Xpert MTB /RIF assay kan worden gebruikt gearchiveerde maagaspiraat en sputum monsters voor gevoelige diagnose van tuberculose pediatrische

Xpert MTB /RIF test kan gebruikt worden op gearchiveerde maagaspiraat en geïnduceerde sputum monsters voor gevoelige diagnostiek van kinderen met tuberculose
Abstracte achtergrond
Tuberculose (TB) bij kinderen wordt verwaarloosd, voornamelijk te wijten aan een gebrek aan gevoelige diagnostische hulpmiddelen . Onlangs Xpert MTB /RIF-test heeft een revolutie teweeggebracht in het diagnostisch veld, maar het nut ervan bij pediatrische TB is niet gemeld uit India en geen rapport is beschikbaar op het gebruik ervan op de lange termijn gearchiveerd monsters.
Methods
We aangeworven 130 pediatrische patiënten met een waarschijnlijke intrathoracale tuberculose en hun maag aspireren (GA) en geïnduceerde sputum (IS) monsters op 2 opeenvolgende dagen werden verzameld tussen januari 2009 en december 2012. Alle monsters (n = 520) werden onderworpen aan een onderzoek, BACTEC-MGIT cultuur en in te smeren -House
multiplex PCR. Een portie van elk monster werd opgeslagen bij -80 ° C en getest in Xpert MTB /RIF test in 2013.
Resultaten
Proef wijs en verstandig patiënt detectie van uitstrijkje microscopie was 4,4% en 10%, terwijl het voor BACTEC -MGIT cultuur dit percentage was 24,4% en 46,9% respectievelijk. Van de 130 dag 1 GA monsters, 31,5% en 27,7% dag 2 GA monsters werden cultuur positief. Slechts 17,7% GA monsters waren positief op beide dagen. Van de 130 monsters verzameld op dag 1 en dag 2, 15,4% en 23,1% waren monsters kweekpositief. Een combinatie van GA en gaf de beste resultaten. De combinatie van zowel GA en IS, de totale gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF op uitstrijkje en cultuur positieve stalen was 95,6%. In uitstrijkje negatief en cultuur positieve monsters was de gevoeligheid van 62,5%. De duur van het monster opslag impact op de Xpert MTB /RIF testprestaties (p = 0,0001). In uitstrijkje positieve monsters bewaard 650-849 dagen, de gevoeligheid was 85,7% en 77,1% voor de IS en GA monsters die respectievelijk gedaald tot 33,3% en 50%, indien opgeslagen gedurende meer dan 1050 dagen.
Discussion
bevestiging van de diagnose van tuberculose in het bijzonder bij kinderen is een medische uitdaging. Geen laboratorium of radiologische testen kan oplopen tot een bevredigend niveau van diagnostische gevoeligheid. Echter, in deze studie foundthat we combinatie van meerdere monsters en meerdere diagnostische tests kunnen betere opbrengst, hoewel notoptimum. In deze studie verzameling 2 maag opgezogen (GA) en 2 sputum (IS) monsters op twee opeenvolgende dagen en getest op drie diagnosemethoden leverde een significant hoge detectiegraad. Ondanks langdurige opslag, de totale gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF op uitstrijkje en -cultuur positieve monsters bleef zeer hoog. Maar na het opslaan van deze monsters onder vriespunt voorwaarden thesensitivity van Xpert MTB /RIF aanzienlijk afgenomen. Dit is te verwachten, want zelfs als het monster uitstrijkje en cultuur positief, de telling van de overlevende mycobacteriën naar beneden gaat, na een aantal jaren is dit aantal kan oplopen tot een niet detecteerbaar niveau.
Conclusie
Dit rapport toont aan dat uitstrijkje en cultuur positieve monsters opgeslagen bij vriespunt voorwaarden voor een aantal jaren kan worden gebruikt in de Xpert MTB /RIF assay, met behoud merkbaar diagnostische test gevoeligheid en specificiteit.
Sleutelwoorden
Pediatrics Tuberculose India maagaspiraat opgewekt sputum Gearchiveerd Monsters mPCR MGIT Cultuur, Xpert MTB /RIF Achtergrond
World Health Organization (WHO) schat de globale last van tuberculose (TB) op 9 miljoen nieuwe gevallen en 1,5 miljoen doden in 2013 [1]. Dit omvatte tot 15% last pediatrische gevallen. Ongeveer 74.000 kinderen sterven aan tbc per jaar en er zijn ongeveer een half miljoen nieuwe gevallen per jaar [2]. Net als bij volwassenen, de meerderheid (70-80%) van het kind gevallen van tuberculose aanwezig met longtuberculose (PTB). Tuberculose bij kinderen is relatief verwaarloosd, voornamelijk als gevolg van problemen in de beschikbaarheid van effectieve diagnose-instrumenten [3]. India is 17 bij 22 hoge belasting landen in termen van algemene TB incidentie, maar zeer weinig informatie beschikbaar is over de epidemiologie van tuberculose bij kinderen, de diagnose en het beheer [4, 5].
In de meeste instellingen diagnose van pediatrische TB op basis van contact opsporing, en zeer weinig pogingen ondernomen voor actieve opsporing. Dit is voornamelijk te wijten aan het ontbreken van een pathognomonisch klinische presentatie bij pediatrische TB en een gebrek aan gevoelige diagnostische instrumenten [3, 4, 6, 7]. Hotels met beperkte hulpmiddelen voor bevestiging van de laboratoriumdiagnostiek, evaluatie van de medische geschiedenis, tuberculine huidtest, thoraxfoto en een gebrek aan respons op antibiotica te helpen bij het maken van de klinische diagnose. Smear microscopie en microbiologische bevestiging wordt zelden bereikt als gevolg van slechte gevoeligheid van deze tests, voor een deel te wijten aan de paucibacillary aard van de ziekte en het onvermogen van jonge kinderen om een ​​optimale sputummonster bieden [6]. Alternate monsters bevatten maagaspiraat (GA), geïnduceerd sputum (IS), nasofaryngeale aspiraat, bronchoalveolaire lavage, laryngeal swab, touwtje testen en monsters ontlasting [3, 7-10]. Afhankelijk van de diagnostische test gebruikt, hebben deze monsters variabele gevoeligheid en specificiteit aangetoond. Vermeld is dat maagspoeling monsters de hoogste (40-92%) detectie, afhankelijk van de gevoeligheid van het gereduceerde vastgesteld. Andere monsters hebben aangetoond armer detectie variërend 4-43% voor bronchoalveolaire lavage, 24-30% voor nasopharyngeal aspiratie, 27-63 voor laryngeal swab en 20-30% door het gebruik van geïnduceerde sputum. Sommige werknemers hebben ook gebruik reeks test, maar de resultaten zijn niet bemoedigend [3, 7, 11-13]. Ondernemingen De recente invoering van de Xpert MTB /RIF assay (Cepheid, USA) is aanzienlijk veranderd de diagnostiek van tuberculose bij volwassenen , maar de toepassing ervan voor de diagnose van pediatrische TB is geëvalueerd. Deze test is snel en levert resultaten binnen 2 uur [14]. In een beleidsverklaring World Health Organization (WHO) in 2011, aanbevolen het gebruik van de Xpert MTB /RIF-test als een voorlopige diagnose-instrument bij kinderen, bij volwassenen met een vermoeden van human immunodeficiency virus (HIV) geassocieerd tuberculose en in alle MDR TB verdachte gevallen [ ,,,0],15]. Vervolgens zijn er verschillende arbeiders begonnen met de Xpert MTB /RIF test voor de diagnose van kinderen met tuberculose [10, 16-18]. Echter, het wijdverbreide gebruik van de Xpert MTB /RIF voor de diagnose van pediatrische TB op een routine-basis nog steeds een verre optie. Tot op heden zijn er slechts een paar studies over de toepassing van de Xpert MTB /RIF voor de diagnose van kinderen met tuberculose. Twee studies rapporteren over het gebruik van de Xpert MTB /RIF op geïnduceerde sputum twee aan het gebruik ervan in een maagspoeling monsters. Er zijn geen studies die tegelijkertijd verslag uit over het gebruik van de Xpert MTB /RIF in zowel Georgië en IS samples op dezelfde patiënt. Verder is er geen enkele studie uit India over de evaluatie van de Xpert MTB /RIF voor de diagnose van kinderen met longtuberculose. Bovendien, de bruikbaarheid van Xpert MTB /RIF op gearchiveerde GA en IS monsters niet eerder onderzocht. Aangezien de Xpert MTB /RIF na 2011 beschikbaar kwamen, is er geen andere snelle test die TB en RIF weerstand tegelijkertijd kan detecteren in monsters die werden verzameld vóór 2011. Deze studie onderzocht het effect van langdurige opslag van klinische monsters term voor de opsporing van tuberculose door de Xpert MTB /RIF assay.
We hebben eerder gemeld dat GA monsters zorgen voor een betere opbrengsten dan iS monsters [19]. In een volgend rapport toonde ook aan dat we het neutraliseren van de pH van maagaspiraat vóór de verwerking leidt tot een hogere mate van vervuiling, zonder verbetering van de opsporing tarief [20]. In de huidige studie rapporteren we over de prestaties van de Xpert MTB /RIF op gearchiveerde GA en IS monsters verzameld op twee opeenvolgende dagen van kinderen met een waarschijnlijke intrathoracale TB, aangeworven als onderdeel van een dubbel blinde gerandomiseerde gecontroleerde trial naar de rol van micronutriënten te bestuderen bij kinderen met een intra-thoracale tuberculose.
Methods
studie ontwerp en de werving van deelnemers
de studie werd uitgevoerd tussen januari 2009 tot december 2012 de All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) en Kalawati Saran Children's Hospital ( KSCH), zowel in New Delhi, India. Dit werk maakte deel uit van een dubbel blind gerandomiseerd onderzoek naar de rol van micronutriënten bij kinderen met een intra-thoracale tuberculose [19-22] te bestuderen. Een totaal van 403 kinderen (58,2% meisjes), tussen de 6 maanden tot 14 jaar [mediane leeftijd, 120 maanden; interkwartielafstand (IQR), 7-168 maanden], met een waarschijnlijke intra-thoracale TB werden ingeschreven. De standaard kliniek-radiologische criteria om te vermoeden intra-thoracale tuberculose werd gebruikt in deze studie, zoals eerder [19-22] gepubliceerd. De diagnose van intrathoracale tuberculose was gebaseerd op aanbevelingen van de Indiase Academy of Pediatrics. Elk kind met hoest en koorts van meer dan 2 weken geen verbetering gedurende zeven tot tien dagen amoxicilline koers en recente onverklaarbaar gewichtsverlies of de geschiedenis van contact met de tbc-patiënten in de afgelopen twee jaar. Alle tuberculose verdachten onderging een röntgenfoto van de borst (lateraal en posterior-anterior). In aanwezigheid van aanhoudende x-ray afwijkingen, met niet-resolutie van de klinische symptomen en geen andere oorzaak voor de klachten en borst x-ray bevindingen, een waarschijnlijke diagnose van intrathoracale tuberculose werd gemaakt. Alle kinderen met een waarschijnlijke tuberculose werden onderworpen aan tuberculine huidtest (TST), ambulante maag zuigt (GA) en geïnduceerde sputum (IS) onderzoek naar AFB uitstrijkje en cultuur. Kinderen werden gestart op ATT als per aanbevelingen van de RNTCP [5]. In het kort: Alle kinderen met een waarschijnlijke intra-thoracale tuberculose werden onderworpen aan maag-aspiratie (GA) en geïnduceerde sputum (IS) collectie voor twee opeenvolgende dagen (D1 & D2). Kinderen werden gevraagd te rapporteren 6 uur vasten in de ochtend naar de aangewezen kliniek. Na het uitleggen van de procedure en het verkrijgen van toestemming van de ouders en mondelinge instemming van de kinderen, werd een geschikt formaat sondevoeding (10-12 g) ingebracht via een neusgat, totdat het de maag bereikt. De positie van de buis werd gecontroleerd door inblazen van lucht in de maag. De inhoud van de maag werden volledig opgezogen, bewaard in een steriele container. Normaal volume verzameld was ongeveer 10 ml. Monsters werden vervoerd naar het laboratorium voor verdere verwerking binnen 1-2 h.
In dezelfde zitten maag aspiratie werd gevolgd door opgewekt sputum met een gat van ongeveer een half uur. Voor sputuminductie, werd het kind voorbehandeld met 2 puffs salbutamol inhalatie door inhalator (MDI Asthalin, 100 ug /puff, Cipla, India)) en spacer (Zeroastat VT spacer, Cipla, India) gevolgd door verneveling met 3 ml 3 % zoutoplossing voor de komende 15-20 min. Alle monsters werden unieke codenummers gegeven; en naar het laboratorium gestuurd zonder koppeling klinische en patiëntgegevens. De monsters werden verwerkt op dezelfde dag voor AFB uitstrijkje, BACTEC-MGIT cultuur en in-house
PCR [23]. Klinische en patiëntgegevens werden in excel sheet opgenomen door het behandelen van kinderarts en het laboratorium was niet op de hoogte van de klinische diagnose van de proefpersonen.
Ethische overwegingen
De studie werd door Institutional ethische commissie van de All India Institute of Medical Sciences goedgekeurd , New Delhi en Kalawati Saran Children Hospital, New Delhi, India, en de proef werd geregistreerd bij clinicaltrials.gov (NCT 00801606). Schriftelijke toestemming is verkregen van de ouders /verzorgers van elk kind.
Laboratory methoden
Sample verwerking
IS en GA (pH niet geneutraliseerd) monsters werden verwerkt zoals eerder beschreven [19, 21, 23, 24] . In het kort werden de monsters gecentrifugeerd bij 10.000 x g gedurende 10 min bij 4 ° C; supernatant afgeschonken en pellet werd opnieuw gesuspendeerd in een gelijk volume van 0,5% NALC-4% NaOH mengsel in 50 ml rand afgedekte rondbodemkolf verwerking buizen. De suspensie werd grondig (4 x 10 s elk interval) gevortext om een ​​goede menging te verzekeren en werd gedurende 10 min geïncubeerd bij 37 ° C. Na incubatie werd alkalische pH geneutraliseerd met fosfaatbuffer [PBS (pH 6,8, totaal volume van 50 ml)], gevolgd door de uiteindelijke centrifugatie bij 10.000 x g gedurende 10 min bij 4 ° C. Het supernatant werd gedecanteerd; de re- pellet gesuspendeerd in 2 ml PBS en 0,5 ml volume in porties verdeeld in 4 steriele buizen. Eén hoeveelheid werd gebruikt voor de bereiding uitstrijkje, één cultuur en één voor testen in een intern
multiplex PCR (m-PCR). Eén hoeveelheid werd opgeslagen bij -80 ° C voor verder gebruik. Van de ene monster, werd een 500 ul suspensie geënt in BACTEC MGIT-960 vloeibare kweeksysteem (BACTEC TM MGIT, Becton Dickinson, Sparks, USA), met behulp van de standaard protocol [25]. Ongeacht positief of negatief resultaat geflitst werden alle kweken onderzocht met Ziehl-Neelsen-kleuring. Differentiatie van isolaten in Mycobacterium tuberculosis
(MTB) of niet-tuberculeuze mycobacteriën (NTM) werd uitgevoerd door een soortspecifieke interne
m-PCR [23]. De IS en GA monster monsters, opgeslagen bij -80 ° C, werden retrospectief onderzocht in de Xpert MTB /RIF assay.
Xpert MTB /RIF Test
In 2013 werden de opgeslagen monsters onderworpen aan Xpert MTB /RIF test . Er waren 520 ontsmet GA en is gekoppeld monsters (130x2 GA & 130x2 IS) die geschikt zijn voor het testen waren, terwijl anderen waren ofwel niet voldoende in kwantiteit of kwaliteit (vervuild). Het monster reagens buffer die isopropanol en NaOH werd toegevoegd in de verhouding van 3: 1 (totaal 2 ml) en gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Het behandelde monster (2 ml) werd vervolgens overgebracht in de Xpert MTB /RIF cartridge met de wasbuffer, gevriesdroogde reagentia voor DNA-extractie en PCR-amplificatie. Na goede menging werd de cartridge geladen in de Xpert MTB /RIF instrument, volgens instructies van de fabrikant (Cepheid, USA). Het instrument voert specimen mengen, sonicatie van de mycobacteriële bacillen en interne controle (sporen), DNA-afgifte en het mengen met de PCR-reagentia, automatisch. Daarna volgt een hemi-nested real-time-PCR-amplificatie, detectie van het doel door vijf kleuren fluorescentie moleculaire beacon probes en interne controle in situ
. Resultaten worden gegenereerd na 2 uur en gerapporteerd als M. tuberculosis Catawiki - negatief of positief semi-kwantitatief bacillaire load hoge, gemiddelde, lage en gemiddelde of indien de pathogeen RIF gevoelig of resistent [14]. De patiënt gegevens werden gekoppeld aan de geteste pas na afloop van de Xpert MTB /RIF evaluatie samples.
Statistische analyse
Gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF werd bepaald door te kijken naar MGIT bacteriologisch bevestigde monsters als echte positief. Om de specificiteit van de Xpert MTB /RIF, uitstrijkje, MGIT cultuur te bepalen en in-house
m-PCR-negatieve monsters werden beschouwd als echte negatieve monsters. Positief voorspellende waarde (PPV), negatieve voorspellende waarde (NPV) en de waarschijnlijkheid ratio voor positieve (LRP) Xpert MTB /RIF werden berekend met 95% CI (betrouwbaarheidsintervallen). LRP van meer dan één geeft aan dat het testresultaat waarschijnlijk echt positief en ten minste één middel dat het testresultaat waarschijnlijk juist negatief [26]. Pearson chi-kwadraat test werd uitgevoerd voor de vergelijking van de patiënt verstandig analyse. Om uit te sluiten van het aandeel van de overeenkomst door toeval, werd Cohen's kappa Electronics Test gebruikt. Een p-waarde van <. 0.05.was beschouwd als statistisch significant [STATA 11,0 (College Station, Texas, USA) software werd gebruikt voor alle statistische analyse]
Resultaten
In deze studie, uitgevoerd tussen januari 2009 tot december 2012. Een totaal van 403 kinderen (58,2% meisjes), tussen de 6 maanden tot 14 jaar [mediane leeftijd, 120 maanden; interkwartielafstand (IQR), 7-168 maanden], met een waarschijnlijke intra-thoracale TB werden ingeschreven. Alleen die kinderen werden opgenomen van wie zowel GA en IS monsters verzameld op twee opeenvolgende dagen beschikbaar waren. Daarom gepaarde IS en GA monsters verkregen op twee opeenvolgende dagen van 130 kinderen werden geanalyseerd door Xpert MTB /RIF assay. De ontsmet monsters werden opgeslagen bij -80 ° C gedurende 21,4-51,9 maanden (mediaan opslagperiode 32,5 maanden IQR 27-35,1) voordat deze werden onderworpen aan Xpert MTB /RIF analyse. Het laboratorium workflow en samenvatting van de resultaten worden getoond in Fig. 1. Fig. 1 Flow grafiek die de opname van monsters met een stroom van monster verwerking, methoden en resultaten per richtlijnen STROBE
Diagnostic uitkomst van IS en GA monsters verzameld op twee opeenvolgende dagen
Slechts 23 van de 520 (4,4%) monsters vanaf 13 (10%) kinderen waren AFB uitstrijkje positief (afb. 1). Van deze 23 monsters, 9 waren D1 en D2 werden 8 monsters GA. Tweede dag (D2) GA monsters gedetecteerd 3 extra AFB uitstrijkje positieve gevallen, terwijl het 4 zaken die positief waren op D1, dus was er geen netto incrementele waarde van een D2 GA sample gemist. Slechts 3 IS monsters waren positief aan beide D1 en D2. De D2-IS monster toegevoegd één geval, maar miste ook een geval. Zestig één van de 130 (46,9%) kinderen [127 van de 520 (24,4%) monsters] werden gediagnosticeerd bacteriologisch bevestigde tuberculose, hetzij door uitstrijkje en cultuur (tabel 1) te hebben. Van de 130 D1-GA monsters 41 (31,5%), terwijl 36 (27,7%) van de D2-GA monsters werden cultuur positief. Drieëntwintig (17,7%) kinderen een kweekpositieve GA op beide dagen (Tabel 2). De opbrengst van geïnduceerde sputum monsters was slecht. Van 130 IS monsters op D1, slechts 20 monsters (15,4%) waren positief, terwijl op D2, 30 (23,1%) monsters waren kweekpositief (tabel 3). Zestien (12,3%) kinderen hadden een cultuur positief op beide dagen. De MGIT kweek opbrengst van GA en IS monsters op twee opeenvolgende dagen wordt getoond in (tabellen 2 & 3, respectievelijk). Er was geen toegevoegde waarde van een tweede dag GA monster voor uitstrijkje microscopie (9 versus 8), cultuur (41 versus 36), of in de Xpert MTB /RIF assay (33 vs
34). Echter monsters op twee opeenvolgende dagen ontvangen aanzienlijke meerwaarde in kweek (20 versus
30), maar een onbeduidend extra toename in de Xpert MTB /RIF assay (22 versus
25). Een combinatie van een GA en één IS monster gaf beste diagnostische nut, ongeacht D1 en D2. Bijna 50% monsters (hetzij GA of IS) waren Xpert MTB /RIF positief op beide dagen (fig. 2) .table 1 Prestatie van Xpert MTB /RIF assay in bacteriologisch positieve en bacteriologisch negatieve monsters [combinatie van maag zuigt (n
= 260) en geïnduceerde sputa (n
= 260)] verzameld van kinderen met een waarschijnlijke intrathoracale tuberculose
Bacteriologisch criteria (N = 520)
Sub-criteria
No . (%)
Xpert MTB /RIF Resultaten
Positief (%)
Negatief (%)
Bacteriologisch positieve (n
= 127; 24,4%)
Smear (+), cultuur (+)
23 (4.4) *, **
22 (95,7)
1 (4.3)
Smear (-), cultuur ( +)
104 (20) *
65 (62,5)
39 (37,5)
Smear (+), cultuur (-)
0
0
0
Subtotaal
127
87 (68,5)
40 (31.5)
Bacteriologisch negatief (n
= 393; 75,5%)
Smear (-), cultuur (-)
393
31 (7.9)
362 (92,1)
Totaal
520
118 (22,7) **
402 (77,3)
De tabel toont een hoge werkzaamheid van Xpert MTB /RIF in de cultuur en smeer positieve monsters maar matige detectie in uitstrijkje negatieve cultuur positieve monsters
*, ** P Restaurant < 0.001, (+) - positief, (-) - Negatief, getal tussen haakjes geven percentage
Tabel 2 Prestaties van MGIT 960 cultuur op de maagaspiraat monsters verzameld op twee opeenvolgende dagen van 130 kinderen met een waarschijnlijke intrathoracale tuberculose
MGIT960 Cultuur resultaten
Dag 1
Positief
Negatief
Total
Dag 2
Positief
23 (17,7%)
13 (10%)
36 (27,7%)
Negatief
18 (13,8%)
76 (58,5%)
94 (72,3%)
Totaal
41 (31,5%)
89 (68,5%)
130
Tabel 3 Prestaties van MGIT 960 cultuur op de geïnduceerde sputum monsters verzameld op twee opeenvolgende dagen van 130 kinderen met een waarschijnlijke intrathoracale tuberculose
MGIT 960 cultuur resultaten
Dag 1
Positief
Negatief
Total
Dag 2
Positief
16 (12,3%)
14 (10,8%)
30 (23,1%)
Negatief verhuur 4 (3,1%)
96 (73,8%)
100 (76,9%)
Totaal
20 (15,4%)
110 (84,6%)
130
Fig. 2 Individueel en overlap analyse van de Xpert MTB /RIF positiviteit in de maag aspireren en geïnduceerde sputum monsters verzameld op 2 opeenvolgende dagen
Vergelijking van IS en GA
Kortom, in monsters (IS + GA), die positief, hetzij in uitstrijkje en waren /of kweek (127/520), de gevoeligheid van Xpert MTB /RIF assay was iets lager (68,5%, 87/127) in vergelijking met bacteriologisch onderzoek (Tabel 1), maar ook ontdekt 7,9% (31/393) extra gevallen via cultuur waarin een totale gevoeligheid van 22,7% [118/520] (p
= NS) maar significant hoger (p = 0,001
) gevoeligheid dan microscopie (Tabel 4). De prestaties van Xpert MTB /RIF was 95,6% (22/23) met uitstrijkje en kweekpositieve gearchiveerde monsters, zoals in (tabel 1) en stroomdiagram (fig. 1). Alle 14 monsters die NTM soorten leverden waren uitstrijkje negatief, maar cultuur en m-PCR positief. Vandaar dat op de re-evaluatie, de gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF op uitstrijkje negatief, maar de cultuur positief (alleen MTB) monsters bedroeg 72,2% (65/90). Maar als alle cultuur positieve stalen samen zonder de mycobacteriële species werden genomen, de gevoeligheid viel tot 62,5% (65/104) als gevolg van 14 NTM isolaten. De gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF niet veel verschillen tussen de GA en IS monsters als alle bacteriologisch (uitstrijkje en /of cultuur) positief GA (92,2%, 71/77) en IS (94%, 47/50) monsters werden vergeleken . Geen NTM positief monster werd valselijk geïdentificeerd door Xpert MTB /RIF, maar het miste een uitstrijkje, cultuur en m-PCR positief monster, het isolaat werd geïdentificeerd als MTB door m-PCR en. Alle Xpert MTB /RIF positieve monsters waren ook m-PCR positief. Vandaar onze in-house m-PCR en Xpert MTB /RIF toonde 100% concordantie in NTM /MTB differentiatie (afb. 1) .table 4 Gevoeligheid, specificiteit en voorspellende waarden van de Xpert MTB /RIF assay in verwijzing naar AFB uitstrijkje en Bactec- MGIT960 cultuur in geïnduceerd sputum (n
= 260) vs. maagaspiraat (n
= 260) monsters
Gevoeligheid
specificiteit
PPV

NPV
LRF van positieve test
diagnostische nauwkeurigheid
Sensitivity (uitstrijkje positief)
Sensitivity (uitstrijkje negatief)
Xpert MTB /RIF assay vs Cultuur
opgewekt sputum
35/50 (70,0%; 56,2-80,9) *
198/210 (94,3%; 90,3-96,7) **
74,5% (60,5 -84,6)
92,7% (88,7-95,7)
12,2% (10,2-14,8)
89,6% (85,3-92,8)
6/6 (100%)
29/44 ( 65,9%)
maagaspiraat
52/77 (67,5%; 56,5-76,9) *
164/183 (89,6%; 84,3-93,2) **
73,2% (61,9-82,1)
87,8% (81,2-90,9)
6,5% (5,8-7,3)
83,1% (78,0-87,1)
16/17 (94,1%)
36/60 (60,0%)
AFB vs Cultuur
opgewekt sputum
6/50 (12,0%; 5,6-23,8) ***
210/210 (100%; 98,2-100)
100% (60,8-100)
82,7% (77,5-86,8)
- 83,1% (78,1-87,1)
NA NA

maagaspiraat
17/77 (22,1%; 14,3-32,5)
183/183 (100%; 97,9-100)
100 % (81,6-100)
75,3% (71,4-81,6)
- 76,9% (71,4-81,6)
NA NA

data n /N (%; 95% CI) of% (95% CI), positief voorspellende waarde (PPV), negatieve voorspellende waarde (NPV), Likelihood ratio (LRF), * p
= 0,77, ** p
= 0,087, *** p = 0,792

Vergelijking van de Xpert MTB /RIF, cultuur en AFB uitstrijkje microscopie
Xpert MTB /RIF assay gedetecteerd een extra 31 van de 393 (7,9%) monsters die zowel AFB uitstrijkje en MGIT cultuur negatief waren, maar miste 39 van 104 (37,5%) cultuur positieve monsters (tabel 4). Bij kinderen met een waarschijnlijke intrathoracale tuberculose, maagaspiraat geïdentificeerd meer gevallen dan opgewekt sputum met behulp van microscopie, cultuur en Xpert MTB /RIF assay (6,5, 29,6, en 27,3% versus
2,3, 19,2 en 18,0%, respectievelijk). De opbrengst van de Xpert MTB /RIF test af met toenemende duur van de opslag van GA evenals IS samples. In monsters bewaard 650-849 dagen, de detectie van Xpert MTB /RIF assay op IS monsters bedroeg 85,7%, die in monsters bewaard gedurende meer dan 1050 dagen gedaald tot 33,3%. Ook waren deze percentages 77,1 en 50%, respectievelijk in Georgië monsters (afb. 3). Na lange verschil opslag in de opbrengst van IS en GA was zeer significant (p
= 0,002). Fig. 3 Dalende positiviteit tarieven in de Xpert MTB /RIF test in relatie tot de duur van de opslag van de maag aspireren en geïnduceerde sputum monsters
Discussion
Er is een stroom van publicaties over de Xpert MTB /RIF ook wel bekend als GeneXpert of cartridge gebaseerd geweest nucleïnezuuramplificatie testen (CBNAAT) in de laatste 3 jaar. Dit is de eerste studie uit India over het gebruik van de Xpert MTB /RIF-test bij kinderen met intrathoracale TB en ook de eerste studie om te rapporteren over het nut van deze test op gearchiveerde GA en IS monsters van kinderen in TB endemisch land. De studie toont aan dat zelfs in Georgië en IS monsters bewaard tot 4 jaar, de Xpert MTB /RIF assay nuttig als een diagnostisch hulpmiddel voor jeugd tuberculose gebleven. In GA en IS monsters die waren uitstrijkje en kweekpositief, de gevoeligheid van Xpert MTB /RIF assay was 95,6%, vergelijkbaar met die in verse klinische monsters. Zoals verwacht de gevoeligheid van Xpert MTB /RIF was beter dan die van microscopie (p
= 0,0001). Echter, de gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF-test op de cultuur positief, maar uitstrijkje negatieve monsters was lager (62,5%). Prestaties van Xpert MTB /RIF-test heeft eerder vooral geëvalueerd op sputum monsters van volwassen tbc-patiënten [27-30], met een hoge gevoeligheid in uitstrijkje en cultuur positieve monsters (98-100%), maar een veel lagere gevoeligheid in uitstrijkje negatief sputum monsters (43-70%). Onze bevindingen waren ook gelijkwaardig aan deze bevindingen, maar op gearchiveerde monsters. Een lagere gevoeligheid van de Xpert MTB /RIF assay is ook gemeld bij HIV-positieve volwassen patiënten [29]. Er zijn maar weinig studies die bij kinderen zijn uitgevoerd en zeer weinig waar de prestaties van de Xpert MTB /RIF assay is geëvalueerd met uitzondering van sputum monsters [4-10, 30, 31] samples. Nicol et al. [8] 452 opgenomen kinderen voor analyse met ten minste één monster van elk kind. Ze toonden een lage sensitiviteit microscopie (6%), kweek (16%) en Xpert MTB /RIF assay (13%) in deze monsters. In deze studie, hoewel detectie van deze drie methoden waren hoger maar het patroon was vergelijkbaar. Aangezien we onderzocht zowel IS en GA monsters op twee opeenvolgende dagen, bij vergelijking van de opbrengst IS monsters was veel lager dan maagaspiraat monsters. Hoewel er nu toe geen gegevens gepubliceerd waarin zowel GA en IS monsters werden op dezelfde studie om de gevoeligheid en specificiteit van Xpert MTB /RIF assay klinisch vermoedelijke gevallen van intrathoracale tuberculose evalueren, maar de resultaten waren in totaal overeenstemming met bevindingen van Bates et al. [10], Rachow et al. [16] en Sekadde et al. [17]. Onze studie toont aan dat uitstrijkje en cultuur opbrengsten GA monsters superieur aan die van IS monsters, maar de gevoeligheid van Xpert MTB /RIF assay niet significant verschillend in GA en IS monsters, in monsters bewaard bij -80 ° C voor dezelfde duur (77,1 en 85,7%, respectievelijk; P
= 049). Verder hebben we verzameld beide monsters op twee opeenvolgende dagen, en dit protocol iets verstrekt betere opbrengst in alle diagnostische technieken wil zeggen uitstrijkje, cultuur en Xpert MTB /RIF assay. Vanwege deze dubbele fronten aanpak, kunnen we het bereiken van een hoge diagnostische {61 van 130; 46,9% kinderen (per patiënt analyse)} opbrengst.
Meeste publicaties over Xpert MTB /RIF of CBNAAT hebben van Sub-Sahara Afrika [6, 8-10, 13, 16, 17] geweest. India is een TB hoge belasting land en de centrale TB afdeling van India, dat is geschonken aan de verantwoordelijkheid van de uitvoering van de herziene nationale tbc-bestrijdingsprogramma heeft onlangs geïnstalleerde meer dan 80 CBNAAT machines .. Maar landspecifieke gegevens en richtlijnen voor het gebruik CBNAAT machines voor diagnosticeren jeugd tuberculose ontbreken. Ons is ook de eerste studie waarin we de maag aspireren en geïnduceerde sputum monster opgeslagen voor maximaal 4,3 jaar (mediaan opslagperiode van 32,5 maanden) hebben gebruikt. In uitstrijkje en cultuur bewezen monsters bleek sensitiviteit van 95,7% die was binnen de door een aantal andere werknemers, maar alleen op verse monsters [10, 17] meldde bereik. In verse monsters een variabele toegevoegde waarde van de Xpert MTB /RIF over de MGIT cultuur is gemeld, maar in onze studie deze waarde toevoeging was minimaal (7,9%), waarschijnlijk als gevolg van een verlies van mycobacteriële levensvatbaarheid op de lange termijn opslag van de monsters [32]. De extra gevallen gedetecteerd via gouden standaard cultuur test, zeer waarschijnlijk vals positief. Mycobacteriële tellingen afbrekende over de opslag van monsters, zelfs na een paar dagen (30), maar tegenstrijdige opmerkingen zijn ook door andere werknemers [33, 34]. Paramasivan et al. [33] gemeld dat er geen effect op de gevoeligheid van tarieven uitstrijkje en cultuur na het opslaan van de sputum monsters tot 10 dagen was. Tessema et al. [34] hebben gemeld dat de opslag van sputum monsters upto 80 dagen bij kamertemperatuur en in bevroren monsters upto 180 dagen geen negatief effect op de opbrengst cultuur had. Banda et al.

• FGF9 van kanker-geassocieerde fibroblasten is een mogelijke mediator van de invasie en anti-apoptose van maagkanker cells
• Antioxidant activiteit en ultrastructurele veranderingen bij maagkanker cellijnen geïnduceerd door Northeastern Thaise eetbare folk plantenextracten