Xpert MTB /RIF määritystä voidaan käyttää arkistoituja mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskös näytteitä herkille diagnosointiin lapsipotilaiden tuberculosis

Xpert MTB /RIF määritystä voidaan käyttää arkistoituja mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskös näytteitä herkille diagnosoimiseksi lapsipotilaiden tuberkuloosin
Abstract
Taustaa
Tuberkuloosi (TB) lapsilla laiminlyödään, lähinnä puutteen herkkiä diagnostisia työkaluja. Äskettäin Xpert MTB /RIF määrityksen on mullistanut diagnostiikan alalla, mutta sen käyttökelpoisuus lapsipotilaiden TB ei ole raportoitu Intiasta eikä raportti on saatavilla sen käyttöä pitkän aikavälin arkistoitu näytteitä. Tool Menetelmät
Rekrytoimme 130 lapsipotilasta jossa todennäköinen rintaonteloon tuberkuloosia ja niiden mahalaukun aspiroi (GA) ja indusoi yskös (IS) näytteet 2 peräkkäisenä päivänä kerättiin tammi 2009 joulukuuta 2012. Kaikki näytteet (n = 520) tehtiin mustamaalata tutkimus, BACTEC-MGIT kulttuuri ja -House
multiplex-PCR. Alikvootti kutakin näytettä säilytettiin -80 ° C: ssa ja testattiin Xpert MTB /RIF määrityksen vuonna 2013.
tulokset
Näyte viisasta ja potilaan viisasta havaitsemismäärä kokeena mikroskopia oli 4,4% ja 10%, kun taas BACTEC -MGIT kulttuuri tämä osuus oli 24,4% ja 46,9%, tässä järjestyksessä. 130 päivää 1 GA näytettä, 31,5% ja 27,7% päivänä 2 GA näytteet olivat kulttuurin positiivisia. Vain 17,7% GA näytteet olivat positiivisia molempina päivinä. Niistä 130 IS kerätyt näytteet päivänä 1 ja päivänä 2, 15,4% ja 23,1% näytteistä oli viljelypositiivisia. Yhdistelmä GA ja IS tuotti parhaat tulokset. Yhdistäminen sekä GA ja IS, yleinen herkkyys Xpert MTB /RIF annetun kokeena ja kulttuurin positiivista näytettä oli 95,6%. Vuonna kokeena negatiivinen ja kulttuurin positiivista näytettä sen herkkyys oli 62,5%. Kesto Näytteen varastoinnin vaikutti Xpert MTB /RIF kokeen aikana (p = 0,0001). Vuonna kokeena positiiviset näytteet säilytetään 650-849 päivää, sen herkkyys oli 85,7% ja 77,1% IS ja GA näytteitä joka laski 33,3% ja 50%: lla, jos säilytetty yli 1050 päivää.
Keskustelu
Uudistetut todettu tuberkuloosi erityisesti lapsilla on lääketieteellinen haaste. Ei laboratorio- tai radiologisia testi voi päästä tyydyttävälle tasolle diagnostisen herkkyyden. Kuitenkin tässä tutkimuksessa foundthat yhdistelmä useiden näytteiden ja useita diagnostisia testejä voi antaa paljon paremman tuoton, vaikka notoptimum. Nykyisessä tutkimuksessa, yhdistelmä 2 mahalaukun aspirates (GA) ja 2 indusoi ysköksen (IS) näytteet kerättiin kahtena peräkkäisenä päivänä, ja testattiin kolmella diagnostisia menetelmiä tuotti merkittävän suuri paljastumisaste. Pitkäaikaisesta varastoinnista huolimatta, yleinen herkkyys Xpert MTB /RIF annetun kokeena ja -Kulttuuri positiivisten näytteiden pysyi erittäin korkealla. Mutta sen jälkeen tallentamalla nämä näytteet alle subfreezing olosuhteissa thesensitivity of Xpert MTB /RIF vähentynyt merkittävästi. Tämän odotetaan sillä vaikka näyte on kokeena ja kulttuurin positiivisia, lasken elossa mykobakteerien menee alas, kun useita vuosia tämän määrä voi saavuttaa on havaittavissa tasolle.
Johtopäätös
raportti osoittaa, että kokeena ja kulttuuri positiivista näytettä varastoidaan subfreezing olosuhteissa useita vuosia voidaan käytetään Xpert MTB /RIF määrityksen, säilyttäen tuntuva diagnostinen testi herkkyys ja spesifisyys.
avainsanat
Pediatrics Tuberkuloosi Intia Mahalaukun Ime aiheuttama Yskös arkistoituja näytteitä mPCR MGIT Culture, Xpert MTB /RIF Taustaa
Maailman terveysjärjestö (WHO) arvioi maailmanlaajuisen taakan tuberkuloosi (TB) 9 miljoonaa uutta tapausta ja 1,5 miljoonaa kuolemantapausta vuonna 2013 [1]. Tämä mukana jopa 15% taakasta lapsipotilaiden tapauksessa. Noin 74000 lasta kuolee tuberkuloosiin vuosittain ja on noin puoli miljoonaa uutta tapausta vuosittain [2]. Kuten aikuisilla, suurin osa (70-80%) lasten tuberkuloositapausten läsnä keuhkotuberkuloosi (PTB). Tuberkuloosi lapsilla on suhteellisen laiminlyöty, lähinnä haasteita saatavuudessa tehokkaiden diagnostisten välineiden [3]. Intia on 17. joukossa 22 raskaasta maita niiden yleistä TB ilmaantuvuus, mutta hyvin vähän tietoa myöskään epidemiologian TB lapsilla, sen diagnosointiin ja hoitoon [4, 5].
Useimmissa asetukset diagnoosi lapsipotilaiden TB on tehdyt perusteella tartunnan jäljittämisessä, ja hyvin harvat yritetty aktiivista ilmenemismäärä. Tämä johtuu pääasiassa puute patognomisia kliinisen esityksen lapsipotilaiden TB ja puute herkkien diagnoosimenetelmien [3, 4, 6, 7].
Rajoitettu työkalut vahvistamista laboratoriodiagnoosia, arviointi sairaushistoria, tuberkuliinikokeessa testaus, rintakehän röntgenkuva ja puute vastaus antibioottien auttaa tekemään kliininen diagnoosi. Kokeena mikroskopia ja vahvistettu mikrobiologisesti harvoin saavutetaan huonon näiden testien herkkyyden, osittain johtuen paucibacillary sairauden laatu ja kyvyttömyys pikkulasten tarjota optimaalisen yskösnäyte [6]. Vaihtoehtoinen näytteitä ovat mahan aspirate (GA), indusoi yskös (IS), nenänielun aspirate, bronchio-alveolaarinen huuhtelu, kurkunpään moppi, string testi ja ulostenäytteet [3, 7-10]. Riippuen diagnostinen testi käytetty, nämä näytteet on vaihdellut herkkyys ja spesifisyys. On raportoitu, että mahahuuhtelua näytteet mahdollisimman suuri (40-92%) etsivä arvioida, herkkyydestä riippuen laboratoriotestien tulokset hyväksyttiin. Muut näytteet ovat osoittaneet huonompi havaitseminen hinnat vaihtelevat 4-43% for bronkoalveolaarinen huuhtelu, 24-30% ja nenänielun toive, 27-63 kurkunpään moppi ja 20-30% käyttämällä aiheuttama ysköksen. Jotkut työntekijät ovat käyttäneet myös merkkijono testissä, mutta tulokset eivät ole olleet rohkaisevia [3, 7, 11-13].
Juuri annettu Xpert MTB /RIF määrityksen (Cepheidiltä, ​​USA) on merkittävästi muuttanut diagnostiikka tuberkuloosin aikuisilla , mutta sen soveltaminen diagnosoimiseksi lapsipotilailla TB on arvioitavana. Tämä määritys on nopea ja tuottaa tuloksia 2 h [14]. Vuonna politiikkalinjauksen Maailman terveysjärjestö (WHO) vuonna 2011, suositeltavaa käyttää Xpert MTB /RIF määrityksen alustavana diagnostinen työkalu lapsilla, aikuisilla, joilla epäillään ihmisen immuunikatovirus (HIV) liittyvä tuberkuloosi ja kaikissa MDR epäillyistä [ ,,,0],15]. Tämän jälkeen useat työntekijät ovat alkaneet käyttää Xpert MTB /RIF määrityksen diagnosoimiseksi lapsipotilaiden tuberkuloosi [10, 16-18]. Kuitenkin laajalle levinnyt käyttö Xpert MTB /RIF diagnosoimiseksi lapsipotilailla TB rutiininomaisesti edelleen kaukainen vaihtoehto. Tähän mennessä on olemassa vain muutamia tutkimuksia soveltamisesta Xpert MTB /RIF diagnosoimiseksi lapsipotilaiden TB. Kahdessa tutkimuksessa raportoida käytöstä Xpert MTB /RIF annetun aiheuttamaa ysköksessä kaksi sen käytöstä mahahuuhtelu näytteissä. Ei ole tutkimuksia, jotka raportoivat käyttö Xpert MTB /RIF sekä GA ja IS näytteitä samanaikaisesti samalla potilaalla. Edelleen, ei ole mitään tutkimusta Intiasta arvioinnista Xpert MTB /RIF diagnosoimiseksi lapsipotilaiden keuhkojen TB. Lisäksi hyödyllisyyttä Xpert MTB /RIF annetun arkistoituja GA ja IS näytteitä ei ole aiemmin tutkittu. Koska Xpert MTB /RIF oli käytettävissä vasta vuoden 2011 jälkeen, ei ole muuta pikatesti joka voi havaita tuberkuloosi ja RIF vastus samanaikaisesti näytteitä, jotka kerättiin ennen vuotta 2011. Tutkimuksessa tarkastellaan myös vaikutusta pitkäaikaisen varastoinnin kliinisten näytteiden päälle havaitseminen TB jonka Xpert MTB /RIF määrityksen.
Olemme aiemmin raportoitu, että GA näytteet paremmin saannot kuin IS näytteitä [19]. Myöhemmässä raportissa todettiin myös, että neutraloivat pH mahan aspirate ennen käsittelyä johtaa korkeampi saastumisen parantamatta havaittava [20]. Tässä tutkimuksessa olemme raportoida suorituskykyyn Xpert MTB /RIF annetun arkistoituja GA ja IS kerätyt näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä lasten kanssa todennäköinen rintakehänsisäinen TB, palvelukseen osana kaksinkertainen sokea satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa tutkia roolia mikroravinteiden lisäämisen lapsilla intratorakaalisen tuberkuloosi. Tool menetelmät
Tutkimusasetelma ja aihe rekrytointi
tutkimus toteutettiin tammi 2009 joulukuuta 2012 All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) ja Kalawati Saran lastensairaalassa ( KSCH), sekä New Delhi, Intia. Tämä työ oli osa kaksinkertainen sokea satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa tutkia roolia mikroravinteiden lisäämisen lapsilla intratorakaalisen tuberkuloosi [19-22]. Kaikkiaan 403 lasta (58,2% tytöistä), iältään 6 kuukaudesta 14 vuoteen [Mediaani-ikä, 120 kuukautta kvartiiliväli (IQR), 7-168kuukausi], jossa todennäköinen intratorakaalisen TB otettiin. Standardi klinikka-radiologisia kriteerit epäillä intratorakaalisen tuberkuloosi käytettiin tässä tutkimuksessa aikaisemmin julkaistujen [19-22]. Diagnoosi rintaonteloon tuberkuloosi perustui suosituksiin Intian Academy of Pediatrics. Jokainen lapsi yskää ja kuumetta yli 2 viikkoa ei parane aikana seitsemän-kymmenenpäivää amoksisilliini kurssi ja viime selittämätön laihtuminen tai ollut yhteyttä TB potilaan kahden viime vuoden aikana. Kaikki tuberkuloosi epäillyt kävivät läpi rintakehän röntgenkuva (sivu- ja taka-anterior). Läsnäollessa pysyviä röntgen- poikkeavuuksia, ei-resoluutio kliinisten oireiden eikä vaihtoehtoista oireiden aiheuttaja ja rintakehän röntgenlöydökset, todennäköinen diagnoosi rintaonteloon tuberkuloosi tehtiin. Kaikki lasten todennäköinen tuberkuloosi alistettiin tuberkuliinikoe (TST), liikkuva mahalaukun ydinaspiraatit (GA) ja indusoi yskös (IS) tutkimista AFB kokeena ja kulttuuriin. Lapset aloitettiin asekauppasopimusta kohti suositukset RNTCP [5]. Lyhyesti: Kaikki lapset todennäköinen intratorakaalisen tuberkuloosi tehtiin mahalaukun toive (GA) ja indusoi yskös (IS) kerääminen kahtena peräkkäisenä päivänä (D1 & D2). Lapset pyydettiin ilmoittamaan 6 h paasto aamulla nimetylle klinikalla. Selitettyään menettelyyn ja suostumus vanhempien ja sanallinen hyväksynyt kyseiset lapset, sopivan kokoinen syöttöaukko (10-12G) työnnettiin läpi yhteen sieraimeen kunnes se saavutti vatsaan. Asema putken tarkistettiin puhaltamalla ilmaa mahaan. Sisältö mahan imettiin kokonaan, pidetään steriiliin astiaan. Tavallinen volyymi kerätyt oli noin 10 ml. Näytteet kuljetettiin laboratorioon jatkojalostusta varten 1-2 h.
Samassa istuu mahalaukun pyrkimys seurasi aiheuttama yskös rako on noin puoli tuntia. Sillä yskös induktio, lapsi pohjamaalattiin 2 suihketta salbutamolia hengittäessä annossumutinta (MDI Asthalin, 100 ug /pullistaa, Cipla, Intia)) ja välikappale (Zeroastat VT spacer, Cipla, Intia) ja sen jälkeen sumuttamalla 3 ml: lla 3 % suolaliuosta seuraavan 15-20 min. Kaikki näytteet annettiin ainutlaatuinen koodinumerot; ja lähetetään laboratorioon ilman linkin kliininen ja potilastiedot. Näytteitä käsiteltiin samana päivänä AFB kokeena, BACTEC-MGIT kulttuuri ja talon
PCR [23]. Kliiniset ja muut potilastiedot kirjattiin excel käsittelemällä lastenlääkäri ja laboratorio ei ollut tietoinen kliininen diagnoosi aiheista.
Eettiset
Tutkimuksen hyväksyi Institutional eettisen komitean All India Institute of Medical Sciences , New Delhi ja Kalawati Saran Children Hospital, New Delhi, Intia, ja oikeudenkäynti rekisteröitiin clinicaltrials.gov (NCT 00801606). Kirjallinen suostumus saatiin vanhempien /huoltajien kunkin lapsen.
Laboratoriomenetelmät
Näytteen käsittely
IS ja GA (pH ei neutraloitu) näytteitä käsiteltiin kuten aiemmin on kuvattu [19, 21, 23, 24] . Lyhyesti, näytteet sentrifugoitiin 10000 x g 10 min, 4 ° C: ssa; Supernatantti dekantoitiin ja pelletti suspendoitiin uudelleen yhtä suureen tilavuuteen 0,5% NALC-4% NaOH seokseen 50 ml harjun rajattu pyöreäpohjaisessa käsittely putkiin. Suspensio oli perusteellisesti (4 x 10 s kullakin aikavälillä) vorteksoitiin varmistaa kunnollisen sekoittumisen ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 10 min. Inkubaation jälkeen, emäksinen pH neutraloitiin fosfaattipuskurilla [PBS (pH 6,8, kokonaistilavuus 50 ml)], minkä jälkeen lopullinen sentrifugoimalla 10000 x g 10 min, 4 ° C: ssa. Supernatantti dekantoitiin; pelletti uudelleen suspendoitiin 2 ml: aan PBS: ää ja 0,5 ml: n tilavuus alikvootit 4 steriileihin putkiin. Yksi näyte käytettiin kokeena valmistelua, toinen kulttuurin ja toinen testattavaksi in-house
multiplex PCR (m-PCR). Yksi alikvootti varastoitiin -80 ° C: ssa myöhempää käyttöä varten. Yhdestä näyte, 500 ui suspensiota siirrostettiin BACTEC MGIT-960 nesteviljelmä järjestelmä (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA), käyttäen vakioyhteyskäytäntöä [25]. Riippumatta siitä, positiivinen tai negatiivinen Flashed seurauksena kaikki viljelmät tutkittiin Ziehl-Neelsen värjäystä. Erilaistuminen Isolaattien Mycobacterium tuberculosis
(MTB) tai ei-tuberkuloottinen mykobakteerien (NTM) toteuttivat lajille ominainen talon
m-PCR [23]. IS ja GA näytealikvootteja, säilytetään -80 ° C: ssa, oli takautuvasti tarkasteltiin Xpert MTB /RIF määrityksen.
Xpert MTB /RIF Test
2013 tallennetut näytteet altistettiin Xpert MTB /RIF testaus . Oli 520 puhdistetaan GA ja IS pariksi näytteitä (130x2 GA & 130x2 IS), jotka olivat sopivia testausta, kun taas toiset olivat joko ole riittävä määrä tai laatu (epäpuhdas). Näyte reagenssia, joka sisälsi NaOH: a ja isopropanolia lisättiin suhteessa 3: 1 (yhteensä 2 ml), ja inkuboitiin 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Käsitelty näyte (2 ml), sitten siirrettiin Xpert MTB /RIF patruuna, joka sisältää pesupuskuria, lyofilisoitu reagenssit DNA: n eristämisessä ja PCR-monistamisen. Kun oikea sekoitus, kasetin ladattu Xpert MTB /RIF väline, kohti valmistajan ohjeiden (Cepheidiltä, ​​USA). Testeri suorittaa näytteen sekoittaminen, sonikoimalla mykobakteeri basilleja ja sisäinen valvonta (itiöt), DNA vapautuminen ja sekoittamista PCR reagenssit, automaattisesti. Tätä seuraa hemi-sisäkkäisiä reaaliaikainen-PCR-monistuksen kohteen havaitsemiseen viiden värin fluoresenssi molekyylimajakka- antureista ja sisäinen valvonta-situ
. Tulokset syntyvät kuluttua 2 h ja raportoidaan M. tuberculosis
- negatiivinen tai positiivinen osittain määrällisesti bacillary kuormitus korkea, keskitaso, väli- tai pieni ja jos taudinaiheuttajaa on RIF herkkä tai resistentti [14]. Potilas yksityiskohtia liittyy testattujen näytteiden vasta valmistumisen Xpert MTB /RIF arviointiin.
Tilastollinen analyysi
herkkyys Xpert MTB /RIF on määritelty kyseisille MGIT kulttuurin vahvisti näytteitä oikeita positiivisia. Voit selvittää spesifisyyden Xpert MTB /RIF, preparaatti, MGIT kulttuuri ja talon
m-PCR-negatiivinen näytteitä pidetään tosi negatiivisten näytteiden. Positiiviset ennustearvojen (PPV), negatiivinen ennustearvo (NPV) ja todennäköisyys suhde positiivinen (LRP) Xpert MTB /RIF laskettiin 95%: n luottamusväli (luottamusvälit). LRP on suurempi kuin yksi, tarkoittaa, että testitulos on todennäköisesti oikeita positiivisia ja alle tarkoittaa, että testitulos on todennäköisesti totta negatiivinen [26]. Pearson chi square koe suoritettiin vertaamalla potilaan viisasta analyysi. Sulkea pois osuutta sopimuksen sattumalta, Cohenin kappa
testillä. P-arvo < 0.05.was pidettiin tilastollisesti merkitsevä [STATA 11,0 (College Station, Texas, USA) ohjelmiston käytettiin tilastoanalyyseissa].
Tulokset
Tässä tutkimuksessa, joka toteutettiin tammi 2009 joulukuu 2012. kaikkiaan 403 lasta (58,2% tytöistä), iältään 6 kuukaudesta 14 vuoteen [mediaani-ikä, 120 kuukautta kvartiiliväli (IQR), 7-168kuukausi], jossa todennäköinen intratorakaalisen TB otettiin. Vain ne lapset olivat mukana keneltä sekä GA ja IS kerätyt näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä oli saatavilla. Siksi pariksi IS ja GA saatujen näytteiden kahtena peräkkäisenä päivänä alkaen 130 lasta analysoitiin Xpert MTB /RIF määrityksen. Puhdistetut näytteitä säilytettiin -80 ° C: ssa +21,4-+51,9kuukausi (mediaani säilytysajan 32,5 kuukautta; IQR 27-35,1) ennen kuin nämä tehtiin Xpert MTB /RIF analyysi. Laboratorio työnkulku ja yhteenveto tuloksista on esitetty kuvassa. 1. Fig. 1 vuokaavion sisällyttämistä näytteiden virtaa näytteen käsittelyyn, käytetyt menetelmät ja tulokset per STROBE suuntaviivat
Diagnostic tulos IS ja GA kerätyt näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä
Vain 23 ulos 520 (4,4%) näytteistä 13 (10%) lapsista oli AFB kokeena positiivisia (Fig. 1). Näistä 23 näytettä, 9 oli D1 ja 8 olivat D2 GA näytteitä. Toinen päivä (D2) GA havaitsemista 3 ylimääräistä AFB kokeena positiivisia tapauksia, kun se jäi 4 tapausta, jotka olivat positiivisia D1, joten ei ollut nettolisäkustannukset arvon D2 GA näyte. Vain 3 IS näytteet olivat positiivisia joko D1 tai D2. D2-IS näyte lisätään yksi tapaus, mutta myös jäänyt yksi tapaus. Kuusikymmentä yksi 130 (46,9%) lapsia [127 520 (24,4%) näytteistä] diagnosoitiin olevan kulttuuri vahvistaneet tuberkuloosi joko preparaatti tai kulttuuri (taulukko 1). Out of 130 D1-GA näytteistä 41 (31,5%), kun taas 36 (27,7%) ja D2-GA näytteet olivat kulttuurin positiivisia. Kaksikymmentä kolme (17,7%) lapsilla oli viljelypositiivisina GA molempina päivinä (taulukko 2). Saanto aiheuttama ysköksestä näytteistä oli huono. 130 IS kerätyt näytteet D1, vain 20 näytettä (15,4%) oli positiivisia kun taas D2, 30 (23,1%) näytteet olivat kulttuuri positiivinen (taulukko 3). Kuusitoista (12,3%) lapsilla oli viljelypositiivisina IS molempina päivinä. MGIT kulttuuri tuoton GA ja IS kerätyt näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä on esitetty (taulukot 2 & 3, tässä järjestyksessä). Ei ollut mitään lisäarvoa toisen päivän GA näyte kokeena mikroskopia (9 vs. 8), kulttuuri (41 vs. 36), tai Xpert MTB /RIF määrityksen (33 vs
34). Kuitenkin IS kerätyt näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä tarjotaan merkittävää lisäarvoa kulttuuri (20 vs
30), mutta merkityksetön ylimääräinen lisäys vuonna Xpert MTB /RIF määrityksen (22 vs
25). Yhdistelmä yhden GA ja yksi IS näyte antoi parhaan vianmääritysohjelmaa riippumatta D1 tai D2. Lähes 50% näytteistä (joko GA tai IS) olivat Xpert MTB /RIF positiivinen molempina päivinä (Fig. 2) .table 1 suoritus Xpert MTB /RIF määritystä bakteriologisesti positiiviset ja bakteriologisesti negatiiviset näytteet [yhdistelmä mahalaukun aspirates (n
= 260) ja indusoi ysköksissä (n
= 260)] kerättyjä lasten todennäköinen rintaonteloon tuberkuloosi
Bakteriologiset kriteerit (N = 520)
Sub-kriteerien
Ei . (%)
Xpert MTB /RIF Tulokset
Positiiviset (%)
Negatiivinen (%)
bakteriologisesti positiivinen (n
= 127; 24,4%) B Smear (+), kulttuuri (+) B-23 (4,4) *, **
22 (95,7) B 1 (4,3) B-preparaatti (-), kulttuuri ( +) B-104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5) B Smear (+), kulttuuri (-) B-0
0
0
Yhteensä
127
87 (68,5)
40 (31,5) B bakteriologisesti negatiivinen (n
= 393; 75,5%) B Smear (-), kulttuuri (-)
393
31 (7,9) B-362 (92,1) B Yhteensä
520
118 (22,7) **
402 (77,3) B taulukosta ilmenee korkea teho Xpert MTB /RIF kulttuurin ja yskösvärjäyspositiivisista näytteet, mutta maltillinen havaitsemismäärä in kokeena negatiivisten kulttuurin positiivista näytettä
*, ** P
< 0,001, (+) - positiivinen, (-) - Negatiivinen, suluissa osoittavat prosenttiosuuden
Taulukko 2 suorituskyky MGIT 960 kulttuurin mahalaukun aspirate näytteistä kahtena peräkkäisenä päivänä alkaen 130 lasten todennäköinen rintaonteloon tuberkuloosi
MGIT960 Culture tulokset
päivä 1
Positiivinen
Negatiivinen
Yhteensä
Päivä 2
Positiivinen
23 (17,7%)
13 (10%) B 36 (27,7%) B Negatiivinen
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%) B Yhteensä
41 (31,5%)
89 (68,5%) B 130
Taulukko 3 suorituskyky MGIT 960 kulttuurin aiheuttama ysköksessä näytteistä kahtena peräkkäisenä päivänä alkaen 130 lasten todennäköinen rintaonteloon tuberkuloosi
MGIT 960 Culture tulokset
päivä 1
Positiivinen
Negatiivinen
Yhteensä
Päivä 2
Positiivinen
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%) B Negatiivinen
4 (3,1%)
96 (73,8%) B 100 (76,9%) B Yhteensä
20 (15,4%) B 110 (84,6%) B 130
Fig. 2 Yksilöllinen ja päällekkäisyyksiä analyysi Xpert MTB /RIF positiivisuuden mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskös näytteitä kerättiin 2 peräkkäisenä päivänä
vertailu IS ja GA
Kaiken näytteissä (IS + GA), jotka olivat positiivisia joko kokeena ja /tai kulttuuri (127/520), herkkyys Xpert MTB /RIF määrityksessä oli hieman pienempi (68,5%, 87/127) verrattuna bakteriologinen tutkimus (taulukko 1), mutta se myös havaittu 7,9% (31/393) lisätapauksia yli kulttuuri antaa yleisen herkkyys 22,7% [118/520] (p
= NS), mutta huomattavasti suurempi (p
= 0,001) herkkyys kuin kokeena mikroskopia (taulukko 4). Suorituskyky Xpert MTB /RIF oli 95,6% (22/23) on kokeena ja kulttuurin positiivisia arkistoidaan näytteitä, kuten on esitetty (taulukko 1) ja virtauksen kaavio (Fig. 1). Kaikki 14 näytettä, jotka saatiin NTM lajit olivat kokeena negatiivisia mutta kulttuuri ja m-PCR-positiivinen. Siksi on uudelleenarviointia, herkkyys Xpert MTB /RIF päällä kokeena negatiivisia, mutta kulttuuri positiivinen (MTB vain) näytteet oli 72,2% (65/90). Mutta jos kaikki kulttuurin positiiviset näytteet on otettu yhdessä ottamatta huomioon mykobakteerilajeissa, herkkyys putosi alas 62,5% (65/104) johtuen 14 NTM isolaatteja. Herkkyys Xpert MTB /RIF ei juurikaan välillä GA ja IS näytteitä, jos kaikki bakteriologisesti (kokeena ja /tai kulttuuri) positiivinen GA (92,2%, 71/77) ja IS (94%, 47/50) näytteitä verrattiin . Ei NTM positiivinen näyte väärin tunnistettiin Xpert MTB /RIF mutta se jäi yksi kokeena, kulttuurin ja m-PCR positiivinen näyte, isolaatti tunnistettiin MTB m-PCR ja. Kaikki Xpert MTB /RIF positiiviset näytteet olivat myös m-PCR-positiivinen. Siksi meidän talon m-PCR ja Xpert MTB /RIF osoitti 100% yhteneväinen NTM /MTB erilaistumista (Fig. 1) .table 4 Herkkyys, spesifisyys ja ennustava arvoja Xpert MTB /RIF määrityksen viitaten AFB kokeena ja Bactec- MGIT960 kulttuurin aiheuttama ysköksen (n
= 260) vs. mahalaukun aspirate (n
= 260) näytteiden
Herkkyys
spesifisyys
PPV

NPV
LRF positiivisen testin
diagnostinen tarkkuus
Herkkyys (kokeena positiivinen)
Herkkyys (kokeena negatiivinen)
Xpert MTB /RIF määrityksen vs Culture
aiheuttama Yskös
35/50 (70,0%; 56,2-80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3-96,7) **
74,5% (60,5 -84,6) B 92,7% (88,7-95,7) B 12,2% (10,2-14,8) B 89,6% (85,3-92,8) B 6/6 (100%) B 29/44 ( 65,9%) B Mahalaukun Ime
52/77 (67,5%; 56,5-76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3-93,2) **
73,2% (61,9-82,1)
87,8% (81,2-90,9) B 6,5% (5,8-7,3) B 83,1% (78,0-87,1) B 16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs Culture
aiheuttama Yskös
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2-100) B 100% (60,8-100) B 82,7% (77,5-86,8) -
83,1% (78,1-87,1)
NA
NA
Mahalaukun Ime
17/77 (22,1%; 14,3-32,5) B 183/183 (100%; 97,9-100) B 100 % (81,6-100) B 75,3% (71,4-81,6) -
76,9% (71,4-81,6) B NA
NA
Data n /N (%; 95% CI) tai% (95% CI), Positiivinen ennustearvo (PPV), negatiivinen ennustearvo (NPV), todennäköisyys suhde (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p
= 0,792
vertailu Xpert MTB /RIF, kulttuurin ja AFB kokeena mikroskopia
Xpert MTB /RIF määrityksen havainnut ylimääräisen 31 393 (7,9%) näytteistä, jotka olivat molemmat AFB kokeena ja MGIT kulttuuri negatiivisia, mutta jäi 39 104 (37,5%) kulttuurin positiivisia näytteitä (taulukko 4). Lapsilla, joilla todennäköinen rintakehänsisäinen tuberkuloosi, mahalaukun aspiraatista tunnistettu enemmän tapauksia kuin aiheuttama ysköksen avulla kokeena mikroskopia, kulttuurin ja Xpert MTB /RIF määrityksen (6,5, 29,6 ja 27,3% vs.
2,3, 19,2 ja 18,0%, tässä järjestyksessä). Saanto Xpert MTB /RIF määrityksen, laskivat varastointiaika GA sekä IS näytteitä. Näytteissä säilytettiin 650-849 päivää, havaitseminen nopeudella Xpert MTB /RIF määrityksen IS näytteistä oli 85,7%, joka laski 33,3% näytteissä varastoida yli 1050 päivää. Samoin näiden hinnat olivat 77,1 ja 50%, vastaavasti GA näytettä (Fig. 3). Pitkän varastoinnin jälkeen ero saannon IS ja GA oli erittäin merkitsevä (P
= 0,002). Kuva. 3 Vähenemässä positiivisuus osuuksista Xpert MTB /RIF määrityksen suhteessa varastointiaika mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskös näytteitä
Keskustelu
on ollut virtaus julkaisuja Xpert MTB /RIF tunnetaan myös GeneXpert tai patruunakäyttöinen nukleiinihappoamplifikaatiotestillä testaus (CBNAAT) viimeisten 3 vuoden aikana. Tämä on ensimmäinen tutkimus, Intiasta käytöstä Xpert MTB /RIF määrityksen lapsilla rintaonteloon tuberkuloosin ja myös ensimmäinen tutkimus raportoimaan hyödyllisyys Tämän määrityksen päälle arkistoituja GA ja IS näytteitä lasten TB endeeminen maassa. Tutkimus osoittaa, että vaikka GA ja IS näytteitä säilytettiin jopa 4 vuotta, Xpert MTB /RIF määrityksen pysyi käyttökelpoinen diagnostisena välineenä lapsuuden tuberkuloosi. GA ja IS näytteet, jotka olivat kokeena ja kulttuurin positiivisia, herkkyys Xpert MTB /RIF määrityksessä oli 95,6%, joka on samankaltainen kuin tuoreessa kliinisistä näytteistä. Kuten odotettua herkkyys Xpert MTB /RIF oli parempi kuin kokeena mikroskopia (p
= 0,0001). Kuitenkin herkkyys Xpert MTB /RIF määrityksen kulttuurin positiivisia mutta kokeena negatiiviset näytteet oli alempi (62,5%). Suorituskyky Xpert MTB /RIF määrityksen on aiemmin arvioitu lähinnä ysköksen näytteistä aikuisen tuberkuloosipotilaille [27-30], joka esittää suuren herkkyyden kokeena ja kulttuuri positiivisten näytteiden (98-100%), mutta paljon pienempi herkkyys kokeena negatiivinen ysköksen näytteet (43-70%). Meidän havainnot olivat myös samanlaiset nämä tulokset, mutta arkistoidaan näytteistä. Matalampi herkkyys Xpert MTB /RIF määrityksen on myös raportoitu HIV-positiivisilla aikuisilla potilailla [29]. On olemassa muutamia tutkimuksia, jotka on tehty lapsilla ja hyvin harvat, jos suorituskyky Xpert MTB /RIF määrityksen on arvioitu näytteille muun kuin yskös näytteitä [4-10, 30, 31]. Nicol et ai. [8] sisältyy 452 lasta analysoitavaksi ainakin yksi on näyte kustakin lapsesta. He osoittivat myös huono herkkyys mikroskopia (6%), kulttuuri (16%) ja Xpert MTB /RIF määrityksen (13%) näistä näytteistä. Esillä olevassa tutkimuksessa, vaikka havaitseminen hinnat näiden kolmen menetelmän olivat korkeammat, mutta kuvio oli samanlainen. Koska me tutkittiin sekä IS ja GA näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä, vertailun tuottoa IS näytteistä oli paljon pienempi kuin mahalaukun aspirate näytteitä. Vaikka tietoja ei ole toistaiseksi julkaistu, jossa sekä GA ja IS näytteitä on käytetty samassa tutkimuksessa arvioimaan herkkyys ja spesifisyys Xpert MTB /RIF määrityksen kliinisesti todennäköinen tapauksissa rintakehänsisäinen tuberkuloosi, mutta tuloksemme olivat yhteensä yhdenmukaiset havainnot Bates et al. [10], Rachow et ai. [16] ja Sekadde et ai. [17]. Tutkimuksemme osoittaa, että kokeena ja kulttuuri saannot GA näytteet parempia kuin IS näytteiden kuitenkin herkkyys Xpert MTB /RIF määrityksen ei ollut merkitsevästi erilainen GA ja IS näytteitä, näytteissä säilytettiin -80 ° C: ssa samassa kesto (77,1 ja 85,7%, tässä järjestyksessä; P
= 049). Lisäksi keräsimme molemmat näytteet kahtena peräkkäisenä päivänä, ja tämä protokolla hieman oli parempi tuotto kaikissa diagnoosimenetelmien so kokeena, kulttuurin ja Xpert MTB /RIF määrityksen. Koska tämä kaksinkertainen lähestymistapaan, voisimme saavuttaa korkea diagnostinen {61 130; 46,9% lapsista (per potilas analyysi)} tuotto. Dating julkaisuja Xpert MTB /RIF tai CBNAAT on Saharan eteläpuolisessa Afrikassa [6, 8-10, 13, 16, 17]. Intia on TB korkea taakka maan ja Keski TB jako Intia, joka on lahjoittanut velvollisuus toteuttaa tarkistetun kansallisen tuberkuloosin valvontaohjelma on äskettäin asennettu yli 80 CBNAAT koneita .. Mutta maakohtaiset tiedot ja ohjeet käytöstä CBNAAT koneiden diagnosoimiseksi lapsuuden tuberkuloosi puuttuvat. Meidän on myös ensimmäinen tutkimus, jossa on käytetty mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskösnäyte säilytetään enintään 4,3 vuotta (mediaani säilytysaika 32,5 kuukautta). Vuonna kokeena ja kulttuurin todistettu otokset osoittivat herkkyys 95,7%, joka oli alueella raportoitu useiden muiden työntekijöiden vaan ainoastaan ​​tuoreet näytteet [10, 17]. Tuoreissa näytteet muuttujan arvon lisäys Xpert MTB /RIF yli MGIT kulttuuri on raportoitu, mutta tutkimuksessamme tämä arvo lisäys oli vähäinen (7,9%), mikä johtui todennäköisesti joitakin menetyksestä mykobakteeri elinkelpoisuutta pitkäaikaiseen varastointiin näytteiden [32]. Ylimääräiset havaittujen tapausten yli kultakantaan bakteeriviljelytuloksiin, olivat hyvin todennäköisesti vääriä positiivisia. Mykobakteeri laskee heikentävistä varastoinnista näytteiden jopa muutaman päivän kuluttua (30), mutta ristiriitaisia ​​havaintoja on tehty myös muilla työntekijät [33, 34]. Paramasivan et ai. [33] ilmoitti, että se ei vaikuttanut herkkyyteen hinnat kokeena ja kulttuurin tallentamisen jälkeen ysköksen näytteet Jopa 10 päivää. Tessema et ai. [34] ovat raportoineet, että varastointi yskös näytteitä enintään 80 päivää huoneenlämmössä ja jäädytetyt näytteet Jopa 180 päivää ei ollut kielteistä vaikutusta kulttuuriin tuotto. Banda et ai.

• FGF9 syöpään liittyvien fibroblastien on mahdollinen välittäjäaine hyökkäyksen ja anti-apoptoosin mahalaukun syöpäsolujen
• Antioksidantti ja Mikroskooppitutkimus muutokset mahasyövän solulinjoissa aiheuttama Northeastern Thai syötävä kansanmusiikin kasviuutteet