Xpert MTB /RIF-analysen kan brukes på arkiv gastrisk aspirat og indusert sputum prøver for sensitiv diagnostisering av pediatrisk tuberculosis

Xpert MTB /RIF-analysen kan brukes på arkiv gastrisk aspirat og indusert sputum prøver for sensitiv diagnostisering av pediatrisk tuberkulose
Abstract
Bakgrunn
tuberkulose (TB) hos barn er neglisjert, hovedsakelig på grunn av mangel på sensitive diagnostiske verktøy. Nylig Xpert MTB /RIF analysen har revolusjonert den diagnostiske feltet, men nytten i pediatrisk TB har ikke blitt rapportert fra India og ingen rapport er tilgjengelig på bruken på langsiktige arkiverte prøver.
Metoder
Vi rekrutterte 130 pediatriske pasienter med sannsynlig intrathoracic tuberkulose og deres gastrisk aspirat (GA) og indusert sputum (IS) prøver på 2 påfølgende dager ble samlet mellom januar 2009 og desember 2012. Alle prøver (n = 520) ble utsatt for smøre eksamen, BACTEC-MGIT kultur og i -huset
multipleks PCR. En porsjon av hver prøve ble lagret ved -80 ° C og testet i Xpert MTB /RIF-analysen i 2013.
Resultater
Smak klok og tålmodig klok oppklaringsprosenten av mikroskopi var 4,4% og 10%, mens for BACTEC -MGIT kultur denne prisen var 24,4% og 46,9%, henholdsvis. Av de 130 dag 1 GA prøver, 31,5% og 27,7% dag 2 GA prøvene var kulturen positivt. Kun 17,7% GA prøvene var positive på begge dager. Av de 130 IS prøver samlet på dag 1 og dag 2, 15,4% og 23,1% prøvene var kulturen positivt. En kombinasjon av GA, og er gitt de beste resultater. Kombinere både GA og IS, den totale følsomheten Xpert MTB /RIF på smøre og kultur positive prøver var 95,6%. I smøre negative og kultur positive prøver følsomheten var 62,5%. Varigheten av prøveoppbevaring påvirket Xpert MTB /RIF teste ytelsen (p = 0,0001). I smøre positive prøver lagret for 650-849 dager, følsomheten var 85,7% og 77,1% for IS og GA prøver som falt til 33,3% og 50%, henholdsvis, hvis det er lagret i mer enn 1050 dager.
Diskusjon
bekreftende diagnostisering av tuberkulose spesielt hos barn er en medisinsk utfordring. Ingen laboratorium eller radiologisk test kan komme til en tilfredsstillende nivå av diagnostisk sensitivitet. Men i denne studien foundthat vi kombinasjon av flere prøver og flere diagnostiske tester kan gi mye bedre ytelse, men notoptimum. I denne studien, kombinasjon av 2 mage aspirates (GA) og to indusert sputum (IS) prøver på to påfølgende dager, og testet på tre diagnostiske metoder gitt en betydelig høy oppklaringsprosenten. Til tross for langtidslagring, den totale følsomheten Xpert MTB /RIF på smøre og -Kultur positive prøver fortsatt svært høy. Men etter lagring disse prøvene under subfreezing forhold thesensitivity av Xpert MTB /RIF sunket betraktelig. Dette er forventet fordi selv om prøven er smøre og kultur positive, greven av overlevende mykobakterier går ned, etter flere år denne tellingen kan komme til en undetectable nivå.
Konklusjon
Denne rapporten viser at smøre og kultur positive prøver oppbevares ved subfreezing forhold for flere år kan brukes i Xpert MTB /RIF-analysen, og samtidig opprettholde vesentlig diagnostisk test sensitivitet og spesifisitet.
nøkkelord
Pediatrics tuberkulose India Gastric Sug Induced Sputum Arkiv Prøver mPCR MGIT Kultur, Xpert MTB /RIF Bakgrunn
Verdens helseorganisasjon (WHO) har beregnet den globale byrden av tuberkulose (TB) på 9 millioner nye tilfeller og 1,5 millioner dødsfall i 2013 [1]. Dette inkluderte opptil 15% byrden av pediatriske tilfeller. Om 74 000 barn dør av tuberkulose hvert år, og det er rundt en halv million nye tilfeller hvert år [2]. Som hos voksne, de fleste (70-80%) av barnetuberkulosetilfeller stede med lungetuberkulose (PTB). Tuberkulose hos barn har vært relativt neglisjert, hovedsakelig på grunn av utfordringer i tilgjengeligheten av effektive diagnostiske verktøy [3]. India er 17. blant 22 store byrden land i form av generelle TB insidensraten, men svært lite informasjon vedrørende epidemiologi av tuberkulose hos barn, [, 5 4].
I de fleste innstillinger diagnostisering av pediatrisk TB er dens diagnose og behandling gjort på grunnlag av kontakt tracing, og meget få forsøk har blitt gjort for aktiv tilfelle deteksjon. Dette er hovedsakelig på grunn av mangel på en patognomonisk klinisk presentasjon i pediatrisk TB og mangel på sensitive diagnostiske verktøy [3, 4, 6, 7].
Med begrensede verktøy for bekreftende laboratorium diagnostisering, vurdering av medisinsk historie, tuberkulintest testing, brystet x-ray og manglende respons på antibiotika hjelpe med å gjøre den kliniske diagnose. Mikroskopi og mikrobiologisk bekreftelse er sjelden oppnås på grunn av dårlig følsomhet av disse testene, delvis på grunn av den paucibacillary sykdommens art og manglende evne til små barn for å tilveiebringe en optimal spyttprøve [6]. Alternative prøvene omfatter mage aspirat (GA), indusert sputum (IS), nasofaryngeal aspirat, bronchio-alveolar lavage, laryngeal pinne, streng test og avføringsprøver [3, 7-10]. Avhengig av den diagnostiske testen anvendt, har disse prøver vist variabel sensitivitet og spesifisitet. Det har blitt rapportert at tarmskylling prøvene gir høyest (40-92%) oppklaringsprosenten, avhengig av følsomheten til laboratorietest vedtatt. Andre prøver har vist dårligere deteksjon priser som spenner 4-43% for bronchoalveolar kylling 24-30% for nasofaryngeal aspirasjon, 27-63 for laryngeal pinne og 20-30% ved hjelp av indusert sputum. Noen arbeidstakere har også brukt streng test, men resultatene har ikke vært oppmuntrende [3, 7, 11-13].
Siste innføring av Xpert MTB /RIF analysen (Cepheid, USA) har betydelig forvandlet diagnostikk av tuberkulose hos voksne , men dens anvendelse for diagnostisering av pediatrisk TB er under evaluering. Denne analysen er rask og gir resultater i løpet av 2 timer [14]. I en policy statement Verdens helseorganisasjon (WHO) i 2011, anbefales bruk av Xpert MTB /RIF-analyse som en foreløpig diagnostisk verktøy blant barn, voksne med mistanke humant immunsviktvirus (HIV) forbundet tuberkulose og i alle MDR TB mistenkte tilfeller [ ,,,0],15]. Senere har flere arbeidere i gang med Xpert MTB /RIF test for diagnose av pediatrisk tuberkulose [10, 16-18]. Men fortsatt er bred spredning bruk av Xpert MTB /RIF for diagnostisering av pediatrisk TB på rutinemessig basis fortsatt en fjern mulighet. Til dags dato er det bare noen få studier på anvendelsen av Xpert MTB /RIF for diagnostisering av pediatrisk TB. To studier rapporterer om bruk av Xpert MTB /RIF på indusert sputum to på bruk i ventrikkelskylling prøver. Det finnes ingen studier som rapporterer om bruk av Xpert MTB /RIF i både GA og IS prøver samtidig på samme pasient. Videre er det ingen studie fra India på evalueringen av Xpert MTB /RIF for diagnostisering av pediatrisk lungetuberkulose. Videre nytten av Xpert MTB /RIF på arkiverte GA og IS prøvene har tidligere ikke blitt undersøkt. Siden Xpert MTB /RIF ble tilgjengelig først etter 2011, er det ingen annen rask test som kan oppdage tuberkulose og RIF motstand samtidig i prøvene som ble samlet inn før 2011. Denne studien undersøker også effekten av langtidslagring av kliniske prøver på for påvisning av TB med Xpert MTB /RIF-analysen.
Vi har tidligere rapportert at GA prøver gi bedre avkastning enn IS prøver [19]. I en påfølgende rapport viste vi også at nøytralisere pH i mage aspirer før behandling fører til en høyere rate av forurensning uten å forbedre oppklaringsprosenten [20]. I denne studien rapporterer vi på resultatene av den Xpert MTB /RIF på arkiverte GA, og er samlet inn prøver på to påfølgende dager fra barn med sannsynlig intrathoracic TB, rekruttert som en del av en dobbel blindet randomisert kontrollert studie for å studere rollen av mikronæringsstoffer tilskudd hos barn med intra-thorax tuberkulose.
Metoder
studie~~POS=TRUNC og underrekruttering
studien ble gjennomført mellom januar 2009 til desember 2012 på All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) og Kalawati Saran barnesykehus ( KSCH), både i New Delhi, India. Dette arbeidet var en del av en dobbel blindet randomisert kontrollert studie for å studere rollen av mikronæringsstoffer tilskudd hos barn med intra-thorax tuberkulose [19-22]. Til sammen 403 barn (58,2% jenter), i alderen 6 måneder til 14 år [Median alder, 120 år; interkvartile området (IQR), 7-168 måneder], med sannsynlig intra-thorax TB ble registrert. Standarden klinikk-radiologiske kriterier for mistanke om intra-thorax tuberkulose ble brukt i denne studien som er publisert tidligere [19-22]. Diagnosen intrathoracic tuberkulose var basert på anbefalinger fra indiske Academy of Pediatrics. Noen barn med hoste og feber på mer enn 2 uker uten bedring i løpet av sju til ti dager amoxicillin kurs- og siste uforklarlig vekttap eller historie for kontakt med TB pasient i de to siste årene. Alle tuberkulose mistenkte gikk en kiste x-ray (lateral og posterior-anterior). I nærvær av vedvarende røntgen unormalt, med ikke-oppløsning på kliniske symptomer og ingen alternativ årsak til symptomer og bryst røntgenfunn, en sannsynlig diagnose av intrathoracic tuberkulose ble gjort. Alle barn med sannsynlig tuberkulose ble utsatt for tuberkulintest (TST), ambulerende mage aspirates (GA) og indusert sputum (IS) undersøkelse for AFB smøre og kultur. Barn ble startet på ATT som per anbefalingene fra RNTCP [5]. I korte trekk: Alle barn med sannsynlig intra-thorax tuberkulose ble utsatt for gastrisk aspirasjon (GA) og indusert sputum (IS) samling i to påfølgende dager (D1 & D2). Barn ble bedt om å rapportere 6 timer fastende om morgenen til den utpekte klinikken. Etter å ha forklart prosedyren og innhente samtykke fra foreldre og verbal samtykke fra barna, ble en passende størrelse materøret (10-12G) inn gjennom det ene neseboret til det nådde magen. Posisjonen til røret ble kontrollert ved innblåsning av luft i magen. Innholdet i magesekken ble aspirert fullstendig, holdt i steril beholder. Vanlig volum samlet var rundt 10 ml. Prøvene ble transportert til laboratoriet for ytterligere behandling i løpet av 1-2 timer.
På samme sittende gastrisk aspirasjon ble etterfulgt av indusert sputum med en avstand på omkring en halv time. For sputum induksjon, ble barnet primet med 2 drag salbutamol inhalering av dosemåleinhalerer (MDI Asthalin, 100 ug /puff, Cipla, India)) og avstandsholderen (Zeroastat VT spacer, Cipla, India) fulgt av forstøvning med 3 ml 3 % saltvann kommende 15-20 min. Alle prøver ble gitt unike kodetall; og sendt til laboratoriet uten en kobling til kliniske og pasientopplysninger. Prøvene ble behandlet på samme dag for AFB smøre, BACTEC-MGIT kultur og in-house
PCR [23]. Kliniske og andre pasientopplysninger ble registrert i excel-ark ved å behandle barnelege og laboratoriet var ikke klar over den kliniske diagnose av fagene.
Etiske hensyn
Studien ble godkjent av Institutional etikkutvalg av All India Institute of Medical Sciences New Delhi og Kalawati Saran Children Hospital, New Delhi, India, og rettssaken ble registrert på clinicaltrials.gov (NCT 00801606). Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra foreldre /foresatte til hvert barn.
Laboratoriemetoder
Utvalgets behandling
IS og GA (pH ikke-nøytralisert) prøver ble behandlet som beskrevet tidligere [19, 21, 23, 24] . I korte trekk, ble prøvene sentrifugert ved 10.000 x g i 10 min, ved 4 ° C; Supernatanten ble dekantert og pelleten ble resuspendert i et like stort volum 0,5% NALC-4% NaOH-blanding i 50 ml rygg avkortet rundbunnet prosesserings rør. Suspensjonen ble grundig (4 x 10 s hvert intervall) virvlet for å sikre riktig blanding og ble inkubert ved 37 ° C i 10 min. Etter inkubasjonen ble alkalisk pH nøytralisert med fosfatbuffer [PBS (pH 6,8, totalvolum på 50 ml)], etterfulgt av endelig sentrifugering ved 10.000 x g i 10 min, ved 4 ° C. Supernatanten ble dekantert; pelleten resuspenderes i 2 ml PBS og 0,5 ml volum alikvotert i 4 sterile rør. Én prøve ble anvendt for fremstilling smear, en for kultur og en annen for testing i en in-house
multipleks PCR (m-PCR). Én prøve ble lagret ved -80 ° C for videre bruk. Fra en delmengde, ble en 500 mL suspensjon inokulert i BACTEC MGIT-960 flytende kultursystem (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA), ved hjelp av standardprotokollen [25]. Uavhengig av et positivt eller et negativt resultat blinket, ble alle kulturer undersøkt ved Ziehl-Neelsen farging. Differensiering av isolater i Mycobacterium tuberculosis plakater (MTB) eller ikke-tuberkuløse mykobakterier (NTM) ble foretatt av en artsspesifikk in-house
m-PCR [23]. IS og GA prøve porsjoner, lagret ved -80 ° C, ble retrospektivt undersøkt i Xpert MTB /RIF analysen
. Xpert MTB /RIF Test
I 2013 ble de lagrede prøvene utsatt for Xpert MTB /RIF testing . Det var 520 dekontaminert GA og er paret prøver (130x2 GA & 130x2 IS) som var egnet for testing, mens andre var enten ikke tilstrekkelig mengde eller kvalitet (forurenset). Prøven reagens buffer inneholdende NaOH og isopropanol ble tilsatt i et forhold på 3: 1 (totalt 2 ml), og inkubert i 15 minutter ved romtemperatur. Den behandlede prøven (2 ml) ble deretter overført til Xpert MTB /RIF patron som inneholder vaskebufferen, lyofiliserte reagenser for DNA-ekstraksjon og PCR-amplifikasjon. Etter riktig blanding, ble kassetten som er lagt i Xpert MTB /RIF instrument, i henhold til produsentens instruksjoner (Cepheid, USA). Instrumentet utfører prøven miksing, lydbehandling av mykobakterielle basiller og internkontroll (sporer), DNA utgivelsen og blande med PCR-reagenser, automatisk. Dette er etterfulgt av et hemi-nestet sanntids-PCR amplifisering, mål-deteksjon ved fem farger fluorescens molekyl beacon prober og internkontrollen in-situ
. Resultatene er generert etter 2 timer og rapportert som M. tuberculosis Anmeldelser - negativt eller positivt med semi-kvantifisert bacillary belastning som høy, middels, middels eller lav, og hvis patogenet er RIF følsomme eller resistente [14]. Pasienten informasjon knyttet til de prøvene som ble testet først etter fullførelse av Xpert MTB /RIF evaluering.
Statistisk analyse
Sensitivitet av Xpert MTB /RIF ble bestemt ved å vurdere MGIT kultur bekreftet prøver som sanne positive. For å bestemme spesifisiteten av Xpert MTB /RIF, smøre, MGIT kultur og in-house
m-PCR negative prøver ble ansett som sanne negative prøver. Positive prediktive verdier (PPV), negativ prediktiv verdi (NPV) og likelihood ratio for positive (LRP) Xpert MTB /RIF ble beregnet med 95% KI (konfidensintervall). LRP er større enn en indikerer at testresultatet er mest sannsynlig sann positiv og mindre enn én betyr at testresultatet er sannsynlig sann negativ [26]. Pearson chi kvadrat test ble utført for sammenligning av pasientens klok analyse. For å utelukke andelen avtalen ved en tilfeldighet, ble Cohens kappa
test brukt. En p-verdi på. ≪ 0.05.was vurderes statistisk signifikant [STATA 11.0 (College Station, Texas, USA) programmet ble brukt for all statistisk analyse]
Resultater
I denne studien, utført i perioden januar 2009 til desember 2012. til sammen 403 barn (58,2% jenter), i alderen 6 måneder til 14 år [Median alder, 120 år; interkvartile området (IQR), 7-168 måneder], med sannsynlig intra-thorax TB ble registrert. Bare disse barna ble tatt fra hvem både GA og IS prøver på to påfølgende dagene var tilgjengelig. Derfor sammenkoblede IS og GA prøver tatt på to påfølgende dager fra 130 barn ble analysert ved Xpert MTB /RIF analysen. Det dekontaminerte Prøvene ble lagret ved -80 ° C i 21,4 til 51,9 måneder (median lagringsperioden 32,5 måneder, IQR 27 til 35,1) før disse ble underkastet Xpert MTB /RIF-analyse. Laboratoriet arbeidsflyten og oppsummering av resultatene er vist i fig. 1. Fig. 1 Flytskjema som viser inkludering av prøver med flyt av utvalgets behandling, metoder brukt og resultater som per STROBE retningslinjer
Diagnostic utfallet av IS og GA prøver samlet på to påfølgende dager
Kun 23 av 520 (4,4%) prøver fra 13 (10%) barn var AFB smøre positive (fig. 1). Av disse 23 prøvene, ni var D1 og 8 var D2 GA prøver. Andre dag (D2) GA prøvene oppdaget ytterligere 3 AFB smøre positive tilfeller mens det savnet 4 tilfeller som var positive på D1, dermed var det ingen netto inkrementell verdi fra en D2 GA prøve. Bare 3 ER prøvene var positive på enten D1 eller D2. D2-IS prøve tilsatt ett tilfelle, men også savnet en sak. Seksti en av 130 (46,9%) barn [127 av 520 (24,4%) samples] ble diagnostisert til å ha kultur bekreftet tuberkulose enten ved smøre eller kultur (tabell 1). Ut av 130 D1-sampler GA 41 (31,5%), mens var 36 (27,7%) av D2-GA prøver kultur positive. Tjue tre (17,7%) barn hadde en kultur positiv GA på begge dager (tabell 2). Utbyttet fra indusert sputum prøvene var dårlig. Fra 130 IS prøver samlet på D1, bare 20 prøver (15,4%) var positive, mens på D2, 30 (23,1%) prøver var kultur positive (tabell 3). Seksten (12,3%) barn hadde en kultur positiv IS på begge dager. De MGIT kultur gir fra GA og IS prøver samlet inn på to påfølgende dager er vist i (tabell 2 & 3, henholdsvis). Det var ingen ytterligere verdi av en andre dag GA prøve for mikroskopi (9 vs 8), kultur (41 vs 36), eller Xpert MTB /RIF-analyse (33 vs
34). Imidlertid er prøver samlet inn på to påfølgende dager gitt en betydelig tilleggsverdi i kultur (20 vs
30), men en ubetydelig ekstra økning i Xpert MTB /RIF-analyse (22 vs
25). En kombinasjon av en GA og en IS prøven ga beste diagnoseverktøy, uavhengig av D1 eller D2. Nesten, 50% prøver (enten GA eller IS) var Xpert MTB /RIF positiv på begge dager (fig. 2) .table en Utførelse av Xpert MTB /RIF-analysen i bakteriologisk positive og bakteriologisk negative prøver [kombinasjon av mage aspirates (n
= 260) og indusert slim (n
= 260)] samlet inn fra barn med sannsynlig intrathoracic tuberkulose
Bakteriologiske kriterier (N = 520)
under~~POS=TRUNC kriteriene
Nei . (%)
Xpert MTB /RIF Resultater Book Positiv (%)
Negative (%)
Bakteriologisk positive (n
= 127; 24,4%)
Smear (+), kultur (+)
23 (4,4) *, **
22 (95,7)
1 (4,3)
Smear (-), kultur ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), kultur (-)
0
0
0
Delsum
127
87 (68,5)
40 (31,5)
Bakteriologisk negative (n
= 393; 75,5%)
Smear (-), kultur (-)
393
31 (7,9)
362 (92,1)
Total
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
tabellen viser høy effekt av Xpert MTB /RIF i kultur og smøre positive prøver, men moderat oppklaringsprosenten i smøre negativ kultur positive prøver product: *, ** P
< 0.001, (+) - positiv, (-) - Negativ, tall i parentes angir prosent
Tabell 2 Resultater av MGIT 960 kultur på mage aspirer prøver samlet inn på to påfølgende dager fra 130 barn med sannsynlig intrathoracic tuberkulose
MGIT960 Culture resultater
dag 1
Positiv
Negativ
Total
dag 2
Positiv
23 (17,7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
Negativ
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
Total
41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabell 3 Resultater av MGIT 960 kultur på indusert sputum prøver samlet inn på to påfølgende dager fra 130 barn med sannsynlig intrathoracic tuberkulose
MGIT 960 Culture resultater
dag 1
Positiv
Negativ
Total
dag 2
Positiv
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negativ
4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
Total
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
fig. 2 individuelle og overlapping analyse av Xpert MTB /RIF positivitet i mage aspirer og indusert sputum prøver samlet på 2 dager Host Sammenligning av IS og GA
Totalt i prøver (IS + GA) som var positive enten i smøre og /eller kultur (127/520), følsomheten av Xpert MTB /RIF analysen var noe lavere (68,5%, 87/127) sammenlignet med bakteriologisk undersøkelse (tabell 1), men det er også oppdaget at 7,9% (31/393) ekstra tilfeller over kulturen som gir en samlet følsomhet på 22,7% [118/520] (p
= NS), men signifikant høyere (p = 0,001
) følsomhet enn mikroskopi (tabell 4). Utførelsen av Xpert MTB /RIF var 95,6% (22/23) på smøre og kultur positive arkiverte prøver, som vist i (tabell 1) og flyt diagram (Fig. 1). Alle 14 prøvene som ga NTM arter var smøre negativ, men kultur og m-PCR positive. Derav på re-evaluering, følsomheten av Xpert MTB /RIF på smøre negativ men kultur positive (kun MTB) prøver var 72,2% (65/90). Men hvis alle kultur positive prøver ble tatt sammen uten å vurdere mykobakterielle arter, falt følsomheten ned til 62,5% (65/104) på ​​grunn av 14 NTM isolater. Sensitiviteten av Xpert MTB /RIF ikke avvike mye mellom GA og IS prøver hvis alle bakteriologisk (smøre og /eller kultur) positiv GA (92,2%, 71/77) og IS (94%, 47/50) prøver ble sammenlignet . Ingen NTM positive prøven ble feilaktig identifisert av Xpert MTB /RIF men det savnet en flekk, kultur og m-PCR positive prøven, isolatet ble identifisert som MTB av m-PCR og. Alle Xpert MTB /RIF positive prøvene var også m-PCR positive. Derav vår in-house m-PCR og Xpert MTB /RIF viste 100% samstemmighet i NTM /MTB differensiering (Fig. 1) .table 4 Sensitivitet, spesifisitet og prediktive verdier av Xpert MTB /RIF analyse i referanse til AFB smøre og Bactec- MGIT960 kultur i indusert sputum (n
= 260) vs. gastrisk aspirat (n
= 260) prøvene
Sensitivitet
spesifisitet
PPV

NPV
LRF av positiv test
Diagnostisk nøyaktighet
Sensitivity (smøre positiv)
Sensitivity (smøre negativ)
Xpert MTB /RIF analyse vs Kultur
Induced Sputum
35/50 (70,0%, 56,2 til 80,9) *
198/210 (94,3%, 90,3 til 96,7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7 til 95,7)
12,2% (10,2 til 14,8)
89,6% (85,3 til 92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
Gastric Sug
52/77 (67,5%, 56,5 til 76,9) *
164/183 (89,6%, 84,3 til 93,2) **
73,2% (61,9 til 82,1)
87,8% (81,2 til 90,9)
6,5% (5.8 til 7.3)
83,1% (78,0 til 87,1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs Kultur
Induced Sputum
6/50 (12,0%; 5,6 til 23,8) ***
210/210 (100%, 98,2 til 100)
100% (60,8 til 100)
82,7% (77,5 til 86,8) -
83,1% (78,1 til 87,1)
NA hoteller, NA
Gastric Sug
17/77 (22,1%, 14,3 til 32,5)
183/183 (100%, 97,9 til 100)
100 % (81,6 til 100)
75,3% (71,4 til 81,6) -
76,9% (71,4 til 81,6) hoteller, NA hoteller, NA
data n /N (%; 95% CI) eller% (95% CI), positiv prediktiv verdi (PPV), negativ prediktiv verdi (NPV), Likelihood ratio (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p
= 0,792 Host Sammenligning av Xpert MTB /RIF, kultur og AFB mikroskopi
Xpert MTB /RIF analysen oppdaget en ekstra 31 av 393 (7,9%) prøvene som var både AFB smøre og MGIT kultur negativt, men tapte 39 av 104 (37,5%) kultur positive prøver (Tabell 4). Hos barn med sannsynlig intrathoracic tuberkulose, mage aspirer identifisert flere tilfeller enn indusert sputum hjelp mikroskopi, kultur og Xpert MTB /RIF analysen (6.5, 29.6 og 27.3% vs
2,3, 19,2 og 18,0%, henholdsvis). Utbytte av Xpert MTB /RIF-analyse avtok med økende varighet av lagring av GA samt er prøver. I prøvene som er lagret for 650-849 dager, oppklaringsprosenten av Xpert MTB /RIF-analysen på, er prøvene var 85,7% som falt til 33,3% i prøver lagret i mer enn 1050 dager. Tilsvarende disse ratene var 77,1 og 50%, henholdsvis GA prøver (fig. 3). Etter lang lagring forskjell i utbyttet av IS og GA var svært signifikant (P
= 0,002). Fig. 3 Fallende positivitet priser i Xpert MTB /RIF-analyse i forhold til varigheten av lagring av mage aspirer og indusert sputum prøver
Diskusjon
Det har vært en strøm av publikasjoner om Xpert MTB /RIF også kjent som GeneXpert eller patron basert nukleinsyreamplifikasjonsprodukt testing (CBNAAT) i de siste 3 årene. Dette er den første studien fra India på bruk av Xpert MTB /RIF analyse hos barn med intrathoracic TB og også den første studien som rapporterer om nytten av denne analysen på arkiverte GA og IS prøver fra barn i TB endemisk land. Studien viser at selv i GA og IS prøvene oppbevares i inntil 4 år, forble Xpert MTB /RIF assay nyttig som et diagnostisk verktøy for barndommen tuberkulose. I GA og IS prøver som var smøre og kultur positiv, følsomheten av Xpert MTB /RIF-analyse var 95,6%, som er lik den som er rapportert i friske kliniske prøver. Som forventet følsomheten av Xpert MTB /RIF var bedre enn for mikroskopi (p
= 0,0001). Men følsomheten av Xpert MTB /RIF-analyse på kultur positive men smøre negative prøver var lavere (62,5%). Utførelse av Xpert MTB /RIF-analysen har tidligere blitt evaluert det meste på spyttprøver innsamlet fra voksne tuberkulosepasienter [27-30], viser en høy følsomhet i smøre og kultur positive prøver (98-100%), men en mye lavere følsomhet i smøre negativ sputum prøver (43-70%). Våre funn var også lik disse funnene, men på arkiverte prøver. En lavere sensitivitet av Xpert MTB /RIF analysen har også blitt rapportert hos HIV positive voksne pasienter [29]. Det er få studier som har blitt gjennomført i barn og en svært få der ytelsen Xpert MTB /RIF-analysen er blitt evaluert av andre enn spyttprøver [4-10, 30, 31] prøver. Nicol et al. [8] inkluderte 452 barn for analyse med minst én ER prøve fra hvert barn. De viste også en dårlig følsomhet av mikroskopi (6%), kultur (16%) og Xpert MTB /RIF-analyse (13%) i disse prøvene. I denne studien, selv om oppdagelsen priser for disse tre metodene var høyere, men mønsteret var lik. Siden vi undersøkt både IS og GA prøver på to påfølgende dager, på sammenligning avkastningen fra IS prøvene var mye lavere enn mage aspirer prøvene. Selv om det er ingen data publisert så langt der både GA og IS prøver har blitt brukt i samme studie for å evaluere sensitivitet og spesifisitet Xpert MTB /RIF-analyse i klinisk sannsynlige tilfeller av intrathoracic tuberkulose, men våre resultater var i total samsvar med funnene i Bates et al. [10], Rachow et al. [16] og Sekadde et al. [17]. Vårt studium viser at smøre og kultur utbytter i GA prøvene er overlegne de til IS-prøver, men følsomheten for Xpert MTB /RIF-analysen var ikke signifikant forskjellige i GA og IS prøver, i prøver lagret ved -80 ° C for den samme varighet (77,1 og 85,7%, henholdsvis; P
= 049). Videre samlet vi begge disse prøvene på to påfølgende dager, og denne protokollen litt gitt bedre avkastning i alle diagnostiske teknikker dvs. smøre, kultur og Xpert MTB /RIF analyse. På grunn av denne doble kanter tilnærming, kan vi oppnå en høy diagnostisk {61 av 130; 46,9% barn (per pasient analyse)} avkastning.
Fleste publikasjoner om Xpert MTB /RIF eller CBNAAT har vært fra Afrika sør for Sahara [6, 8-10, 13, 16, 17]. India er en TB høy belastning landet og det sentrale TB delingen av India, som har blitt skjenket ansvaret for å implementere den reviderte nasjonale tuberkulosekontroll program har nylig installert mer enn 80 CBNAAT maskiner .. Men landsspesifikke data og retningslinjer for bruk av CBNAAT maskiner for diagnostisere barndommen tuberkulose mangler. Vår er også den første studien der vi har brukt mage aspirer og indusert sputum prøven oppbevares i opptil 4,3 år (median lagringsperiode på 32,5 måneder). I smøre og kultur påvist prøvene viste det sensitivitet på 95,7% som var innenfor området rapportert av flere andre arbeidere, men bare på ferske prøver [10, 17]. I nye prøver har blitt rapportert en variabel verdi tillegg av Xpert MTB /RIF over MGIT kultur, men i vår studie denne verdien tillegg var minimal (7,9%), sannsynligvis på grunn av noe tap av mykobakterielle levedyktighet på lang tids lagring av prøver [32]. De ekstra tilfeller oppdages over gullstandarden kultur test, var svært lite sannsynlig å være falsk positiv. Mykobakterielle teller utarme på oppbevaring av prøver selv etter noen dager (30), men motstridende observasjoner har også blitt gjort av andre arbeidere [33, 34]. Paramasivan et al. [33] rapporterte at det var ingen effekt på følsomhets priser av smøre og kultur etter lagring av spyttprøvene opp til 10 dager. Tessema et al. [34] har rapportert at lagring av spyttprøver opptil 80 dager ved romtemperatur og i frosne prøvene opp til 180 dager hadde ingen negativ effekt på kultur yield. Banda et al.

• FGF9 fra kreft-assosiert fibroblaster er en mulig formidler av invasjon og anti-apoptose av magekreftceller
• Antioksidantaktivitet og ultra endringer i mage kreft cellelinjer indusert ved Northeastern Thai spiselig folk planteekstrakter