Prediksjon av svulst tilbakefall etter kurativ reseksjon i magekreft basert på BCL-2 uttrykk

Prediksjon av svulst tilbakefall etter kurativ reseksjon i magekreft basert på BCL-2 uttrykk
Abstract
Bakgrunn
Det er ikke pålitelige prediktive faktorer for magekreft tilbakefall. Målet med denne studien var å evaluere forholdet mellom BCL-2 uttrykk og risikoen for magekreft tilbakefall.
Metoder
Fra januar 1996 til desember 2007, ble 449 magekreftpasienter som gjennomgikk kurativ reseksjon retrospektivt undersøkt. Uttrykket nivåer av BCL-2 ble undersøkt ved immunhistokjemi. Logistisk regresjon ble utført for å identifisere uavhengige risikofaktorer for generelle tilbakefall av magekreft.
Resultater
151 pasienter (33,6%) opplevde tilbakefall. Median tid til tilbakefall var 17,0 måneder, 113 (74,8%) pasienter hadde tilbakefall innen 2 år. Peritoneal tilbakefall var den mest utbredte mønster, etterfulgt av hematogenous metastase i hvilken leveren var det vanligste. Dybde på invasjon, lymfeknutemetastaser, og negative uttrykk for BCL-2 var uavhengige risikofaktorer for generelle gjentakelse. Den totale overlevelsestiden for tilbakevendende pasientene var 22,7 måneder. Median overlevelse etter tilbakefall var 6,7 måneder.
Konklusjon
dybden av invasjonen, lymfeknutemetastaser og uttrykk av BCL-2 er uavhengige faktorer for å forutsi magekreft tilbakefall.
Nøkkelord
Magekreft tilbakefall clinicopathological faktorer bCL-2 Bakgrunn
Selv om forekomsten av magekreft har vært fallende betydelig i flere tiår, er det fortsatt den fjerde vanligste kreftformen og den nest hyppigste årsaken til kreftdød [1, 2]. Selv om de fleste pasienter med tidlig stadium magekreft kan ha lange overlevelsestid etter operasjonen, ca 40% av pasientene dør av tilbakefall, selv etter under kurativ kirurgi [3]. Tilstedeværelse eller fravær av tilbakefall er ansett å være den viktigste prediktor for overlevelse, som prognosen for pasienter med tilbakefall er svært dystert. Derfor er det svært viktig å nøyaktig forutsi risikoen for tilbakefall på et tidlig stadium for å forbedre prognosen for pasienter med tilbakefall. Imidlertid har det blitt demonstrert at rutinen oppfølging etter kirurgi for magekreft er ikke nyttig i påvisning av tilbakefall på et tidlig stadium [4]. Derfor er det viktig å undersøke bestemte faktorer som kan identifisere undergrupper av pasienter med mer aggressiv sykdom. Nylig har noen studier vist at patologiske faktorer som lymfeknute status, dybden av invasjonen, og tumor størrelse, spiller en avgjørende rolle i å forutsi tilbakefall etter gastrektomi [5, 6]. Det er imidlertid vanskelig å forutsi gjentakelse ved hjelp av vanlige clinicopathological faktorer. Gitt at noen biologiske markører som onkogener, tumor-suppressor gener, celle-syklus regulatorer, og DNA-reparasjonsgener, er relatert til tumor tilblivelse, vekst, invasjon og metastasering, mange etterforskere i jakten på nye prediktive faktorer blant disse molekylære markører. I en tidligere studie, evaluerte vi den prognostiske verdi av biologiske markører som for eksempel p53, bcl-2, Bax, og c-myc i magekreft, og fant at bcl-2 var signifikant assosiert med prognose i magekreftpasienter [7]. Derfor hypotese vi at bcl-2-ekspresjon kan reflektere tumoregenskaper, og således tjene som en pålitelig indikator for å forutsi tilbakefall. Målet med denne studien er å finne ut om BCL-2 uttrykk kan forutsi tilbakefall av sykdommen etter kurativ reseksjon hos pasienter med magekreft.
Metoder
Pasienter
Mellom januar 1996 og desember 2007 4,426 pasienter med histologisk bekreftet primære adenokarsinom i ventrikkel gikk gastrektomi ved Institutt for magekreft og bløtvevssarkom i Fudan University i Shanghai Cancer Center. Ut av disse pasientene ble 449 tilfeller valgt. Disse pasientenes prøvene ble farget immunohistochemically. Data ble hentet fra pasientenes operative og patologiske rapporter. Oppfølgingsdata ble innhentet via telefon, brev, og poliklinisk kliniske database. Staging ble utført i henhold til Union for International Cancer Control (UICC) TNM staging Klassifisering for Carcinoma av magen plakater (Seventh Edition, 2010) [8]. En oppfølging av alle pasienter ble gjennomført i henhold til vår standard protokoll (hver tredje måned i minst 2 år, hver 6. måned for de neste 3 år, og etter 5 år hver 12. måned for livet). Innsjekking-up elementer inkludert fysisk undersøkelse, tumor-markør undersøkelse, ultralyd, røntgen thorax, computertomografi skanning, og endoskopisk undersøkelse. Utvalget av oppfølgingen var fra januar 1996 til mai 2010. Median oppfølgingstid var 76,5 måneder på tidspunktet for analyse. Skriftlig informert samtykke var innhentet fra alle pasientene, og denne studien ble godkjent av etisk komité Shanghai Cancer Center of Fudan University. Studien var retrospektiv.
Immunhistokjemisk farging
BCL-2 ble oppdaget av immunhistokjemisk metode. Antistoffer ble kjøpt fra Dako (Hamburg, Tyskland). Immunhistokjemisk farging ble utført ved den forbedrede merket polymersystem metode. Parafinsnitt ble deparaffinised med xylen og hydrert med etanol /deionisert vann. Seksjonene ble deretter inkubert med metanol /0,3% H 2o 2 og blokkert med ikke-spesifikk farging blokkerende reagens. Etter inkubering over natten ved 4 ° C med anti-bcl-2-antistoff (fortynnet 1: 100), ble delene behandlet i henhold til standard immunoperoxidase metoder. Negative kontroll seksjonene ble underkastet den samme prosedyre, med unntak av at det første antistoffet ble erstattet med PBS. Ingen positiv farging ble observert i kontrollene. Plasseringen av farging for BCL-2 var hovedsakelig i cytoplasma og cytomembrane
Immunhistokjemisk farging. Ledelsen
Alle skiver ble uavhengig evaluert av to patologer. Prosentandelen av immunreaktive celler og fargeintensitet ble evaluert. Prosentandelen av immunreaktive celler ble gradert på en skala fra 0 til 4: ingen farging ble scoret som 0, 1 til 10% av celler farget scoret som en 11 til 50% som 2, er 51 til 80% som 3, og 81 til 100% for eksempel 4. De fargeintensitetene ble gradert fra 0 til 3: 0 ble definert som negativ, en så svak, 2 som moderat, og 3 som henholdsvis sterk,. Rådata ble konvertert til en immunhistokjemisk score (IHS) ved å multiplisere mengde og intensitet score. En IHS score på 9 til 12 ble vurdert som en sterk immunoreaktivitet (+++), 5 til 8 som moderat (++), 1 til 4 som svak (+),, 0 som negativ (-). Saker med en score på mindre enn 1 ble vurdert som negative, og de med ≥1 ble ansett som positivt [9].
Statistisk analyse
Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD eller median for numeriske parametere. Pasientenes funksjoner og kliniske karakteristika ble analysert ved hjelp av den tosidige Student t
-test eller Pearson chi-kvadrat test som passer. Faktorer som ble ansett av potensielle betydning på univariat analyse ble inkludert i multivariat analyse. Logistisk regresjon ble brukt for å estimere relaterte faktorer for tilbakefall. Den aksepterte nivået av betydning var P
< 0,05. . Statistiske analyser og grafikk ble utført ved hjelp av SPSS 13.0 statistikkpakke (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)
Resultater
Clinicopathological egenskaper
Studien inkluderte 307 mannlige og 142 kvinnelige pasienter (2,2: 1 ) med en gjennomsnittsalder på 57 år. Det var 49 (10,9%) tidlig mage kreft og 400 (89,1%) avansert magekreft. I henhold til histologisk type var godt differensierte tumorer observert i 7 (1,5%) pasienter, moderat differensiert i 149 (33,2%) pasienter, og poorlydifferentiated tumorer i de gjenværende 293 (65,3%) pasienter. Ifølge Borrmann type, 49 (10,9%) var typen 0, 32 (7,1%) type I, 14 (3,1%) type II, 333 (74,2%) type III, og 21 (4,7%) type IV. Av disse pasientene, 147 (32,7%) hadde svulster som befinner seg i den øvre tredjedel av magesekken, 65 (14,5%) hadde svulster i den midtre tredjedel, 212 (47,2%) hadde svulster i den nedre tredjedel, og 25 (5,6%) hadde svulster opptar to tredjedeler eller mer av magen. Lymfeknutemetastase ble observert hos 326 pasienter, og metastase rente var 72,6%. Fordelingen av patologisk trinn var som følger: 35 (7,8%) pasienter tilhørte stadium IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%) IIIB, og 93 (20,7%) IIIC.
uttrykk av BCL-2
BCL-2 uttrykk var positiv i 21,2% av alle mage kreft vev. Bcl-2-farging ble observert i cytoplasma og cytomembrane av carcinoma celler (figur 1). Bcl-2 ekspresjon er assosiert med patologisk stadium. Det var ingen korrelasjon mellom bcl-2 og andre patologiske parametre, slik som alder, kjønn, histologisk type Borrmann typen, tumor sted, eller tumorstørrelse. Figur 1 Positiv uttrykk for BCL-2 immunhistokjemi i magekreft vev. En opprinnelig forstørrelse × 100, B opprinnelige forstørrelse × 400.
Tid til tilbakefall og gjentakelse mønster
Tilbakefall skjedde i 151 (33,6%) av pasientene i løpet av oppfølgingsperioden. Median tid til tilbakefall var 17,0 måneder (variasjon fra 2,0 til 91,0 måneder), og mellomtiden var 21,1 måneder. Blant pasienter med tilbakefall, 113 (74,8%) hadde tilbakefall innen 2 år. Hyppigheten og frekvensen av tilbakefall er vist i Figur 2. Figur 2 Frekvens av tilbakefall etter kurativ operasjon av året.
Av de 151 pasienter med tilbakefall, 58 (38,4%) ble diagnostisert med peritoneal tilbakefall, som var de mest utbredte, 49 (32,5%) av pasientene hadde hematogene metastaser, som var den nest vanligste gjentakelse mønster, og leveren var hyppigst involvert organ; det ble innblandet i 57,1% av alle tilbakevendende pasienter. Andre tilbakefall ble lokoregionalt (n = 34, 22,5%), fjernt lymfeknutemetastaser (n = 8, 5,3%), eller på flere steder (n = 2, 1,3%) (figur 3). Figur 3 Mønster for tilbakefall av etter kurativ gastrektomi.
Gjentakelse-relaterte faktorer
Univariat analyse viste at Borrmann type, dybde av invasjonen, lymfeknute status, og uttrykk for BCL-2 ble forbundet med total tilbakefall, mens alder, kjønn, histologisk type svulst plassering, og tumor størrelse var ikke (tabell 1). Logistisk regresjon ble benyttet for å identifisere de uavhengige risikofaktorer for generelle gjentakelse. Det ble demonstrert at dybden av invasjonen, lymfeknutemetastaser, og negative uttrykk for BCL-2 ble uavhengige prediktive faktorer for generell tilbakefall (tabell 2) .table en Univariat analyse av risikofaktorer for tilbakefall i magekreft
Nei gjentakelse
tilbakefall
P-verdi product: (n = 298) product: (n = 151)
Alder (år), gjennomsnitt ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
kjønn, mann /kvinne
203/95
104/47
0,871
Tumor størrelse (cm ), gjennomsnitt ± SD
4,8 ± 2,5
5,3 ± 2,7
0,054
Tumor beliggenhet, øvre /midtre /nedre /to eller flere
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
Borrmann type, 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0,002
Histologi, godt /moderat /dårlig differensiert
5/101/192
2/48/101
0,899
Dybde invasjon, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0.000
lymfeknutestatus, negativ /positiv
108/190
15/136
0.000
BCL-2, negativ /positiv
226/72
128/23
0,029
Tabell 2 Multivariate analysisof risikofaktorer for tilbakefall i magekreft
Variabel
P-verdi
Odds forholdet
95% KI
Age
0,116
0,710
0,463, 1,088
Kjønn
0,775
1,069
0,677, 1,687
Borrmann typen
0,334
0,872
0,660, 1,152
Dybde invasjon
0,017
0,438
0,222, 0,861
lymfeknutestatus
0.000
3,753
2,040, 6,905
BCL-2
0,047
0,577
0,336, 0,992
Univariat analyse viste at Borrmann type, dybde av invasjonen, lymfeknute status, histologi, kjønn, og uttrykk for bCL-2 ble assosiert med peritoneal tilbakefall. Logistisk regresjon viste at dybden av invasjonen, lymfeknute status, histologi, og BCL-2 var uavhengige prediktive faktorer for peritoneal gjentakelse. Tumor plassering og Borrmann typen var knyttet til hematogene metastaser og tumor plassering var den eneste uavhengige prediktiv faktor. Det var ingen sammenheng mellom clinicopathological parametere og lokoregionalt tilbakefall.
Prognose av residiverende pasienter
samlet 5-års overlevelse var 52% for alle pasienter. Fem års overlevelse var 58,9% og 45,5% i BCL-2 positive og BCL-2 negative pasienter hhv. I BCL-2-positive pasienter, patologisk stadium og svulst plassering betydelig påvirket prognose, og patologisk stadium var en uavhengig prognostisk faktor. I BCL-2-negative pasienter, univariat analyse viste at Borrmann type, dybde av invasjonen, lymfeknutemetastaser, tumorstørrelse, svulst plassering og patologisk stadium betydelig påvirket prognose. Multivariat analyse viste at lymfeknutemetastaser, tumorlokalisasjon og patologisk stadium var uavhengige prognostiske faktorer.
Median overlevelse av pasienter med tilbakefall var 22,7 måneder. Median overlevelse etter tilbakefall var 6,7 måneder. Ifølge de ulike tilbakefall mønstre, median overlevelse etter peritoneal tilbakefall, hematogene metastaser, lokoregionalt tilbakefall, og fjerne lymfeknutemetastaser var 5,7 måneder (02.06 til 12.04), 7,3 måneder (2,4 til 11,7), 7,0 måneder (2,5 til 17.1), og 6,1 måneder (3,9 til 7,9), respektivt. Pasienter med peritoneal og fjerne lymfeknute tilbakefall hadde en kortere overlevelsestid; men dette var ikke statistisk signifikant.
Diskusjon
De viktigste funnene i denne studien var at (1) peritoneal tilbakefall var den mest utbredte gjentakelse mønster etter kurativ kirurgi, og (2) dybden av invasjonen, lymfeknutemetastaser og negativ ekspresjon av bcl-2 var uavhengige risikofaktorer for generell tilbakefall.
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er en av de mest vanlige ondartede sykdommer i verden. Selv om prognosen for pasienter med magekreft har økt som følge av bedre diagnostiske teknikker og terapeutiske strategier, er magekreft fremdeles den nest største årsaken til kreft-relaterte [2] dødsfall. Den dystre prognose av magekreft skyldes i hovedsak hyppigheten av tilbakefall og metastasering. Derfor er det svært viktig å avklare mønster av tilbakefall og risikofaktorer for tilbakefall, noe som kan bidra til gjennomføringen av postoperativ klinisk praksis og oppfølging.
I vår studie, 151 (33,6%) pasienter fikk tilbakefall i løpet av oppfølgings -up periode. Gjennomsnittlig tid til tilbakefall var 21,1 måneder; 113 pasienter (74,8%) fikk tilbakefall innen 2 år. Dette resultatet viser at de fleste magekreft tilbakefall skjer innen 2 år, og er i samsvar med andre studier [10-12]. Yoo et al.
[12] rapporterte 508 pasienter med tilbakefall etter kurativ reseksjon for magekreft og viste at den gjennomsnittlige lengden av tid til tilbakefall var 21,8 måneder. Derfor var det nødvendig å forsterke oppfølging innen 2 år etter kurativ reseksjon.
Det har blitt rapportert at de vanligste tilbakefall mønstre er hematogenous tilbakefall og peritoneal formidling i magekreft [3, 12-14]. I vår serie, peritoneal tilbakefall var det vanligste mønsteret, sto for 38,4% av alle pasienter med tilbakefall, etterfulgt av hematogene metastaser (32,5%). Våre resultater er i overensstemmelse med tidligere studier [3, 12]. Maehara et al.
Rapportert [15] at peritoneal mønsteret sto for 50% av tilfellene, hematogenous tilbakefall for 40% av tilfellene, og lokoregionalt tilbakefall for 20%. Men det er fortsatt noen tvister. En italiensk studie viste at den vanligste gjentakelse mønster var lokoregionalt, sto for 45% av alle tilbakevendende tilfeller [16]. Dette misforholdet indikerte at det er noen forskjeller i tilbakefall mønstre mellom østlige og vestlige land. Det er mulig at den lave forekomsten av lokalt tilbakefall i Eastern studier skyldes utstrakt bruk av D2 lymph-node disseksjon.
Tilbakefall er hyppig i mage kreftpasienter etter under radikal gastrektomi. Derfor er det viktig å identifisere pasienter med en høy risiko for tilbakefall. I denne studien univariat analyse viste at Borrmann typen, dybde av invasjon, og lymfeknute status var assosiert med generell tilbakefall. Logistisk regresjon viste at dybden av invasjonen og lymfeknutemetastaser var uavhengige risikofaktorer for generelle gjentakelse. I samsvar med våre funn, har tidligere studier vist at tradisjonelle clinicopathological faktorer som serøse eksponering, histologisk type dybde av invasjonen, og lymfeknutemetastase var risikofaktorer for tilbakefall [17-19]. Men tradisjonelle clinicopathological faktorer er ofte utilstrekkelig for prediksjon av tilbakefall. En rekke studier har indikert at biomarkører, slik som tumor markører [20, 21], vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) familie [22, 23], E-cadherin [24, 25], og microRNAs [26], kan bli nyttig for å forutsi tilbakefall av magekreft. BCL-2 ligger på kromosom 18q21, og koder for et 26-kDa protein lokalisert hovedsakelig i mitokondriemembranen [27]. BCL-2-genet ble først beskrevet som et onkogen i follikulært lymfom. Noen studier har vist at overekspresjon av bcl-2 undertrykte cellulær proliferasjon og er forbundet med mindre aggressiv oppførsel biologisk [28, 29]. Imidlertid er verdien av bcl-2 i å forutsi magekreft gjentagelse fortsatt uklart. I en tidligere studie fant vi at BCL-2 var signifikant assosiert med prognosen i mage kreftpasienter [7]. Derfor hypotese vi at bcl-2 kan gjenspeile den biologiske natur av tumoren, og vil tjene som en pålitelig indikator for å forutsi tilbakefall. I henhold til våre resultater, er den negative ekspresjon av bcl-2-en uavhengig risikofaktor for magekreft tilbakefall. Den eksakte mekanismen er fortsatt uklart. Det er mulig at bcl-2 påvirker magekreft tilbakefall ved å regulere tumorcelle biologiske atferd. Saegusa et al.
[28] rapporterte at flertallet av BCL-2 + cancercellene er i en nonproliferative tilstand, og den gjennomsnittlige ekspresjon av Ki-67-merkeindeksen og apoptotisk-merkeindeksen i bcl-2 + foci er betydelig lavere enn i bcl-2 foci. Aizawa et al.
[30] viste at ekspresjon av bcl-2 avansert magekreft er assosiert med en lavere apoptotisk indeks og en bedre prognose. Pietenpol et al.
[31] rapporterte at over-ekspresjon av bcl-2 inhiberer veksten av flere fast-tumorcellelinjer.
Konklusjon
Konklusjonen er at den foreliggende studien viste at peritoneal tilbakefall var den mest felles gjentakelse mønster etter kurativ gastrektomi. Dybde på invasjon, lymfeknutemetastaser, og negative uttrykk for BCL-2 forutsi større risiko for tilbakefall. Disse funnene kan gi en del nyttig informasjon for oppfølging i mage kreftpasienter som har gjennomgått kirurgi for reseksjon. Nærmere bestemt, er det nødvendig å foreta en intensiv oppfølging plan for magekreftpasienter med negativ ekspresjon av bcl-2. Imidlertid liten skala og den retrospektive designen var svakhetene i denne studien. Videre i stor skala, bør prospektive studier utføres for å validere nytten av BCL-2 påvise tumor tilbakefall hos pasienter med magekreft.
Merknader
Jianghong Wu, Xiaowen Liu bidratt likt til dette arbeidet.
Erklæringer
takk
Vi takker Ben Liotta for å redigere det engelske språket i vår manuskript.
forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes opprinnelige innsendte filer for bilder. 12957_2013_1895_MOESM1_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 1 12957_2013_1895_MOESM2_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 2 12957_2013_1895_MOESM3_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 3 konkurrerende interesser
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende interesser.
Forfattere ' bidrag
JHW, XWL og YNW unnfanget og designet forsøkene. JHW og XWL utførte eksperimentene. JHW, XWL og HC analysert dataene. HC og YNW bidratt reagenser /materialer verktøy /analyse. JHW og XWL skrev avisen. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Kombinert epitelial-mesenchymale overgang med kreftstamcelleliknende markør som predikator for tilbakefall etter radikal reseksjon for mage cancer
• Sammenligning mellom bedre og dårlig differensiert lokalt avansert magekreft i preoperativ kjemoterapi: en retrospektiv, komparativ studie på ett linjetjenesten institutt