Xpert MTB /RIF-Test kann auf archivierten Magenaspirat verwendet werden und Sputum-Proben für empfindliche Diagnose von pädiatrischen tuberculosis

Xpert MTB /RIF-Test induziert auf archivierten Magenaspirat verwendet werden und Sputum-Proben für empfindliche Diagnose von pädiatrischen Tuberkulose
Zusammenfassung induzierte
Hintergrund
Tuberkulose (TB) bei Kindern vernachlässigt wird, vor allem wegen des Mangels an sensiblen Diagnose-Tools. Vor kurzem hat Xpert MTB /RIF-Test die diagnostische Bereich revolutioniert, aber seine Nützlichkeit bei pädiatrischen TB nicht aus Indien und kein Bericht ist auf den Einsatz auf Langzeit archivierten Proben verfügbar berichtet.
Methoden kaufen Wir 130 pädiatrischen Patienten rekrutiert mit wahrscheinlichen intrathorakalen Tuberkulose und ihre Magenaspirat (GA) und induzierten Sputum (IS) Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen wurden zwischen Januar 2009 und Dezember 2012. Alle Proben (n = 520) gesammelt ausgesetzt wurden Prüfung, BACTEC-MGIT Kultur zu schmieren und in -Haus
Multiplex-PCR. Ein Aliquot jeder Probe wurde bei -80 ° C und getestet in Xpert MTB /RIF-Test im Jahr 2013
Ergebnisse gespeichert
weise und Patient weise Erkennungsrate von Schmiermikroskopie Probe 4,4% und 10% betrug, während für BACTEC -MGIT Kultur war diese Rate 24,4% und 46,9%, respectively. Von den 130 Tage 1 GA Proben, 31,5% und 27,7% Tag 2 GA Proben waren Kultur positiv. Nur 17,7% GA Proben waren an beiden Tagen positiv. Von den 130 Proben am Tag gesammelt 1 und Tag 2, 15,4% und 23,1% Proben waren Kultur positiv. Eine Kombination von GA und ist am besten Ergebnisse erzielt. beide GA und IS, die allgemeine Empfindlichkeit von Xpert MTB /RIF auf Abstrich und Kultur positiven Proben die Kombination betrug 95,6%. In Abstrich negativ und Kultur positiven Proben die Empfindlichkeit war 62,5%. Die Dauer der Probenlagerung beeinflusst das Xpert MTB /RIF-Test Leistung (p = 0,0001). In Abstrich positiven Proben für 650-849 Tage gelagert, seine Empfindlichkeit betrug 85,7% und 77,1% für die Proben und GA, die auf 33,3% gesunken und 50%, bzw. gespeichert, wenn für mehr als 1050 Tage.
Diskussion
bestätigende Diagnose der Tuberkulose vor allem bei Kindern ist eine medizinische Herausforderung. Kein Labor oder Röntgenprüfung kann auf einem befriedigenden Niveau der diagnostischen Empfindlichkeit erreichen. Jedoch in dieser Studie foundthat wir Kombination von mehreren Proben und mehrere diagnostische Tests können viel bessere Ausbeute ergeben, obwohl notoptimum. In dieser Studie, eine Kombination von zwei Magen abgesaugt (GA) und 2 induzierten Sputum (IS) Proben an zwei aufeinanderfolgenden Tagen gesammelt und getestet auf drei diagnostischen Methoden ergab eine signifikant hohe Erkennungsrate. Trotz langfristige Lagerung, die Gesamtsensitivität von Xpert MTB /RIF auf Abstrich und -Kultur positive Proben blieben sehr hoch. Aber nachdem diese Proben Lagerung unter Bedingungen die Empfindlichkeit von Xpert MTB /RIF subfreezing deutlich zurückgegangen. Dies ist zu erwarten, denn selbst wenn die Probe Abstrich und Kultur positiv, der Graf Mykobakterien überleben geht, nach mehreren Jahren kann diese Anzahl auf einen nicht nachweisbaren Niveau zu erreichen.
Fazit
Dieser Bericht zeigt, dass Abstrich und Kultur positive Proben gespeichert unter Bedingungen, seit mehreren Jahren unter dem Gefrierpunkt in der Xpert MTB /RIF-Test verwendet werden, während merkliche diagnostische Sensitivität und Spezifität zu halten.
Schlüsselwörter Pediatrics Tuberkulose Indien Magenaspirat induzierten Sputum archivierten Proben mPCR MGIT Kultur, Xpert MTB /RIF Hintergrund
Weltgesundheitsorganisation (WHO) schätzt die globale Belastung der Tuberkulose (TB) auf 9 Millionen Neuerkrankungen und 1,5 Millionen Todesfälle im Jahr 2013 [1]. Dazu gehörten zu 15% Last der pädiatrischen Fälle auf. Über 74.000 Kinder sterben an TB jedes Jahr und es gibt rund eine halbe Million neuer Fälle jährlich [2]. Wie bei Erwachsenen, die Mehrheit (70-80%) der Kinder TB-Fälle vorhanden mit Lungentuberkulose (PTB). Tuberkulose bei Kindern ist relativ vernachlässigt, vor allem auf Herausforderungen in der Verfügbarkeit von wirksamen Diagnose-Tools [3]. Indien gehört zu 22 Ländern mit hoher Prävalenz in Bezug auf die Gesamt TB-Inzidenz 17, aber nur sehr wenige Informationen ist bei Kindern in Bezug auf die Epidemiologie der Tuberkulose zur Verfügung, ihre Diagnose und Behandlung [4, 5].
In den meisten Einstellungen Diagnose von pädiatrischen TB hergestellt auf der Basis der Kontaktverfolgung, und nur sehr wenige Versuche für aktive Fallabfragung vorgenommen. Dies ist vor allem wegen des Mangels an einer pathognomonische klinischen Präsentation in der pädiatrischen TB und der Mangel an empfindlichen Diagnose-Tools [3, 4, 6, 7].
Mit begrenzten Tools für bestätigende Labordiagnostik, Beurteilung von Medizingeschichte, Tuberkulin-Hauttests, Röntgen-Thorax und mangelnde Reaktion auf Antibiotika helfen, die klinische Diagnose zu machen. Smear-Mikroskopie und mikrobiologische Bestätigung wird selten aufgrund der schlechten Empfindlichkeit dieser Tests erreicht, aufgrund der paucibacillary Art der Krankheit und der Unfähigkeit von kleinen Kindern teil eine optimale Sputumprobe bereitzustellen [6]. Alternative Proben umfassen Magenaspirat (GA), induzierten Sputum (IS), Nasen-Rachen-aspirieren, bronchio Lavage, Kehlkopf- Tupfer, Fadentest und Stuhlproben [3, 7-10]. Je nach diagnostischer Test verwendet werden, haben diese Proben variable Empfindlichkeit und Spezifität gezeigt. Es wurde berichtet, dass Magenspülungsproben die höchste (40-92%) Erkennungsrate liefern, abhängig von der Empfindlichkeit des Labortest angenommen. Andere Proben haben schlechtere Erkennungsraten von 4 bis 43% für Bronchiallavage Bereich gezeigt, 24-30% für Nasen-Rachen-Aspiration, 27-63 für Larynx-Tupfer und 20-30% von induzierten Sputum verwenden. Einige Arbeiter haben auch String-Test verwendet aber die Ergebnisse sind nicht ermutigend gewesen [3, 7, 11-13].
Die kürzliche Einführung des Xpert MTB /RIF-Test (Cepheid, USA) hat sich deutlich die Diagnose von Tuberkulose bei Erwachsenen verwandelt , aber ihre Anwendung für die Diagnose von pädiatrischen TB unter Auswertung. Dieser Test ist schnell und liefert Ergebnisse innerhalb von 2 h [14]. In einer Grundsatzerklärung im Jahr 2011 Weltgesundheitsorganisation (WHO) empfohlen, die Verwendung von Xpert MTB /RIF-Test als vorläufige Diagnose-Tool bei Kindern, bei Erwachsenen mit Verdacht auf humanen Immundefizienz-Virus (HIV) assoziiert Tuberkulose und in allen MDR TB Verdachtsfällen [ ,,,0],15]. Anschließend wurden mehrere Arbeiter unter Verwendung Xpert MTB /RIF-Test zur Diagnose von pädiatrischen tuberculosis begann [10, 16-18]. Allerdings bleibt die weite Verbreitung von Xpert MTB /RIF für die Diagnose von pädiatrischen TB auf einer Routinebasis noch eine entfernte Möglichkeit. Bis heute gibt es nur wenige Studien über die Anwendung des Xpert MTB /RIF für die Diagnose von pädiatrischen TB. Zwei Studien berichten über die Verwendung des Xpert MTB /RIF auf induzierten Sputum zwei auf seine Verwendung in der Magenspülung Proben. Es gibt keine Studien, die sowohl in der GA bei der Verwendung von Xpert MTB /RIF berichten und IS Proben gleichzeitig auf dem gleichen Patienten. Des Weiteren gibt es auf der Auswertung von Xpert MTB /RIF für die Diagnose der pädiatrischen Lungentuberkulose keine Studie aus Indien. Darüber hinaus hat die Nützlichkeit von Xpert MTB /RIF auf archivierten GA und IS Proben bisher nicht untersucht worden. Da das Xpert MTB /RIF erst nach 2011 zur Verfügung standen, gibt es keine andere Schnelltests, die TB und RIF Widerstand gleichzeitig in Proben nachweisen kann, die vor 2011 gesammelt wurden, auch diese Studie die Wirkung der Langzeitlagerung von klinischen Proben für die auf sucht Nachweis von TB durch den Xpert MTB /RIF-Test.
Wir haben früher berichtet, dass GA Proben als IS Proben bessere Erträge liefern [19]. In einem späteren Bericht zeigten wir auch, dass der pH-Wert des Magens aspirieren Neutralisieren vor der Verarbeitung zu einer höheren Rate von Kontamination führt, ohne dass die Erkennungsrate zu verbessern [20]. In der vorliegenden Studie berichten wir über die Leistung des Xpert MTB /RIF auf archivierten GA und IS-Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen von Kindern mit wahrscheinlichen intrathorakalen TB gesammelt, rekrutiert als Teil einer Doppel randomisierte kontrollierte Studie verblindet die Rolle von Mikronährstoffen zu studieren bei Kindern mit intrathoracischen Tuberkulose.
Methoden
Studiendesign und Rekrutierungs
die Studie von Januar 2009 bis Dezember 2012 im All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) und Kalawati Saran Kinderkrankenhaus durchgeführt wurde ( KSCH), die beide in Neu-Delhi, Indien. Diese Arbeit war Teil einer doppelblind randomisierten kontrollierten Studie die Rolle von Mikronährstoffen bei Kindern mit intrathoracischen Tuberkulose [19-22] zu studieren. Insgesamt 403 Kinder (58,2% Mädchen), im Alter zwischen 6 Monaten und 14 Jahren [Mittleres Alter, 120 Monate, Quartilsabstand (IQB), 7-168 Monate], mit wahrscheinlichen intrathoracischen TB eingeschrieben waren. Die Standard-Klinik-Röntgen Kriterien für den Verdacht intrathoracischen Tuberkulose wurde in dieser Studie verwendet wurden, wie bereits veröffentlicht [19-22]. Die Diagnose der intrathorakalen Tuberkulose wurde auf Empfehlungen der indischen Academy of Pediatrics basiert. Jedes Kind mit Husten und Fieber von mehr als 2 Wochen keine Besserung während sieben bis zehn Tage Amoxicillin Kurs und den letzten unerklärlicher Gewichtsverlust oder Geschichte der Kontakt mit TB Patienten in den vergangenen zwei Jahren. Alle Tuberkulose Verdächtigen unterzog sich einer Röntgenaufnahme des Thorax (lateral und posterior-anterior). In Anwesenheit von persistenten Röntgen Anomalien, mit nicht Abklingen der klinischen Symptome und keine alternative Ursache für die Symptome und Brust Röntgenbefunde, wurde eine wahrscheinliche Diagnose von intrathorakalen Tuberkulose gemacht. Alle Kinder mit Tuberkulose wahrscheinlich wurden Tuberkulin-Hauttest (TST), ambulante Magen Aspiraten (GA) und induzierten Sputum (IS) Prüfung für AFB-Abstrich und Kultur unterworfen. Die Kinder wurden auf ATT gemäß Empfehlungen des RNTCP [5] gestartet. Kurz gesagt: Alle Kinder mit wahrscheinlichen intrathoracischen Tuberkulose wurden Magen-Aspiration (GA) und induzierten Sputum unterworfen (IS) Sammlung an zwei aufeinanderfolgenden Tagen (D1 & D2). Die Kinder wurden gebeten, 6 h Fasten am Morgen an den bezeichneten Klinik zu berichten. Nach der Erläuterung wurde das Verfahren und den Erhalt Zustimmung von Eltern und verbale Zustimmung von den Kindern, eine geeignete Größe Ernährungsschlauch (10-12 g) durch ein Nasenloch eingeführt, bis es den Magen erreicht. Die Position des Rohres wurde durch Einblasen von Luft in den Magen überprüft. Der Inhalt des Magens wurden in sterilen Behälter vollständig, gehalten abgesaugt. Übliche Volumen gesammelt war etwa 10 ml. Die Proben wurden zur weiteren Bearbeitung innerhalb von 1-2 h zu Labor transportiert.
Im gleichen Magen-Aspiration sitzen induzierten Sputum mit einem Abstand von etwa einem halben Stunde folgte. Für Sputuminduktion wurde das Kind mit zwei Zügen Salbutamol Inhalation durch Dosieraerosol (MDI Asthalin, 100 ug /puff, Cipla, Indien) grundiert) und Abstandshalter (Zeroastat VT Spacer, Cipla, Indien), gefolgt von Vernebelung mit 3 ml 3 % Kochsalzlösung für die nächsten 15 bis 20 min. Alle Proben wurden eindeutige Codenummern gegeben; und ohne einen Link zu den klinischen und Patientendaten an das Labor geschickt. Die Proben wurden am gleichen Tag für AFB-Abstrich, BACTEC-MGIT Kultur verarbeitet und in-House | PCR [23]. Klinische und andere Patientendaten wurden in Excel-Blatt aufgezeichnet von dem Arzt, die Behandlung und das Labor war der klinischen Diagnose der Probanden nicht bewusst.
Ethische Überlegungen
Die Studie von institutionellen Ethikkommission des All India Institute of Medical Sciences genehmigt wurde , Neu-Delhi und Kalawati Saran Children Hospital, Neu-Delhi, Indien, und die Studie wurde an clinicaltrials.gov (NCT 00801606) registriert. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von den Eltern /Erziehungsberechtigte des Kindes erhalten.
Laborverfahren
Probenbearbeitung
IS und GA (pH nicht neutralisierten) Proben verarbeitet wurden, wie zuvor beschrieben [19, 21, 23, 24] . Kurz gesagt, wurden die Proben für 10 min bei 4 ° C bei 10000 x g zentrifugiert; Überstand dekantiert und wurde Pellet in einem gleichen Volumen von 0,5% NALC-4% NaOH Mischung in 50 ml ridge capped Rundbodenbearbeitungsrohre resuspendiert. Die Suspension wurde gründlich (4 x 10 s jedes Intervall) verwirbelt geeignetes Mischen sicherzustellen, und wurde für 10 min bei 37 ° C inkubiert. Nach der Inkubation alkalischen pH-Wert wurde bei 4 ° C mit Phosphatpuffer [PBS (pH 6,8, Gesamtvolumen von 50 ml)], gefolgt von abschliessende Zentrifugation bei 10.000 x g für 10 min, neutralisiert. Der Überstand wurde dekantiert; das Pellet RE- in 2 ml des PBS und 0,5 ml Volumen aliquotiert in 4 sterile Röhrchen suspendiert. Eine Teilmenge wurde für Abstrich Vorbereitung, eine für die Kultur und eine andere für die Prüfung in einem In-House | Multiplex-PCR (m-PCR) verwendet. Ein Aliquot wurde bei -80 ° C zur weiteren Verwendung gelagert. Von einem aliquoten wurde eine 500 ul Suspension in BACTEC MGIT-960 Flüssigkultursystem (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA) geimpft, das Standardprotokoll [25]. Unabhängig von einer positiven oder einer negativen geflasht Ergebnis wurden alle Kulturen von Ziehl-Neelsen-Färbung untersucht. Die Differenzierung der Isolate in Mycobacterium tuberculosis
(MTB) oder nicht-tuberkulösen Mykobakterien (NTM) durch eine artspezifische in-House | m-PCR [23] durchgeführt wurde. Die IS und GA Probenaliquote, bei -80 ° C gelagert wurden im Xpert MTB /RIF-Test retrospektiv untersucht.
Xpert MTB /RIF-Test
Im Jahr 2013 wurden die gelagerten Proben zu Xpert MTB /RIF Prüfung unterzogen . Es gab 520 dekontaminiert GA und IS gepaarte Stichproben (130x2 GA & 130x2 IS), die für die Prüfung geeignet waren, während andere waren entweder nicht ausreichend in Quantität oder Qualität (kontaminiert). 1 (insgesamt 2 ml), und inkubiert 15 min bei Raumtemperatur: Die Probe-Reagens-Puffer mit NaOH und Isopropanol im Verhältnis von 3 zugegeben. Die behandelte Probe (2 ml) wurde dann in die Xpert MTB /RIF Patrone übertragen, um den Waschpuffer, lyophilisierte Reagenzien zur DNA-Extraktion und PCR-Amplifizierung enthält. Nach der richtigen Mischen wurde die Patrone in der Xpert MTB /RIF Instrument geladen, gemäß den Anweisungen des Herstellers (Cepheid, USA). Das Gerät führt Probe Mischen, Beschallung der Mykobakterien-Bazillen und die interne Kontrolle (Sporen), DNA-Freisetzung und Mischen mit den PCR-Reagenzien, automatisch. Dies wird durch eine Hemi-verschachtelt Echtzeit-PCR-Amplifikation gefolgt wird, Zielerkennung durch Fünffarben-Fluoreszenz molekularen Signalsonden und die interne Kontrolle in-situ
. Die Ergebnisse werden nach 2 h und als M. tuberculosis
erzeugt - negativ oder positiv mit halb quantifiziert bacillary Last als hoch, mittel, mittlerer oder niedriger, und wenn der Erreger ist RIF empfindlich oder resistent [14]. Die Patientendaten wurden auf die Proben erst nach Abschluss des Xpert MTB /RIF Auswertung getestet verknüpft.
Statistische Analyse
Empfindlichkeit von Xpert MTB /RIF unter Berücksichtigung MGIT Kultur bestätigt Proben als richtig positiv bestimmt. Um die Spezifität des Xpert MTB /RIF, Abstrich, MGIT Kultur bestimmen und in-House | m-PCR-negative Proben wurden als echte negative Proben betrachtet. Positive prädiktive Werte (PPV), negativer prädiktiver Wert (NPV) und Wahrscheinlichkeitsverhältnis für die positive (LRP) Xpert MTB /RIF wurden mit 95% CI (Konfidenzintervall) berechnet. LRP von größer als eins zeigt an, dass das Testergebnis ist sehr wahrscheinlich wahr positiv und kleiner als eins bedeutet, dass das Testergebnis wahrscheinlich wahr negativ ist [26]. Pearson-Chi-Quadrat-Test wurde zum Vergleich der Patienten weise Analyse durchgeführt. Um auszuschließen, wurde der Anteil der Zustimmung durch Zufall, Cohen kappa
Test verwendet. Ein p-Wert von <. 0.05.was als statistisch signifikant [STATA 11,0 (College Station, Texas, USA) Software für alle statistische Analyse verwendet wurde]
Ergebnisse
In dieser Studie von Januar 2009 bis Dezember durchgeführt 2012. insgesamt 403 Kinder (58,2% Mädchen), im Alter zwischen 6 Monaten und 14 Jahren [Mittleres Alter, 120 Monate, Quartilsabstand (IQB), 7-168 Monate], mit wahrscheinlichen intrathoracischen TB eingeschrieben waren. Es wurden nur die Kinder eingeschlossen, von denen beide GA und IS-Proben gesammelt an zwei aufeinanderfolgenden Tagen zur Verfügung standen. Daher gepaart ist und GA an zwei aufeinander folgenden Tagen von 130 Kindern erhaltenen Proben wurden durch Xpert MTB /RIF-Test analysiert. Die dekontaminiert Proben wurden 21,4-51,9 Monaten (Median Lagerzeit 32,5 Monate; IQR 27-35,1) bei -80 ° C gelagert, bevor sie diese an Xpert MTB /RIF-Analyse unterzogen wurden. Der Arbeitsablauf im Labor und Zusammenfassung der Ergebnisse sind in Abb. 1. Fig. 1 Flussdiagramm, das die Aufnahme von Proben mit Strom von Probenverarbeitung darstellt, Methoden und Ergebnisse gemäß STROBE Richtlinien
Diagnoseergebnis IS und GA an zwei aufeinander folgenden Tagen gesammelten Proben
Nur 23 von 520 (4,4%) Proben von 13 (10%) Kinder waren AFB-Abstrich positiv (Abb. 1). Von diesen 23 Proben waren 9 D1 und 8 waren D2 GA Proben. Zweiter Tag (D2) GA Proben nachgewiesen 3 zusätzliche AFB Abstrich positiven Fälle, während es 4 Fälle verpasst, die auf D1 positiv waren, daher gab es keine Netto-Wertzuwachs von einem D2 GA Probe. Nur 3 Proben waren positiv auf entweder D1 oder D2. Die D2-IS Probe hinzugefügt einem Fall verpasste aber auch ein Fall. Sechzig eine von 130 (46,9%) Kinder [127 von 520 (24,4%) Proben] wurden Kultur Tuberkulose entweder durch Abstrich oder Kultur (Tabelle 1) bestätigt haben, diagnostiziert. Von 130 D1-GA Proben 41 (31,5%), während 36 (27,7%) der D2-GA Proben waren Kultur positiv. Dreiundzwanzig (17,7%) Kinder hatten eine Kultur positiv GA an beiden Tagen (Tabelle 2). Die Ausbeute aus induzierten Sputum-Proben war schlecht. Von 130 Proben auf D1 gesammelt, nur 20 Proben (15,4%) waren positiv, während auf D2, 30 (23,1%) Proben Kultur waren positiv (Tabelle 3). Sechzehn (12,3%) Kinder hatten eine Kultur positiv beiden Tagen auf. Die MGIT Kultur Ausbeuten von GA und IS-Proben an zwei aufeinanderfolgenden Tagen gesammelt in (Tabellen 2 & 3 bezeichnet) gezeigt. Es gab keinen zusätzlichen Wert eines zweiten Tag GA Probe für Schmiermikroskopie (9 vs 8), Kultur (41 vs 36), oder Xpert MTB /RIF-Test (33 vs
34). Allerdings ist Proben an zwei aufeinanderfolgenden Tagen gesammelt, um einen signifikanten Mehrwert in der Kultur (20 vs
30) aber eine unbedeutende zusätzliche Zuwachs im Xpert MTB /RIF-Test (22 vs
25) zur Verfügung gestellt. Eine Kombination aus einem GA und einer IS Probe ergab beste Diagnoseprogramm, und zwar unabhängig von D1 oder D2. Fast 50% Proben (entweder GA oder IS) waren Xpert MTB /RIF positiv an beiden Tagen (Abb. 2) .Tabelle 1 Leistung von Xpert MTB /RIF-Test in bakteriologisch positiv und bakteriologisch negativen Proben [Kombination von Magen-Aspiraten (n
= 260) und induzierten Sputum (n
= 260)] von Kindern mit wahrscheinlichen intrathorakalen Tuberkulose
bakteriologischer Kriterien gesammelt (N = 520)
Sub-Kriterien
Nein . (%)
Xpert MTB /RIF Ergebnisse | Positive
(%)
Negative (%)
bakteriologisch positiv (n
= 127; 24,4%)
Smear (+), Kultur (+)
23 (4.4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3)
Smear (-), Kultur ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), Kultur (-)
0
0
0
Teilsumme
127
87 (68,5)
40 (31.5)
bakteriologisch negativ (n
= 393; 75,5%)
Smear (-), Kultur (-)
393
31 (7.9)
362 (92,1)
insgesamt
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
Die Tabelle hohe Wirksamkeit von Xpert zeigt MTB /RIF in Kultur und Abstrich positiven Proben aber mäßige Erkennungsrate in Abstrich negativ Kultur positiven Proben
*, ** P
< 0,001, (+) - positiv, (-) - Negative, die Zahl in Klammern geben Prozentsatz
Tabelle 2 Performance von MGIT 960 Kultur auf Magenaspirat Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen von 130 Kindern mit wahrscheinlichen intrathorakalen Tuberkulose
MGIT960 Kultur gesammelt Ergebnisse
Tag 1 | Positive
Negative
insgesamt
Tag 2
Positive
23 (17.7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
Negative
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
insgesamt
(31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabelle 3 Performance von MGIT 960 Kultur auf induzierten Sputum-Proben gesammelt an zwei aufeinander folgenden Tagen von 130 Kindern mit wahrscheinlichen intrathorakalen Tuberkulose
MGIT 960 Kultur Ergebnisse
Tag 1 | Positive
Negative
insgesamt
Tag 2
Positive
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negative
4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
insgesamt
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
Abb. 2 Einzel- und Überschneidungsanalyse von Xpert MTB /RIF-Positivität in Magenaspirat und induzierten Sputum gesammelten Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen
von IS und GA
, Overall in Proben (IS + GA), die entweder in Abstrich positiv waren und /oder Kultur (127/520) war die Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF Assay etwas niedriger (68,5%, 87/127) im Vergleich zur bakteriologischen Untersuchung (Tabelle 1), aber es detektiert auch 7,9% (31/393) zusätzliche Fälle über die Kultur, um eine Gesamtsensitivität von 22,7% ergab [118/520] (S.
= NS), aber signifikant höher (p
= 0,001) Empfindlichkeit als Schmiermikroskopie (Tabelle 4). Die Leistung von Xpert MTB /RIF betrug 95,6% (22/23) auf Abstrich und Kultur positiv archivierten Proben, wie in (Tabelle 1) und Flussdiagramm (Abb. 1). Alle 14 Proben, die NTM-Spezies ergaben waren Abstrich negativ, aber Kultur und m-PCR-positiv. Daher auf eine Neubewertung, die Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF auf Abstrich negativ, aber Kultur positiv (MTB nur) Proben betrug 72,2% (65/90). Aber wenn alle Kultur-positiven Proben zusammengenommen wurden, ohne dass die Mykobakterienarten Berücksichtigung sank die Empfindlichkeit auf 62,5% nach unten (65/104) wegen 14 NTM-Isolaten. Die Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF unterschied sich nicht viel zwischen dem GA und IS-Proben, wenn alle bakteriologisch (Abstrich und /oder Kultur) positiv GA (92,2%, 71/77) und IS (94%, 47/50) Proben verglichen wurden . Kein NTM positive Probe wurde fälschlicherweise von Xpert MTB /RIF identifiziert, aber es verpasst ein Abstrich, Kultur und m-PCR-positiven Probe wurde das Isolat als MTB von m-PCR und identifiziert. Alle Xpert MTB /RIF-positiven Proben waren auch m-PCR-positiv. Daher unser Inhouse-m-PCR und Xpert MTB /RIF zeigte eine 100% ige Übereinstimmung in NTM /MTB Differenzierung (Abb. 1) .Tabelle 4 Sensitivität, Spezifität und prädiktive Werte von Xpert MTB /RIF-Test in Bezug auf die AFB-Abstrich und Bactec- MGIT960 Kultur im induzierten Sputum (n
= 260) vs. Magenaspirat (n
= 260) Proben
Empfindlichkeit
Spezifität
PPV

NPV
LRF positiver Test
Diagnosegenauigkeit
Empfindlichkeit (Abstrich positiv)
Empfindlichkeit (Abstrich negativ)
Xpert MTB /RIF-Test vs Kultur
induziertem Sputum
35/50 (70,0%; 56,2 bis 80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3 bis 96,7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7-95,7)
12,2% (10,2-14,8)
89,6% (85,3-92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
Magenaspirat
52/77 (67,5%; 56,5 bis 76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3 bis 93,2) **
73,2% (61,9-82,1)
87,8% (81,2-90,9)
6,5% (5,8-7,3)
83,1% (78,0-87,1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs Kultur
induziertem Sputum
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2-100)
100% (60,8-100)
82,7% (77,5-86,8)
- 83,1% (78,1-87,1)
NA
NA
Magenaspirat
17/77 (22,1%; 14,3 bis 32,5)
183/183 (100%; 97,9-100)
100 % (81,6-100)
75,3% (71,4-81,6)
- 76,9% (71,4-81,6)
NA NA
Daten n /N (%
; 95% CI) oder% (95% CI), der positive prädiktive Wert (PPV), negativer prädiktiver Wert (NPV), Likelihood-Verhältnis (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p
= 0,792
von Xpert MTB /RIF, Kultur und AFB Schmiermikroskopie
Xpert MTB /RIF-Test eine zusätzliche 31 von 393 (7,9%) Proben nachgewiesen, die sowohl AFB waren Abstrich und MGIT Kultur negativ, aber verpasst 39 von 104 (37,5%) Kultur positive Proben (Tabelle 4). Bei Kindern mit einer wahrscheinlichen intrathorakalen Tuberkulose, mehr Fälle als induzierten Sputum mit Abstrich Mikroskopie, Kultur und Xpert MTB /RIF-Test Magenaspirat identifiziert (6,5, 29,6 und 27,3% vs
2,3, 19,2 und 18,0%, respectively). Die Ausbeute des Xpert MTB /RIF-Test verringerte sich mit der Dauer der Speicherung von GA Erhöhung sowie Proben. In den Proben für 650-849 Tage gelagert war die Erkennungsrate von Xpert MTB /RIF-Test auf IS-Proben 85,7%, die in Proben auf 33,3% gesunken für mehr als 1050 Tage gespeichert. In ähnlicher Weise waren diese Sätze 77,1 und 50%, bzw. in GA-Proben (Abb. 3). Nach längerer Lagerung Unterschied in der Ausbeute von IS und GA war hoch signifikant (P
= 0,002). Feige. 3 Rückläufige Positivität Raten im Xpert MTB /RIF-Test in Bezug auf die Dauer der Speicherung von Magen absaugen und induzierten Sputum-Proben
Diskussion
Es hat sich auch als Genexpert oder Kartusche bekannt, dass ein Fluss von Publikationen auf Xpert MTB /RIF gewesen basiert Nukleinsäureamplifikation Tests (CBNAAT) in den letzten 3 Jahren. Dies ist die erste Studie aus Indien über die Verwendung des Xpert MTB /RIF-Test bei Kindern mit intrathorakalen TB und auch die erste Studie über den Nutzen dieses Tests auf archivierten GA zu berichten und IS-Proben von Kindern in TB betroffene Land. Die Studie zeigt, dass selbst in GA und IS Proben für bis zu 4 Jahre gelagert, dem Xpert MTB /RIF-Test als diagnostisches Werkzeug für Kindheit Tuberkulose nützlich geblieben. In GA und IS Proben, die waren Abstrich und Kultur positiv war die Empfindlichkeit von Xpert MTB /RIF-Test 95,6%, die der in frischen klinischen Proben berichtet ähnlich ist. Wie erwartet war die Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF überlegen, dass der Abstrich-Mikroskopie (p
= 0,0001). Allerdings war die Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF-Test auf die Kultur positiv, aber Abstrich negative Proben niedriger (62,5%). Leistung von Xpert MTB /RIF-Test wurde zuvor bewertet worden meist auf Sputum-Proben von erwachsenen TB-Patienten gesammelt [27-30], die eine hohe Empfindlichkeit in Abstrich und Kultur positive Proben (98-100%), aber eine viel geringere Empfindlichkeit in Abstrich zeigt negativ Sputum-Proben (43-70%). Unsere Ergebnisse waren auch ähnlich dieser Erkenntnisse aber auf archivierte Proben. Eine geringere Empfindlichkeit des Xpert MTB /RIF-Test wurde auch bei HIV-positiven erwachsenen Patienten [29] berichtet. Es gibt nur wenige Studien, die bei Kindern und sehr wenige in denen die Leistung von Xpert MTB /RIF-Test ausgewertet wurde an Proben andere als Sputum-Proben durchgeführt wurden [4-10, 30, 31]. Nicol et al. [8] enthalten 452 Kinder für die Analyse mit mindestens einem von jedem Kind Probe. Sie zeigten auch eine geringe Empfindlichkeit der Mikroskopie (6%), Kultur (16%) und Xpert MTB /RIF-Test (13%) in diesen Proben. In der vorliegenden Studie, obwohl die Erkennungsrate dieser drei Methoden waren höher, aber das Muster war ähnlich. Da wir beide untersucht und GA-Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen auf dem Vergleich von der Ausbeute Proben war viel geringer als Magenaspirat Proben. Obwohl es in der bisher veröffentlichten keine Daten sowohl GA und IS Proben wurden in der gleichen Studie verwendet worden, um die Empfindlichkeit und Spezifität der Xpert MTB /RIF-Assay in klinisch wahrscheinlich Fälle von intrathorakalen tuberculosis zu bewerten, doch waren unsere Ergebnisse insgesamt Übereinstimmung mit Ergebnisse von Bates et al. [10], Rachow et al. [16] und Sekadde et al. [17]. Unsere Untersuchung zeigt, dass Abstrich und Kultur Ausbeuten in GA Proben überlegen sind diejenigen von IS Proben jedoch die Empfindlichkeit der Xpert MTB /RIF-Assay in GA nicht signifikant verschieden war und ist Proben, in Proben, die bei -80 ° C für den gleichen gespeicherten Dauer (77,1 und 85,7%, p =
049). Darüber hinaus haben wir für diese beiden Proben an zwei aufeinander folgenden Tagen, und dieses Protokolls etwas bessere Ausbeute in allen diagnostischen Techniken heißt Abstrich, Kultur und Xpert MTB /RIF-Test. Aufgrund dieser doppelten Säulen-Ansatz, könnten wir eine hohe diagnostische {61 von 130 zu erreichen; 46,9% Kinder (pro Patient-Analyse)} Ausbeute.
Meisten Publikationen auf Xpert MTB /RIF oder CBNAAT wurden aus Afrika südlich der Sahara [6, 8-10, 13, 16, 17]. Indien ist ein TB hohe Belastung Land und die zentrale TB Teilung Indiens, die die Verantwortung für die Durchführung der überarbeiteten nationalen TB Steuerprogramm vor kurzem installiert verliehen wurde mehr als 80 CBNAAT Maschinen hat .. Aber länderspezifische Daten und Richtlinien zur Verwendung CBNAAT Maschinen Diagnose Kindheit Tuberkulose fehlen. Unsere ist auch die erste Studie, in der wir Magenaspirat und induzierten Sputum Probe für bis zu 4,3 Jahre (Median Lagerzeit von 32,5 Monate) gespeichert verwendet haben. In Abstrich und Kultur bewiesen Proben zeigten es Sensitivität von 95,7%, die im Bereich von mehreren anderen Arbeiter berichtet, sondern nur auf frische Proben [10, 17]. In frischen Proben ein variabler Wert Zugabe des Xpert MTB /RIF über die MGIT Kultur wurde berichtet, aber in unserer Studie dieser Wert hinaus war minimal (7,9%), wahrscheinlich wegen einem gewissen Verlust von Mykobakterien-Lebensfähigkeit auf langfristige Lagerung von Proben [32]. Die zusätzlichen Fälle über den Goldstandard Kulturtest nachgewiesen, waren sehr unwahrscheinlich falsch positiv. Mycobakteriellen Zählungen verarmen auf Lagerung der Proben selbst nach Tagen (30), aber widersprüchliche Beobachtungen wurden auch von anderen Mitarbeitern [33, 34] hergestellt. Paramasivan et al. [33] berichtet, dass es nach dem Speichern der Sputum-Proben bis zu 10 Tagen kein Effekt auf die Empfindlichkeit Raten Abstrich und Kultur. Tessema et al. [34] haben gezeigt, dass die Lagerung von Sputum-Proben bis zu 80 Tage bei Raumtemperatur und in gefrorenen Proben berichtet bis zu 180 Tage keine negative Auswirkung auf die Kultur Ausbeute hatte. Banda et al.

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