Xpert MTB /RIF анализ может быть использован на архивизированных аспирата желудка и индуцированных образцов мокроты для чувствительной диагностики туберкулеза у детей

Xpert MTB /RIF анализ может быть использован на архивизированных аспирата желудка и индуцированных образцов мокроты для чувствительной диагностики туберкулеза у детей
Аннотация
Справочная информация
Туберкулез (ТБ) у детей пренебрегают, в основном из-за отсутствия чувствительных диагностических инструментов , Недавно Xpert MTB /RIF анализ произвел революцию в области диагностики, но ее полезность в педиатрической ТБ не сообщалось из Индии и отчет не доступен по его использованию по долгосрочным архивным образцам.
Методы
Мы набраны 130 педиатрических пациентов с вероятной внутригрудного туберкулеза и их желудочного аспирата (ГА) и индуцированной мокроте (IS) были собраны образцы на 2 дня подряд в период с января 2009 по декабрь 2012. Все образцы (n = 520) были подвергнуты мазков, BACTEC MGIT-культуры и в
мультиплекс-хаус ПЦР. Аликвоту каждого образца хранили при -80 ° С и испытаны в Xpert MTB /RIF анализа в 2013 г.

Результаты проб мудрая и терпеливая мудрый уровень обнаружения микроскопии мазка составила 4,4% и 10%, в то время как для BACTEC -MGIT культура этот показатель составил 24,4% и 46,9%, соответственно. Из 130 день 1 образцов GA, 31,5% и 27,7% день 2 GA образцы культуры положительными. Только 17,7% GA пробы были положительными в течение двух дней. Из 130 образцов, собранных в 1 день и 2-й день, 15,4% и 23,1% образцов были положительными культуры. Сочетание GA и IS дали лучшие результаты. Объединение как GA и IS, общая чувствительность Xpert MTB /RIF на мазка и культуры положительных образцов составляла 95,6%. В мазком отрицательных и положительных образцов культуры ее чувствительность составила 62,5%. Продолжительность хранения проб повлияли на Xpert MTB /RIF тест производительности (р = 0,0001). В мазка положительных образцов, хранившихся в течение 650-849 дней, его чувствительность составила 85,7% и 77,1% для IS и GA образцов, которые упали до 33,3% и 50%, соответственно, при хранении в течение более чем 1050 дней.
Обсуждение
Подтверждающие диагностика туберкулеза особенно у детей является медицинской проблемой. Ни одна лаборатория или радиологическое испытание не может достигнуть до удовлетворительного уровня диагностической чувствительности. Тем не менее, в данном исследовании мы foundthat сочетание нескольких образцов и нескольких диагностических тестов может дать гораздо лучший выход, хотя notoptimum. В настоящем исследовании, комбинация 2 желудочного содержимого (GA) и 2 индуцированной мокроте (IS) образцов, собранных в течение двух дней подряд, и проходят на трех диагностических методов дали значительно высокий уровень обнаружения. Несмотря на длительный срок хранения, общая чувствительность Xpert MTB /RIF на мазок и -Культура положительных образцов оставалась очень высокой. Но после того, как хранить эти образцы под минусовой условия thesensitivity из Xpert MTB /RIF значительно уменьшились. Ожидается, что это потому, что даже если образец мазка и культуры положительный, количество выживших микобактерии идет вниз, через несколько лет это число может достигать до незаметного уровня.
Вывод
Этот отчет показывает, что мазка и культуры положительные образцы хранить при минусовой условиях в течение нескольких лет может быть использован в Xpert MTB /RIF анализа, сохраняя при этом заметную диагностическую чувствительность теста и специфичность.
Ключевые слова
Педиатрия Туберкулез Индия Желудочный Аспирируйте мокроте архивные Образцы mPCR MGIT культура, Xpert MTB /РИФ фон
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ), по оценкам глобального бремени туберкулеза (ТБ) в 9 миллионов новых случаев заболевания и 1,5 миллиона случаев смерти в 2013 году [1]. Это включало до 15% бремени педиатрических случаев. Около 74000 детей умирают от туберкулеза каждый год, и существует около полумиллиона новых случаев ежегодно [2]. Как и у взрослых, большинство (70-80%) случаев ТБ ребенок присутствующих с туберкулезом легких (РТВ). Туберкулез у детей было относительно мало внимания, в основном из-за проблем в доступности эффективных средств диагностики [3]. Индия занимает 17-е среди 22 стран с высоким бременем с точки зрения общего показателя заболеваемости туберкулезом, но очень мало информации об эпидемиологии туберкулеза у детей, его диагностика и лечение [4, 5].
В большинстве установок диагностики туберкулеза у детей производится на основе прослеживания контактов, и очень мало попыток было сделано для активного выявления случаев заболевания. Это происходит главным образом из-за отсутствия патогномоничных клинических проявлений в детской ТБ и отсутствие чувствительных диагностических инструментов [3, 4, 6, 7].
С ограниченными инструментами для лабораторной диагностики подтверждающим, оценка медицинской истории, туберкулиновой пробы кожи, рентген грудной клетки и отсутствие реакции на антибиотики помочь в проведении клинического диагноза. Микроскопия мазка мокроты и подтверждение микробиологической редко достигается из-за плохой чувствительности этих тестов, отчасти из-за олигобациллярной характера заболевания и неспособности детей младшего возраста, чтобы обеспечить оптимальный образец мокроты [6]. Альтернативные образцы включают желудочного аспирата (GA), индуцированной мокроте (IS), носоглотки аспирата, bronchio лаваж, гортань тампоном, тест строки и образцы стула [3, 7-10]. В зависимости от используемого диагностического теста, эти образцы показали переменной чувствительности и специфичности. Сообщалось, что желудочные образцы промывание обеспечивают самую высокую (40-92%) уровень обнаружения, в зависимости от чувствительности лабораторных испытаний, принятой. Другие образцы показали худшие показатели обнаружения в пределах от 4-43% для бронхоальвеолярного лаважа, 24-30% для носоглотки аспирации, 27-63 для гортани тампоном и 20-30% с помощью индуцированной мокроте. Некоторые работники также использовали тест строки, но результаты не обнадеживают [3, 7, 11-13].
Недавнее введение в Xpert MTB /RIF анализа (цефеиды, США) значительно трансформируются диагностику туберкулеза у взрослых , но его применение для диагностики туберкулеза у детей находится в стадии оценки. Этот анализ является быстрым и дает результаты в течение 2 ч [14]. В заявлении о политике Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в 2011 году рекомендовал использовать Xpert MTB /RIF анализа в качестве предварительного диагностического инструмента среди детей, у взрослых с подозрением на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), связанных с туберкулезом и во всех подозреваемых МЛУ ТБ случаев [ ,,,0],15]. Впоследствии, несколько рабочих начали использовать Xpert MTB /RIF анализа для диагностики туберкулеза у детей [10, 16-18]. Тем не менее, широкое распространение использование Xpert MTB /RIF для диагностики туберкулеза у детей на регулярной основе по-прежнему остается отдаленной вариант. На сегодняшний день существует лишь несколько исследований по применению Xpert MTB /RIF для диагностики туберкулеза у детей. Два исследования сообщают об использовании в Xpert MTB /RIF на индуцированной мокроте два на ее использование в образцах желудочного лаважа. Там нет никаких исследований, которые сообщают об использовании Xpert MTB /RIF в обоих ГА и IS образцов одновременно на того же пациента. Кроме того, нет никакого исследования из Индии по оценке Xpert MTB /RIF для диагностики туберкулеза легких у детей. Кроме того, утилита Xpert MTB /RIF на архивным GA и IS образцов ранее не были рассмотрены. Так как Xpert MTB /RIF стал доступен только после 2011 года, не существует никакой другой экспресс-тест, который может обнаружить туберкулез и РИФ сопротивление одновременно в образцах, которые были собраны до 2011 г. Это исследование также рассматривает влияние длительного хранения клинических образцов на для выявление туберкулеза с помощью Xpert MTB /RIF анализа.
ранее мы сообщали, что GA образцы обеспечивают лучшие урожаи, чем образцы [19]. В последующем докладе мы также показали, что нейтрализация рН желудочного аспирата перед ее приводит к более высокому уровню загрязнения без повышения скорости обнаружения [20]. В настоящем исследовании мы сообщаем о выполнении Xpert MTB /RIF на архивизированных GA и IS образцов, собранных в течение двух дней подряд у детей с вероятной внутригрудного туберкулеза, набраны в составе двойной ослепил рандомизированное контролируемое исследование по изучению роли пищевых добавок с микроэлементами у детей с
внутри грудной клетки туберкулеза.
методов проектирования изучение и предмета найма
Исследование проводилось в период с января 2009 по декабрь 2012 года в Всеиндийский институт медицинских наук (AIIMS) и Kalawati Саран детской больницы ( KSCH), как в Нью-Дели, Индия. Эта работа была частью двойном слепом рандомизированном контролируемом исследовании с целью изучения роли питательных микроэлементов у детей с внутри грудной клетки туберкулеза [19-22]. В общей сложности 403 детей (58,2% девочек), в возрасте от 6 месяцев до 14 лет [средний возраст 120 месяцев; были включены межквартильный диапазон (МКР), 7-168 месяцев], с внутригрупповыми торакальной ТБ. Стандартные клинико-радиологические критерии подозревая внутри грудной клетки туберкулез был использован в этом исследовании, опубликованной ранее [19-22]. Диагноз внутригрудного туберкулеза основывался на рекомендациях Индийской академии педиатрии. Любой ребенок с кашлем и лихорадкой более 2-х недель без улучшения в течение семи до десяти дней амоксициллин курса и недавние необъяснимая потеря веса или в анамнезе контакта с больным ТБ в течение последних двух лет. Все подозреваемые туберкулез прошли рентген грудной клетки (боковой и задний-передний). При наличии стойких рентгеновских аномалий, с неурегулированности клинических симптомов и отсутствие альтернативной причины для симптомов и грудной клетки выводы рентгеновских, вероятный диагноз внутригрудного туберкулеза был сделан. При размещении всех детей с возможными туберкулезом были подвергнуты туберкулиновой пробы кожи (ТСТ), амбулаторные желудочного содержимого (GA) и индуцированной мокроте (IS) для обследования AFB мазка и культуры. Дети были начаты АТТ в соответствии с рекомендациями ПНППРТ [5]. Вкратце: Все дети с внутригрупповыми торакальной туберкулеза были подвергнуты желудочной аспирации (ГА) и индуцированной мокроте (IS) коллекции в течение двух последовательных дней (D1 &Amp; D2). Детей просили сообщить 6 ч натощак утром в назначенный клинику. После объяснения процедуры и получения согласия от родителей и словесное согласие от детей, соответствующего размера питательная трубка (10-12G) вставляли через одну ноздрю, пока она не достигла желудка. Положение трубки проверяли вдувания воздуха в желудок. Содержимое желудка отсасывали полностью, держали в стерильном контейнере. Обычный объем было собрано около 10 мл. Образцы были доставлены в лабораторию для дальнейшей обработки в течение 1-2 ч.
В то же сидящей желудочной аспирации последовала мокроте с зазором около получаса. Для исследования мокроты индукции, ребенок был загрунтовать 2 затяжек сальбутамола ингаляции дозированного ингалятора (MDI Asthalin, 100 мкг /слоеного, Cipla, Индия)) и распорку (Zeroastat VT распорка, Cipla, Индия), а затем через небулайзер с 3 мл 3 % физиологического раствора в течение 15-20 мин. Все образцы были присвоены уникальные номера кода; и отправлены в лабораторию без ссылки на клинических и пациента деталей. Образцы были обработаны в тот же день на AFB мазка, BACTEC MGIT-культуры и в доме
ПЦР [23]. Клинические и другие детали пациента были зарегистрированы в Excel лист обработкой педиатра и лаборатория не было известно о клинической диагностике субъектов.
Этические соображения
Исследование было одобрено институциональными комитетом по этике, Всеиндийского института медицинских наук , Нью-Дели и Kalawati Саран детской больницы, Нью-Дели, Индия, и судебный процесс был зарегистрирован в clinicaltrials.gov (НЗТ 00801606). Письменное информированное согласие было получено от родителей /опекунов каждого ребенка.
Лабораторные методы
Обработка проб
IS и GA (рН не нейтрализованной) были обработаны образцы, как описано ранее [19, 21, 23, 24] , Вкратце, образцы центрифугировали при 10000 х г в течение 10 мин при 4 ° C; Супернатант сливают и осадок вновь суспендировали в равном объеме 0,5% NALC-4% NaOH смеси в 50 мл ребристых труб крышками круглых обработки дна. Суспензию тщательно (4 х 10 с каждый интервал) встряхивали для обеспечения надлежащего перемешивания и инкубировали при 37 ° С в течение 10 мин. После инкубации в щелочной рН нейтрализуют фосфатным буфером [PBS (рН 6,8, общим объемом 50 мл)], а затем окончательного центрифугирования при 10000 х г в течение 10 мин, при температуре 4 ° С. Жидкость над осадком сливают; Таблетку ресуспендировали в 2 мл PBS и 0,5 мл аликвоты объемом в 4 стерильные пробирки. Одну аликвоту используют для приготовления мазка, один для культуры, а другой для тестирования в в доме
мультиплекс ПЦР (м-ПЦР). Одну аликвоту хранили при -80 ° С для дальнейшего использования. С одной аликвоты, 500 мкл суспензии высевали в BACTEC MGIT-960 системы жидкой культуральной (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, США), используя стандартный протокол [25]. Вне зависимости от положительного или отрицательного результата мелькали все культуры были исследованы Цилю-Нильсену окрашивания. Дифференциация штаммами микобактерий туберкулеза
(MTB) или нетуберкулезных микобактерий (НТМ) был проведен один из видов специфической в ​​доме
м-ПЦР [23]. Образцы аликвот IS и GA, хранят при -80 ° С, были ретроспективно рассмотрены в Xpert MTB /RIF анализа.
Xpert MTB /RIF испытаний
В 2013 году сохраненные образцы были подвергнуты Xpert MTB /RIF тестирования , Были 520 обеззараживать Г.А. и соединится образцы (130x2 GA &Amp; 130x2 IS), которые были пригодны для тестирования, в то время как другие были либо не достаточным по количеству и качеству (загрязненных). Буфер образец реагент, содержащий NaOH и добавляли изопропанол в соотношении 3: 1 (всего 2 мл), и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре. Обработанный образец (2 мл) затем переносили в Xpert MTB /RIF картридж, содержащий промывочный буфер, лиофилизированные реагенты для экстракции ДНК и ПЦР-амплификации. После правильного смешивания, картридж был загружен в Xpert MTB /RIF инструмента, в соответствии с инструкциями изготовителя (цефеиды, США). Прибор выполняет образец смешения, Озвучивание микобактериальной бацилл и внутреннего контроля (споры), высвобождение ДНК и смешивание с реагентов для ПЦР, автоматически. Это сопровождается Hemi-вложенными в режиме реального времени ПЦР-амплификации, обнаружение цели по пятицветная флуоресцентных зондов молекулярный маяк и внутреннего контроля на месте
. Результаты генерируются через 2 часа и сообщили в туберкулезной продаже - отрицательный или положительный с полу-количественно нагрузки бациллярной, как высокий, средний, средний и низкий, и если патоген РИФ чувствительной или резистентной [14]. Детали пациента были связаны с испытанных образцов только после завершения Xpert MTB /RIF оценки.
Статистический анализ
Чувствительность Xpert MTB /RIF определялась с учетом MGIT культуры подтвердили образцы как истинные положительные. Для определения специфичности Xpert MTB /RIF, мазка, MGIT культуры и в доме
м-ПЦР отрицательные образцы рассматривались как истинные отрицательные образцы. Положительные Прогнозные значения (PPV), отрицательное прогностическое значение (NPV) и отношение правдоподобия для положительного результата (LRP) Xpert MTB /RIF были рассчитаны с 95% ДИ (доверительный интервал). LRP из более чем одного указывает на то, что результат теста, скорее всего, правда, положительное и меньше единицы означает, что результат теста, скорее всего, правда, отрицательный [26]. Пирсона хи-квадрат был проведен для сравнения пациента мудрой анализа. Чтобы исключить часть соглашения случайно, использовали каппа
тест Коэна. Р-значении &ЛТ;. 0.05.was считали статистически значимыми [STATA 11.0 (Колледж Стейшн, штат Техас, США) программное обеспечение было использовано для всех статистического анализа]
Результаты
В этом исследовании, проведенном в период с января по декабрь 2009 года 2012. в общей сложности 403 детей (58,2% девочек), в возрасте от 6 месяцев до 14 лет [средний возраст 120 месяцев; были включены межквартильный диапазон (МКР), 7-168 месяцев], с внутригрупповыми торакальной ТБ. Только те дети были включены, от которых как GA и IS образцов, собранных в течение двух дней подряд были доступны. Поэтому, спаренные образцов и GA, полученные на двух дней подряд из 130 детей были проанализированы с помощью Xpert MTB /RIF анализа. Очищенные образцы хранили при -80 ° С в течение 21,4 до 51,9 месяцев (период медианный хранения 32,5 месяцев; IQR 27-35.1), прежде чем они были подвергнуты Xpert MTB /RIF анализа. Рабочий процесс лаборатории и обобщение результатов показаны на рис. 1. Рис. 1 блок-схему включения образцов с потоком обработки образцов, используемых методов и результатов как на руководящих принципов СТРОБ
Диагностический результат ИБ и GA образцов, собранных в течение двух дней подряд
Только 23 из 520 (4,4%) образцов с 13 (10%) детей были КУМ мазка положительный (рис. 1). Из этих 23 образцов, 9 были D1 и 8 были образцы D2 GA. Второй день (D2) GA образцы обнаружены 3 дополнительные AFB мазка положительные случаи в то время как он пропустил 4 случая, которые были положительными на D1, следовательно, не было никакого чистого инкрементно из образца D2 GA. Только 3 IS образцы были положительными на любом D1 или D2. Образец D2-добавляется один случай, но и пропустил один случай. Шестьдесят один из 130 (46,9%) детей [127 520 (24,4%) образцов] была диагностирована культура подтвердили туберкулез либо мазка или культуры (таблица 1). Из 130 D1-GA 41 образцов (31,5%), а 36 (27,7%) образцов D2-ГА ​​были положительными культуры. Двадцать три (17,7%) детей имели положительный культуру GA на оба дня (таблица 2). Выход из индуцированных образцов мокроты была бедна. Из 130 образцов, собранных на D1, только 20 образцов (15,4%) были положительными в то время как на D2, 30 (23,1%) образцов были положительными культуры (таблица 3). Шестнадцать (12,3%) детей имели культуру позитив в течение двух дней. Выход MGIT культур из ГА и IS образцов, собранных в течение двух последовательных дней показано в таблицах 2 (&Amp; 3, соответственно). Там не было никакого дополнительного значения второй день GA образца для микроскопии мазка (9 против 8), культуры (41 против 36), или Xpert MTB /RIF анализ (33 против
34). Тем не менее, IS образцы, собранные в течение двух дней подряд обеспечило значительное дополнительное значение в культуре (20 против
30), но незначительное дополнительное приращение Xpert MTB /RIF анализа (22 против
25). Сочетание одного GA и один образец дал лучший служебную программу диагностики, независимо от того, D1 или D2. Почти 50% образцов (либо GA или IS) были Xpert MTB /RIF положительно на оба дня (рис. 2) .table 1 Производительность Xpert MTB /RIF анализа в бактериологически положительных и бактериологически отрицательных образцов [сочетание желудочного содержимого (п
= 260) и индуцированных мокрота (п
= 260)] собраны у детей с возможными внутригрудного туберкулеза
бактериологических критериев (N = 520)

подкритериям

Нет , (%)

Xpert MTB /RIF Результаты

Положительный (%)

Отрицательный (%)

бактериологически положительная (п
= 127; 24,4%)
мазка (+), культуры (+)
23 (4.4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3)
мазка (-), культуры ( +)
104 (20) *
65 (62,5) 39
(37.5)
мазка (+), культура (-)
0 0

0 <бр> Итого 127

87 (68,5)
40 (31.5)
бактериологически отрицательный (п
= 393; 75,5%)
мазка (-), культура (-) <бр> 393
31 (7.9)
362 (92,1)
Total
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
таблица показывает высокую эффективность Xpert MTB /RIF в культуре и намазать положительные образцы, но умеренный уровень обнаружения в мазке отрицательной культуры положительных образцов
*, ** P &
л; 0,001, (+) - положительный, (-) - Отрицательные, число в скобках указывают процент
Таблица 2 Производительность MGIT 960 культуры на образцах желудочного аспирата, собранных в течение двух дней подряд из 130 детей с вероятной внутригрудного туберкулеза
MGIT960 культуры Результаты

день 1

Позитивный

Негативный

Total

2-й день
позитиве
23 (17,7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
отрицательный
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
Total <бр> 41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Таблица 3 Выполнение MGIT 960 культуры на индуцированных образцах мокроты, собранных в течение двух дней подряд из 130 детей с вероятной внутригрудного туберкулеза
MGIT 960 культуры Результаты

день 1

Позитивный

Негативный

Total

2-й день
позитиве
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
отрицательный
4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
Total <бр> 20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
рис. 2 Индивидуальные и анализ перекрытия Xpert MTB /RIF положительности в желудочном аспирата и индуцированной мокроте образцов, собранных на 2 последовательных дней
Сравнение IS и GA
В целом, в образцах (IS + GA), которые были положительными либо в мазке и /или культуры (127/520), чувствительность Xpert MTB /RIF анализа был несколько ниже (68,5%, 87/127) по сравнению с бактериологическое исследование (таблица 1), но он также обнаружено 7,9% (31/393) дополнительные случаи по культуре дает общую чувствительность 22,7% [118/520] (р
= NS), но значительно выше (р = 0,001
) чувствительность, чем микроскопии мазка (таблица 4). Производительность Xpert MTB /RIF был 95,6% (22/23) на мазок и культуры положительных архивным образцов, как показано в таблице (1) и технологическая схема (рис. 1). Все 14 образцов, которые давали НТМ видов были мазка отрицательным, но культура и м-ПЦР положительный. Поэтому на переоценке, чувствительность Xpert MTB /RIF на мазок отрицательный, но культуры положительной (только MTB) образцов составила 72,2% (65/90). Но если все культуры положительные образцы, взятые вместе, не принимая во внимание виды микобактерий, чувствительность упала до 62,5% (65/104) в связи с 14 НТМ изолирует. Чувствительность Xpert MTB /RIF не сильно отличаются между ГА и IS, если все образцы бактериологически (мазка и /или культуры) положительный GA (92,2%, 71/77) и (94% 47/50) сравнивали образцы , Ни один НТМ положительный образец не был ложно идентифицирован Xpert MTB /RIF, но он пропустил одну мазка, культуру и м-ПЦР положительный образец, изолят был идентифицирован как MTB по м-ПЦР и. Все Xpert MTB /RIF положительные образцы были также м-ПЦР положительный. Поэтому наш внутренний м-ПЦР и Xpert MTB /RIF показал 100% согласование в НТМ /MTB дифференцировки (рис. 1) .table 4 Чувствительность, специфичность и прогнозных значений Xpert MTB /RIF анализа применительно к AFB мазка и Bactec- MGIT960 культура в индуцированной мокроте (п
= 260) по сравнению с желудка аспирата (п
= 260) образцы

Чувствительность

Специфичность

PPV

NPV

ФПС положительного теста

Диагностическая точность

Чувствительность (мазок положительный)

Чувствительность (мазок отрицательный)

Xpert MTB /RIF анализ против культуры
мокроте
35/50 (70,0%; 56.2-80.9) *
198/210 (94,3%; 90.3-96.7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88.7-95.7)
12,2% (10.2-14.8)
89,6% (85.3-92.8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
Желудочный Аспирируйте
52/77 (67,5%; 56.5-76.9) *
164/183 (89,6%; 84.3-93.2) **
73,2% (61.9-82.1)
87,8% (81.2-90.9)
6,5% (5.8-7.3)
83,1% (78.0-87.1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB против Культуры
мокроте
6/50 (12,0%; 5.6-23.8) ***
210/210 (100%; 98.2-100)
100% (60.8-100)
82,7% (77.5-86.8) -

83,1% (78.1-87.1)
NA NA

Желудочный Аспирируйте
17/77 (22,1%; 14.3-32.5)
183/183 (100%; 97.9-100)
100 % (81.6-100)
75,3% (71.4-81.6)
-
76,9% (71.4-81.6)
NA NA

данных N /N (%; 95% CI) или% (95% ДИ), прогностическая ценность положительного результата (PPV), отрицательное прогностическое значение (NPV), отношение правдоподобия (ФПС), * р
= 0,77, ** р
= 0,087, *** р = 0,792

Сравнение Xpert MTB /RIF, культуры и AFB микроскопии мазка
обнаружена Xpert MTB /RIF анализа дополнительно 31 из 393 (7,9%) образцах, которые оба были AFB мазка и MGIT культуры отрицательный, но пропустил 39 из 104 (37,5%) культуры положительных образцов (таблица 4). У детей с вероятной внутригрудного туберкулеза, желудка аспирата определены больше случаев, чем мокроте с помощью микроскопии мазка, культуры и Xpert MTB /RIF анализа (6,5, 29,6 и 27,3% против 2,3
, 19,2 и 18,0%, соответственно). Выход Xpert MTB /RIF анализа уменьшается с увеличением продолжительности хранения ГА, а также IS образцы. В образцах, хранившихся в течение 650-849 дней, частота выявления Xpert MTB /RIF анализа на образцах составляет 85,7%, что упала до 33,3% в образцах, хранившихся в течение более чем 1050 дней. Аналогичным образом, эти показатели были 77,1 и 50%, соответственно, в образцах Ga (рис. 3). После длительного хранения разницы в доходности IS и GA была очень существенной (P
= 0,002). Инжир. 3 Снижение уровня позитивности в Xpert MTB /RIF анализа по отношению к продолжительности хранения желудочного аспирата и индуцированные образцов мокроты
Обсуждение
Там было поток публикаций по Xpert MTB /RIF также известный как GeneXpert или картриджа на основе тестирование амплификации нуклеиновых кислот (CBNAAT) в течение последних 3-х лет. Это первое исследование, проведенное в Индии по использованию Xpert MTB /RIF анализа у детей с внутригрудного туберкулеза, а также первое исследование, чтобы сообщить о полезности этого анализа на архивизированных GA и IS образцы из детей в эндемичных ТБ страны. Исследование показывает, что даже в ГА и IS образцы храниться до 4-х лет, Xpert MTB /RIF анализа оставался полезным в качестве диагностического инструмента для туберкулеза у детей. В ГА и IS образцах, которые были мазка и культура положительная, чувствительность Xpert MTB /RIF анализа был 95,6%, что аналогично тому, что сообщалось в свежих клинических образцах. Как и следовало ожидать чувствительность Xpert MTB /RIF был выше, чем у микроскопии мазка (р = 0,0001
). Тем не менее, чувствительность Xpert MTB /RIF анализа на культуре положительные, но отрицательные образцы мазка был ниже (62,5%). Производительность Xpert MTB /RIF анализа ранее оценивали в основном на образцах мокроты, собранных от взрослых больных туберкулезом [27-30], показывая высокую чувствительность при мазка и культуры положительных проб (98-100%), но значительно более низкую чувствительность в мазке отрицательной образцы мокроты (43-70%). Наши результаты также были подобны этим выводам, но на архивных образцов. Более низкая чувствительность Xpert MTB /RIF анализа также сообщалось у ВИЧ-инфицированных взрослых пациентов [29]. Есть несколько исследований, которые проводились у детей и очень мало, где производительность Xpert MTB /RIF анализа оценивали на отличных образцах мокроты [4-10, 30, 31] образцов. Nicol и др. [8] включены 452 детей для анализа, по меньшей мере, один образец от каждого ребенка. Они также показали плохую чувствительность микроскопии (6%), культуры (16%) и Xpert MTB /RIF анализа (13%) в этих образцах. В настоящем исследовании, хотя уровень обнаружения этих трех методов были выше, но картина была аналогичной. Так как мы исследовали как IS и GA образцы в течение двух дней подряд, по сравнению выход из образцов был значительно ниже, чем образцов желудочного аспирата. Хотя нет никаких данных, опубликованных до сих пор, в которых оба GA и IS образцы не были использованы в том же исследовании для оценки чувствительности и специфичности Xpert MTB /RIF анализа в клинически вероятных случаев внутригрудного туберкулеза, но наши результаты были в полной согласованности с результаты Бейтс и др. [10], Rachow и др. [16] и Sekadde и др. [17]. Наше исследование показывает, что мазок и культура урожайности в образцах GA превосходят аналогичные образцы, однако, чувствительность Xpert MTB /RIF анализа значимо не отличалась в ГА и IS образцы, в образцах, хранившихся при температуре -80 ° С в течение того же продолжительность (77,1 и 85,7% соответственно; P
= 049). Кроме того, мы собрали оба эти образцы в течение двух дней подряд, и этот протокол несколько при условии, лучший выход во всех диагностических методов, т.е. мазка, культуры и Xpert MTB /RIF анализа. Из-за этого двойного двойственный подход, мы могли бы достичь высокой диагностической {61 130; 46,9% детей (на анализ пациента)} урожайности.
Большинство публикаций по Xpert MTB /RIF или CBNAAT были из Африки к югу от Сахары [6, 8-10, 13, 16, 17]. Индия является страной с высоким бременем ТБ и разделение центральной ТБ Индии, который был пожалован ответственность за осуществление пересмотренной национальной программы по борьбе с туберкулезом недавно установила более 80 машин CBNAAT .. Но страна конкретные данные и рекомендации по использованию машин CBNAAT для диагностики туберкулеза у детей отсутствуют. Наша также первое исследование, в котором мы использовали желудочного аспирата и индуцированный образца мокроты, хранящуюся на Шифрование до 4,3 лет (средний срок хранения 32,5 месяцев). В мазка и культуры доказано образцов он показал чувствительность 95,7%, что в пределах диапазона, указанного несколькими другими работниками, но только на свежих образцах [10, 17]. В свежих образцах значение переменной добавление Xpert MTB /RIF над MGIT культуры сообщается, но в нашем исследовании это значение добавление было минимальным (7,9%), вероятно, связано с некоторой потерей микобактерий жизнеспособности на длительном хранении образцов [32]. Дополнительные случаи, обнаруженные в течение испытания на золотой стандарт культуры, были очень вряд ли будет ложный положительный результат. Микобактериальные рассчитывает истощают при хранении образцов даже после нескольких дней (30), но противоречивые наблюдения также были сделаны другими исследователями [33, 34]. Paramasivan и др. [33] сообщили, что не было никакого влияния на уровень чувствительности мазка и культуры после хранения образцов мокроты на не более 10 дней. Тессема и др. [34] сообщили, что хранение образцов мокроты Шифрование до 80 дней при комнатной температуре и в замороженных образцах ДО 180 дней не было никакого негативного влияния на урожайность культуры. Банда и др.

• FGF9 от рака ассоциированных фибробластов является возможным медиатором вторжения и антиапоптоз желудочного …
• Антиоксидантной активностью и ультраструктурные изменения в желудочном раковых клеточных линиях, вызванных…