bakteriolog positiv (n
= 127; 24,4%) Review Smear (+), kultur (+) Review 23 (4,4) *, **
22 (95,7) Review 1 (4,3) Review Smear (-), kultur ( +) Review 104 (20) *
65 (62,5) Review 39 (37,5) Review Smear (+), kultur (-) Review 0
0
0
Delsumma
127
87 (68,5) Review 40 (31,5) Review Bakteriolog negativ (n
= 393; 75,5%) Review Smear (-), kultur (-)
393
31 (7,9) Review 362 (92,1) Review Totalt
520
118 (22,7) **
402 (77,3) Review tabellen visar hög effektivitet av Xpert MTB /RIF i kultur och smeta positiva prov men måttlig träffsäkerhet i smeta negativa odlingspositiva prover
*, ** P Hotel < 0,001, (+) - positivt, (-) - Negativ, antal inom parentes anger procent
Tabell 2 Utförande av MGIT 960 kultur på gastric aspirera prover som tagits på två dagar i följd från 130 barn med sannolik intratorakala tuberkulos
MGIT960 kultur resultat
Dag 1
Positiv
Negativ
Totalt
Dag 2 Review Positiv
23 (17,7%)
13 (10%) Review 36 (27,7%) Review Negativ
18 (13,8%) Review 76 (58,5%) Review 94 (72,3%) Review Totalt
41 (31,5%) Review 89 (68,5%) katalog 130
Tabell 3 Prestanda för MGIT 960 kultur på inducerat sputum prover som tagits på två dagar i följd från 130 barn med sannolik intratorakala tuberkulos
MGIT 960 kultur resultat
Dag 1
Positiv
Negativ
Totalt
Dag 2 Review Positiv
16 (12,3%)
14 (10,8%) Review 30 (23,1%) Review Negativ
4 (3,1%) Review 96 (73,8%) Review 100 (76,9%) Review Totalt
20 (15,4%) Review 110 (84,6%) katalog 130
Fig. 2 Enskilda och överlappande analys av Xpert MTB /RIF positivitet i gastric aspirera och inducerat sputum prover som tagits på 2 dagar i följd
Jämförelse mellan IS och GA
Sammantaget i prover (IS + GA) som var positiva antingen smeta och /eller kultur (127/520), känslighet Xpert MTB /RIF analys var något lägre (68,5%, 87/127) jämfört med bakteriologisk undersökning (Tabell 1) men det upptäcks också 7,9% (31/393) ytterligare fall över kulturen ger en total känslighet på 22,7% [118/520] (s
= NS) men signifikant högre (p
= 0,001) känslighet än smear mikroskopi (tabell 4). Utförandet av Xpert MTB /RIF var 95,6% (22/23) på smear och odlingspositiva arkiverade prover, som visas i (Tabell 1) och flödesschema (Fig. 1). Alla 14 prover som gav NTM arter var smeta negativa men kultur och m-PCR-positiva. Därför på omvärdering, känslighet Xpert MTB /RIF om smeta negativt men kultur positiv (endast MTB) prover var 72,2% (65/90). Men om alla odlingspositiva prover tillsammans utan att tänka på mykobakteriella arter, föll känsligheten ner till 62,5% (65/104) på ​​grund av 14 NTM isolat. Känsligheten av Xpert MTB /RIF inte skiljer sig mycket mellan GA och IS prov om alla bakteriologiskt (smear och /eller kultur) positiv GA (92,2%, 71/77) och (94%, 47/50) prover jämfördes . Ingen NTM positiva prov felaktigt identifierats av Xpert MTB /RIF, men det missade ett cellprov, kultur och m-PCR-positiva prov, var isolat identifierades som MTB av m-PCR och. Alla Xpert MTB /RIF positiva prover var också m-PCR-positiva. Därför vår egen m-PCR och Xpert MTB /RIF visade 100% överensstämmelse i NTM /MTB differentiering (fig. 1) .table 4 känslighet, specificitet och prediktiva värden för Xpert MTB /RIF analys med hänvisning till AFB smeta och Bactec- MGIT960 kultur i inducerat sputum (n
= 260) jämfört med gastric aspirera (n
= 260) prover
Känslighet
specificitet
PPV

NPV
LRF positiva testet
Diagnostisk noggrannhet
Känslighet (smear positiv)
Känslighet (smear negativ)
Xpert MTB /RIF assay vs kultur
inducerat sputum
35/50 (70,0%; 56,2 till 80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3 till 96,7) **
74,5% (60,5 -84,6) Review 92,7% (88,7-95,7) Review 12,2% (10,2-14,8) Review 89,6% (85,3-92,8) Review 6/6 (100%) Review 29/44 ( 65,9%) Review Gastric Aspirera
52/77 (67,5%; 56,5 till 76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3 till 93,2) **
73,2% (61,9 till 82,1)
87,8% (81,2-90,9) Review 6,5% (5,8 till 7,3) Review 83,1% (78,0-87,1) Review 16/17 (94,1%) katalog 36/60 (60,0%)
AFB vs kultur
inducerat sputum
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2-100) Review 100% (60,8-100) Review 82,7% (77,5-86,8) -
83,1% (78,1-87,1) Review NA
NA
Gastric Sug
17/77 (22,1%; 14,3-32,5) katalog 183/183 (100%; 97,9-100) katalog 100 % (81,6-100) Review 75,3% (71,4-81,6) -
76,9% (71,4-81,6) Review NA
NA
Data n /N (%; 95% CI) eller% (95% CI), Positivt prediktivt värde (PPV), negativt prediktivt värde (NPV), Sannolikheten förhållande (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p
= 0,792
Jämförelse av Xpert MTB /RIF, kultur och AFB smeta mikroskopi
Xpert MTB /RIF analys upptäckt ytterligare 31 av 393 (7,9%) prov som var både AFB smear och MGIT kultur negativt men missade 39 av 104 (37,5%) odlingspositiva prover (Tabell 4). Hos barn med sannolik intratorakala tuberkulos, mag aspirera identifierat fler fall än inducerat sputum hjälp smeta mikroskopi, kultur och Xpert MTB /RIF analys (6,5, 29,6 och 27,3% vs
2,3, 19,2 och 18,0%, respektive). Utbyte av Xpert MTB /RIF analys minskade med ökande lagringstid för GA samt IS prover. I prover som lagrats för 650-849 dagar, träffsäkerhet på Xpert MTB /RIF analys på IS prover var 85,7%, vilket sjönk till 33,3% i prover som lagrats i mer än 1050 dagar. På samma sätt var frekvensen 77,1 och 50%, respektive i GA prover (Fig. 3). Efter lång skillnad i utbytet av IS och GA lagring var mycket signifikant (P
= 0,002). Fikon. 3 Sjunkande positivitet priser på Xpert MTB /RIF analys i förhållande till lagringstid för gastric aspirera och inducerade sputumprov
Diskussion
Det har varit ett flöde av publikationer om Xpert MTB /RIF även känd som Genexpert eller patron baserad nukleinsyraamplifiering testning (CBNAAT) under de senaste 3 åren. Detta är den första studien från Indien på användningen av Xpert MTB /RIF analys hos barn med intratorakala tuberkulos och även den första studien att rapportera om nyttan av denna analys på arkiverade GA och IS prover från barn i TB endemisk land. Studien visar att även i GA och prover lagras i upp till 4 år, förblev Xpert MTB /RIF analys användbar som ett diagnostiskt verktyg för barn tuberkulos. I GA och prover som var smeta och kultur positiv, känslighet Xpert MTB /RIF analys var 95,6%, vilket är liknande den som rapporterats i färska kliniska prover. Som väntat känsligheten hos Xpert MTB /RIF var överlägsen den för smeta mikroskopi (p
= 0,0001). Men känsligheten hos Xpert MTB /RIF analys på kultur positiva men smeta negativa proverna var lägre (62,5%). Utförande av Xpert MTB /RIF analys har tidigare utvärderats mestadels på sputum prover som tagits från vuxna patienter TB [27-30], visar en hög känslighet i smear och kultur positiva prover (98-100%) men en mycket lägre känslighet i smeta negativ sputumprov (43-70%). Våra resultat var också liknande dessa fynd, men på arkiverade prover. En lägre känslighet Xpert MTB /RIF analys har också rapporterats hos HIV-positiva vuxna patienter [29]. Det finns få studier som har genomförts på barn och en mycket få där prestanda Xpert MTB /RIF analys har utvärderats på andra än sputumprover [4-10, 30, 31] prover. Nicol et al. [8] ingår 452 barn för analys med åtminstone en är prov från varje barn. De visade också en dålig känslighet av mikroskopi (6%), kultur (16%) och Xpert MTB /RIF-analysen (13%) i dessa prover. I den aktuella studien, though upptäckten hastigheten av dessa tre metoder var högre men mönstret var liknande. Eftersom vi undersökte både IS och GA prover på två dagar i följd, vid jämförelse avkastningen från IS proverna var mycket lägre än gastric aspirera prover. Även om det inte finns några uppgifter som hittills publicerats där både GA och prover har använts i samma studie för att utvärdera känsligheten och specificiteten av Xpert MTB /RIF analys i kliniskt sann fall av intratorakala tuberkulos, men våra resultat var i total överensstämmelse med resultaten av Bates et al. [10], Rachow et al. [16] och Sekadde et al. [17]. Vår studie visar att smeta och kulturutbyten i GA prover är överlägsna de hos IS prover, men känsligheten hos Xpert MTB /RIF analys var inte signifikant annorlunda i GA och IS prov, i prover lagrade vid -80 ° C för samma varaktighet (77,1 och 85,7%, respektive; P
= 049). Dessutom samlade vi båda dessa prover på två dagar i följd, och detta protokoll ges något bättre avkastning i alla diagnosmetoder, dvs smear, kultur och Xpert MTB /RIF analys. På grund av denna dubbla diversifierat angreppssätt, kan vi uppnå en hög diagnostisk {61 av 130; 46,9% barn (per patient analys)} avkastning.
Flesta publikationer om Xpert MTB /RIF eller CBNAAT ha varit från Afrika söder om Sahara [6, 8-10, 13, 16, 17]. Indien är en TB hög belastning land och den centrala TB uppdelningen av Indien, som har skänkt ansvaret för att genomföra den reviderade nationella TB kontrollprogram har nyligen installerat mer än 80 CBNAAT maskiner .. Men landsspecifika uppgifter och riktlinjer om hur du använder CBNAAT maskiner för diagnostisera barndom tuberkulos saknas. Vår är också den första studien där vi har använt gastric aspirera och inducerade prov sputum lagras i upp till 4,3 år (median lagringsperiod på 32,5 månader). I smeta och kultur visat prov det visade känslighet 95,7%, vilket var inom intervallet rapporterats av flera andra arbetstagare, men bara på färska prover [10, 17]. I färska prover ett variabelt värde tillsats av Xpert MTB /RIF över MGIT kulturen har rapporterats, men i vår studie värdet Dessutom var minimal (7,9%), förmodligen på grund av en viss förlust av mykobakteriell lönsamhet på lång sikt lagring av prover [32]. De ytterligare fall som upptäckts under guldmyntfoten odlingsprov, var mycket osannolikt att vara falskt positiva. Mykobakteriella räknar bryter på lagring av prover även efter några dagar (30) men motstridiga observationer har också gjorts av andra arbetstagare [33, 34]. Paramasivan et al. [33] rapporterade att det inte fanns någon effekt på känsligheten andelen smeta och kultur efter lagring av sputumprover upp till 10 dagar. Tessema et al. [34] har rapporterat att lagring av sputumprover upp 80 dagar vid rumstemperatur och i frysta prover upp 180 dagar hade ingen negativ effekt på kulturutbytet. Banda et al.

• FGF9 från cancerassocierade fibroblaster är en möjlig förmedlare av invasion och anti-apoptos av magcancer cells
• Antioxidant aktivitet och ultra förändringar i gastric cancercellinjer som induceras av nordöstra Thai ätlig folk växt extracts