Förutsägelse av tumörrecidiv efter kurativ resektion i magcancer baserat på bcl-2 uttryck

Förutsägelse av tumörrecidiv efter kurativ resektion i magcancer baserat på bcl-2 uttryck Bild Sammanfattning
Bakgrund Review Det finns för närvarande inga tillförlitliga prediktiva faktorer för magcancer återfall. Syftet med denna studie var att utvärdera förhållandet mellan Bcl-2-expression och risken för magcancer återfall.
Metoder
Från januari 1996 till december 2007 var 449 magcancer patienter som genomgick kurativ resektion efterhand studeras. De uttrycksnivåer av bcl-2 undersöktes genom immunhistokemi. Logistisk regression utfördes för att identifiera oberoende riskfaktorer för övergripande återkommande magcancer.
Resultat
151 patienter (33,6%) fick återfall. Mediantiden till återfall var 17,0 månader, hade 113 (74,8%) patienter återfall inom 2 år. Peritoneal recidiv var det mest förekommande mönster, följt av hematogen metastas där levern var den vanligaste platsen. Djup invasion, lymfkörtelmetastaser och negativa uttryck av bcl-2 var oberoende riskfaktorer för övergripande återfall. Den totala överlevnadstiden för återkommande patienter var 22,7 månader. Medianöverlevnaden efter återfall var 6,7 månader.
Slutsats
djup invasion, lymfkörtelmetastaser och uttryck av bcl-2 är oberoende faktorer för att förutsäga magcancer återfall.
Nyckelord
Magcancer återfall kliniskt patologiska faktorer bcl-2 bakgrund
Även förekomsten av magsäckscancer har minskat kraftigt under flera decennier, är det fortfarande den fjärde vanligaste cancerformen och den näst vanligaste dödsorsaken i cancer [1, 2]. Även om majoriteten av patienter med tidig cancer i magsäcken kan ha långa överlevnadstider efter operationen, ca 40% av patienterna dör av återfall, även efter att ha genomgått kurativ kirurgi [3]. Närvaron eller frånvaron av återfall anses allmänt vara den viktigaste prediktorn för överlevnad, eftersom prognosen för patienter med återfall är extremt dyster. Därför är det mycket viktigt att exakt förutsäga risken för återfall på ett tidigt stadium för att förbättra prognosen för patienter med återfall. Emellertid har det visat sig att rutinmässig uppföljning efter operation för magcancer är inte till hjälp vid detektering av återkommande på ett tidigt stadium [4]. Därför är det viktigt att undersöka specifika faktorer som kan identifiera undergrupper av patienter med mer aggressiv sjukdom. Nyligen har vissa studier visat att patologiska faktorer såsom lymfkörtel status, djup invasion, och tumörstorleken, spelar en avgörande roll i att förutsäga återfall efter gastrektomi [5, 6]. Det är dock svårt att förutsäga återfall med hjälp av vanliga kliniskt patologiska faktorer. Med tanke på att vissa biologiska markörer, såsom onkogener, tumörsuppressorgener, cellcykelregulatorer, och DNA-reparationsgener, är relaterade till tumör genes, tillväxt, invasion och metastas, är många forskare att söka efter nya prediktiva faktorer bland dessa molekylära markörer. I en tidigare studie utvärderade vi prognostiska värde av biologiska markörer såsom p53, bcl-2, bax, och c-myc i magcancer, och fann att bcl-2 var signifikant associerad med prognosen hos patienter magcancer [7]. Därför hypotes vi att bcl-2-expression kan avspegla tumöregenskaper, och därmed fungera som en tillförlitlig indikator för att förutsäga återfall. Syftet med den aktuella studien är att fastställa huruvida bcl-2-uttryck kan förutsäga återfall i sjukdomen efter kurativ resektion hos patienter med magcancer.
Metoder
Patienter
Mellan januari 1996 och december 2007, 4.426 patienter med histologiskt bekräftad primär magcancer gick gastrektomi vid institutionen för gastric Cancer och mjukdelssarkom i Fudan University Shanghai Cancer Center. Av dessa patienter var 449 fall valts. Dessa patienters prover färgades immunohistokemiskt. Data hämtas från patienternas operativa och patologiska rapporter. Uppföljningsdata erhölls genom telefon, brev, och poli kliniska databasen. Staging utfördes enligt UICC (UICC) TNM Staging Klassificering för Cancer i magen
(Sjunde upplagan, 2010) [8]. En uppföljning av alla patienter genomfördes i enlighet med vår standardprotokoll (var tredje månad under minst 2 år, var 6 månader för de kommande 3 åren, och efter 5 år var 12 månader för livet). Check-up poster fysisk undersökning, tumörmarkör undersökning, ultraljud, lungröntgen, datortomografisk skanning och endoskopisk undersökning. Intervallet för uppföljning var från januari 1996 till maj 2010. Median uppföljningstid var 76,5 månader vid tidpunkten för analys. Skriftligt informerat samtycke hade erhållits från alla patienter, och denna studie godkändes av den etiska kommittén för Shanghai Cancer Center i Fudan University. Studien var retrospektiv.
Immunohistokemisk färgning
Bcl-2 detekterades genom immunhistokemisk metod. Antikroppar köptes från Dako (Hamburg, Tyskland). Immunhistokemisk färgning utfördes genom den förbättrade märkta polymersystemet metod. Paraffinsektioner deparaffinised med xylen och hydratiserades med etanol /avjoniserat vatten. Sektioner inkuberades sedan med metanol /0,3% H 2O 2 och blockerades med icke-specifik färgning blockeringsreagens. Efter inkubation över natten vid 4 ° C med anti-bcl-2-antikropp (spädd 1: 100), var sektionerna behandlades enligt standard immunoperoxidas metoder. Negativa kontrollsektionerna utsattes för samma procedur, med undantag av att den första antikroppen ersattes med PBS. Ingen positiv färgning observerades i kontrollerna. Placeringen av färgning för bcl-2 var främst cytoplasman och cytomembrane
Immunhistokemisk färgning. Scoring
Alla skivor har oberoende utvärderats av två patologer. Procentandelen immunreaktiva celler och färgintensitet utvärderades. Den procentuella andelen av immunreaktiva celler graderades på en skala från 0 till 4: ingen färgning poängsattes som 0, 1 till 10% av celler färgade poängsattes som en 11 till 50% som 2, 51-80% som 3, och 81 till 100% som 4. färgnings~~POS=TRUNC intensiteter graderades från 0 till 3: 0 definierades som negativ, en så svag, 2 som måttlig, och tre lika starka, respektive. Rådata omvandlades till en immunhistokemisk poäng (IHS) genom att multiplicera kvantiteten och intensitet poäng. En IHS poäng 9-12 ansågs vara stark immunoreaktivitet (+++), 5-8 måttlig (++), 1-4 som svag (+), och 0 som negativ (-). Fall med en poäng på mindre än 1 betraktades som negativa, och de med ≥1 betraktades som positiv [9].
Statistisk analys
Data presenterades som medelvärde ± SD eller medianvärdet för numeriska parametrar. Patienternas funktioner och kliniska egenskaper analyserades med hjälp av den tvåsidiga Students t
-test eller Pearson chitvåtest vad som är lämpligt. Faktorer som bedömdes av potentiell betydelse för univariat analys ingick i multivariat analys. Logistisk regression användes för att uppskatta relaterade faktorer för återfall. Den accepterade signifikansnivån var P Hotel < 0,05. . Statistiska analyser och grafik utfördes med hjälp av SPSS 13,0 statistisk paket (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) Review Resultat
kliniskt patologiska egenskaper
I studien ingick 307 män och 142 kvinnliga patienter (2,2: 1 ) med en medelålder på 57 år. Det fanns 49 (10,9%) början av gastric cancer och 400 (89,1%) avancerad magsäckscancer. Enligt histologisk typ, var väl differentierade tumörer observerades i 7 (1,5%) patienter, måttligt differentierade i 149 (33,2%) patienter och poorlydifferentiated tumörer i de återstående 293 (65,3%) patienter. Enligt Borrmann-typ, 49 (10,9%) var typ 0, 32 (7,1%) av typ I, 14 (3,1%) av typ II, 333 (74,2%) typ III, och 21 (4,7%) av typ IV. Av dessa patienter hade 147 (32,7%) tumörer som ligger i den övre tredjedelen av magen, 65 (14,5%) hade tumörer i den mellersta tredje, 212 (47,2%) hade tumörer i den nedre tredjedelen, och 25 (5,6%) hade tumörer som upptar två tredjedelar eller mer i magen. Lymfkörtel metastas observerades hos 326 patienter, och metastas hastigheten var 72,6%. Fördelningen av patologiska stadiet var enligt följande: 35 (7,8%) patienter tillhörde steg IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%) IIIB, och 93 (20,7%) IIIC.
expression av bcl-2 Review Bcl-2-expression var positiv i 21,2% av alla magcancer vävnader. Bcl-2-färgning observerades i cytoplasman och cytomembrane av karcinomceller (Figur 1). Bcl-2 expression var associerat med patologisk skede. Det fanns ingen korrelation mellan bcl-2 och andra patologiska parametrar, såsom ålder, kön, histologisk typ, Borrmann typ, tumörplacering, eller tumörstorleken. Figur 1 Positiv uttryck av bcl-2 immunohistokemi i magsäckscancer vävnad. En ursprunglig förstoring x 100, B ursprunglig förstoring x 400.
Tid till återfall och återkommande mönster
Återfall förekom i 151 (33,6%) patienter under uppföljningsperioden. Mediantiden till återfall var 17,0 månader (intervall från 2,0 till 91,0 månader), och tiden var 21,1 månader. Bland patienter med återfall, 113 (74,8%) fick återfall inom 2 år. Frekvensen och andelen återfall demonstreras i figur 2. Figur 2 Frekvens av återfall efter kurativ operation från år.
Av de 151 patienter med återfall, 58 (38,4%) diagnostiserades med peritoneal återfall, som var de vanligaste, 49 (32,5%) patienter hade hematogena metastaser, vilket var den näst vanligaste återkommande mönster, och lever var oftast inblandade organ; det var inblandad i 57,1% av alla återkommande patienter. Andra återfall var loco-regional (n = 34, 22,5%), avlägsna lymfkörtelmetastaser (n = 8, 5,3%), eller på flera ställen (n = 2, 1,3%) (Figur 3). Figur 3 Mönster för återkommande efter botande gastrektomi.
Recurrence-relaterade faktorer
Univariate analys visade att Borrmann typ, djup av invasion, lymfkörtelstatus, och uttryck av bcl-2 var associerade med övergripande återfall, medan ålder, kön, histologisk typ, tumörplacering, och tumör storlek var inte (tabell 1). Logistisk regression användes för att identifiera de oberoende riskfaktorer för övergripande återfall. Det visades att djupet av invasionen, lymfkörtelmetastaser och negativa uttryck av bcl-2 var oberoende prediktiva faktorer för övergripande återfall (tabell 2) .table en Univariat analys av riskfaktorer för återfall i magcancer
Nej återfall
återfall
P-värde
(n = 298)
(n = 151)
Ålder (år), medelvärde ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
Kön, manligt /kvinnligt
203/95
104/47
0,871
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP (cm ), medelvärde ± SD
4,8 ± 2,5
5,3 ± 2,7
0,054
Tumör plats, övre /mitten /nedre /två eller flera
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
Borrmann typ, 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0,002
Histologi, väl /måttligt /dåligt differentierad
5/101/192
2/48/101
0,899
djup invasion, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0.000
Lymfkörtel status, negativ /positiv
108/190
15/136
0.000
Bcl-2, negativ /positiv
226/72
128/23
0,029
Tabell 2 Multivariate analysisof riskfaktorer för återfall i magcancer
Variabel
P-värde
Odds förhållande
95% CI
Ålder
0,116
0.710
0,463, 1,088
Kön
0,775
1,069
0,677, 1,687
Borrmann typ
0,334
0,872
0,660, 1,152
djup invasion
0,017
0,438
0,222, 0,861
Lymfkörtel status
0.000
3,753
2,040, 6,905
Bcl-2 Review 0,047
0,577
0,336, 0,992
Univariat analys visade att Borrmann typ, djup invasion, lymfkörtel status, histologi, kön, och uttryck av bcl-2 var associerade med peritoneal återfall. Logistisk regression visade att djupet av invasionen, lymfkörtel status, histologi och bcl-2 var oberoende prediktiva faktorer för peritoneal återfall. Tumörlokalisation och Borrmann typ avsåg hematogena metastaser och tumör platsen var den enda oberoende förutsägande faktor. Det fanns ingen korrelation mellan kliniskt patologiska parametrar och loco-regional återfall.
Prognos av återkommande patienter
övergripande 5-års överlevnad var 52% för alla patienter. Fem års överlevnad var 58,9% och 45,5% i bcl-2 positiva och BCL-2 negativa patienterna. I BCL-2-positiva patienter, patologiskt stadium och tumörlokalisation påverkas avsevärt prognos, och patologiskt stadium var en oberoende prognostisk faktor. I BCL-2 negativa patienter, univariat analys visade att Borrmann typ, djup invasion, lymfkörtelmetastaser, tumörstorlek, tumörplacering och patologisk skede påverkas nämnvärt prognos. Multivariat analys visade att lymfkörtelmetastaser, tumörplacering, och patologiskt stadium var oberoende prognostiska faktorer.
Medianöverlevnadstiden för patienter med återfall var 22,7 månader. Medianöverlevnaden efter återfall var 6,7 månader. Enligt de olika upprepningsmönster, medianöverlevnadstiden efter peritoneal återfall, hematogena metastaser, loco-regional återfall, och fjärran lymfkörtelmetastaser var 5,7 månader (2,6-12,4), 7,3 månader (2,4 till 11,7), 7,0 månader (2,5 till 17,1), och 6,1 månader (3,9 till 7,9), respektive. Patienter med peritoneal och fjärran lymfkörtel återfall hade en kortare överlevnadstid; men detta var inte statistiskt signifikant.
Diskussion
De viktigaste resultaten av denna studie var att (1) peritoneal återfall var den vanligast förekommande återfall mönster efter kurativ kirurgi, och (2) djupet av invasionen, lymfkörtelmetastaser och negativa uttryck av bcl-2 var oberoende riskfaktorer för övergripande återfall.
Gastric cancer är en av de vanligaste maligniteter i världen. Även prognosen för patienter med magcancer har förbättrats till följd av bättre diagnosmetoder och behandlingsstrategier, är magcancer fortfarande den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterade dödsfall [2]. Den dystra prognosen för magcancer beror främst på frekvensen av återkommande och metastasering. Därför är det mycket viktigt att klargöra mönster för återfall och riskfaktorer för återfall, som kan bidra till genomförandet av postoperativ klinisk praxis och uppföljning.
I vår studie hade 151 (33,6%) av patienterna återfall under uppföljningen -up period. Den genomsnittliga tiden till återfall var 21,1 månader; 113 patienter (74,8%) fick återfall inom 2 år. Detta resultat visar att de flesta magcancer återfall inträffar inom 2 år, och är i linje med andra studier [10-12]. Yoo et al.
[12] rapporterade 508 patienter med återfall efter kurativ resektion för magcancer och visade att den genomsnittliga tid till återfall var 21,8 månader. Därför var det nödvändigt att förstärka uppföljning inom 2 år efter kurativ resektion.
Det har rapporterats att de vanligaste återkommande mönster är hematogen återfall och peritoneal spridning i magcancer [3, 12-14]. I vår serie, peritoneal återfall var den vanligaste mönstret, står för 38,4% av alla patienter med återfall, följt av hematogena metastaser (32,5%). Våra resultat är i överensstämmelse med tidigare studier [3, 12]. Maehara et al.
Rapporterats [15] att den peritoneala mönstret stod för 50% av fallen, hematogen återfall för 40% av fallen, och loco-regional återfall för 20%. Det finns dock fortfarande vissa meningsskiljaktigheter. En italiensk studie visade att det vanligaste återkommande mönster var loco-regional och står för 45% av alla återkommande fall [16]. Denna skillnad visade att det finns vissa skillnader i återfall mönster mellan östra och västra länder. Det är möjligt att den låga förekomsten av lokalt återfall i östra studier beror på den omfattande användningen av D2 lymfkörtel dissektion Upprepning.
Är ofta i mag cancerpatienter som genomgår efter radikal gastrektomi. Därför är det viktigt att identifiera patienter som löper en hög risk för återfall. I denna studie, univariat analys visade att Borrmann typ, djup av invasion och lymfkörtel status var förknippade med övergripande återfall. Logistisk regression visade att djupet av invasionen och lymfkörtelmetastaser var oberoende riskfaktorer för övergripande återfall. I överensstämmelse med våra resultat, har tidigare studier visat att traditionella kliniskt patologiska faktorer såsom serosala exponering, histologiska typ, djup invasion, och lymfkörtel metastas var riskfaktorer för återfall [17-19]. Men traditionella kliniskt patologiska faktorer är ibland otillräcklig för att förutsäga återfall. Ett antal studier har visat att biomarkörer, såsom tumörmarkörer [20, 21], vascular endothelial growth factor (VEGF) -familjen [22, 23], E-cadherin [24, 25], och mikroRNA [26], kan vara användbar för att förutsäga återfall av magcancer. Bcl-2 belägen vid kromosom 18q21, och kodar för ett protein 26-kDa-lokaliserade huvudsakligen i mitokondriemembranet [27]. Bcl-2-genen beskrevs först som en onkogen i follikulärt lymfom. Vissa studier har visat att överuttryck av bcl-2 undertryckte celldelning och förknippades med mindre aggressiva biologiska beteende [28, 29]. Det är dock fortfarande oklart värdet av bcl-2 i förutsäga magcancer upprepningar. I en tidigare studie fann vi att bcl-2 var signifikant associerad med prognosen hos patienter magcancer [7]. Därför hypotes vi att bcl-2 kan återspegla den biologiska natur av tumören, och skulle kunna utgöra en tillförlitlig indikator för att förutsäga återfall. Enligt våra resultat är den negativa uttryck av bcl-2 en oberoende riskfaktor för magcancer recurrence. Den exakta mekanismen är fortfarande oklart. Det är möjligt att bcl-2 påverkar gastric cancer återkommer genom att reglera tumörcell biologiskt beteende. Saegusa et al.
[28] rapporterade att majoriteten av Bcl-2 + cancerceller är i ett icke-fertila tillstånd, och den genomsnittliga uttrycket av Ki-67 märkningsindex och apoptotisk märkningsindex i bcl-2 + foci är betydligt lägre än den i bcl-2 foci. Aizawa et al.
[30] visade att uttryck av bcl-2 i avancerad magsäckscancer är förknippad med en lägre apoptotisk index och en bättre prognos. Pietenpol et al.
[31] rapporterade att överuttryck av bcl-2 hämmar tillväxten av flera solid-tumörcellinjer.
Slutsats
Sammanfattningsvis visade denna studie att peritoneal återfall var den mest gemensam återfall mönster efter botande gastrektomi. Djup invasion, lymfkörtelmetastaser och negativa uttryck av bcl-2 förutsäger större risk för återfall. Dessa upptäckter kan ge användbar information för uppföljning i magcancer patienter som genomgått kirurgi för resektion. Närmare bestämt är det nödvändigt att genomföra en intensiv uppföljningsplan för gastric patienter med negativt uttryck av bcl-2 cancerpatienter. Men den småskaliga och den retrospektiva designen var brister i den nuvarande studien. Ytterligare storskaliga, bör presumtiva studier utföras för att bekräfta nyttan av bcl-2 i att upptäcka tumörer återfall hos patienter med magcancer.
Notes
Jianghong Wu, Xiaowen Liu bidragit lika för detta arbete.
Förklaringar
Bekräftelser
Vi tackar Ben Liotta för att redigera det engelska språket i vår manuskript.
författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 12957_2013_1895_MOESM1_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 1 12957_2013_1895_MOESM2_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 2 12957_2013_1895_MOESM3_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 3 konkurrerande intressen
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande intressen.
Författare " bidrag
JHW, XWL och YNW tänkta och utformade experimenten. JHW och XWL utförde experimenten. JHW, XWL och HC analyserat data. HC och YNW bidrog reagens /material /analysverktyg. JHW och XWL skrev tidningen. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Kombinerad epitel-mesenkymala övergång med Cancerstamceller liknande markör som prediktorer för återfall efter radikal resektion för gastric cancer
• Jämförelse mellan bättre och dåligt differentierade lokalt avancerad magsäckscancer i preoperativ kemoterapi: en retrospektiv, jämförande studie med en enda tertiärvård institute