Xpert MTB /RIF test može se koristiti na arhiviranim želučane aspirata i inducirani uzorke iskašljaja za osjetljivu dijagnozu pedijatrijske tuberculosis

Xpert MTB /RIF testa može se koristiti na arhiviranim želučane aspirata i inducirani uzorke iskašljaja za osjetljivu dijagnoze dječje tuberkuloze
Sažetak
Pozadina pregled tuberkuloze (TB) u djece zapostavljen, uglavnom zbog nedostatka osjetljivih dijagnostičkih alata. Nedavno Xpert MTB /RIF test je revoluciju u dijagnostičku polje, ali njegova korisnost u pedijatrijskoj TB nije prijavio iz Indije i bez izvještaj je dostupan na njegovu uporabu u dugoročnim arhivirane uzorke.
Metode pregled smo unovačeni 130 pedijatrijska bolesnika s vjerojatnom intratorakalni tuberkuloze i njihove želučane aspirata (GA) i indukcije iskašljaja (IS) uzorci na 2 uzastopna dana su prikupljeni u razdoblju od siječnja 2009. do prosinca 2012. Svi uzorci (n = 520) bili su podvrgnuti premazati pregled, BACTEC-MGIT kulturu i na koristi uslugu nocenja pregled multiplex PCR. Alikvot svakog uzorka pohranjeni na -80 ° C i testiran u Xpert MTB /RIF pokus u 2013. | Rezultati
Uzorak mudri i strpljivi pametno stopa otkrivanja prljave mikroskopije je za 4,4% i 10%, dok je za BACTEC -MGIT kultura ta je stopa iznosila 24,4%, a 46,9%, respektivno. Od 130 dana 1 GA uzorcima, 31,5% i 27,7% 2. dan GA uzorci bili kulture pozitivni. Samo 17,7% GA uzoraka bilo je pozitivno na oba dana. Od 130 uzoraka prikupljenih na dan 1 i danu 2, 15,4% i 23,1% uzoraka bilo kultura pozitivno. Kombinacija GA i IS dala najbolje rezultate. Kombiniranjem GA i IS, ukupna osjetljivost Xpert MTB /RIF na PAPA i kulture pozitivnih uzoraka bila je 95,6%. U PAPA negativnih i kultura pozitivnih uzoraka osjetljivost bila 62,5%. Trajanje pohrane uzoraka utjecali na Xpert MTB /Rif testu (p = 0,0001). U PAPA pozitivnih uzoraka pohranjenih na 650-849 dana, njegova osjetljivost 85,7% i 77,1% je i GA uzoraka koji se pale na 33,3% i 50%, respektivno, ako se skladišti na više od 1050 dana. Pregled Rasprava pregled potvrdna dijagnoza tuberkuloze osobito u djece je medicinski izazov. Ne laboratorij ili radiološki test može doći do zadovoljavajuće razine dijagnostičke osjetljivosti. Međutim, u ovoj studiji smo foundthat kombinaciju višestrukih uzoraka i više dijagnostičkih testova može dati puno bolji prinos, iako notoptimum. U ovom istraživanju, kombinacija 2 želučanih aspirata (GA) i 2 induciranog sputuma (IS) uzimanja uzoraka u dva uzastopna dana, a testirani na tri dijagnostičkim metodama dobiven je značajno visoku stopu detekcije. Unatoč dugotrajno skladištenje, ukupna osjetljivost Xpert MTB /RIF na razmazu i -culture pozitivnih uzoraka i dalje vrlo visoka. No, nakon skladištenja tih uzoraka pod subfreezing uvjete thesensitivity od Xpert MTB /RIF značajno smanjen. To je očekivano, jer čak i ako je uzorak premazati i kultura pozitivno, grof od preživjelih mikobakterije ide dolje, nakon nekoliko godina ovaj broj može doći do nemjerljivom razinom. Pregled Zaključak pregled Ovo izvješće pokazuje da brisu i kultura pozitivnih uzoraka pohranjeni na subfreezing uvjeta za nekoliko godina može se koristiti u Xpert MTB /RIF testu, a da pritom zadrže značajnijeg dijagnostički test osjetljivosti i specifičnosti. pregled Ključne riječi pregled Pedijatrija Tuberkuloza Indija želudac Aspiriraj indukcije iskašljaja Arhivirani Uzorci mPCR MGIT Kultura, Xpert MTB /RIF pozadini pregled, Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) procjenjuje globalni teret tuberkuloze (TB) na 9 milijuna novih slučajeva, a 1,5 milijuna smrtnih slučajeva u 2013. [1]. To je uključivalo i do 15% opterećenja pedijatrijskih slučajeva. Oko 74.000 djece umire od tuberkuloze svake godine i ima oko pola milijuna novih slučajeva godišnje [2]. Kao i kod odraslih, većina (70-80%) od djeteta TB slučajeva prisutne s plućnom tuberkulozom (PTB). Tuberkuloza u djece je relativno zanemaren, uglavnom zbog izazova u dostupnosti učinkovitih dijagnostičkih alata [3]. Indija je 17. među 22 visokih zemljama teret u smislu ukupne TB stopu incidencije, ali vrlo malo informacija dostupno je u vezi epidemiologiju tuberkuloze u djece, njegova dijagnoza i upravljanje [4, 5].
Većinom postavki dijagnoza pedijatrijske TB se donesena na temelju kontakt slijeda, a vrlo malo pokušaja da se za aktivno otkrivanje slučaja. To je uglavnom zbog nedostatka patološko kliničke prezentacije u pedijatrijskoj TB i nedostatka osjetljivih dijagnostičkih alata [3, 4, 6, 7].
S ograničenim alatima za potvrdnim laboratorijske dijagnostike, procjene medicinske povijesti, tuberkulinizacije kože, rentgenska slika i nedostatak odgovora na antibiotike pomoći u izradi kliničku dijagnozu. Premazati mikroskopija i potvrda mikrobiološka rijetko postiže zbog slabe osjetljivosti tih testova, u dijelu zbog paucibacillary prirodi bolesti i nesposobnosti male djece kako bi osigurao optimalnu uzorak sputuma [6]. Alternativna uzorci uključuju želučane aspirata (GA), inducirani sputum (IS), nazofarinksa aspirata, bronchio lavage, grkljana obrisak, string test i uzorcima stolice [3, 7-10]. Ovisno o dijagnostičkog testa koji se koristi, ti uzorci su pokazali varijabilne osjetljivosti i specifičnosti. On je izvijestio da su uzorci ispiranje želuca pružiti najvišu (40-92%) detekcije, ovisno o osjetljivosti laboratorijskih testova usvojen. Ostali uzorci su pokazali lošije stope detekcije u rasponu od 4-43% za bronhoalveolarnim ispiranjem, 24-30% za nazofarinksa aspiracije, 27-63 za grkljana vatom i 20-30% pomoću indukcije iskašljaja. Neki su radnici također imaju koristi string test, ali rezultati nisu ohrabrujući [3, 7, 11-13].
Nedavno uvođenje Xpert MTB /RIF testu (Cepheid, SAD) znatno je transformirao dijagnostiku tuberkuloze u odraslih , ali njegova primjena u dijagnostici dječje tuberkuloze je u ocjeni. Ovaj test je brza i osigurava rezultate u roku od 2 sata [14]. U izjavi o privatnosti Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) u 2011. godini, preporučuje se korištenje Xpert MTB /RIF testom kao prethodno dijagnostičko sredstvo kod djece, u odraslih sa sumnjom na virus humane imunodeficijencije (HIV) koji su povezani tuberkuloze iu svim MDR TB sumnjivih slučajeva [ ,,,0],15]. Nakon toga, nekoliko radnika su počeli koristiti Xpert MTB /Rif testa za dijagnozu dječje tuberkuloze [10, 16-18]. Međutim, jako raširena upotreba Xpert MTB /RIF za dijagnozu pedijatrijske TB na temelju rutinu i dalje ostaje daleka mogućnost. Do danas, postoje samo nekoliko studija o primjeni Xpert MTB /RIF za dijagnozu pedijatrijske TB. Dvije studije izvješće o korištenju Xpert MTB /RIF na induciranog sputuma dva na njegovu upotrebu u uzorcima ispiranje želuca. Nema studija koje izvještavaju o korištenju Xpert MTB /RIF u oba GA te je uzoraka istovremeno na istom pacijentu. Nadalje, ne postoji studija iz Indije o procjeni Xpert MTB /RIF za dijagnozu pedijatrijske plućne tuberkuloze. Štoviše, korisnost Xpert MTB /RIF na arhiviranim GA te se uzorci prethodno nije pregledao. Budući da je Xpert MTB /RIF postao dostupan tek nakon 2011. godine, ne postoji drugi brzi test koji može otkriti TB i Rif otpora istovremeno u uzorcima koji su prikupljeni prije 2011. Ova studija također istražuje utjecaj dugotrajnog skladištenja kliničkih uzoraka na za otkrivanje tuberkuloze od Xpert MTB /RIF-testu.
smo ranije izvijestili da GA uzorci dati bolje prinose nego što se uzorci [19]. U slijedećem izvješću se također pokazali da neutraliziranje pH želučanog aspirata prije obrade dovodi do povećanja kontaminacije ne poboljšanje detekcije [20]. U ovoj studiji smo izvješće o izvedbi Xpert MTB /RIF na arhiviranim GA i IS uzorci prikupljeni u dva uzastopna dana od djece s vjerojatnim intratorakalni TB, regrutirani u sklopu dvostruko oslijepio randomizirana kontrolirana studija za proučavanje uloge mikronutrijenata nosa u djece s intra-torakalni tuberkuloze. pregled metoda
studija dizajna i predmeta zapošljavanje
Istraživanje je provedeno u razdoblju od siječnja 2009. do prosinca 2012. godine Sveindijskoga Instituta za medicinske znanosti (AIIMS) i Kalawati Šaran Dječje bolnice ( KSCH), oba u New Delhiju, Indija. Ovaj rad je dio dvostruke slijepom randomiziranom kontroliranom pokusu za proučavanje uloge mikronutrijenata nosa u djece s intra-torakalni tuberkuloze [19-22]. Ukupno 403 djece (58,2% djevojčica) u dobi između 6 mjeseci do 14 godina [srednja dob, 120 mjeseci; interquartile raspon (IQR), 7-168 mjeseci], s vjerojatnom unutar prsne TB upisani su. Standardne klinika-radiološki kriteriji za sumnju unutar prsne tuberkuloze je korišten u ovom istraživanju koje je objavio ranije [19-22]. Dijagnoza intratorakalni tuberkuloze se temelji na preporukama indijskom Academy of Pediatrics. Svako dijete s kašljem i groznicom više od 2 tjedna bez poboljšanja tijekom sedam do deset dana amoksicilin, naravno, i nedavna neobjašnjen gubitak težine ili povijesti kontaktu s TB pacijenta u posljednje dvije godine. Svi osumnjičeni tuberkuloze doživio prsima x-ray (bočno i stražnji-anterior). U prisustvu postojanih x-ray abnormalnosti, s nerješavanja kliničkih simptoma i bez alternativnog uzrok simptoma i rentgen nalaza, vjerojatno dijagnoze intratorakalni tuberkuloze je napravio. Sva djeca s vjerojatnom tuberkuloze su podvrgnuti tuberkulinizacije kože (TST), ambulantnim želučanih aspirata (GA) i indukcije iskašljaja (IS) ispita za AFB brisa i kulture. Djeca su počeli na ATT po preporukama RNTCP [5]. Ukratko: Sva djeca s vjerojatnom unutar prsne tuberkuloze su podvrgnuti želučane aspiracije (GA) i indukcije iskašljaja (IS) kolekcije za dva uzastopna dana (D1 & D2). Djeca su zamoljeni da izvješće 6 sati posta u jutro na određenom klinici. Nakon što je objasnio postupak i dobivanje suglasnosti od roditelja i verbalnu suglasnost od djece, odgovarajući veličine otvor za umetanje (10-12G) je umetnuta kroz jednu nosnicu dok se ne postigne želudac. Položaj cijevi provjerena je insuflacijom zraka u želucu. Sadržaj želuca su ispražnjene potpunosti, čuva se u sterilnu posudu. Uobičajena volumen prikupljeno je oko 10 ml. Uzorci su prebačene u laboratorij na daljnju obradu u roku od 1-2 sata.
U istom sjedi želuca aspiracije uslijedio indukcije iskašljaja s razmakom od oko pola sata. Za indukcije iskašljaja, dijete je premazati sa 2 dimova salbutamol inhalacije inhalatora (MDI Asthalin, 100 g /lisnata, Cipla, Indija)) i razmaka (Zeroastat VT PR, Cipla, Indija), nakon čega slijedi stvaranje maglice s 3 mL 3 % slana otopina tijekom sljedećih 15-20 minuta. Svi uzorci su dobili jedinstveni broj koda; i poslati u laboratorij bez poveznice s kliničkim i bolesnika detalje. Uzorci su obrađeni na isti dan za AFB razmaza, BACTEC-MGIT kulturi i in-house
PCR [23]. Klinički i drugi detalji bolesnika zabilježeni su u Excel list obradom pedijatra i laboratorij nije bio svjestan kliničke dijagnoze ispitanika. Pregled Etička razmatranja
Studija je odobren od strane institucionalnog etičkog povjerenstva Sveindijskome Instituta za medicinske znanosti New Delhi i Kalawati Šaran Djeca bolnica, New Delhi, Indija, a suđenje je registrirana na ClinicalTrials.gov (NCT 00801606). Pismeni informirani pristanak koji je dobiven od roditelja /staratelja svakog djeteta.
Laboratorijskim metodama
Uzorak obrade pregled IS i GA (pH ne neutralizira) Uzorci su obrađeni kao što je prethodno opisano [19, 21, 23, 24] , Ukratko, uzorci su centrifugirani pri 10000 x g tijekom 10 minuta, na 4 ° C; supernatant dekantira i talog je ponovno suspendiran u jednakom volumenu 0,5% NALC-4% NaOH smjese u 50 ml grebena zatvorenim epruvetama okruglim dnom obrade. Suspenzija je temeljito (4 x 10 s svaki interval) miješana da bi se osiguralo dobro miješanje te se inkubira na 37 ° C tijekom 10 minuta. Nakon inkubacije, alkalni pH je neutralizirana fosfatnim puferom [PBS (pH 6.8, ukupni volumen od 50 ml)] nakon čega slijedi konačni centrifugiranjem na 10000 x g tijekom 10 minuta, na 4 ° C. Supernatant je dekantiran; pelet re- suspendira u 2 ml PBS i 0,5 ml volumena alikvotira u 4 sterilnim epruvetama. Jedan alikvot je korišten za pripremu razmaza, jedan za kulturu i drugi za testiranje u in-house pregled multipleks PCR (m-PCR). Jedan alikvot se čuva pri -80 ° C za daljnju uporabu. Iz jednog alikvota, 500 ul suspenzije nasadi se u BACTEC MGIT-960 sustava tekućina kulture (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA), koristeći standardni protokol [25]. Bez obzira na pozitivan ili negativan bljesnula rezultat toga, sve kulture su pregledane Ziehl-Neelsen bojenja. Diferencijacija izolata u Mycobacterium tuberculosis
(MTB) ili ne-tuberkulozan mikobakterija (NTM) je izvršio vrste specifične in-house pregled m-PCR [23]. IS i GA uzorak alikvota, pohranjeni na -80 ° C, naknadno su ispitani u Xpert MTB /RIF-testu. Pregled, Xpert MTB /RIF Test pregled 2013. pohranjeni uzorci su podvrgnuti Xpert MTB /RIF testiranje , Bilo je 520 dekontaminirati GA i uparen uzoraka (130x2 GA & 130x2 IS) koji su pogodni za ispitivanje, dok su drugi bili ili nisu dovoljno u količini ili kvaliteti (zagađene). Pufer Uzorak reagens sadrži NaOH i izopropanol se doda u omjeru 3: 1 (ukupno 2 ml), te inkubira 15 minuta na sobnoj temperaturi. Tretirana uzorka (2 ml) je zatim prebačena u Xpert MTB /RIF patronu koja sadrži pufer za ispiranje, liofilizirane reagensi za ekstrakciju DNA i PCR amplifikacijom. Nakon pravilno miješanje, spremnik je postavljen u Xpert MTB /RIF instrumenta, kao i po uputama proizvođača (Cepheid, USA). Instrument obavlja Uzorak miješanje, soniciranje mikobakterijske bacila i unutarnje kontrole (spore), oslobađanja DNA i miješanje s reagensima PCR, automatski. Nakon toga slijedi pravi put-PCR amplifikacije polu-ugniježđena, ciljati detekcije pet boja fluorescencije molekularna beacon sondi i unutarnje kontrole in-situ Netlogu. Rezultati su stvorena nakon 2 sata i iskazuje M. tuberculosis Netlogu - negativna ili pozitivna s polu-kvantitativno bacilarne opterećenja kao visok, srednji, srednje ili niske, a ako je patogen RIF osjetljiva ili otpornim [14]. Pojedinosti bolesnika su bili povezani s ispitanim tek nakon završetka Xpert MTB /RIF ocjenjivanje uzoraka.
Statistička analiza pregled Osjetljivost Xpert MTB /RIF određena je s obzirom MGIT kulturu potvrdio je uzorke kao pravi pozitivni. Za određivanje specifičnosti Xpert MTB /RIF, premazati, MGIT kulturi i in-house pregled m-PCR negativni uzorci su smatrani kao istinski negativnih primjera. Pozitivne prediktivne vrijednosti (PPV), negativna prediktivna vrijednost (NPV) i omjer vjerojatnosti za pozitivne (LRP) Xpert MTB /RIF izračunate su s 95% CI (intervalima pouzdanosti). LRP veći od jedan pokazuje da je rezultat testa je vrlo vjerojatno istina pozitivan i manji od jedan znači da je rezultat testa je vjerojatno istina negativna [26]. Pearson hi kvadrat test je proveden za usporedbu pacijenta mudre analize. Kako bi se isključila dio sporazuma slučajno, korišten je Cohen kappa pregled testa. P-vrijednost. ≪ 0.05.was smatra statistički značajna [Stata 11.0 (College Station, Texas, USA) software je korišten za sve statističke analize] | Rezultati
U ovom istraživanju, koje je provedeno u razdoblju od siječnja 2009. do prosinca 2012. je ukupno 403 djece (58,2% djevojčica) u dobi između 6 mjeseci do 14 godina [srednja dob, 120 mjeseci; interquartile raspon (IQR), 7-168 mjeseci], s vjerojatnom unutar prsne TB upisani su. Samo ta djeca su bili uključeni od koga i GA i IS uzorci prikupljeni u dva uzastopna dana bili dostupni. Stoga sparene jest i GA uzorci dobiveni u dva uzastopna dana od 130 djece su analizirani Xpert MTB /RIF testu. Dekontaminiranog Uzorci su čuvani na -80 ° C, 21,4 do 51,9 mjeseci (medijan period skladištenja 32,5 mjeseci; IQR 27-35,1) prije nego oni su podvrgnuti Xpert MTB /RIF analize. Laboratorij tijek rada i sažetak rezultata prikazani su na slici. 1. Sl. 1 na dijagramu koji prikazuje uključivanje uzoraka s toka obrade uzoraka, metode koriste i rezultati kao i po Strobe smjernicama
dijagnostiku ishod IS i GA uzoraka prikupljenih u dva uzastopna dana pregled, samo 23 od 520 (4,4%) uzoraka od 13 (10%) djeca su AFB razmaz pozitivan (Sl. 1). Od tih 23 uzoraka, 9 su D1 i 8 su bili uzorci D2 GA. Drugi dan (D2) VS uzoraka otkrivena još 3 AFB brisu pozitivnih slučajeva, dok je promašio 4 predmeta koji su bili pozitivni na D1, stoga nije bilo neto inkrementalni vrijednosti iz uzorka D2 GA. Samo 3 JE uzoraka bilo je pozitivno na obje D1 ili D2. Uzorak D2 dodaje jedan slučaj, ali i promašio jedan slučaj. Šezdeset jedan od 130 (46,9%) djece [127 od 520 (24,4%) uzoraka] je dijagnosticirano da imaju kulturu potvrdio tuberkuloze bilo razmazu ili kulture (Tablica 1). Od 130 D1-GA uzoraka 41 (31,5%) dok je 36 (27,7%) uzoraka D2-GA bili kulture pozitivni. Dvadeset tri (17,7%) imalo je samo kulturu pozitivno GA na oba dana (tablica 2). Prinos od induciranih uzoraka sputuma je bio siromašan. Od 130 uzoraka prikupljenih na D1, samo 20 uzoraka (15,4%) bili su pozitivni, a na D2, 30 (23,1%) uzorci su kultura pozitivnih (Tablica 3). Šesnaest (12,3%) djece imali kulturu pozitivno je na oba dana. U MGIT kultura prinosi GA i IS uzorci prikupljeni u dva uzastopna dana prikazan je na (tablice 2 i 3, respektivno). Nije bilo nikakvih dodatnih vrijednost drugog dana GA uzorak za PAPA mikroskopom (9 vs 8), kulture (41 vs 36), ili Xpert MTB /RIF ispitivanje (33 vs Netlogu 34). No, je li uzorci prikupljeni u dva uzastopna dana pruža značajnu dodatnu vrijednost u kulturi (20 vs Netlogu 30), ali neznatna dodatni prirast u Xpert MTB /RIF testu (22 vs Netlogu 25). Kombinacija jedne GA, a jedan uzorak je dao najbolji dijagnostički uslužni program, bez obzira na D1 ili D2. Gotovo 50% uzoraka (bilo GA ili IS) su Xpert MTB /RIF pozitivno na oba dana (Sl. 2) .table 1 Nastup Xpert MTB /RIF test u bakteriološki pozitivnih i negativnih primjera bakteriološki [kombinacijom želučanih aspirata (n
= 260) i inducirani sputa (n pregled = 260)] prikupljeni od djece s vjerojatne intratorakalnih tuberkuloze pregled bakteriološki kriterijima (N = 520)
pod-kriterije
Ne , (%)
Xpert MTB /Rif Rezultati pregled
pozitivan (%)
Negative (%)
bakteriološki pozitivni (n pregled = 127; 24,4%) pregled brisa (+), kulturi (+)
23 (4.4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3) pregled brisa (-), kulturi ( +) pregled, 104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5) pregled brisa (+), kultura (-) pregled, 0
0 pregled 0
Subtotal
127 pregled 87 (68,5)
40 (31,5)
bakteriološki negativan (n
= 393, 75,5%)
premazati (-), kulture (-)
393 pregled 31 (7.9) pregled, 362 (92,1) pregled Ukupan pregled 520 pregled 118 (22,7) ** pregled 402 (77,3), pregled tablica pokazuje visoku učinkovitost Xpert MTB /RIF u kulturi i premazati pozitivne uzorke, ali umjereno detekcije u premazati negativne kulture pozitivnih uzoraka pregled *, ** P izvoznici < 0.001, (+) - pozitivan, (-) - Negativan, broj u zagradi pokazuju postotak pregled Tablica 2. Obavljanje MGIT 960 kulturi na želučane uzorcima aspirata prikupljenih u dva uzastopna dana od 130 djece s vjerojatnim intratorakalni tuberkuloze
MGIT960 kulture Rezultati
Dan 1
pozitivan
negativne
Ukupno
Dan 2
pozitivan pregled, 23 (17,7%) pregled, 13 (10%)
36 (27,7%)
Negativan
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%) pregled Ukupna
41 (31,5%)
89 (68,5%) pregled, 130 pregled Tablica 3 Nastup MGIT 960 kulturi na inducirani uzoraka iskašljaja prikupljenih u dva uzastopna dana od 130 djece s vjerojatnim intratorakalni tuberkuloze pregled MGIT 960 kulture Rezultati
Dan 1
pozitivan
negativne
Ukupno
Dan 2
pozitivan pregled, 16 (12,3%) pregled, 14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negativan
4 (3,1%) pregled, 96 (73,8%)
100 (76,9%) pregled Ukupna
20 (15,4%) pregled, 110 (84,6%) pregled, 130 pregled slika. 2 Individualni i preklapanje analiza Xpert MTB /RIF pozitivnosti u želučanom aspirata i indukcije iskašljaja uzorci prikupljeni na 2 uzastopna dana
Usporedba jest i GA
Sve u svemu, u uzorcima (IS + GA), koji su bili pozitivni ili u razmazu i /ili kulture (127/520), osjetljivost Xpert MTB /RIF testu bila je nešto niža (68,5%, 87/127) u odnosu na bakteriološku pregleda (tablica 1), ali to je također otkriven 7,9% (31/393) dodatne predmete preko kulture daje ukupnu osjetljivost od 22,7% [118/520] (str pregled = NS), ali značajno veći (p pregled = 0,001) osjetljivost od prljave mikroskopom (Tablica 4). Performanse Xpert MTB /RIF bio 95,6% (22/23) na PAPA i kulture pozitivnim arhivirane uzoraka, kao što je prikazano u (Tablica 1) i dijagram toka (Sl. 1). Svih 14 uzoraka koje daju NTM vrste su bris negativan, ali kultura i m-PCR pozitivan. Stoga se na ponovne procjene, osjetljivost Xpert MTB /RIF na razmazu negativan, ali kultura pozitivnih (samo MTB) uzoraka bila je 72,2% (65/90). Ali ako su svi kulture pozitivni uzorci uzeti zajedno, bez obzirom na vrste mikobakterija, osjetljivost pao je na 62,5% (65/104) zbog 14 NTM izolira. Osjetljivost Xpert MTB /RIF ne razlikuju mnogo između GA i IS uzorci ako sve bakteriološki (bris i /ili kulturu) pozitivna GA (92,2%, 71/77) i (94%, 47/50) uzorci su u odnosu , Ne NTM pozitivni uzorak pogrešno je identificiran Xpert MTB /RIF, ali je promašio jedan razmaz, kulturu i m-PCR pozitivan uzorak, izolat je identificiran kao MTB M-PCR i. Svi Xpert MTB /Rif pozitivni uzorci su bili i m-PCR pozitivan. Stoga je naš in-house m-PCR i Xpert MTB /RIF pokazao 100% podudarnost u NTM /MTB diferencijacije (Sl. 1) .table 4. osjetljivost, specifičnost i prediktivne vrijednosti od Xpert MTB /RIF testu u odnosu na AFB razmaza i Bactec- MGIT960 kultura indukcije iskašljaja (n pregled = 260) u odnosu na želudac usisavati (n pregled = 260) uzorci
Osjetljivost
Specifičnost
PPV pregled pregled NPV
LRF pozitivnog testa
Dijagnostička točnost
Osjetljivost (bris pozitivan)
Osjetljivost (bris negativan)
Xpert MTB /RIF test vs kultura pregled indukcije iskašljaja pregled, 35/50 (70,0%; 56,2-80,9) * pregled 198/210 (94,3%; 90.3-96.7) **
74,5% (60,5 -84,6) pregled, 92,7% (88,7-95,7) pregled, 12,2% (10,2-14,8) pregled, 89,6% (85,3-92,8) pregled, 6/6 (100%) pregled, 29/44 ( 65,9%) pregled želuca Aspiriraj
52/77 (67,5%, 56.5-76.9) * pregled 164/183 (89,6%; 84.3-93.2) ** pregled 73,2% (61.9-82.1)
87,8% (81,2-90,9) pregled, 6,5% (5,8-7,3) pregled, 83,1% (78,0-87,1) pregled, 16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs kultura pregled indukcije iskašljaja
6/50 (12.0%; 5,6-23,8) *** pregled 210/210 (100%; 98.2-100)
100% (60.8-100)
82,7% (77.5-86.8)
- 83,1% (78,1-87,1)
NA pregled NA pregled želuca Aspiriraj
17/77 (22,1%, 14.3-32.5)
183/183 (100%; 97,9 - 100) pregled 100 % (81,6-100) pregled, 75,3% (71,4-81,6)
- 76,9% (71.4-81.6) pregled NA pregled NA pregled podataka n /n (% 95% CI) ili% (95% CI), Pozitivna prediktivna vrijednost (PPV), negativna prediktivna vrijednost (NPV), omjer vjerojatnosti (LRF), * p pregled = 0,77, ** p pregled = 0,087, *** p pregled = 0,792 pregled Usporedba Xpert MTB /RIF, kulturu i AFB razmaz mikroskopije pregled Xpert MTB otkriti /RIF test dodatnih 31 393 (7,9%) uzoraka koji su bili i AFB premazati i MGIT kulture negativna, ali propustio 39 od 104 (37,5%) kultura pozitivnih uzoraka (tablica 4). U djece s vjerojatnim intratorakalni tuberkuloze, želučani usisavati identificirati više slučajeva nego induciranog sputuma pomoću PAPA mikroskopije, kulturu i Xpert MTB /Rif testa (6.5, 29.6, i 27.3% u odnosu na pregled 2.3, 19.2 i 18,0%, respektivno). Prinos Xpert MTB /RIF testu pala s povećanjem trajanje skladištenja GA, kao i IS uzoraka. U uzorcima pohranjenim na 650-849 dana, stopa otkrivanja Xpert MTB /RIF test na uzorcima bio je 85,7%, što je pala na 33,3% u uzorcima pohranjenim na više od 1050 dana. Isto tako, ove stope su 77,1 i 50%, odnosno u uzorcima ga (sl. 3). Nakon dugog razlika spremište u prinosu IS i GA je bio vrlo značajna (P pregled = 0,002). Sl. 3 Pad pozitivnosti stope u Xpert MTB /RIF testu u odnosu na trajanje skladištenja želučane aspirata i inducirani uzorci sputuma
Rasprava
Došlo je protok publikacija o Xpert MTB /RIF također poznat kao GeneXpert ili uložak temelji ispitivanje nukleinske pojačanje kiseline (CBNAAT) u posljednje 3 godine. Ovo je prvo istraživanje iz Indije o korištenju Xpert MTB /RIF testa u djece s intratorakalni TB i prva studija izvijestiti o korisnosti ovog testa na arhiviranim GA i IS uzorci djece u TB endemske zemlji. Studija pokazuje da ni u GA i IS uzorci pohranjeni za do 4 godine, Xpert MTB /RIF test ostala korisna kao dijagnostički alat za dječje tuberkuloze. U GA te je uzorcima koji su bili premazati i kultura pozitivno, osjetljivost Xpert MTB /RIF testu bila je 95,6%, što je slična onoj u svježim kliničkim uzorcima. Kao što se očekivalo osjetljivost Xpert MTB /RIF bio nadmoćan nad prljave mikroskopom (p pregled = 0,0001). Međutim, osjetljivost Xpert MTB /RIF testu na kulturi pozitivne nego negativne razmaza uzoraka bila je manja (62,5%). Nastup Xpert MTB /RIF testu je prethodno ocijenjena uglavnom na iskašljaja uzoraka prikupljenih od pacijenata odrasle TB [27-30], pokazuju visoku osjetljivost u PAPA i kulture pozitivnih uzoraka (98-100%), ali znatno manju osjetljivost u razmazu negativnog uzorci sputuma (43-70%). Naši rezultati su bili slični tim nalazima, ali na arhiviranim uzoraka. Niža osjetljivost Xpert MTB /RIF testa također je prijavljen u HIV pozitivnih odraslih bolesnika [29]. Postoji nekoliko studija koje su proveli u djece i vrlo malo gdje izvedba Xpert MTB /RIF testa ocijenjen je na uzorcima, osim uzoraka iskašljaja [4-10, 30, 31]. Nicol et al. [8] uključeno 452 djece za analizu s najmanje jedna je uzorak iz svakog djeteta. Su također pokazali slabu osjetljivost mikroskopom (6%), kulturu (16%) i Xpert MTB /RIF analizi (13%) u tim uzorcima. U ovom istraživanju, iako stope detekcije ovih triju metoda bile su veće, ali uzorak je bio sličan. Budući da smo ispitani i IS i GA uzorci na dva uzastopna dana, u usporedbi prinos od uzoraka bila je znatno niža od uzoraka želučane aspirata. Iako ne postoji do sada objavljenih podataka u kojoj se i GA, te je uzorci su korišteni u istoj studiji procijeniti osjetljivost i specifičnost Xpert MTB /RIF testa u klinički vjerojatnih slučajeva intratorakalni tuberkuloze, ali naši rezultati bili su u potpunom skladu s nalazi Bates i sur. [10], Rachow et al. [16] i Sekadde et al. [17]. Naša studija pokazuje da razmaza i kultura prinosi u uzorcima GA su bolji od onih uzoraka, međutim, osjetljivost Xpert MTB /RIF test nije bio značajno različit u GA i IS uzoraka, u uzorcima pohranjenim na -80 ° C za iste trajanje (77,1 i 85,7%, respektivno; P pregled = 049). Nadalje, prikupili smo obje ove uzorke u dva uzastopna dana, a ovaj protokol malo daje bolji prinos u svim dijagnostičkim tehnikama tj PAPA, kulture i Xpert MTB /RIF testa. Zbog tog dvostrukog račvast pristup, mogli smo postići visoka dijagnostička {61 od 130; 46,9% djece (po analizi bolesnika)} prinos.
Većina publikacija na Xpert MTB /RIF ili CBNAAT su od subsaharskoj Africi [6, 8-10, 13, 16, 17]. Indija je TB visok teret države i središnje TB podjela Indije, koji je dao odgovornost provedbe revidirane nacionalne kontrole TB programa nedavno je instalirano više od 80 CBNAAT strojeva .. Ali zemlja Podaci i smjernice o korištenju CBNAAT strojeva za dijagnosticiranje djetinjstva tuberkuloze nedostaje. Naša je prva studija u kojoj smo se želučani aspirata i inducirani uzorak sputuma pohranjena za upto 4,3 godina (medijan razdoblje skladištenja 32,5 mjeseci). U PAPA i kulture dokazano uzoraka pokazala je osjetljivost 95,7%, što je u granicama prijavljen od strane nekoliko drugih radnika, ali samo na svježim uzorcima [10, 17]. U svježim uzorcima vrijednost varijable dodatak Xpert MTB /RIF preko MGIT kulture je prijavljen, ali u našem istraživanju ta vrijednost dodatak bila minimalna (7,9%), vjerojatno zbog nekog gubitka mikobakterije održivosti na dugoročne pohrane uzoraka [32]. Dodatni slučajevi otkriveni tijekom testa zlatni standard za kulturu, bili su vrlo vjerojatno neće biti lažno pozitivan. Bakterijski broji iscrpiti na skladištenje uzoraka i nakon nekoliko dana (30), ali kontradiktorni zapažanja također su napravljene od strane drugih radnika [33, 34]. Paramasivan et al. [33] izvijestio da nema učinak na stope osjetljivosti od brisa i kulture nakon pohranjivanja uzoraka sputuma upto 10 dana. Tessema et al. [34] su izvijestili da je skladištenje uzoraka iskašljaja upto 80 dana na sobnoj temperaturi, a smrznute uzorke upto 180 dana nije imala negativan utjecaj na prinos kulture. Banda et al.

• FGF9 od raka povezan fibroblasta je moguće posrednik invazije i anti-apoptoze želučanih stanica raka
• Antioksidacijska aktivnost i ultrastrukturne promjene u želučanom staničnim linijama karcinoma potaknute Northeastern Tajlandski jestivog narodne biljnih ekstrakata