Xpert MTB /RIF ensayo se puede utilizar en el aspirado gástrico archivado e indujo muestras de esputo para el diagnóstico de la tuberculosis sensible pediátrica

Xpert MTB /RIF ensayo se puede utilizar en el aspirado gástrico archivado y muestras de esputo inducido sensible para el diagnóstico de la tuberculosis pediátrica
Resumen Antecedentes

La tuberculosis (TB) en niños se descuida, debido principalmente a la falta de herramientas de diagnóstico sensibles . Recientemente Xpert MTB /RIF ensayo ha revolucionado el campo del diagnóstico, pero su utilidad en TB pediátrica No se ha informado de la India y ningún informe está disponible en su uso en muestras archivadas a largo plazo.
Métodos
Se reclutaron 130 pacientes pediátricos de tuberculosis intratorácica probable y su aspirado gástrico (GA) y esputo inducido (IS) se recogieron muestras en 2 días consecutivos entre enero de 2009 y diciembre de 2012. Todas las muestras (n = 520) fueron sometidos a un examen Papanicolau, la cultura BACTEC MGIT-y en -Casa
PCR multiplex. Una alícuota de cada muestra se almacenó a -80 ° C y se ensayó de la Xpert MTB /RIF ensayo en 2013.
: Resultados de la Muestra tasa de detección sabia sabia y paciente de la baciloscopia fue del 4,4% y el 10%, mientras que para BACTEC cultura -MGIT esta tasa fue de 24,4% y 46,9%, respectivamente. De los 1 130 muestras GA día, el 31,5% y el 27,7% Día 2 muestras GA fueron cultivo positivo. Sólo el 17,7% de las muestras fueron positivas GA en ambos días. De los 130 IS muestras recogidas en el día 1 y el día 2, el 15,4% y el 23,1% de las muestras fueron cultivo positivo. Una combinación de GA y se rinde mejores resultados. La combinación de ambos GA e IS, la sensibilidad global del Xpert MTB /RIF en muestras de frotis positivo y cultura fue del 95,6%. En muestras negativas y la cultura de frotis positivo su sensibilidad fue del 62,5%. La duración de almacenamiento de las muestras impactado el rendimiento Xpert MTB /RIF prueba (p = 0,0001). En las muestras de frotis positivo almacenados durante 650-849 días, su sensibilidad fue del 85,7% y del 77,1% para las muestras de SI y GA que se redujo a 33,3% y 50%, respectivamente, si se almacena durante más de 1050 días.
Discusión
diagnóstico de confirmación de la tuberculosis sobre todo en los niños es un reto médico. Ningún laboratorio o prueba radiológica pueden llegar a un nivel satisfactorio de sensibilidad diagnóstica. Sin embargo, en este estudio hemos foundthat combinación de múltiples muestras y pruebas de diagnóstico múltiple puede dar mucho mejor rendimiento, aunque notoptimum. En este estudio, la combinación de 2 aspirados gástricos (GA) y 2 muestras de esputo inducido (IS) recogidos en dos días consecutivos, y probado en tres métodos de diagnóstico arrojó una tasa significativamente alta de detección. A pesar de su almacenamiento a largo plazo, la sensibilidad global del Xpert MTB /RIF en muestras de frotis y -cultura positivos sigue siendo muy alta. Pero después de almacenar estas muestras bajo condiciones de temperaturas bajo cero thesensitivity del Xpert MTB /RIF disminuido significativamente. Se espera porque incluso si la muestra es de frotis y cultivo positivo, el recuento de sobrevivir micobacterias se pone, después de varios años, este recuento puede llegar a un nivel indetectable.
Conclusión
Este informe muestra que los frotis y cultivo de muestras positivas almacenado a temperaturas bajo cero condiciones para varios años puede ser utilizado en el ensayo Xpert MTB /RIF, manteniendo al mismo tiempo la sensibilidad prueba diagnóstica sensible y especificidad.
Palabras clave
muestras Pediatría Tuberculosis India gástrico Aspirar el esputo inducido archivados mPCR MGIT Cultura, Xpert MTB /Antecedentes RIF
Organización Mundial de la Salud (OMS) estima la carga mundial de la tuberculosis (TB) a los 9 millones de casos nuevos y 1,5 millones de muertes en 2013 [1]. Esto incluye hasta 15% carga de casos pediátricos. Alrededor de 74.000 niños mueren de tuberculosis cada año y hay alrededor de medio millón de nuevos casos al año [2]. Al igual que en los adultos, la mayoría (70-80%) de los casos de tuberculosis infantil se presentan con tuberculosis pulmonar (PTB). La tuberculosis en los niños ha sido relativamente descuidado, debido principalmente a los problemas en la disponibilidad de herramientas de diagnóstico eficaces [3]. La India es 17 entre 22 países con elevada carga en términos de tasa global de incidencia de TB, pero muy poca información disponible sobre la epidemiología de la tuberculosis en los niños, su diagnóstico y manejo [4, 5].
En la mayoría de los ajustes de diagnóstico de la TB pediátrica se realizan sobre la base del estudio de contactos, y muy pocos intentos se han hecho para la detección activa de casos. Esto se debe principalmente a la falta de una presentación clínica patognomónica en TB pediátrica y la falta de herramientas de diagnóstico sensibles [3, 4, 6, 7]. Vaya con herramientas limitadas para el diagnóstico de laboratorio de confirmación, la evaluación de la historia clínica, pruebas de la tuberculina, radiografía de tórax y una falta de respuesta a los antibióticos ayudan a hacer el diagnóstico clínico. la baciloscopia y la confirmación microbiológica rara vez se consigue debido a la escasa sensibilidad de estas pruebas, en parte debido a la naturaleza de la enfermedad paucibacilar y la incapacidad de los niños para proporcionar una muestra de esputo óptima [6]. muestras alternativas incluyen aspirado gástrico (GA), esputo inducido (IS), aspirado nasofaríngeo, lavado bronco-alveolar, hisopo de laringe, prueba de la cuerda y muestras de heces [3, 7-10]. Dependiendo de la prueba de diagnóstico utilizado, estas muestras han demostrado la sensibilidad y especificidad variables. Se ha informado de que las muestras de lavado gástrico proporcionan el índice de detección más alto (40-92%), dependiendo de la sensibilidad de la prueba de laboratorio adoptado. Otras muestras han mostrado tasas de detección más pobres que van desde 4-43% para el lavado broncoalveolar, 24-30% para la aspiración nasofaríngea, 27-63 de hisopo de laringe y 20-30% mediante el uso de esputo inducido. Algunos trabajadores han utilizado también prueba de la cuerda pero los resultados no han sido alentadores [3, 7, 11-13].
La reciente introducción de la prueba Xpert MTB /RIF (Cepheid, EE.UU.) ha transformado significativamente el diagnóstico de la tuberculosis en adultos , pero su aplicación para el diagnóstico de TB pediátrica está en evaluación. Este ensayo es rápido y proporciona resultados dentro de 2 h [14]. En una declaración de política Mundial de la Salud Organización (OMS) en 2011, se recomienda el uso de Xpert MTB ensayo /RIF como herramienta de diagnóstico preliminar entre los niños, en adultos con sospecha de virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) la tuberculosis asociados y en todos los casos de MDR TB sospechosos [ ,,,0],15]. Posteriormente, varios trabajadores han empezado a utilizar Xpert MTB ensayo /RIF para el diagnóstico de la tuberculosis pediátrica [10, 16-18]. Sin embargo, el uso generalizado de Xpert MTB /RIF para el diagnóstico de TB pediátrica sobre una base rutinaria todavía sigue siendo una opción distante. Hasta la fecha, sólo hay unos pocos estudios sobre la aplicación de la Xpert MTB /RIF para el diagnóstico de TB pediátrica. Dos estudios informan sobre el uso de la Xpert MTB /RIF en el esputo inducido dos en su uso en las muestras de lavado gástrico. No hay estudios que informan sobre el uso del Xpert MTB /RIF tanto en GA y está muestras al mismo tiempo en el mismo paciente. Además, no existe un estudio de la India en la evaluación de la Xpert MTB /RIF para el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar pediátrica. Por otra parte, la utilidad de la Xpert MTB /RIF en muestras archivadas GA e IS anteriormente no ha sido examinado. Desde el Xpert MTB /RIF no estuvo disponible hasta después de 2011, no hay ninguna otra prueba rápida que puede detectar la tuberculosis y la resistencia a RIF simultáneamente en muestras que se recogieron antes de 2011. Este estudio también examina el efecto del almacenamiento a largo plazo de muestras clínicas en el la detección de la tuberculosis mediante el ensayo Xpert MTB /RIF.
anterior hemos informado de que las muestras GA proporcionan mejores rendimientos que ES muestras [19]. En un informe posterior que también mostró que la neutralización del pH del aspirado gástrico antes de la transformación conduce a una mayor tasa de contaminación sin la mejora de la tasa de detección de [20]. En el presente estudio se informe sobre el desempeño de la Xpert MTB /RIF en archivados GA y está muestras recogidas en dos días consecutivos a partir de los niños con tuberculosis intratorácica probable, reclutado como parte de una doble ciego ensayo controlado aleatorio para estudiar el papel de los suplementos de micronutrientes controlada en niños con tuberculosis intratorácica.
Métodos diseño del estudio y
objeto de reclutamiento Francia el estudio se realizó entre enero 2009 a diciembre 2012 en el Instituto All India de Ciencias médicas (AIIMS) y el hospital de niños Kalawati Saran ( KSCH), ambos en Nueva Delhi, India. Este trabajo fue parte de un ensayo controlado aleatorizado, doble ciego para estudiar el papel de los suplementos de micronutrientes en niños con tuberculosis intratorácica [19-22]. Un total de 403 niños (58,2% mujeres), con edades comprendidas entre los 6 meses y los 14 años [La mediana de edad, 120 meses; rango intercuartílico (RIC), 7-168 meses], con la tuberculosis intratorácica probable se inscribieron. Se utilizaron los criterios clínico-radiológico estándar para sospechar la tuberculosis intratorácica en este estudio publicado anteriormente [19-22]. El diagnóstico de tuberculosis intratorácica se basó en las recomendaciones de la Academia India de Pediatría. Cualquier niño con tos y fiebre de más de 2 semanas sin mejoría durante siete a diez días de curso amoxicilina y pérdida reciente de peso inexplicable o antecedentes de contacto con el paciente de TB en los últimos dos años. Todos los sospechosos de tuberculosis fueron sometidos a una radiografía de tórax (lateral y posterior-anterior). En presencia de anormalidades persistentes de rayos X, con falta de resolución de los síntomas clínicos y ninguna causa alternativa para los síntomas y hallazgos de la radiografía de tórax, un diagnóstico probable de la tuberculosis intratorácica se hizo. Todos los niños con tuberculosis probables fueron sometidos a la prueba cutánea de la tuberculina (TST), aspirados gástricos ambulatorios (GA) y esputo inducido (IS) la búsqueda de frotis y cultivo AFB. Los niños se iniciaron sobre el TCA, según las recomendaciones de la RNTCP [5]. En resumen: Todos los niños con probable tuberculosis intratorácica se sometieron a la aspiración gástrica (GA) y esputo inducido (IS) recogida durante dos días consecutivos (D1 & D2). Se pidió a los niños que informe 6 h en ayunas por la mañana a la clínica designada. Después de explicar el procedimiento y obtener el consentimiento de los padres y el asentimiento verbal por parte de los niños, se insertó un tubo de alimentación de tamaño adecuado (10-12g) a través de un orificio nasal hasta que llega al estómago. La posición del tubo se comprobó mediante la insuflación de aire en el estómago. El contenido del estómago se aspiraron por completo, guardado en un recipiente estéril. volumen habitual recogida fue de alrededor de 10 ml. Las muestras se trasladaron al laboratorio para su procesamiento dentro de 1-2 h. Hoteles en la misma aspiración gástrica sesión, seguido por la inducción de esputo con una diferencia de alrededor de media hora. Para la inducción de esputo, el niño se cebó con 2 inhalaciones de salbutamol por inhalación con un inhalador de dosis medida (MDI Asthalin, 100 mg /inhalación, Cipla, India)) y el espaciador (Zeroastat VT espaciador, Cipla, India), seguido por nebulización con 3 ml de 3 % de solución salina durante el próximo 15-20 min. Todas las muestras se les dio un número de código; y se envía al laboratorio sin un enlace a los detalles clínicos y pacientes. Las muestras se procesaron en el mismo día de la baciloscopia, cultivo BACTEC MGIT y-en-Casa en la PCR [23]. Los detalles clínicos y otros pacientes fueron registrados en la hoja de Excel mediante el tratamiento de pediatra y el laboratorio no era consciente de que el diagnóstico clínico de los sujetos.
Consideraciones éticas Francia El estudio fue aprobado por el comité ético institucional del Instituto All India de Ciencias Médicas , Nueva Delhi y Kalawati hospital de Niños Saran, Nueva Delhi, India, y el juicio se registró en clinicaltrials.gov (NCT 00801606). escrito el consentimiento informado se obtuvo de los padres /tutores de cada niño. Los métodos de laboratorio
Procesamiento de la muestra
IS y GA (pH no neutralizado) se procesaron las muestras como se describe anteriormente [19, 21, 23, 24] . En breve, las muestras se centrifugaron a 10.000 x g durante 10 min, a 4 ° C; sobrenadante se decantó y sedimento se resuspendió en un volumen igual de mezcla de NaOH%-4 NALC 0,5% en 50 ml de cresta tubos de procesamiento de fondo redondo tapado. La suspensión fue bien (4 x 10 s cada intervalo) vórtex para asegurar la mezcla adecuada y se incubó a 37 ° C durante 10 min. Después de la incubación, pH alcalino se neutralizó con tampón fosfato [PBS (pH 6,8, volumen total de 50 ml)], seguido de centrifugación final a 10.000 x g durante 10 min, a 4 ° C. Se decantó el sobrenadante; el sedimento re- suspendió en 2 ml de la PBS y 0,5 ml de volumen de alícuotas en 4 tubos estériles. Una alícuota se utiliza para la preparación de frotis, una para la cultura y la otra para la prueba en una casa en
PCR multiplex (m-PCR). Una alícuota se almacenó a -80 ° C para su uso posterior. A partir de una alícuota, una suspensión de 500 l se inoculó en BACTEC MGIT 960-sistema de cultivo líquido (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, EE.UU.), utilizando el protocolo estándar [25]. Con independencia de un positivo o un resultado negativo brilló, todos los cultivos fueron examinados por la tinción de Ziehl-Neelsen. La diferenciación de cepas de Mycobacterium tuberculosis en
(MTB) o micobacterias no tuberculosas (MNT) se llevó a cabo por una especie específica de la casa
m-PCR [23]. Las alícuotas de la muestra es y GA, almacenados a -80 ° C, se examinaron de forma retrospectiva en el ensayo Xpert MTB /RIF.
Xpert MTB Prueba de RIF /
En 2013, las muestras almacenadas fueron sometidos a las pruebas Xpert MTB /RIF . Había 520 descontaminado GA y está emparejado muestras (130x2 GA & 130x2 IS) que eran adecuados para las pruebas, mientras que otros eran o no suficientes en cantidad o calidad (contaminado). Se añadió el tampón de reactivo de muestra que contiene NaOH y el isopropanol en una proporción de 3: 1 (total 2 ml), y se incubó durante 15 min a temperatura ambiente. La muestra tratada (2 ml) a continuación se transfirió al Xpert MTB cartucho /RIF que contiene el tampón de lavado, reactivos liofilizados para la extracción de ADN y la amplificación PCR. Después de una mezcla adecuada, el cartucho se cargó en el instrumento /RIF Xpert MTB, según las instrucciones del fabricante (Cefeidas, EE.UU.). El instrumento realiza la muestra de mezcla, tratamiento con ultrasonidos de los bacilos de micobacterias y control interno (esporas), la liberación de ADN y la mezcla con los reactivos de PCR, de forma automática. Esto es seguido por una amplificación por PCR en tiempo real hemi-anidado, el objetivo de la detección por fluorescencia de cinco colores sondas de baliza molecular y control interno
in situ. Los resultados se generan después de 2 horas y se presenta como M. tuberculosis CD - negativo o positivo con carga semi-cuantificado bacilar como alta, media, baja o intermedia y si el patógeno es sensible o resistente RIF [14]. Los datos de los pacientes estaban vinculados a las muestras analizadas sólo después de la finalización de la /RIF evaluación Xpert MTB.
El análisis estadístico
sensibilidad del Xpert MTB /RIF se determina considerando la cultura MGIT confirmó muestras como verdaderos positivos. Para determinar la especificidad de la Xpert MTB /RIF, frotis, cultivo MGIT y en la casa
muestras negativas m-PCR fueron consideradas como muestras verdaderas negativas. Los valores predictivos positivos (VPP), el valor predictivo negativo (VPN) y la razón de verosimilitud para el positivo (PRL) Xpert MTB /RIF se calcularon con IC del 95% (intervalo de confianza). PRL superior a uno indica que el resultado de la prueba es más probable verdadero positivo y menor que uno quiere decir que el resultado de la prueba es probable que así sea negativo [26]. Se realizó la prueba de chi cuadrado de Pearson para la comparación del análisis racional paciente. Para descartar la proporción de concordancia por azar, se utilizó la prueba de kappa de Cohen
. Un valor de p <. 0.05.was considerados estadísticamente significativos [STATA 11.0 (College Station, Texas, EE.UU.) se utilizó el software para todos los análisis estadísticos]: Resultados de la
En este estudio, llevado a cabo entre enero de 2009 y diciembre 2012. Un total de 403 niños (58,2% mujeres), con edades comprendidas entre los 6 meses y los 14 años [La mediana de edad, 120 meses; rango intercuartílico (RIC), 7-168 meses], con la tuberculosis intratorácica probable se inscribieron. Sólo aquellos niños fueron incluidos de quien tanto GA e IS muestras recogidas en dos días consecutivos estaban disponibles. muestras, por lo tanto, emparejados IS y GA obtenidos en dos días consecutivos de 130 niños fueron analizados por ensayo Xpert MTB /RIF. Las muestras descontaminados fueron almacenadas a -80 ° C durante 21,4 51,9 meses (mediana del período de almacenamiento de 32,5 meses; IQR 27-35,1) antes de que éstas se sometieron a análisis Xpert MTB /RIF. El flujo de trabajo de laboratorio y resumen de los resultados se muestran en la Fig. 1. Fig. 1 Diagrama de flujo que representa la inclusión de las muestras con el flujo de procesamiento de la muestra, los métodos utilizados y los resultados según las directrices de STROBE
resultado de diagnóstico de muestras es GA y recogidos en dos días consecutivos
Sólo 23 de las 520 muestras (4,4%) de 13 (10%) niños fueron baciloscopia positiva (Fig. 1). De estos 23 muestras, 9 eran D1 y 8 eran muestras D2 GA. Segundo día muestras (D2) GA detectaron 3 casos positivos de frotis AFB adicionales, mientras que perdió 4 casos que fueron positivas en D1, por lo tanto, no había ningún valor incremental neto de una muestra D2 GA. Sólo 3 está muestras fueron positivas en D1 o D2. La muestra D2-Se añade un caso, pero también se perdió uno de los casos. Sesenta y uno de los 130 (46,9%) niños [127 de 520 (24,4%) muestras] fueron diagnosticados de tuberculosis confirmada por cultivo, ya sea por frotis o cultivo (Tabla 1). Fuera de 130 muestras D1-GA 41 (31,5%), mientras que 36 (27,7%) de las muestras D2-GA fueron cultivo positivo. Veintitrés (17,7%) niños presentaron una cultura GA positivo en ambos días (Tabla 2). El rendimiento de las muestras de esputo inducido era pobre. De 130 está muestras recogidas en D1, sólo 20 muestras (15,4%) fueron positivos, mientras que en D2, 30 (23,1%) muestras fueron cultivo positivo (Tabla 3). Dieciséis (12,3%) niños tenían un cultivo positivo está en ambos días. Los rendimientos de cultivos MGIT de GA e IS muestras recogidas en dos días consecutivos se muestran en las Tablas 2 y (& 3, respectivamente). No había ningún valor adicional de una segunda muestra de GA días para la microscopía de frotis (9 vs 8), la cultura (41 vs 36), o Xpert MTB /RIF ensayo (33 vs
34). Sin embargo, IS muestras recogidas en dos días consecutivos proporciona un valor adicional significativo en la cultura (20 vs 30), pero
un incremento adicional insignificante en el ensayo de Xpert MTB /RIF (22 vs
25). Una combinación de uno GA y uno se muestra dio utilidad de diagnóstico mejor, independientemente de D1 o D2. Casi 50% de las muestras (ya sea GA o IS) fueron Xpert MTB /RIF positivo en ambos días (Fig. 2) .Tabla 1 Rendimiento del Xpert MTB /RIF ensayo en muestras bacteriológicamente positivos y negativos [bacteriológicamente combinación de aspirado gástrico (n
= 260) y esputos inducidos (n = 260
)] recogido de los niños con tuberculosis intratorácica probable
criterios bacteriológicos (N = 520) guía empresas Subcriterios
La No se . (%) Guía empresas Xpert MTB /RIF Resultados
positivo (%) guía empresas Negativo (%) guía empresas bacteriología positiva (n = 127
; 24,4%)
Smear (+), la cultura (+)
23 (4,4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3)
Smear (-), la cultura ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), la cultura (-)
0 0

0
Subtotal
127
87 (68,5)
40 (31,5)
bacteriológicamente negativo (n =
393; 75,5%)
Smear (-), la cultura (-)
393
31 (7,9)
362 (92,1)
total
520
118 (22,7) **
402 (77,3) Francia El cuadro muestra una alta eficacia de la Xpert MTB /RIF en la cultura y manchar las muestras positivas, pero moderada tasa de detección en las muestras positivas de cultivo de frotis negativo
*, ** P Hotel < 0,001, (+) - positiva, (-) - Negativo, número entre paréntesis indican el porcentaje sobre Table 2 Rendimiento de la cultura MGIT 960 en muestras de aspirado gástrico recogidos en dos días consecutivos de 130 niños con tuberculosis intratorácica probable
MGIT960 Cultura resultados
Día 1
positivo negativo

total
Día 2
positiva
23 (17,7%) página 13 (10%)
36 (27,7%) negativo

18 (13,8%): perfil 76 (58,5%): perfil 94 (72,3%)
total
41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabla 3 Rendimiento de la cultura MGIT 960 en muestras de esputo inducido recogidos en dos días consecutivos de 130 niños con tuberculosis intratorácica probable
MGIT 960 cultura resultados
Día 1
positivo negativo

total
Día 2
positiva
16 (12,3%) página 14 (10,8%)
30 (23,1%) negativo
página 4 (3,1%): perfil 96 (73,8%)
100 (76,9%)
total
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
Fig. 2 muestras individuales y análisis de superposición de Xpert MTB /RIF positividad en el aspirado gástrico y de esputo inducido recogidos en 2 días consecutivos
Comparación de la IS y GA
En general, en las muestras (es + GA), que fueron positivos, ya sea en frotis y /o cultivo (127/520), la sensibilidad del ensayo Xpert MTB /RIF fue ligeramente inferior (68,5%, 87/127) en comparación con el examen bacteriológico (Tabla 1) pero también detectado 7,9% (31/393) de los casos adicionales sobre la cultura que da una sensibilidad de 22,7% [118/520] (p = NS
), pero significativamente mayor (p = 0,001
) la sensibilidad de la baciloscopia (Tabla 4). El rendimiento del Xpert MTB /RIF fue del 95,6% (22/23) de las muestras archivadas de frotis positivo y cultura, como se muestra en la (Tabla 1) y el diagrama de flujo (Fig. 1). Todas las 14 muestras que arrojaron las especies de NTM eran frotis negativo, pero la cultura y m-PCR positivo. De ahí que en la reevaluación, la sensibilidad del Xpert MTB /RIF en frotis negativo, pero un cultivo positivo (MTB) sólo muestras fue del 72,2% (65/90). Pero si se toman juntos todas las muestras positivas de cultivo sin tener en cuenta las especies de micobacterias, la sensibilidad cayó hasta el 62,5% (65/104) por 14 NTM aislamientos. La sensibilidad del Xpert MTB /RIF no difiere mucho entre el GA e IS muestras si todo punto de vista bacteriológico (frotis y /o cultivo) GA positivo (92,2%, 71/77) e IS (94%, 47/50) se compararon muestras . No se muestra positiva NTM fue falsamente identificado por Xpert MTB /RIF pero perdió un frotis, la cultura y m-PCR muestra positiva, el aislado fue identificado como MTB por m-PCR y. Todas las muestras Xpert MTB /RIF positivos también eran m-PCR positivo. Por lo tanto nuestra internamente m-PCR y Xpert MTB /RIF mostró un 100% de concordancia en NTM /MTB diferenciación (Fig. 1) .Tabla 4 especificidad y valores predictivos de ensayo Xpert MTB /RIF sensibilidad, en referencia a la baciloscopia y Bactec- cultura MGIT960 en el esputo inducido (n = 260
) vs. aspirado gástrico (n = 260
) muestras
Sensibilidad Especificidad

PPV

VAN
LRF de prueba positiva
La precisión diagnóstica
Sensibilidad (frotis positivo)
Sensibilidad (frotis negativo)
Xpert MTB /RIF ensayo vs Cultura y esputo inducido
35/50 (70,0%; 56,2 a 80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3 a 96,7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7-95,7)
12,2% (10,2-14,8)
89,6% (85,3-92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
gástrico Aspirar
52/77 (67,5%; 56,5 a 76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3 a 93,2) **
73,2% (61,9-82,1)
87,8% (81,2-90,9)
6.5% (5.8 a 7.3)
83,1% (78,0-87,1)
16/17 (94,1%): perfil del 36/60 (60,0%)
AFB vs Cultura y esputo inducido
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2 a 100)
100% (60,8-100)
82,7% (77,5-86,8) -
83,1% (78,1-87,1)
NA NA

gástrico Aspirar
17/77 (22,1%; 14,3 a 32,5)
183/183 (100%; 97,9 a 100) 100
% (81,6-100)
75,3% (71,4-81,6) -
76,9% (71,4-81,6)
NA NA

de datos n /N (%; 95% CI) o% (IC del 95%), valor predictivo positivo (VPP), el valor predictivo negativo (VPN), razón de verosimilitud (LRF), * p = 0,77
, ** p = 0,087
, *** p = 0,792

Comparación de la Xpert MTB /RIF, cultura y la microscopía de frotis AFB
detecta /RIF ensayo Xpert MTB un adicional de 31 de 393 (7,9%) muestras que eran tanto baciloscopia y la cultura MGIT negativa, pero perdido 39 de 104 muestras positivas (37,5%) de cultivo (Tabla 4). En los niños con tuberculosis intratorácica probable, aspirado gástrico identificado más casos que el esputo inducido mediante baciloscopia, el cultivo y el Xpert MTB /RIF ensayo (6.5, 29.6, y 27.3% vs
2.3, 19.2 y 18.0%, respectivamente). El rendimiento del Xpert MTB /RIF ensayo disminuyó al aumentar la duración del almacenamiento de GA, así como muestras de ES. En las muestras almacenadas durante 650-849 días, la tasa de detección del ensayo Xpert MTB /RIF en muestras de SI fue del 85,7%, que se redujo a 33,3% en las muestras almacenadas durante más de 1050 días. Del mismo modo, estas tasas fueron 77,1 y 50%, respectivamente en muestras de GA (Fig. 3). Después de un almacenamiento a largo diferencia en el rendimiento de IS y GA fue altamente significativa (P = 0,002
). Higo. 3 La disminución de las tasas de positividad en el ensayo Xpert MTB /RIF en relación con la duración del almacenamiento de aspirado gástrico y muestras de esputo inducido
Discusión
Ha habido un flujo de publicaciones sobre Xpert MTB /RIF también conocidos como GeneXpert o cartucho basado las pruebas de amplificación de ácido nucleico (CBNAAT) en los últimos 3 años. Este es el primer estudio de la India en el uso de la prueba Xpert MTB /RIF en niños con tuberculosis intratorácica y también el primer estudio que informa sobre la utilidad de este ensayo sobre el archivado y GA ES muestras de niños en la TB país endémico. El estudio muestra que incluso en GA e IS muestras almacenadas durante un máximo de 4 años, el /RIF ensayo Xpert MTB permaneció útil como una herramienta de diagnóstico para la tuberculosis infantil. En las muestras GA e IS que eran frotis y cultivo positivo, la sensibilidad del ensayo Xpert MTB /RIF fue del 95,6%, que es similar a la reportada en muestras clínicas frescas. Como era de esperar la sensibilidad de Xpert MTB /RIF fue superior a la de la microscopía de frotis (p
= 0,0001). Sin embargo, la sensibilidad del ensayo Xpert MTB /RIF en la cultura muestras negativas positivas pero frotis fue menor (62,5%). Rendimiento del ensayo Xpert MTB /RIF ha sido previamente evaluado principalmente en muestras de esputo recogidas de pacientes adultos con tuberculosis [27-30], que muestran una alta sensibilidad en muestras de frotis positivo y cultura (98-100%), pero una sensibilidad mucho menor en los frotis negativo muestras de esputo (43-70%). Nuestros resultados también fueron similares a estos hallazgos, pero en muestras archivadas. Un menor sensibilidad de la /RIF ensayo Xpert MTB también se ha reportado en pacientes adultos VIH positivos [29]. Existen pocos estudios que se han realizado en niños y muy pocos cuando la ejecución del ensayo de la Xpert MTB /RIF ha sido evaluada en muestras distintas de las muestras de esputo [4-10, 30, 31]. Nicol et al. [8] incluidos 452 niños para el análisis con al menos uno es muestra de cada niño. También mostraron una pobre sensibilidad de la microscopía (6%), la cultura (16%) y Xpert MTB /RIF ensayo (13%) en estas muestras. En el presente estudio, aunque las tasas de detección de estos tres métodos fueron más altos pero el patrón fue similar. Dado que hemos examinado tanto que es y muestras GA en dos días consecutivos, en la comparación del rendimiento de las muestras es era mucho más baja que las muestras de aspirado gástrico. Aunque no hay datos publicados hasta el momento en el que tanto GA y es que la muestra se han utilizado en el mismo estudio para evaluar la sensibilidad y especificidad de la Xpert MTB ensayo /RIF en los casos clínicamente probables de tuberculosis intratorácica, sin embargo, nuestros resultados están en total concordancia con resultados de Bates et al. [10], Rachow et al. [16] y Sekadde et al. [17]. Nuestro estudio muestra que los rendimientos microscopía y cultivo en muestras de GA son superiores a los de las muestras, sin embargo, la sensibilidad de la Xpert MTB /RIF ensayo no fue significativamente diferente en GA e IS muestras, en las muestras almacenadas a -80 ° C para el mismo duración (77,1 y 85,7%, respectivamente, p =
049). Además, se recogieron muestras de estos dos en dos días consecutivos, y este protocolo proporcionado ligeramente mejor rendimiento en todas las técnicas de diagnóstico es decir, frotis, cultivo y ensayo Xpert MTB /RIF. Debido a este enfoque de doble vertiente, podríamos lograr un alto diagnóstico {61 de 130; 46,9% de los niños (por análisis de paciente)} rendimiento.
Mayoría de las publicaciones sobre el Xpert MTB /RIF o CBNAAT han sido desde el África subsahariana [6, 8-10, 13, 16, 17]. La India es un país de alta carga de TB y la división TB central de la India, que se ha otorgado la responsabilidad de la aplicación del programa nacional de control de la tuberculosis revisado recientemente ha instalado más de 80 máquinas CBNAAT .. Pero país de datos y directrices específicas sobre el uso de máquinas para CBNAAT el diagnóstico de la tuberculosis infantil son insuficientes. Nuestra es también el primer estudio en el que se ha utilizado aspirado gástrico y la muestra de esputo inducido almacenado por hasta 4.3 años (período de almacenamiento mediana de 32,5 meses). En las muestras de frotis y cultivo demostrado que mostró una sensibilidad del 95,7%, lo que estaba dentro del rango reportado por varios otros trabajadores, pero sólo en muestras frescas [10, 17]. En muestras frescas un valor Además variable de la Xpert MTB /RIF sobre la cultura MGIT se ha informado, pero en nuestro estudio este valor Además fue mínima (7,9%), probablemente debido a cierta pérdida de viabilidad de micobacterias en el almacenamiento a largo plazo de muestras [32]. Los casos adicionales detectados durante la prueba de cultivo estándar de oro, eran muy poco probable que sea falso positivo. conteos de micobacterias agotan en el almacenamiento de las muestras, incluso después de unos días (30), pero las observaciones contradictorias también han sido hechas por otros trabajadores [33, 34]. Paramasivan et al. [33] informó de que no había ningún efecto sobre las tasas de sensibilidad de frotis y cultivo después de almacenar las muestras de esputo hasta 10 días. Tessema et al. [34] han informado de que el almacenamiento de muestras de esputo hasta 80 días a temperatura ambiente y en muestras congeladas hasta 180 días no tuvo ningún efecto negativo en el rendimiento del cultivo. Banda et al.

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