Predição de recorrência do tumor após a ressecção curativa em carcinoma gástrico baseado em Bcl-2-expressão

Predição de recorrência do tumor após a ressecção curativa em carcinoma gástrico baseado em Bcl-2 expressão da arte abstracta
Fundo
Atualmente não há fatores preditivos confiáveis ​​para recorrência do câncer gástrico. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a Bcl-2 expressão e risco de recorrência do câncer gástrico.
Métodos
De janeiro de 1996 a dezembro de 2007, 449 pacientes com câncer gástrico submetidos à ressecção curativa foram estudados retrospectivamente. Os níveis de expressão de Bcl-2 foram examinados por imuno-histoquímica. A regressão logística foi realizada para identificar fatores de risco independentes para recorrência global de cancro gástrico.
Resultados
151 pacientes (33,6%) recorrências experientes. O tempo médio de recorrência foi de 17,0 meses, 113 (74,8%) pacientes tiveram recorrência dentro de 2 anos. recidiva peritoneal foi o padrão mais prevalente, seguida de metástase hematogênica em que o fígado era o local mais comum. Profundidade de invasão, de metástases linfáticas e expressão negativa de Bcl-2 foram fatores de risco independentes para recorrência geral. O tempo de sobrevida global dos pacientes recorrentes foi de 22,7 meses. O tempo médio de sobrevivência após o retorno foi de 6,7 meses.
Conclusão
A profundidade da invasão, metástases linfáticas e expressão de Bcl-2 são fatores independentes para prever a recorrência de câncer gástrico.
Palavras-chave
recorrência do câncer gástrico fatores clinicopatológicos Bcl-2 Fundo
Embora a incidência de câncer gástrico tem vindo a diminuir substancialmente durante várias décadas, ainda é o quarto câncer mais comum ea segunda causa mais frequente de morte por câncer [1, 2]. Embora a maioria dos doentes com cancro gástrico de fase inicial pode ter tempos de sobrevivência a longo após a cirurgia, aproximadamente 40% dos pacientes morrem de recorrência, mesmo depois de submetido a uma cirurgia curativa [3]. A presença ou ausência de recorrência é amplamente considerado o indicador mais importante para a sobrevivência, como o prognóstico para pacientes com recidiva é extremamente sombrio. Portanto, é muito importante para predizer com precisão o risco de recorrência numa fase inicial, a fim de melhorar o prognóstico de pacientes com recidiva. No entanto, foi demonstrado que a rotina de seguimento após cirurgia para o cancro gástrico não é útil na detecção de recorrência precocemente [4]. Portanto, é essencial para investigar factores específicas que podem identificar subgrupos de pacientes com doença mais agressiva. Recentemente, alguns estudos têm mostrado que fatores patológicos, tais como status do nó de linfa, profundidade de invasão, e o tamanho do tumor, desempenham um papel crucial na previsão de recorrência após gastrectomia [5, 6]. No entanto, é difícil prever a recorrência usando fatores clínico-patológicos comuns. Tendo em conta que alguns marcadores biológicos, tais como oncogenes, genes supressores de tumores, reguladores do ciclo celular, e genes de reparo de DNA, estão relacionados com a gênese do tumor, crescimento, invasão e metástase, muitos investigadores estão à procura de novos factores preditivos entre esses marcadores moleculares. Em um estudo anterior, avaliamos o valor prognóstico de marcadores biológicos, tais como p53, Bcl-2, bax, e c-myc no câncer gástrico, e descobriu que Bcl-2 foi significativamente associada com o prognóstico em pacientes com câncer gástrico [7]. Portanto, temos a hipótese de que a Bcl-2 expressão pode refletir as características do tumor e, assim, servir como um indicador confiável para prever a recorrência. O objetivo do presente estudo é determinar se a Bcl-2 expressão pode prever a recorrência da doença após a ressecção curativa em pacientes com câncer gástrico.
Métodos
Pacientes
entre janeiro de 1996 e dezembro de 2007, 4.426 pacientes com diagnóstico histológico de adenocarcinoma gástrico primário submetidos à gastrectomia no Departamento de câncer de estômago e de Tecidos Moles Sarcoma na Universidade Fudan Shanghai Cancer Center. Destes pacientes, foram selecionados 449 casos. espécimes desses pacientes foram coradas por imunohistoquímica. Os dados foram obtidos a partir de relatórios operacionais e patológicos dos pacientes. dados de seguimento foram obtidos por telefone, carta, e o banco de dados clínico ambulatorial. Estadiamento foi realizado de acordo com a União de Controle do Câncer Internacional (UICC) Classificação TNM Staging para o carcinoma do estômago
(Sétima Edição, 2010) [8]. Um acompanhamento de todos os pacientes foi realizada de acordo com nosso protocolo padrão (a cada três meses para, pelo menos, 2 anos, a cada 6 meses para os próximos 3 anos, e depois de 5 anos a cada 12 meses para a vida). Os itens de check-up incluiu exame físico, exame tumor-marcador, ultra-sonografia, radiografia de tórax, tomografia computadorizada e exame endoscópico. O alcance do acompanhamento foi de janeiro de 1996 a maio de 2010. O tempo médio de acompanhamento foi de 76,5 meses no momento da análise. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes, e este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Shanghai Cancer Center da Universidade de Fudan. O estudo foi retrospectivo.
Imuno coloração
Bcl-2 foi detectada pelo método de imuno-histoquímica. Os anticorpos foram adquiridos da Dako (Hamburgo, Alemanha). coloração imuno-histoquímica foi realizada pelo método de sistema de polímero marcado melhorado. As secções de parafina foram deparaffinised com xileno e hidratadas com etanol /água desionizada. As secções foram então incubadas com metanol /0,3% de H 2O 2 e bloqueadas com coloração não específica reagente de bloqueio. Após incubação durante a noite a 4 ° C com anti-Bcl-2 de anticorpo (diluído 1: 100), as secções foram tratadas de acordo com métodos padrão de imunoperoxidase. secções de controlo negativo foram submetidos ao mesmo procedimento, excepto que o primeiro anticorpo foi substituído por PBS. Nenhuma coloração positiva foi observada nos controlos. A localização da coloração para Bcl-2 foi predominantemente no citoplasma e cytomembrane
coloração imuno-histoquímica:. Pontuar
Todos os cortes foram avaliados de forma independente por dois patologistas. Foram avaliadas a percentagem de células imunorreactivas e intensidades de coloração. A percentagem de células imunorreactivas foi graduada numa escala de 0 a 4: sem coloração foi pontuada como 0, 1 a 10% de células coradas pontuado como 1, 11 a 50% de 2, 51 a 80% em 3, e 81 a 100% como 4. As intensidades de coloração foram graduadas de 0 a 3: 0 foi definido como negativo, como uma fraco, como 2 moderado e 3 como forte, respectivamente. Os dados em bruto foram convertidos para uma avaliação imuno-histoquímica (IHS), multiplicando as pontuações de intensidade e quantidade. Uma pontuação IHS de 9 a 12 foi considerado como forte imunorreactividade (+++), de 5 a 8 como moderada (++), 1 a 4 como fraca (+), e 0 como negativa (-). Casos com uma pontuação inferior a 1 foram considerados como negativos, e aqueles com ≥1 foram considerados positivos [9].
Análise estatística
Os dados foram apresentados como a média ± SD ou a mediana para parâmetros numéricos. características dos pacientes e características clínicas foram analisadas usando o Student bicaudal t
-teste ou teste do qui-quadrado de Pearson, conforme apropriado. Fatores que foram considerados de importância potencial na análise univariada foram incluídas na análise multivariada. A regressão logística foi usada para estimar fatores relacionados para recorrência. O nível aceito de significância foi de P Art < 0,05. . As análises e gráficos estatísticos foram realizados com o pacote estatístico SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA)
Resultados
características clínicopatológicos
O estudo incluiu 307 homens e 142 pacientes do sexo feminino (2,2: 1 ), com uma idade média de 57 anos. Houve 49 (10,9%) cancros gástricos precoces e 400 (89,1%) avançou cancros gástricos. De acordo com o tipo histológico, foram observados tumores bem diferenciados em 7 (1,5%) pacientes, moderadamente diferenciado em 149 (33,2%) pacientes, e poorlydifferentiated tumores nos 293 (65,3%) pacientes restantes. De acordo com o tipo de Borrmann, 49 (10,9%) eram do tipo 0, 32 (7,1%) tipo I, 14 (3,1%) do tipo II, 333 (74,2%) do tipo III, e 21 (4,7%) do tipo IV. Destes pacientes, 147 (32,7%) tinham tumores localizados no terço superior do estômago, 65 (14,5%) tinham tumores no terço médio, 212 (47,2%) tinham tumores no terço inferior, e 25 (5,6%) tinham tumores que ocupam dois terços ou mais do estômago. Metástase linfonodal foi observado em 326 pacientes, ea taxa de metástase foi de 72,6%. A distribuição de estágio patológico foi a seguinte: 35 (7,8%) pacientes pertenciam ao estágio IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%) III-B, e 93 (20,7%) IIIC.
expressão de Bcl-2 Bcl-2
expressão foi positiva em 21,2% de todos os tecidos de cancro gástrico. Bcl-2 coloração foi observada no citoplasma e cytomembrane de células de carcinoma (Figura 1). Bcl-2 foi associada com a fase patológica. Não houve correlação entre a Bcl-2 e outros parâmetros patológicos, como idade, sexo, tipo histológico, tipo de Borrmann, localização do tumor, ou o tamanho do tumor. Figura 1 A expressão positiva de bcl-2 imuno-histoquímica em tecido de cancro gástrico. A ampliação original × 100, ampliação original B × 400.
Tempo de recorrência e padrão de recorrência
recorrência ocorreu em 151 (33,6%) pacientes durante o período de acompanhamento. O tempo médio de recorrência foi de 17,0 meses (intervalo de 2,0 a 91,0 meses), eo tempo médio foi de 21,1 meses. Entre os pacientes com recorrência, 113 (74,8%) tiveram recorrência dentro de 2 anos. A frequência e taxa de recorrência são demonstradas na Figura 2. Figura 2 Frequência de recorrência após a operação curativa por ano.
Dos 151 pacientes com recorrência, 58 (38,4%) foram diagnosticados com recidiva peritoneal, que foi o, 49 (32,5%) pacientes mais prevalentes tinha metástases hematogênicas, que foi o segundo padrão de recorrência mais comum, e fígado foi o mais freqüentemente envolvido órgão; foi implicado em 57,1% de todos os pacientes recorrentes. Outros recorrências foram metástases de nódulos linfáticos distantes locorregional (n = 34, 22,5%), (n = 8, 5,3%), ou em locais múltiplos (n = 2, 1,3%) (Figura 3). Figura 3 Padrão de recorrência de após gastrectomia curativa. factores relacionados com recorrência
A análise univariada mostrou que tipo de Borrmann, profundidade de invasão, status do nó de linfa, e expressão de Bcl-2 foram associados com recorrência global, enquanto a idade, sexo, tipo histológico, localização do tumor e tumor tamanho não foram (Tabela 1). A regressão logística foi utilizada para identificar os fatores de risco independentes para recorrência geral. Foi demonstrado que a profundidade de invasão, de metástases linfáticas e expressão negativa de Bcl-2 foram fatores preditivos independentes para recorrência geral (Tabela 2) .table 1 Análise univariada dos fatores de risco para a recorrência no câncer gástrico
Não recorrência
recorrência
P-valor
(n = 298)
(n = 151)
Idade (anos), significa ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
Sexo, masculino /feminino
203/95
104/47
0,871
tamanho do tumor (cm ), média ± SD
4,8 ± 2,5
5,3 ± 2,7
0,054
localização do tumor, superior /média /baixa /dois ou mais
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
tipo Borrmann, 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0,002
Histologia, bem /moderada /pouco diferenciado
5/101/192
2/48/101
0,899
profundidade de invasão, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0.000
status do nó de linfa, negativo /Tablet positiva 108/190
15/136
0.000
Bcl-2, negativo /positivo
226/72
128/23
0,029
Tabela 2 multivariados analysisof fatores de risco para a recorrência no câncer gástrico

P-valor da variável
Odds rácio
95% CI
Idade
0,116
0,710
0,463, 1,088
Sexo
0,775
1.069
0,677, 1,687
tipo Borrmann
0,334
0,872
0.660, 1.152
profundidade de invasão
0,017
0,438
0,222, 0,861
linfa status do nó
0.000
3.753
2.040, 6.905
Bcl-2
0,047
0,577
0,336, 0,992
A análise univariada mostrou que tipo de Borrmann, profundidade de invasão, status do nó de linfa, histologia, sexo, e expressão de Bcl-2, foram associados com a recorrência peritoneal. A regressão logística mostrou que a profundidade de invasão, status do nó de linfa, histologia e Bcl-2 foram fatores preditivos independentes para recidiva peritoneal. localização do tumor e tipo Borrmann estavam relacionadas com metástases hematogênicas, e localização do tumor foi o único fator preditivo independente. Não houve correlação entre os parâmetros clínico e recorrência loco-regional. Reliable Prognosis dos pacientes recorrentes
A taxa de sobrevida global em 5 anos foi de 52% para todos os pacientes. taxa de sobrevivência de cinco anos foi de 58,9% e 45,5% nos pacientes negativos Bcl-2 positivas e Bcl-2, respectivamente. Em 2 Bcl-positivos, estágio patológico e localização do tumor afetou significativamente o prognóstico, e estágio patológico foi um fator prognóstico independente. Em 2 Bcl-pacientes negativos, a análise univariada mostrou que tipo de Borrmann, profundidade de invasão, metástases em linfonodos, tamanho do tumor, localização do tumor e estágio patológico afetou significativamente o prognóstico. A análise multivariada mostrou que metástases linfáticas, localização do tumor e estágio patológico foram fatores prognósticos independentes.
O tempo médio de sobrevivência de pacientes com recorrência foi de 22,7 meses. O tempo médio de sobrevivência após o retorno foi de 6,7 meses. De acordo com os diferentes padrões de retorno, o tempo médio de sobrevivência após o retorno da peritoneal, metástases hematogênicas, a recorrência loco-regional e metástases em linfonodos distantes eram 5,7 meses (2,6-12,4), 7,3 meses (2,4 a 11,7), 7,0 meses (2,5 a 17.1), e 6,1 meses (3,9 a 7,9), respectivamente. Pacientes com peritoneal e distante recorrência linfonodo teve um tempo de sobrevida mais curta; no entanto, este não foi estatisticamente significativa.
Discussão
As principais conclusões deste estudo foram que (1) recidiva peritoneal foi o padrão de recorrência mais prevalente após a cirurgia curativa, e (2) a profundidade da invasão, metástases linfáticas e expressão negativa de Bcl-2 foram fatores de risco independentes para recorrência geral.
o câncer gástrico é um dos tumores malignos mais comuns em todo o mundo. Embora o prognóstico de pacientes com câncer gástrico melhorou como resultado de melhores técnicas de diagnóstico e estratégias terapêuticas, câncer gástrico ainda é a segunda principal causa de mortes relacionadas ao câncer [2]. O prognóstico sombrio de câncer gástrico é devido, principalmente, à frequência de recorrência e metástase. Portanto, é muito importante esclarecer o padrão de recorrência e os fatores de risco para recorrência, o que pode contribuir para a condução da prática clínica pós-operatória e seguimento.
Em nosso estudo, 151 (33,6%) pacientes tiveram recorrência durante o acompanhamento período -up. O tempo médio de recorrência foi de 21,1 meses; 113 pacientes (74,8%) tiveram recorrência dentro de 2 anos. Este resultado mostra que a maior recorrência de câncer gástrico ocorre dentro de 2 anos, e é consistente com outros estudos [10-12]. Yoo et al.
[12] relatou 508 pacientes com recidiva após a ressecção curativa para câncer gástrico e mostrou que a média de tempo de recorrência foi de 21,8 meses. Por isso, foi necessário reforçar o acompanhamento no prazo de 2 anos após a ressecção curativa.
Foi relatado que os padrões de retorno mais comuns são recorrência hematogênica e disseminação peritoneal no câncer gástrico [3, 12-14]. Em nossa série, recorrência peritoneal foi o padrão mais comum, respondendo por 38,4% de todos os pacientes com recorrência, seguido de metástases hematogênicas (32,5%). Os nossos resultados são consistentes com estudos anteriores [3, 12]. Maehara et al.
Relatados [15] que o padrão peritoneal foi responsável por 50% dos casos, a recorrência hematogênica por 40% dos casos, e recorrência loco-regional para 20%. No entanto, ainda existem algumas disputas. Um estudo italiano mostrou que o padrão de recorrência mais comum foi loco-regional, sendo responsável por 45% de todos os casos recorrentes [16]. Esta disparidade indicou que há algumas diferenças nos padrões de recorrência entre os países orientais e ocidentais. É possível que a baixa incidência de recorrência local em estudos do Oriente é devido ao uso extensivo de dissecção D2 linfonodo.
Recorrência é frequente em doentes com cancro gástrico depois de submetidos a gastrectomia radical. Portanto, é importante para identificar pacientes com alto risco de recorrência. Neste estudo, a análise univariada mostrou que tipo de Borrmann, profundidade de invasão, e estado dos linfonodos foram associados com recorrência geral. A regressão logística demonstrou que a profundidade de invasão e metástases em linfonodos foram fatores de risco independentes para recorrência geral. Consistente com os nossos achados, estudos anteriores mostraram que fatores clinicopatológicos tradicionais, tais como a exposição serosa, tipo histológico, profundidade de invasão e metástases em linfonodos foram fatores de risco para a recorrência [17-19]. No entanto, fatores clinicopatológicos tradicionais são por vezes inadequados para a previsão de recorrência. Um número de estudos têm indicado que os biomarcadores, tais como marcadores tumorais [20, 21], o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) familiar [22, 23], E-caderina [24, 25], e microARNs [26], pode ser útil para prever a recorrência de câncer gástrico. Bcl-2 localizado no cromossoma 18q21, e codifica uma proteína de 26 kDa localizada principalmente na membrana mitocondrial [27]. O gene bcl-2 foi descrito pela primeira vez como um oncogene em linfoma folicular. Alguns estudos têm mostrado que a sobre-expressão de proliferação celular Bcl-2 suprimida e foi associado com o comportamento biológico menos agressivo [28, 29]. No entanto, o valor de Bcl-2 na previsão de recorrências cancro gástrico ainda não é clara. Em um estudo anterior, descobrimos que Bcl-2 foi significativamente associada com o prognóstico em pacientes com câncer gástrico [7]. Portanto, temos a hipótese de que a Bcl-2 pode refletir a natureza biológica do tumor, e serviria como um indicador confiável para prever a recorrência. De acordo com nossos resultados, a expressão negativa de Bcl-2 é um fator de risco independente para recorrência do câncer gástrico. O mecanismo exato ainda não está claro. É possível que a proteína Bcl-2 afecta a recorrência do cancro gástrico, regulando o comportamento biológico da célula tumoral. Saegusa et al.
[28] relataram que a maioria das 2 Bcl-+ células cancerosas estão num estado não proliferativo, e a expressão média de Ki-67 índice de marcação e índice de marcação apoptótica em focos de Bcl-2 + são significativamente mais baixos do que em Bcl-2 focos. Aizawa et ai.
[30] demonstraram que a expressão de Bcl-2 no cancro gástrico avançado está associada com um índice apoptótico inferior e um prognóstico melhor. Pietenpol et ai.
[31] relataram que a sobre-expressão de bcl-2 inibe o crescimento de várias linhas de células de tumor sólido.

Conclusão Em conclusão, o presente estudo demonstrou que a recorrência peritoneal foi o mais padrão de recorrência comum após gastrectomia curativa. Profundidade de invasão, de metástases linfáticas e expressão negativa de Bcl-2 prever maior risco de recorrência. Esses achados podem fornecer alguma informação útil para acompanhamento em pacientes com câncer gástrico submetidos a cirurgia de ressecção. Especificamente, é necessário proceder a um plano de seguimento intensivo para doentes com cancro gástrico com expressão negativa de Bcl-2. No entanto, a pequena escala e o desenho retrospectivo foram deficiências do estudo. Além disso em grande escala, estudos prospectivos devem ser realizados para validar a utilidade de Bcl-2 na detecção de recorrência do tumor em pacientes com câncer gástrico.
Notas
Jianghong Wu, Xiaowen Liu contribuíram igualmente para este trabalho.
Declarações
Agradecimentos
Agradecemos Ben Liotta para a edição do idioma Inglês em nosso manuscrito.
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' contribuições
JHW, XWL e YNW concebido e desenhado os experimentos. JHW e XWL realizados os experimentos. JHW, XWL HC e os dados analisados. HC e YNW contribuiu reagentes /materiais /ferramentas de análise. JHW e XWL escreveu o jornal. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

• epitelial-mesenquimal combinada de transição com marcador de células-tronco como câncer como preditores de recorrência após ressecção radical para a transição epitelial-mesenquimal cancer
• Comparação entre melhor e pouco diferenciado, localmente avançado câncer gástrico em quimioterapia pré-operatória: estudo retrospectivo, comparativo em um único comparação institute