Xpert MTB /RIF ensaio pode ser usado em aspirado gástrico arquivado e induziu amostras de escarro para o diagnóstico da tuberculose sensível pediátrica

Xpert MTB /RIF ensaio pode ser usado em aspirado gástrico arquivado e induziu amostras de escarro para o diagnóstico da tuberculose sensível pediátrica da arte abstracta
Fundo
A tuberculose (TB) em crianças é negligenciado, principalmente devido à falta de ferramentas de diagnóstico sensíveis . Recentemente Xpert MTB ensaio /RIF revolucionou o campo de diagnóstico, mas a sua utilidade na TB infantil não tem sido relatada da Índia e nenhum relatório está disponível no seu uso em amostras arquivadas a longo prazo.
Métodos
Nós recrutados 130 pacientes pediátricos com provável tuberculose intratorácica e sua aspirado gástrico (GA) e expectoração induzida (IS) amostras em 2 dias consecutivos foram coletados entre janeiro de 2009 e dezembro de 2012. Todas as amostras (n = 520) foram submetidos a exame esfregaço, cultura BACTEC MGIT-e -house
PCR multiplex. Uma alíquota de cada amostra foi armazenada a -80 ° C e testado em Xpert MTB /RIF ensaio em 2013.

Resultados da Amostra taxa de detecção sábio sábio e paciente da baciloscopia foi de 4,4% e 10%, enquanto que para BACTEC cultura -MGIT essa taxa foi de 24,4% e 46,9%, respectivamente. Das amostras de 1 GA 130 dia, dia 2 amostras GA 31,5% e 27,7% eram cultura positiva. Somente 17,7% amostras de GA foram positivos em ambos os dias. Do 130 é amostras coletadas no dia 1 e dia 2, 15,4% e 23,1% amostras foram cultura positiva. Uma combinação de GA e é cedido melhores resultados. Combinando GA e IS, a sensibilidade global de Xpert MTB /RIF em amostras com baciloscopia positiva e cultura foi de 95,6%. Em amostras negativas e cultura com baciloscopia positiva a sua sensibilidade foi de 62,5%. A duração do armazenamento da amostra impactou o /performance Xpert MTB RIF teste (p = 0,0001). Em amostras com baciloscopia positiva armazenados por 650-849 dias, a sua sensibilidade foi de 85,7% e 77,1% para as amostras for e GA, que caiu para 33,3% e 50%, respectivamente, se for armazenado por mais de 1050 dias.
Discussão confirmação do diagnóstico de tuberculose particularmente em crianças é um desafio médico. No laboratório ou exame radiológico pode chegar a um nível satisfatório de sensibilidade diagnóstica. No entanto, neste estudo, foundthat combinação de várias amostras e vários testes de diagnóstico pode dar muito melhor rendimento, embora notoptimum. No presente estudo, a combinação de 2 aspirado gástrico (AG) e 2 expectoração induzida (IS) amostras recolhidas em dois dias consecutivos, e testados em três métodos de diagnóstico originou uma taxa de detecção significativamente elevada. Apesar de armazenamento a longo prazo, a sensibilidade global de Xpert MTB /RIF no esfregaço e as amostras positivas -cultura permaneceu muito elevado. Mas depois de armazenar essas amostras sob subfreezing condições thesensitivity de Xpert MTB /RIF diminuiu significativamente. Isto é esperado porque mesmo se a amostra é esfregaço e cultura positiva, a contagem de sobreviver micobactérias vai para baixo, depois de vários anos esta contagem pode chegar a um nível indetectável.
Conclusão
Este relatório mostra que as amostras com baciloscopia positiva e cultura armazenado a subfreezing condições de vários anos, pode ser utilizado no ensaio de Xpert MTB /RIF, mantendo ao mesmo tempo a sensibilidade do teste de diagnóstico sensível e especificidade. Palavras-chave

Pediatria Tuberculose Índia gástrico Aspirar o escarro induzido arquivados amostras mPCR MGIT Culture, Xpert MTB /Background RIF
Organização Mundial da Saúde (OMS) estimou o peso global da tuberculose (TB) em 9 milhões de novos casos e 1,5 milhões de mortes em 2013 [1]. Isso incluiu até fardo 15% dos casos pediátricos. Cerca de 74.000 crianças morrem de tuberculose todos os anos e há cerca de meio milhão de novos casos por ano [2]. Assim como em adultos, a maioria (70-80%) dos casos de TB infantil apresentam com tuberculose pulmonar (PTB). A tuberculose em crianças tem sido negligenciada relativamente, principalmente devido aos desafios na disponibilidade de ferramentas eficazes de diagnóstico [3]. A Índia é 17ª entre os 22 países com alta carga em termos de taxa global de incidência de TB, mas muito pouca informação disponível sobre a epidemiologia da tuberculose em crianças, seu diagnóstico e gestão [4, 5].
Na maioria das configurações diagnóstico da TB infantil é feita com base na localização dos contactos, e muito poucas têm sido feitas tentativas para detecção activa. Isto é principalmente devido à falta de uma apresentação clínica patognomônica de TB infantil e falta de ferramentas sensíveis de diagnóstico [3, 4, 6, 7].
Com ferramentas limitadas para diagnóstico laboratorial confirmatório, avaliação da história clínica, teste tuberculínico, radiografia de tórax e uma falta de resposta aos antibióticos ajudar a fazer o diagnóstico clínico. baciloscopia e confirmação microbiológica é raramente alcançado devido à baixa sensibilidade destes testes, em parte devido à natureza paucibacilar da doença e incapacidade das crianças pequenas para fornecer uma amostra de escarro ideal [6]. amostras alternadas incluem aspirado gástrico (GA), expectoração induzida (IS), aspirado nasofaríngeo, lavagem brônquio-alveolar, swab de laringe, teste de corda e amostras de fezes [3, 7-10]. Dependendo do teste de diagnóstico utilizado, nestas amostras demonstraram sensibilidade e especificidade variável. Tem sido relatado que as amostras de lavagens gástricas proporcionar o mais elevado (40-92%) taxa de detecção, dependendo da sensibilidade do ensaio de laboratório aprovado. Outras amostras mostraram taxas de detecção mais pobres que variam de 4-43% para lavado bronco-alveolar, 24-30% de aspiração nasofaríngea, 27-63 de swab da laringe e 20-30% usando escarro induzido. Alguns trabalhadores também têm utilizado o teste de cadeia, mas os resultados não têm sido encorajadores [3, 7, 11-13].
A recente introdução do ensaio Xpert MTB /RIF (Cepheid, EUA) tem transformado significativamente o diagnóstico de tuberculose em adultos , mas a sua aplicação para o diagnóstico da TB infantil está sob avaliação. Este ensaio é rápido e fornece resultados dentro de 2 h [14]. Em uma declaração política Organização Mundial da Saúde (OMS) em 2011, recomenda-se o uso de ensaio /RIF Xpert MTB como uma ferramenta de diagnóstico preliminar entre as crianças, em adultos com suspeita de vírus da imunodeficiência humana (HIV) tuberculose associados e em todos os casos de MDR TB suspeitos [ ,,,0],15]. Posteriormente, vários trabalhadores começaram a usar Xpert MTB ensaio /RIF para o diagnóstico da tuberculose pediátrica [10, 16-18]. No entanto, o uso generalizado de Xpert MTB /RIF para o diagnóstico da TB infantil numa base de rotina continua a ser uma opção distante. Até o momento, existem poucos estudos sobre a aplicação da Xpert MTB /RIF para o diagnóstico da TB infantil. Dois estudos relatam sobre a utilização da Xpert MTB /RIF na expectoração induzida de dois sobre a sua utilização em amostras de lavagem gástrica. Não há estudos que relatam uso de Xpert MTB /RIF, tanto GA e é amostras simultaneamente no mesmo paciente. Além disso, não há nenhum estudo da Índia na avaliação de Xpert MTB /RIF para o diagnóstico de TB pulmonar pediátrico. Além disso, nunca tiver sido examinada a utilidade de Xpert MTB /RIF em amostras GA e é arquivado. Desde o Xpert MTB /RIF tornou-se disponível somente depois de 2011, não há nenhum outro teste rápido que pode detectar TB e resistência RIF simultaneamente em amostras que foram coletadas antes de 2011. Este estudo também examina o efeito do armazenamento a longo prazo de amostras clínicas em para o detecção de TB pelo ensaio Xpert MTB /RIF.
Temos relatado anteriormente que as amostras GA proporcionar melhores rendimentos do que IS amostras [19]. Em um relatório subsequente também mostraram que a neutralização do pH do fluido aspirado gástrico antes que o processamento conduz a uma maior taxa de contaminação sem melhorar a taxa de detecção [20]. No presente estudo, um relatório sobre o desempenho da Xpert MTB /RIF em GA arquivados e são amostras coletadas em dois dias consecutivos de crianças com provável TB intratorácica, recrutados como parte de um duplo cego randomizado para estudar o papel da suplementação de micronutrientes controlada em crianças com tuberculose intra-torácica.
Métodos
recrutamento desenho do estudo e sujeitos
o estudo foi realizado entre janeiro de 2009 a dezembro de 2012, o All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) e Hospital de Kalawati Saran crianças ( KSCH), ambos em Nova Deli, Índia. Este trabalho faz parte de um estudo randomizado cego duplo controlado para estudar o papel da suplementação de micronutrientes em crianças com tuberculose intra-torácica [19-22]. Um total de 403 crianças (58,2% meninas), com idade entre 6 meses a 14 anos [idade média, 120 meses; intervalo interquartil (IQR), 7-168 meses], com provável TB intra-torácica foram incluídos. Os critérios padrão clínico-radiológico para suspeitar de tuberculose intra-torácica foi usado neste estudo como publicado anteriormente [19-22]. O diagnóstico da tuberculose intratorácica foi baseada nas recomendações de Indian Academy of Pediatrics. Qualquer criança com tosse e febre de mais de 2 semanas sem melhora durante sete a dez dias de curso amoxicilina e recente perda de peso inexplicada ou história de contato com doentes de TB nos últimos dois anos. Todos os suspeitos de tuberculose foi submetido a uma radiografia de tórax (lateral e póstero-anterior). Na presença de anormalidades de raios-x persistente, com não-resolução dos sintomas clínicos e nenhuma causa alternativa para os sintomas e os achados da radiografia de tórax, um provável diagnóstico de tuberculose intratorácica foi feita. Todas as crianças com tuberculose provável, foram submetidos ao teste da tuberculina (TST), aspirados ambulatoriais gástricas (GA) e expectoração induzida (IS) exame de esfregaço e cultura AFB. As crianças foram iniciados em ATT conforme recomendações do RNTCP [5]. Em resumo: Todas as crianças com provável tuberculose intra-torácica foram submetidos a aspiração gástrica (GA) e expectoração induzida (IS) de recolha para dois dias consecutivos (D1 & D2). As crianças foram solicitados a relatar 6 h de jejum de manhã para a clínica designada. Depois de explicar o procedimento e obter o consentimento dos pais e concordância verbal das crianças, um tubo de alimentação de tamanho adequado (10-12G) foi inserido através de uma narina até alcançar o estômago. A posição do tubo foi verificado por insuflação de ar para dentro do estômago. O conteúdo do estômago foram completamente aspirados, mantido no recipiente estéril. o volume de costume recolhido foi de cerca de 10 ml. As amostras foram transportadas para o laboratório para posterior processamento dentro de 1-2 h.
Na mesma aspiração gástrica sessão, seguido de expectoração induzida com um intervalo de cerca de meia hora. Para a indução de escarro, a criança foi preparado com 2 puffs inalação de salbutamol através de inalador de dose medida (MDI Asthalin, 100 ug /sopro, Cipla, Índia)) e espaçador (Zeroastat VT espaçador, Cipla, Índia), seguido de nebulização com 3 ml de 3 % de solução salina sobre a próxima 15-20 min. Todas as amostras foram dadas códigos numéricos; e enviadas para o laboratório, sem uma ligação para detalhes clínicos e paciente. As amostras foram processadas no mesmo dia para o esfregaço AFB, cultura BACTEC-MGIT e in-house
PCR [23]. detalhes clínicos e outros pacientes foram registrados na folha de excel tratando pediatra eo laboratório não estava ciente do diagnóstico clínico dos sujeitos.
Considerações éticas of the estudo foi aprovado pelo comitê de ética institucional de todos Institute Índia de Ciências Médicas , Nova Deli e Kalawati Saran Hospital infantil, Nova Deli, Índia, e o julgamento foi registrado na clinicaltrials.gov (NCT 00801606). consentimento informado por escrito foi obtido dos pais /encarregados de educação de cada criança. Os métodos de laboratório
O processamento da amostra
IS e GA (pH não-neutralizado) amostras foram processadas como descrito anteriormente [19, 21, 23, 24] . Em resumo, as amostras foram centrifugadas a 10.000 x g durante 10 min, a 4 ° C; sobrenadante foi decantado e pelota foi re-suspensa num volume igual de 0,5% NALC-4% de NaOH mistura de 50 ml tapados cume tubos de processamento de fundo redondo. A suspensão foi cuidadosamente (4 x 10 s cada intervalo) vortex para assegurar uma mistura adequada e foi incubada a 37 ° C durante 10 min. Após a incubação, o pH alcalina foi neutralizada com tampão de fosfato [PBS (pH 6,8, volume total de 50 ml)] seguido por centrifugação final, a 10.000 x g durante 10 min, a 4 ° C. O sobrenadante foi decantado; o sedimento re suspenso em 2 ml de PBS e 0,5 ml de volume aliquotadas em 4 tubos estéreis. Uma alíquota foi utilizada para preparação de esfregaço, uma para a cultura e outra para testes em um in-house
PCR multiplex (m-PCR). Uma aliquota foi armazenada a -80 ° C para posterior utilização. A partir de uma aliquota, uma suspensão de 500 ul foram inoculadas em BACTEC MGIT-960 do sistema de cultura líquido (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, EUA), utilizando o protocolo padrão [25]. Independentemente de um positivo ou um resultado negativo flashed, todas as culturas foram examinadas por coloração de Ziehl-Neelsen. Diferenciação de isolados em Mycobacterium tuberculosis
(MTB) ou micobactérias não tuberculosas (MNT) foi realizada por uma espécie específica em casa
m-PCR [23]. As alíquotas da amostra é e GA, armazenadas a -80 ° C, foram examinados retrospectivamente no ensaio Xpert MTB /RIF.
Xpert MTB /RIF teste
Em 2013, as amostras armazenadas foram submetidos a Xpert MTB /RIF teste . Havia 520 descontaminados GA e está emparelhado amostras (130x2 GA & 130x2 IS) que foram adequado para testes, enquanto outros eram ou não suficiente em quantidade ou qualidade (contaminada). O tampão de amostra de reagente contendo NaOH e isopropanol foi adicionado na proporção de 3: 1 (total de 2 ml), e incubou-se durante 15 min à temperatura ambiente. A amostra tratada (2 ml) foi, em seguida, transferido para o cartucho Xpert MTB /RIF contendo o tampão de lavagem, reagentes liofilizados para extracção de ADN e de amplificação por PCR. Após mistura adequada, o cartucho foi colocado no instrumento Xpert MTB /RIF, de acordo com as instruções do fabricante (Cepheid, EUA). O instrumento realiza espécime mistura, sonicação dos bacilos por micobactérias e controle interno (esporos), liberação de DNA e mistura com os reagentes de PCR, automaticamente. Isto é seguido por uma amplificação em tempo real-PCR nested-hemi, detecção por alvo de cinco cores de fluorescência sondas farol molecular e de controlo interno in situ
. Os resultados são gerados após 2 h e classificado como M. tuberculosis
- negativa ou positiva com carga semi-quantificados bacilar tão elevado, médio, baixo e intermédio ou se o agente patogénico é sensível ou resistente à rifampicina [14]. Os dados do paciente foram ligados às amostras testadas somente após a conclusão da avaliação Xpert MTB /RIF.
Análise estatística
Sensibilidade de Xpert MTB /RIF foi determinado considerando a cultura MGIT confirmou amostras como verdadeiros positivos. Para determinar a especificidade de Xpert MTB /RIF, esfregaço, cultura MGIT e in-house
amostras negativas m-PCR foram consideradas como verdadeiras amostras negativas. Os valores preditivos positivos (VPP), valor preditivo negativo (NPV) e taxa de probabilidade para o positivo (LRP) Xpert MTB /RIF foram calculados com (intervalos de confiança) IC 95%. LRP superior a um indica que o resultado do teste é muito provavelmente verdadeiro positivo e menos do que um significa que o resultado do teste é provavelmente verdadeiro negativo [26]. Pearson teste do qui-quadrado foi realizado para comparação da análise sábio paciente. Para descartar a proporção de concordância por acaso, foi utilizado o teste kappa
de Cohen. Um valor de p <. 0.05.was considerados estatisticamente significativos [STATA 11,0 (College Station, Texas, EUA) software foi utilizado para todas as análises estatísticas]

Resultados Neste estudo, realizado entre janeiro de 2009 a dezembro 2012. Um total de 403 crianças (58,2% meninas), com idade entre 6 meses a 14 anos [idade média, 120 meses; intervalo interquartil (IQR), 7-168 meses], com provável TB intra-torácica foram incluídos. Apenas as crianças foram incluídas de quem tanto GA e IS amostras coletadas em dois dias consecutivos estavam disponíveis. amostras IS e GA, portanto, emparelhados obtidos em dois dias consecutivos de 130 crianças foram analisadas por Xpert MTB ensaio /RIF. As amostras descontaminadas foram armazenadas a -80 ° C para 21,4 para 51,9 meses (período de armazenagem mediana de 32,5 meses; IQR 27-35,1) antes de estes foram submetidos a análise Xpert MTB /RIF. O fluxo de trabalho de laboratório e resumo dos resultados estão apresentados na Fig. 1. A Fig. 1 Carta de fluxo que descreve a inclusão de amostras com fluxo de processamento da amostra, os métodos utilizados e os resultados conforme as diretrizes STROBE
resultado de diagnóstico de amostras IS e GA recolhidos em dois dias consecutivos
Apenas 23 dos 520 (4,4%) amostras a partir de 13 (10%) crianças foram esfregaço AFB positivo (Fig. 1). Destas 23 amostras, 9 eram D1 e 8 eram amostras D2 GA. Segundo dia de amostras (D2) GA detectado 3 casos adicionais positivos AFB smear enquanto ele perdeu 4 casos que eram positivos em D1, portanto, não havia valor marginal líquido a partir de uma amostra de D2 GA. Somente 3 é amostras foram positivas em ambos D1 ou D2. A amostra D2-é adicionado um caso, mas também perdeu um caso. Sessenta e um de 130 (46,9%) crianças [127 de 520 (24,4%) amostras] foram diagnosticados para ter cultura confirmada a tuberculose seja por esfregaço ou cultura (Tabela 1). Das 130 amostras D1-GA 41 (31,5%), enquanto 36 (27,7%) das amostras de D2-GA foram cultura positiva. Vinte e três (17,7%) crianças tiveram uma cultura positiva GA em ambos os dias (Tabela 2). O rendimento a partir de amostras de escarro induzido foi pobre. De 130 IS amostras coletadas em D1, apenas 20 amostras (15,4%) foram positivos, enquanto em D2, 30 (23,1%) amostras foram cultura positiva (Tabela 3). Dezesseis (12,3%) crianças tiveram uma cultura positiva é em ambos os dias. Os rendimentos de cultura MGIT de GA e é amostras coletadas em dois dias consecutivos é mostrado na (Tabelas 2 & 3, respectivamente). Não havia nenhum valor adicional de uma segunda amostra GA dia para baciloscopia (9 vs 8), cultura (41 vs 36), ou Xpert MTB ensaio RIF /(33 vs
34). No entanto, em amostras colhidas em dois dias consecutivos, desde um valor adicional significativa na cultura (20 vs 30), mas
um incremento adicional insignificante no ensaio de MTB Xpert /RIF (22 vs
25). Uma combinação de um GA e um é da amostra deu utilitário melhor diagnóstico, independentemente do D1 ou D2. Quase, 50 amostras% (quer GA ou IS) foram Xpert MTB /RIF positiva em ambos os dias (Fig. 2) .table 1 Desempenho de Xpert MTB /RIF ensaio em amostras bacteriologicamente positivas e negativas bacteriologicamente [combinação de aspirado gástrico (n
= 260) e escarro induzido (n
= 260)] coletadas de crianças com provável tuberculose intratorácica
critérios bacteriológicos (N = 520)
subcritérios
Não . (%)
Xpert MTB /RIF Resultados
Positivo (%)
Negativa (%)
bacteriologicamente positivo (n = 127
; 24,4%)
Smear (+), a cultura (+)
23 (4,4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3)
Smear (-), cultura ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), a cultura (-)
0
0
0
Subtotal
127
87 (68,5)
40 (31,5)
bacteriologicamente negativo (n
= 393; 75,5%)
Smear (-), cultura (-)
393
31 (7,9)
362 (92,1)
total
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
A tabela mostra alta eficácia da Xpert MTB /RIF na cultura e esfregaço amostras positivas, mas a taxa de detecção moderada nas amostras positivas esfregaço de cultura negativa
*, ** P Art < 0.001, (+) - positivo, (-) - Negativo, número entre parênteses indicam percentual
Tabela 2 Desempenho de MGIT 960 cultura em amostras de aspirado gástrico recolhidos em dois dias consecutivos de 130 crianças com provável tuberculose intratorácica
Cultura MGIT960 resultados
Dia 1
positiva
negativo
total
Dia 2
positiva
23 (17,7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
negativo 18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
total
41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabela 3 Desempenho de MGIT 960 cultura em amostras de escarro induzido coletadas em dois dias consecutivos de 130 crianças com provável tuberculose intratorácica
MGIT 960 cultura resultados
Dia 1
positiva
negativo
total
Dia 2
positiva
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negative página 4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
total
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
Fig. 2 amostras individuais e análise de sobreposição de Xpert MTB /RIF positividade em aspirado gástrico e escarro induzido coletadas em 2 dias consecutivos
Comparação de IS e GA
geral, em amostras (é de + GA), que foram positivos, quer em esfregaço e /ou cultura (127/520), a sensibilidade do ensaio Xpert MTB /RIF foi ligeiramente inferior (68,5%, 87/127) em relação ao exame bacteriológico (Tabela 1), mas também detectado 7,9% (31/393) dos casos adicionais sobre a cultura dando uma sensibilidade geral de 22,7% [118/520] (p
= NS), mas significativamente maior (p = 0,001
) sensibilidade do que a baciloscopia (Tabela 4). O desempenho da Xpert MTB /RIF foi de 95,6% (22/23) no esfregaço e cultura de amostras arquivadas positivos, como mostrado na (Tabela 1) e fluxograma (Fig. 1). Todas as 14 amostras que resultaram em espécies de MNT foram esfregaço negativo, mas a cultura e m-PCR positivo. Daí em re-avaliação, a sensibilidade da Xpert MTB /RIF em esfregaço negativo, mas cultura positiva (apenas MTB) amostras foi de 72,2% (65/90). Mas se todas as amostras positivas de cultura foram tomados em conjunto, sem considerar as espécies de micobactérias, a sensibilidade caiu para 62,5% (65/104), devido a 14 NTM isola. A sensibilidade da Xpert MTB /RIF não difere muito entre o GA e IS amostras se tudo bacteriologicamente (esfregaço e /ou cultura) positiva GA (92,2%, 71/77) e IS (94%, 47/50) das amostras foram comparadas . Nenhuma amostra positiva NTM foi falsamente identificado por Xpert MTB /RIF, mas perdeu um esfregaço, cultura e m-PCR amostra positiva, o isolado foi identificado como MTB por m-PCR e. Todas as amostras positivas Xpert MTB /RIF também foram m-PCR positivo. Daí a nossa in-house m-PCR e Xpert MTB /RIF mostraram concordância de 100% no NTM /MTB diferenciação (Fig. 1) .table 4 sensibilidade, especificidade e preditivos valores de Xpert MTB ensaio /RIF, em referência ao esfregaço AFB e Bactec- cultura MGIT960 na expectoração induzida (n
= 260) vs. aspirado gástrico (n
= 260) amostras
Sensibilidade
Especificidade
PPV

NPV
LRF de teste positivo
precisão de diagnóstico
Sensibilidade (baciloscopia positiva)
Sensibilidade (esfregaço negativo)
Xpert MTB /RIF ensaio vs Cultura
o escarro induzido
35/50 (70,0%; 56,2-80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3-96,7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7-95,7)
12,2% (10,2-14,8)
89,6% (85,3-92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
gástrica Aspirar
52/77 (67,5%; 56,5-76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3-93,2) **
73,2% (61,9-82,1)
87,8% (81,2-90,9)
6,5% (5,8-7,3)
83,1% (78,0-87,1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs Cultura
o escarro induzido
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2-100)
100% (60,8-100)
82,7% (77,5-86,8)
- 83,1% (78,1-87,1)
NA
NA
gástrica Aspirar
17/77 (22,1%; 14,3-32,5)
183/183 (100%; 97,9-100)
100 % (81,6-100)
75,3% (71,4-81,6)
- 76,9% (71,4-81,6)
NA
NA
dados n /N (%; 95% CI) ou% (IC 95%), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN), razão de verossimilhança (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p = 0,792

Comparação de Xpert MTB /RIF, cultura e baciloscopia AFB
Xpert MTB ensaio /RIF detectado um adicional de 31 dos 393 (7,9%) amostras que foram ambos esfregaço AFB e cultura MGIT negativo, mas perdeu 39 de 104 amostras positivas (37,5%) de cultura (Tabela 4). Em crianças com provável tuberculose intratorácica, aspirado gástrico identificados mais casos do que expectoração induzida usando baciloscopia, cultura e Xpert MTB ensaio /RIF (6,5, 29,6, e 27,3% vs
2,3, 19,2 e 18,0%, respectivamente). Rendimento de ensaio RIF Xpert MTB /diminuiu com o aumento da duração do armazenamento de GA, bem como IS amostras. Em amostras armazenadas durante 650-849 dias, a taxa de detecção de Xpert MTB /RIF ensaio em amostras de SI foi de 85,7%, que caiu para 33,3% em amostras armazenadas durante mais de 1050 dias. Da mesma forma, estes valores foram de 77,1 e 50%, respectivamente em amostras de GA (Fig. 3). Depois diferença armazenamento de longo no rendimento de IS e GA foi altamente significativa (P
= 0,002). FIG. 3 declínio das taxas de positividade na /ensaio RIF Xpert MTB em relação à duração do armazenamento de aspirado gástrico e amostras de escarro induzido
Discussão
Houve um fluxo de publicações sobre Xpert MTB /RIF também conhecidos como GeneXpert ou cartucho de base testes de amplificação de ácidos nucleicos (CBNAAT) nos últimos 3 anos. Este é o primeiro estudo da Índia sobre o uso do ensaio Xpert MTB /RIF em crianças com tuberculose intratorácica e também o primeiro estudo a relatar sobre a utilidade deste ensaio sobre GA arquivado e IS amostras de crianças em TB país endêmico. O estudo mostra que, mesmo no GA e IS amostras armazenadas por até 4 anos, o ensaio Xpert MTB /RIF permaneceu útil como uma ferramenta de diagnóstico para tuberculose na infância. Em amostras de AG e IS, que foram esfregaço e cultura positiva, a sensibilidade da Xpert MTB ensaio /RIF foi de 95,6%, que é semelhante à relatada em amostras clínicas frescos. Como esperado, a sensibilidade de Xpert MTB /RIF foi superior à de microscopia de esfregaço (p
= 0,0001). No entanto, a sensibilidade do ensaio Xpert MTB /RIF em cultura amostras negativas positivas mas esfregaço foi menor (62,5%). Desempenho de Xpert MTB ensaio /RIF foi previamente avaliada principalmente em amostras de escarro coletadas de pacientes adultos com TB [27-30], mostrando uma alta sensibilidade em amostras com baciloscopia positiva e cultura (98-100%), mas uma sensibilidade muito menor em esfregaço negativo amostras de escarro (43-70%). Os nossos resultados também foram semelhantes a estes resultados, mas em amostras arquivados. A menor sensibilidade do ensaio de Xpert MTB /RIF também tem sido relatada em doentes adultos HIV positivo [29]. Existem poucos estudos que têm sido realizados em crianças e muito poucos em que o desempenho de ensaio Xpert MTB /RIF foi avaliada em outros do que amostras de escarro [4-10, 30, 31] amostras. Nicol et al. [8] incluiu 452 crianças para análise com pelo menos um é amostra de cada criança. Eles também mostrou uma baixa sensibilidade da microscopia (6%), a cultura (16%) e ensaio Xpert MTB /RIF (13%) nestas amostras. No presente estudo, embora as taxas de detecção destes três métodos foram maiores, mas o padrão foi semelhante. Desde que examinou tanto IS e amostras GA em dois dias consecutivos, na comparação do rendimento a partir de amostras é foi muito menor do que amostras de aspirado gástrico. Embora não haja dados publicados até o momento em que as amostras tanto GA e é foram usados ​​no mesmo estudo para avaliar a sensibilidade e especificidade de Xpert MTB ensaio /RIF em casos clinicamente prováveis ​​de tuberculose intratorácica, mas nossos resultados foram no total concordância com achados de Bates et al. [10], Rachow et ai. [16] e Sekadde et ai. [17]. O nosso estudo mostra que essa faixa de cultura e os rendimentos em amostras de GA são superiores às das amostras, no entanto, a sensibilidade do ensaio Xpert MTB /RIF não foi significativamente diferente em GA e IS amostras, em amostras armazenadas a -80 ° C durante a mesma duração (77,1 e 85,7%, respectivamente; P
= 049). Além disso, coletamos ambas as amostras em dois dias consecutivos, e este protocolo fornecido um pouco melhor rendimento em todas as técnicas de diagnóstico ou seja, esfregaço, cultura e Xpert MTB ensaio /RIF. Devido a esta abordagem pente duplo, poderíamos alcançar um elevado diagnóstico {61 de 130; 46,9% das crianças (por análise de paciente)} rendimento.
A maioria das publicações sobre Xpert MTB /RIF ou CBNAAT ter sido de Sub-Sahariana [6, 8-10, 13, 16, 17]. A Índia é um país TB elevada carga ea divisão TB central da Índia, que foi concedida a responsabilidade da execução do programa nacional de controlo da TB revisto recentemente instalou mais de 80 máquinas CBNAAT .. Mas country dados e orientações específicas sobre o uso de máquinas CBNAAT para diagnóstico da tuberculose na infância estão faltando. Nosso é também o primeiro estudo em que temos utilizado o aspirado gástrico e amostra de expectoração induzida armazenados para até 4,3 anos (período de armazenamento mediana de 32,5 meses). Em amostras de esfregaço e cultura comprovada houve uma sensibilidade de 95,7%, o que estava dentro da faixa relatada por vários outros trabalhadores, mas apenas em amostras frescas [10, 17]. Em amostras frescas uma adição de valor variável da Xpert MTB /RIF através da cultura MGIT foi relatado, mas no nosso estudo este valor adição foi mínimo (7,9%), provavelmente devido a alguma perda de viabilidade de micobactérias em armazenamento de longo prazo de amostras [32]. Os casos adicionais detectados durante o teste de ouro de cultura padrão, foram muito pouco provável que seja falso positivo. contagens micobacterianas esgotar sobre o armazenamento de amostras, mesmo depois de alguns dias (30), mas observações contraditórias também foram feitas por outros trabalhadores [33, 34]. Paramasivan et ai. [33] relataram que não houve efeito sobre as taxas de sensibilidade de esfregaço e cultura depois de armazenar as amostras de escarro até 10 dias. Tessema et ai. [34] relataram que o armazenamento de amostras de escarro até 80 dias à temperatura ambiente e em amostras congeladas até 180 dias não teve efeito negativo sobre a produtividade da cultura. Banda et ai.

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