Xpert MTB /RIF test se lahko uporablja na arhiviranih želodca aspiracija in povzroča vzorce izpljunka za občutljivo diagnozo pediatrične tuberkuloze

Xpert MTB /RIF test se lahko uporablja na arhiviranih želodca aspiracija in povzroča vzorce izpljunka za občutljivo diagnozo pediatrične tuberkuloze
Abstract
Ozadje
Tuberkuloza (TB) pri otrocih je zanemarjena, predvsem zaradi pomanjkanja občutljivih diagnostičnih orodij . V zadnjem času je Xpert MTB /RIF test revolucionarno diagnostično polje, vendar je njegova uporabnost v pediatrični TB niso poročali iz Indije in nobeno poročilo je na voljo na njegove uporabe na dolgoročnih arhiviranih vzorcev.
Metode
smo zaposlili 130 pediatričnih bolnikov z verjetnim intratorakalnega tuberkulozo in njihovega želodca aspiracija (GA) in izzvanega izmečka (IS) vzorcev na 2 zaporednih dneh so bili zbrani med januarjem 2009 in decembrom 2012. Vsi vzorci (n = 520) so bili izpostavljeni bris pregled, BACTEC-MGIT kulture in v -house
multipleks PCR. Alikvot vsakega vzorca smo shranili pri -80 ° C in preizkušeni v Xpert MTB /RIF test v letu 2013.
Rezultati
vzorcev pametno in potrpežljiv pametno stopnjo odkrivanja brisa mikroskopije je bila 4,4% in 10%, medtem ko je za BACTEC -MGIT kultura ta stopnja je bila 24,4% in 46,9%, v tem zaporedju. 130 dni 1 GA vzorcev, je bilo 31,5% in 27,7% dan 2 GA vzorci kultura pozitivna. Le 17,7% GA vzorci so bili pozitivni na obeh dni. Od 130 vzorcev, zbranih na dan 1. in 2. dan, 15,4% in 23,1% vzorcev je bila kultura pozitivna. Kombinacija GA in IS dala najboljše rezultate. Združevanje tako GA in je bil skupni občutljivost Xpert MTB /RIF na brise in kulturnih vzorcev, pozitivnih na 95,6%. V brisih negativnih in kultura pozitivnih vzorcev je bila njegova občutljivost 62,5%. Trajanje skladiščenja vzorca vplivalo na MTB /Rif testiranja Xpert (p = 0,0001). V razmaza pozitivnih vzorcev, shranjenih za 650-849 dni, je bila njena občutljivost 85,7% in 77,1% za IS in GA vzorcev, ki so se znižale za 33,3% in 50%, oziroma, če je shranjeno več kot 1050 dni.
Razprava
potrdilno diagnozo tuberkuloze, zlasti pri otrocih je medicinski izziv. Ne laboratorij ali radiološka preizkus lahko doseže na zadovoljivi ravni diagnostične občutljivosti. Vendar pa v tej študiji smo foundthat kombinacijo različnih vzorcev in različnih diagnostičnih testov lahko dajejo veliko bolje donos, čeprav notoptimum. V tej študiji, kombinacija 2 želodčnih aspirati (GA) in 2 izzvanega izmečka (IS) vzorci odvzeti na dveh zaporednih dneh, in preizkušen na treh diagnostičnih metod prinesla precej visoko stopnjo odkrivanja. Kljub dolgoročno skladiščenje, splošna občutljivost Xpert MTB /RIF na bris in -culture pozitivnih vzorcev ostala zelo visoka. Toda po shranjevanju teh vzorcev pod subfreezing pogoji thesensitivity o Xpert MTB /RIF bistveno zmanjšala. To je pričakovano, ker tudi če je vzorec bris in kultura pozitiven, število preživelih mikobakterije gre dol, po več letih se lahko to število doseže na nezaznavno raven.
Zaključek
Poročilo kaže, da bris in kultura pozitivnih vzorcev shranjena pri subfreezing pogoje za več let, se lahko uporabljajo v Xpert MTB /RIF test, hkrati pa ohraniti znaten diagnostične občutljivosti preskusu in specifičnost.
Ključne besede
Pediatrija Tuberkuloza Indija želodca Potegnite izzvanega izmečka arhiviranih Vzorci mPCR MGIT Kultura, Xpert MTB /Rif ozadju
Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) ocenjuje, da je globalno breme tuberkuloze (TBC) na 9 milijonov novih primerov in 1,5 milijona smrti v letu 2013 [1]. To je vključevalo do 15% obremenitve pediatričnih primerov. Približno 74.000 otrok umre zaradi tuberkuloze vsako leto in je približno pol milijona novih primerov letno [2]. Tako kot pri odraslih, večina (70-80%) primerov otrok TB prisotne s pljučno tuberkulozo (PTB). Tuberkuloza pri otrocih so relativno zanemarjeno, predvsem zaradi izzivov v razpoložljivosti učinkovitih diagnostičnih orodij [3]. Indija je 17. med 22 zelo obremenjenih držav v smislu skupna incidenca tuberkuloze, vendar zelo malo informacij je na voljo o epidemiologiji tuberkuloze pri otrocih, njegova diagnoza in upravljanje [4, 5].
V večini nastavitvah diagnoza pediatrični TB je narejena na podlagi sledenje stikov, in zelo malo poskusi so bili narejeni za aktivno odkrivanje primerov. To je predvsem posledica pomanjkanja pathognomonic klinično sliko v pediatrični TB in pomanjkanja občutljivih diagnostičnih orodij [3, 4, 6, 7].
Z omejenimi orodij za potrditvene laboratorijsko diagnostiko, ocenjevanje zdravstvene anamneze, tuberkulinizacijo kože, prsih x-ray in pomanjkanje odziva na antibiotike pomagale pri klinično diagnozo. Madeži mikroskopija in potrditev mikrobiološko redko doseže zaradi slabe občutljivosti teh testov, deloma zaradi paucibacillary narave bolezni in nezmožnosti majhne otroke, da se zagotovi optimalno izpljunku vzorec [6]. Nadomestni vzorci vključujejo želodca aspiraciji (GA), izzvanega izmečka (IS), nazofarinksu aspiraciji, bronchio-alveolarne izpiranju, grla bris, test niz in vzorce blata [3, 7-10]. Odvisno diagnostičnega testa so ti vzorci pokazale variabilno občutljivost in specifičnost. Ugotovljeno je bilo, da je v želodcu vzorci želodčnega soka zagotoviti najvišjo (40-92%) stopnjo odkrivanja, glede na občutljivost laboratorijskih testov sprejet. Drugi vzorci so pokazali slabše zaznavanja v razponu od 4-43% za bronhoalveolarni izpiranju, 24-30% za nazofaringealnega aspiracije, 27-63 za grla palčko in 20-30% s pomočjo izzvanega izmečka. Nekateri delavci so uporabili tudi test niz, vendar rezultati niso bili spodbujanje [3, 7, 11-13].
Nedavno uvedbo Xpert MTB /RIF testu je (Cepheid, ZDA) bistveno preoblikovali diagnostiko tuberkuloze pri odraslih , vendar je njena uporaba za diagnostiko pediatrične TB je v postopku ocenjevanja. Ta poskus je hitra in daje rezultate v 2 urah [14]. V izjavi politiki Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) v letu 2011, je bila priporočena uporaba Xpert MTB /RIF testu kot predhodno diagnostično orodje pri otrocih, pri odraslih s sumom virusa humane imunske pomanjkljivosti (HIV), povezanih s tuberkulozo in v vseh MDR TB sumom [ ,,,0],15]. Kasneje je več delavci začeli uporabljati Xpert MTB /Rif test za ugotavljanje pediatrične tuberkuloze [10, 16-18]. Vendar pa je razširjena uporaba Xpert MTB /RIF za diagnozo pediatrično tuberkuloze na rutinsko še vedno oddaljena možnost. Do sedaj, obstaja le nekaj študij o uporabi Xpert MTB /RIF za diagnozo pediatrične TB. Dve študiji poroča o uporabi Xpert MTB /RIF o izzvanega izmečka dve o njegovi uporabi v vzorcih izpiranje želodca. Ni študije, ki poročajo o uporabi Xpert MTB /RIF tako v GA in IS vzorcev istočasno na istem bolniku. Poleg tega ne obstaja študija iz Indije na oceni Xpert MTB /RIF za diagnozo pediatrične pljučne tuberkuloze. Poleg tega še ni bila preučiti uporabnost Xpert MTB /RIF o arhiviranih GA in IS vzorcev. Ker se Xpert MTB /RIF postali dostopni šele po letu 2011, ni druge hitri test, ki lahko zazna tuberkulozi in Rif odpornost hkrati v vzorcih, ki so bili zbrani pred letom 2011. Ta študija obravnava tudi učinek dolgoročno shranjevanje kliničnih vzorcev na za odkrivanje TB, ki ga Xpert MTB /RIF testu.
prej smo poročali, da gA vzorci zagotoviti boljše donose kot IS vzorcev [19]. V naslednjem poročilu smo tudi pokazali, da nevtralizira pH želodca aspiracija pred predelava privede do višje stopnje kontaminacije brez izboljšanja stopnje zaznavanja [20]. V tej študiji smo poroča o uspešnosti Xpert MTB /RIF o arhiviranih GA in JE vzorci odvzeti na dveh zaporednih dneh od otrok z verjetnim intratorakalnega TB, zaposlen kot del dvojno slepo randomizirano kontrolirano preskušanje preučiti vlogo mikrohranil dopolnitev pri otrocih s znotraj prsnega tuberkulozo.
metod
načrtovanja študija in ob zaposlitvi
je bila izvedena v obdobju od januarja 2009 do decembra 2012 na All India inštitut za medicinske vede (AIIMS) in bolnišnice Kalawati Saran otroške (študija KSCH), tako v New Delhiju v Indiji. To delo je del dvojno slepi randomizirani nadzorovani študiji bi preučili vlogo mikrohranil dopolnitev pri otrocih z znotraj prsnega tuberkuloze [19-22]. Skupno 403 otrok (58,2% deklic), starih od 6 mesecev do 14 let [Mediana starosti, 120 mesecev; Vključenih je bilo območje interkvartilni (IQR), 7-168 mesecev], s verjetne znotraj prsni TB. Standardne ambulanta, radiološko merila za sum znotraj prsnega koša tuberkuloze je bila uporabljena v tej študiji, kot je bila objavljena že prej [19-22]. Diagnozo intratorakalnega tuberkuloze je temeljila na priporočilih indijskega Academy of Pediatrics. Vsak otrok s kašljem in vročino več kot 2 tedna brez izboljšanja med sedem do deset dni amoksicilin tečaje in nedavno nepojasnjeno hujšanje ali zgodovine stik s TB bolnika v zadnjih dveh letih. Vse tuberkulozo osumljenci doživel rentgensko slikanje prsnega koša (stransko in posterior-prednjo). V prisotnosti stalnih rentgenskih nepravilnosti, z ne-reševanje kliničnih simptomov in brez druge vzrok za simptome in prsih ugotovitev x-ray, ki je verjetno diagnozo intratorakalnega tuberkulozo je bil dosežen. Vsi otroci z verjetnim tuberkulozo je bil opravljen tuberkulinski kožni test (TST), ambulantno želodčnih aspirati (GA) in izzvanega izmečka (IS) izpit za AFB bris in kulture. Otroci so se začeli o trgovini z orožjem, kot na priporočilih RNTCP [5]. Na kratko: Vsi otroci z verjetnim znotraj prsni tuberkulozo bili podvrženi želodca aspiracije (GA) in izzvanega izmečka (IS), zbirko v dveh zaporednih dneh (D1 & D2). Otroci so bile pozvane, da poročajo 6 h tešče zjutraj na določeni kliniki. Po razlagi postopka in pridobitev soglasja staršev in ustno soglasje od otrok, je bila vstavljena ustrezna cev velika hranjenje (10-12G) skozi eno nosnico, dokler ne doseže želodec. Položaj cevi smo preverili z insuflacijo zraka v želodcu. Vsebina želodca so popolnoma posrka hranijo v sterilno posodo. Običajen obseg zbranih je bilo okrog 10 ml. Vzorci so bili prepeljani v laboratorije za nadaljnjo predelavo v 1-2 urah.
V istem sedi želodca aspiracije je sledila izzvanega izmečka z režo za približno pol ure. Za izpljunku indukciji, je bil otrok napolniti z 2 vpiha salbutamol vdihavanju ga inhalator določenim odmerkom (MDI Asthalin, 100 g /puff, Cipla, Indija)) in distančnik (Zeroastat VT spacer, Cipla, Indija), ki mu sledi pršenjem s 3 ml 3 % fiziološke raztopine nad naslednjem 15-20 min. Vsi vzorci so imeli edinstveno kodne številke; in pošlje v laboratorij brez povezave s kliničnimi in bolnikov podrobnosti. Vzorci so bili obdelani na isti dan za AFB bris, BACTEC-MGIT kulture in-house
PCR [23]. Klinične in druge podatke o bolniku smo zabeležili v excel stanja z obdelavo pediatra in laboratorij ni bil seznanjen s klinično diagnozo predmetov.
Etična vprašanja
Študijo je odobril Institucionalna etični odbor All India inštitut za medicinske vede , New Delhi in Kalawati Saran Hospital Children, New Delhi, Indija, in sojenje je bila registrirana na clinicaltrials.gov (NCT 00801606). Pisna privolitev je bila pridobljena od staršev /skrbnikov vsakega otroka.
Laboratorijske metode
obdelavo vzorca
IS in GA (pH niso nevtralizirani) so bili vzorci obdelujejo kot je opisano prej [19, 21, 23, 24] . Na kratko smo vzorce centrifugirali pri 10000 x g 10 min pri 4 ° C; Supernatant oddekantiramo in pelete ponovno suspendirali v enakem volumnu 0.5% NALC-4% NaOH zmesi v 50 ml grebenu pokrovom okroglih cevi za obdelavo dna. Suspenzija je bila temeljito (4 x 10 y vsak interval) vrtimo, da se zagotovi ustrezno mešanje in inkubiramo pri 37 ° C za 10 minut. Po inkubaciji smo alkalno pH nevtralizirali z fosfatni pufer [PBS (pH 6,8, skupnim volumnom 50 ml)], čemur sledi končno centrifugiranjem pri 10000 x g 10 min pri 4 ° C. Supernatant dekantiramo; pelet ponovno suspendiramo v 2 ml PBS in 0,5 ml, alikvote v 4 sterilne epruvete. Ena alikvot je bil uporabljen za pripravo brisa, enega za kulturo in drugo za testiranje v in-house
multipleks PCR (m-PCR). En alikvot smo shranili pri -80 ° C za nadaljnjo uporabo. Iz ene alikvot, je suspenzija 500 ul nacepili v BACTEC MGIT-960 sistemom tekoče kulture (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, ZDA), z uporabo standardnega protokola [25]. Ne glede na pozitiven ali negativen zasvetil Posledično so vse kulture pregledal Ziehl-Neelsen barvanjem. Razlikovanje izolatov v Mycobacterium tuberculosis
(MTB) ali ne-tuberkulozne mikobakterije (NTM) je opravil vrste posebnega in-house
m-PCR [23]. IS in GA vzorcev alikvote, shranjenih pri -80 ° C, je bilo naknadno preučiti v Xpert MTB /RIF testu.
Xpert MTB /RIF Testna
Leta 2013 so bili shranjeni vzorci izpostavljeni Xpert MTB /RIF testiranje . Bilo je 520 dekontaminirati GA in se poveže vzorcev (130x2 GA & 130x2 IS), ki so primerni za testiranje, medtem ko so bili bodisi v količini ali kakovosti (kontaminirane) ne zadošča. Vzorec reagenta varovalni omejevalno NaOH in izopropanola dodamo v razmerju 3: 1 (skupaj 2 ml) in inkubirali 15 minut pri sobni temperaturi. Obdelani vzorec (2 ml) smo nato prenesli v Xpert MTB /RIF vložek vsebuje pralnega pufra, liofiliziramo reagente za ekstrakcijo DNK in PCR. Po ustreznem mešanju je vložek vstavljen v Xpert MTB /RIF instrumenta, po navodilih proizvajalca (Cepheid, ZDA). Instrument izvaja primerek mešanje, ultrazvočno razbijanje mikobakterijske bacilov in notranji nadzor (spor), sproščanja DNK in mešanje z reagentov PCR, samodejno. Temu sledi, hemi ugnezdeni pravi čas za pomnoževanje, ciljno odkrivanje po petih barv fluorescence molekularna oddajanja sond in notranje kontrole na kraju samem
. Rezultati so ustvarjeni po 2 uri in opisati, kakor M. tuberculosis
- negativen ali pozitiven s pol-količinsko bacillary obremenitve, kot visoko, srednje, srednje ali nizko in če je patogen RIF občutljive ali odporne proti [14]. Podrobnosti bolnikov so bili povezani z vzorcih šele po zaključku Xpert MTB /RIF vrednotenja.
Statistična analiza
je Občutljivost Xpert MTB /RIF določi z upoštevanjem MGIT kulture potrdili vzorce pravi pozitiven. Za določitev specifičnosti Xpert MTB /RIF, bris, MGIT kulture in-house
so m-PCR negativne vzorce obravnavati kot prave negativnih vzorcev. Pozitivne napovedne vrednosti (PPV), negativna napovedna vrednost (NPV) in razmerje verjetnost za pozitivno (LRP) Xpert MTB /RIF so bile izračunane z 95% IZ (intervali zaupanja). LRP večjo od enega kažejo, da je rezultat testa najverjetneje res pozitivna in najmanj en pomeni, da je rezultat testa verjetno res negativen [26]. Pearson Test hi kvadrat je bila izvedena za primerjavo bolnikov pametno analize. Izključiti del sporazuma po naključju, je bila uporabljena preskusna kappa
Cohen. P-vrednost. ≪ 0.05.was velja za statistično značilno [stata 11,0 (College Station, Texas, ZDA) programska oprema je bila uporabljena za vse statistične analize]
Rezultati
V tej študiji, ki poteka od januarja 2009 do decembra 2012. skupno 403 otrok (58,2% deklic), starih od 6 mesecev do 14 let [Mediana starosti, 120 mesecev; Vključenih je bilo območje interkvartilni (IQR), 7-168 mesecev], s verjetne znotraj prsni TB. ti otroci so bili vključeni le od koga tako GA in IS vzorci odvzeti na dveh zaporednih dneh so bili na voljo. Zato paru IS in GA vzorci, pridobljeni v dveh zaporednih dni od 130 otrok, so bili analizirani s Xpert MTB /RIF testom. V dekontaminirati Vzorce smo shranili pri -80 ° C 21,4 do 51,9 mesecev (obdobje mediana shranjevanje 32,5 mesecev; IQR 27-35,1), preden so bili ti izpostavljeni Xpert MTB /RIF analizo. Laboratorij potek in povzetek rezultatov so prikazani na sl. 1. Sl. 1 Diagram prikazuje vključitev vzorcev s pretokom obdelave vzorcev, uporabljenih metod in rezultatov, kot na smernicah Strobe
Diagnostic izid IS in GA vzorcev, odvzetih v dveh zaporednih dneh
le 23 od 520 (4,4%) vzorcev od 13 (10%) so bili otroci AFB brisa pozitivna (sl. 1). Od teh 23 vzorcev, 9 je bilo D1 in 8 so D2 GA vzorci. Drugi dan (D2) GA vzorci zaznal 3 dodatne AFB bris pozitivne primere, ko je zgrešil 4 primere, ki so bili pozitivni na D1, zato ni videla nobenih neto mejna vrednost iz D2 GA vzorca. Le 3 vzorci so bili pozitivni na obeh D1 ali D2. D2-IS vzorec dodali en primer zgrešil tudi en primer. Šestdeset ena od 130 (46,9%) otrok [127 od 520 (24,4%) vzorcev] so postavili diagnozo, da ima kultura potrdili tuberkulozo bodisi bris ali kulture (tabela 1). Od 130 D1-GA vzorcev, 41 (31,5%), medtem ko je bilo 36 (27,7%) od D2-GA vzorcev kultura pozitivna. Dvajset tri (17,7%) otrok je imel kulturo pozitivno GA na obeh dneh (tabela 2). Donos od induciranih vzorcev pljunka je bila slaba. 130 IS vzorce, zbrane na D1, je bilo le 20 vzorcev (15,4%) pozitiven, medtem ko na D2, je bilo 30 (23,1%) vzorcev kultura pozitivna (tabela 3). Šestnajst (12,3%), otroci so imeli kulture pozitiven, se na obeh dni. donosov MGIT kulture iz GS in IS vzorce, zbrane v dveh zaporednih dneh je prikazano v (tabeli 2 & 3, v tem zaporedju). Ni bilo dodatno vrednost drugi dan GA vzorca za bris mikroskopijo (9 vs 8), kulture (41 vs 36), ali Xpert MTB /RIF test (33 vs
34). Vendar pa je vzorce, zbrane v dveh zaporednih dneh, ki znatno dodano vrednost na področju kulture (20 vs
30), vendar pa je ta zanemarljiv dodaten porast v Xpert MTB /RIF testu (22 vs
25). Kombinacija ene GA, ena pa je vzorec dal najboljši diagnostični pripomoček, ne glede na D1 ali D2. Skoraj je bilo 50% vzorcev (bodisi GA ali IS) Xpert MTB /RIF pozitivna na obeh dneh (sl. 2) .table 1 Poslovanje Xpert MTB /RIF test v bakteriološko pozitivnih in bakteriološko negativnih vzorcev [kombinaciji želodca aspirati (n
= 260) in povzroča sputa (n
= 260)], ki jo otrok z verjetnim intratorakalnih tuberkulozo
bakterioloških meril (N = 520)
podmeril
Ne . (%)
Xpert MTB /Rif Rezultati
Pozitivno (%)
Negativno (%)
bakteriološko pozitivna (n
= 127; 24,4%)
bris (+), kulturo (+)
23 (4.4) * **
22 (95,7)
1 (4.3)
bris (-), kulture ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), kultura (-)
0
0
0
Vmesni seštevek
127
87 (68,5)
40 (31,5)
bakteriološko negativni (n
= 393; 75,5%)
bris (-), kulture (-)
393
31 (7,9)
362 (92,1)
Skupaj
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
tabela kaže visoko učinkovitost Xpert MTB /RIF v kulturi in bris pozitivnih vzorcev, vendar zmerno stopnjo odkrivanja v bris negativen kulture pozitivnih vzorcev
*, ** P
< 0,001 (+) - pozitivno, (-) - Negativno, številka v oklepaju navede odstotek
Tabela 2 Poslovanje MGIT 960 kulture na želodcu vzorcih aspirat, zbranih v dveh zaporednih dneh od 130 otrok z verjetnim intratorakalnega tuberkulozo
MGIT960 kulturo Rezultati
Dan 1
pozitivne
negativno
Skupaj
2. dan
pozitivno
23 (17,7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
Negativne
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
Total
41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabela 3 Performance MGIT 960 kulture na izzvanega izmečka vzorcih, zbranih v dveh zaporednih dneh od 130 otrok z verjetnim intratorakalnega tuberkulozo
MGIT 960 kulturo Rezultati
Dan 1
pozitivne
negativno
Skupaj
2. dan
pozitivno
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negativne
4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
Total
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
sl. 2. Posamezni in analiza prekrivanja Xpert MTB /RIF pozitivnosti v želodčni aspirat in povzroča izpljunku vzorce, zbrane na 2 zaporednih dni
Primerjava IS in GA
splošno, v vzorcih (IS + GA), ki so bili pozitivni bodisi brisa in /ali kultura (127/520), občutljivost Xpert MTB /RIF testu je bila nekoliko nižja (68,5%, 87/127), v primerjavi z bakteriološko preiskavo (tabela 1), pa je zaznati tudi 7,9% (31/393) dodatnih primerov v kulturi, ki daje splošno občutljivost 22,7% [118/520] (p
= NS), vendar bistveno višja (p
= 0,001) občutljivost od brisa mikroskopijo (tabela 4). Uspešnost Xpert MTB /RIF bila 95,6% (22/23) na brise in kulture pozitivnih arhiviranih vzorcev, kot je prikazano v (tabela 1) in diagram (sl. 1). Vseh 14 vzorcev, ki jih prinašajo NTM vrste so bris negativen, ampak kultura in m-PCR pozitiven. Zato o ponovnem vrednotenju je bila občutljivost Xpert MTB /RIF na bris negativen, vendar kulture pozitivnega (samo MTB) vzorcev 72,2% (65/90). Ampak, če bi bili vsi kultura pozitivni vzorci skupaj, ne da bi mikobakterijske vrste, občutljivost padel na 62,5% (65/104), ob 14 NTM izolira. Občutljivost Xpert MTB /RIF ne razlikujejo bistveno med GA in IS vzorci, če vse bakteriološke (bris in /ali kultura) pozitiven GA (92,2%, 71/77) in IS (94%, 47/50) so primerjali vzorce . Ne NTM pozitiven vzorec je napačno ugotovila Xpert MTB /RIF vendar je zgrešil en bris, kulturo in m-PCR pozitiven vzorec, je izolat identificiran kot MTB s m-PCR in. Vse Xpert MTB /Rif pozitivni vzorci so bili tudi m-PCR pozitiven. Zato naše in-house m-PCR in Xpert MTB /RIF pokazala 100% preverjanje skladnosti NTM /MTB diferenciacije (sl. 1) .table 4 občutljivost, specifičnost in napovedne vrednosti Xpert MTB /RIF testu s sklicem na AFB brisa in Bactec- MGIT960 kultura v izzvanega izmečka (n
= 260) v primerjavi želodčni aspirat (n
= 260) vzorcev
Občutljivost
Specifičnost
PPV

NPV
LRF pozitivnega testa
Diagnostična natančnost
Občutljivost (bris pozitiven)
Občutljivost (bris negativen)
Xpert MTB /RIF test vs kulture
izzvanega izmečka
35/50 (70,0%; 56,2-80,9) *
198/210 (94,3%; 90.3-96.7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7-95,7)
12,2% (10,2-14,8)
89,6% (85,3-92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
želodca Potegnite
52/77 (67,5%; 56.5-76.9) *
164/183 (89,6%; 84.3-93.2) **
73,2% (61.9-82.1)
87,8% (81,2-90,9)
6,5% (5,8-7,3)
83,1% (78,0-87,1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs kulture
izzvanega izmečka
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98.2-100)
100% (60.8-100)
82,7% (77.5-86.8) -
83,1% (78,1-87,1)
Na
Na
želodca Potegnite
17/77 (22,1%; 14.3-32.5)
183/183 (100%; 97,9-100)
100 % (81,6-100)
75,3% (71,4-81,6) -
76,9% (71.4-81.6)
NA
Na
podatkov n /n (%; 95% CI) ali% (95% CI), Pozitivna napovedna vrednost (PPV), negativna napovedna vrednost (NPV), Verjetnost razmerje (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p
= 0,792
Primerjava Xpert MTB /RIF, kulturo in AFB brisa mikroskopijo
Xpert MTB /RIF test zazna dodaten 31 393 (7,9%) vzorcev, ki so bili tako AFB bris in MGIT kultura negativna, vendar zamudil 39 104 (37,5%) kulture pozitivnih vzorcev (tabela 4). Pri otrocih z verjetnim intratorakalnega tuberkulozo, želodčni aspirat opredelila več zadev, kot izzvanega izmečka uporabo bris mikroskopijo, kulturo in Xpert MTB /Rif testom (6,5, 29,6 in 27,3% vs
2,3, 19,2 in 18,0%, v tem zaporedju). Donos Xpert MTB /RIF testu zmanjševali s podaljševanjem skladiščenja GA, kot tudi IS vzorci. V vzorcih shranjenih za 650-849 dni, je bila stopnja odkrivanja Xpert MTB /RIF testom na IS vzorcih 85,7%, kar v vzorcih shranjenih več kot 1050 dni, znižal na 33,3%. Podobno so bile te stopnje 77,1 in 50%, v tem zaporedju v GA vzorcev (sl. 3). Po dolgem razlike skladiščenje v pridelka IS in GA so bili zelo pomembni (P
= 0,002). Fig. 3 Zaradi upadanja pozitivnosti v Xpert MTB /RIF testu v zvezi s trajanjem skladiščenja želodca aspiracija in izzvanega izmečka vzorcev
Razprava
Prišlo je pretok publikacij o Xpert MTB /RIF znana tudi kot GeneXpert ali kartuše, ki temelji testiranje pomnoževanja nukleinske kisline (CBNAAT) v zadnjih 3 letih. To je prva študija, iz Indije o uporabi Xpert MTB /RIF testom pri otrocih z intratorakalnega TB in tudi prva študija poroča o koristnosti tega testa na arhiviranih GA in IS vzorce otrok v TB endemične državi. Študija kaže, da tudi v GA in IS vzorce shraniti do 4 letih, Xpert MTB /RIF test ostala uporabna kot diagnostično orodje za otroštvu tuberkulozo. V GA in BO vzorcev, ki so bili bris in kultura pozitivna, občutljivost Xpert MTB /RIF testu je bila 95,6%, kar je podoben tistemu, ki ga v svežih kliničnih vzorcev. Kot je bilo pričakovati občutljivost Xpert MTB /RIF je bil boljši od tistega iz brisa mikroskopije (p
= 0,0001). Vendar pa je pozitivna, vendar bris negativnih vzorcev je bila občutljivost Xpert MTB /RIF testu na kulturi nižja (62,5%). Uspešnost Xpert MTB /RIF testu je bila predhodno ocenjevali predvsem na vzorcih sputuma, zbranih od bolnikov odraslih TB [27-30], ki kažejo visoko občutljivost razmaza in kulture pozitivnih vzorcev (98-100%), vendar precej manjšo občutljivost brisa negativna vzorci izpljunku (43-70%). Naše ugotovitve so bile podobnih teh ugotovitev, ampak na arhiviranih vzorcev. Nižja občutljivost Xpert MTB /RIF testu so poročali tudi pri HIV pozitivnih odraslih [29]. Obstaja nekaj študij, ki so bile opravljene pri otrocih in zelo malo, če je bila izvedba Xpert MTB /RIF testu ocenjen na razen vzorcev pljunka [4-10, 30, 31] vzorcev. Nicol sod. [8], vključenih 452 otrok, za analizo z najmanj ena oseba je vzorec iz vsakega otroka. Pokazali so tudi slabo občutljivost mikroskopije (6%), kulture (16%) in Xpert MTB /RIF testa (13%) v teh vzorcih. V tej študiji je bilo pa vendarle odkrivanja obrestne mere teh treh metod višje, vendar je vzorec je bil podoben. Ker smo pregledali tudi IS in GA vzorcev na dveh zaporednih dni, v primerjavi bil donos od IS vzorcev precej nižja od vzorcev želodca aspirat. Čeprav ni nobenega doslej objavljeni podatki, v katerih so bili uporabljeni tako GA in IS vzorci v isti študiji oceniti občutljivost in specifičnost Xpert MTB /RIF testu v klinično verjetnih primerih intratorakalnega tuberkuloze, vendar naši rezultati so bili v popolnem soglasju z ugotovitve Bates et al. [10] Rachow sod. [16] in Sekadde sod. [17]. Naša raziskava je pokazala, da so bris in kultura donosi v GA vzorcih boljše od IS vzorcev pa je občutljivost Xpert MTB /RIF test ni bistveno drugačna v GA in IS vzorcev, v vzorcih, ki so shranjeni pri -80 ° C, za isto trajanje (77,1 in 85,7%, v tem zaporedju; P
= 049). Poleg tega smo zbrali oba vzorca v dveh zaporednih dneh, in ta protokol nekoliko pod boljši izkoristek v vseh diagnostičnih tehnik to razmaza, kulture in Xpert MTB /RIF analiznih. Zaradi tega dvojnega dvostranskega pristopa, bi lahko dosegli visoko diagnostično {61 130; 46,9% otrok (na analizi bolnikov)} donos.
Večina publikacij o Xpert MTB /RIF ali CBNAAT so bili iz podsaharske Afrike [6, 8-10, 13, 16, 17]. Indija je TB visoko država breme in delitev osrednji TB Indije, ki je bil podaril odgovornost izvajanja revidiranega nacionalnega nadzornega TB programa je pred kratkim namestili več kot 80 CBNAAT strojev .. Ampak država specifičnih podatkov in smernice o uporabi CBNAAT stroji diagnosticiranje otroštva tuberkuloze primanjkuje. Naša je tudi prva študija, pri čemer smo uporabili želodca aspiraciji in izzvanega izmečka vzorec shranjen stanuje 4,3 let (mediana obdobje shranjevanja 32,5 mesecev). V brisih in kulture dokazano vzorcev je pokazala občutljivost 95,7%, kar je bilo v razponu več drugih delavcev, ampak le na svežih vzorcev [10, 17] poroča. V svežih vzorcih je bila prijavljena vrednost dodatek spremenljivka Xpert MTB /RIF nad MGIT kulture, vendar pa v naši raziskavi je bilo to dodana vrednost majhna (7,9%), verjetno zaradi neke izgube upravičenosti mikobakterijskimi o dolgoročnem skladiščenju vzorcev [32]. Ugotovljene nad testom zlati standard kulture dodatnih primerov, je bilo zelo verjetno, da bi lažno pozitiven. Mikobakterijami šteje tanjšajo za shranjevanje vzorcev, tudi po nekaj dni (30), vendar nasprotujoče si ugotovitve so bili vloženi tudi druge delavce [33, 34]. Paramasivan sod. [33] so poročali, da ni bilo učinka na stopnje občutljivosti bris in kulture po shranjevanju vzorcev v izpljunku upto 10 dni. Tessema sod. [34], so poročali, da je shranjevanje vzorcev pljunka upto 80 dni pri sobni temperaturi in v zamrznjenih vzorcih stanuje imela 180 dni nima negativnega vpliva na donos kulture. Banda sod.

• FGF9 od raka povezana fibroblastov je mogoče posrednik invazije in anti-apoptoze želodca rakavih celic
• Antioksidativno aktivnost in ultrastrukturni spremembe v želodcu raka celičnih linijah s severovzhodne tajske užitnih folk obrat induciranih extracts