Predikcia recidívy po kuratívnej resekcii v karcinómu žalúdka na základe expresie bcl-2

Predikcia recidívy po kuratívnej resekcii žalúdka karcinómu založené na bcl-2 expresie
abstraktné
pozadia
V súčasnosti neexistujú žiadne spoľahlivé prediktívne faktory pre žalúdočné recidívy rakoviny. Cieľom tejto štúdie bolo zhodnotiť vzťah medzi bcl-2 expresie a riziko recidívy rakoviny žalúdka.
Metódy
od januára 1996 do decembra 2007, 449 pacientov s rakovinou žalúdka, ktorí podstúpili kuratívne resekcii boli spätne študované. Hladiny expresie bcl-2 bola skúmaná pomocou imunohistochémia. Logistická regresia bola vykonaná na identifikáciu nezávislých rizikových faktorov pre celkovú recidívy rakoviny žalúdka.
Výsledky
151 pacientov (33,6%) sa objavilo recidív. Medián času do recidívy bola 17,0 mesiaca, 113 (74,8%) pacienti mali recidívy počas 2 rokov. Peritoneálnej opakovanie bol najčastejšie vzor, ​​nasleduje hematogénne metastáz, v ktorom pečeň bola najčastejším miestom. Hĺbka invázie, metastáz lymfatických uzlín, a negatívne expresie bcl-2 boli nezávislé rizikové faktory pre celkové opakovanie. Celkové prežívanie recidivujúcich pacientov bol 22,7 mesiaca. Medián doby prežitia po recidívy bola 6,7 ​​mesiaca.
Záver
hĺbky invázie, metastáz v lymfatických uzlinách a expresie bcl-2 sú nezávislé faktory pre predikciu žalúdočné recidíve rakoviny.
Kľúčové
žalúdočné recidívu rakoviny klinicko-patologické faktory, bcl-2 pozadia
aj keď je výskyt rakoviny žalúdka klesá v podstate už niekoľko desiatok rokov, je to stále ešte štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu [1, 2]. Aj keď väčšina pacientov s rakovinou žalúdka v ranom štádiu môže mať dlhú dobu prežitia po operácii, približne 40% pacientov umiera na opakovanie, a to aj potom, čo podstúpil operáciu kuratívny [3]. Prítomnosť alebo neprítomnosť recidívy je široko považovaná za najdôležitejšie prediktor pre prežitie, pretože prognóza pacientov s opakovanie je veľmi žalostný. Preto je veľmi dôležité, aby presne predpovedať riziko recidívy v ranom štádiu, aby sa zlepšila prognózu pacientov s recidívou. Avšak, bolo preukázané, že rutinné následku po operácii rakoviny žalúdka, nie je užitočné pri detekcii recidívy v ranej fáze [4]. Z tohto dôvodu je nevyhnutné skúmať špecifické faktory, ktoré môžu identifikovať podskupiny pacientov s agresívnym ochorením viac. V poslednej dobe sa niektoré štúdie preukázali, že faktory, ako je patologické stavu lymfatických uzlín, hĺbkou invázie a veľkosti tumoru, hrajú kľúčovú úlohu v predikciu recidívy po gastrektómii [5, 6]. Avšak, to je ťažké predpovedať opakovanie pomocou bežných klinicko-faktorov. Vzhľadom na to, že niektoré biologické markery, ako sú onkogény, tumor-supresorových génov, regulátorov bunkového cyklu a gény DNA, ktoré súvisia s nádorovú genézu, rast, invázia a metastáz, mnoho vyšetrovatelia hľadajú nové prediktívnych faktorov medzi týmito molekulárnych markerov. V predchádzajúcej štúdii sme hodnotili prognostickú hodnotu biologických príznakov, ako sú p53, BCL-2, Bax, a c-myc v karcinómu žalúdka, a zistili, že bcl-2 bola významne spojená s prognózou u pacientov s rakovinou žalúdka [7]. Preto sme predpokladali, že bcl-2 expresie môže odrážať nádorové vlastnosti, a preto slúži ako spoľahlivý indikátor pre predpovedanie opakovanie. Cieľom tejto štúdie je určiť, či bcl-2 expresie môžu predpovedať recidívu ochorenia po kuratívny resekcii u pacientov s karcinómom žalúdka.
Metódy
Pacienti
V období od januára 1996 do decembra 2007, 4,426 pacienti s histologicky potvrdených primárnej adenokarcinóme žalúdka prešiel gastrektómii na katedre rakoviny žalúdka a sarkóm mäkkých tkanív v Fudan University Shanghai Cancer Center. Z týchto pacientov bolo vybraných 449 prípadov. Vzorky týchto pacientov boli zafarbené imunohistochemicky. Údaje boli získané z operatívnych a patologických správach pacientov. Nadväzujúce údaje boli získané telefonicky, listom, a ambulantné klinické databázy. Inscenácia bola vykonaná podľa Únie pre medzinárodný boj proti rakovine (UICC) TNM Staging klasifikácie karcinómu žalúdka
(siedma vydanie, 2010) [8]. Následku všetkých pacientov bolo vykonané podľa nášho štandardného protokolu (každé tri mesiace po dobu najmenej 2 rokov, každých 6 mesiacov po ďalšie 3 roky a po 5 rokoch každých 12 mesiacov pre život). Check-up položky zahrnuté fyzikálne vyšetrenie, tumor-markerov vyšetrenie, ultrazvuk, röntgen hrudníka, počítačová tomografia skenovanie a endoskopické vyšetrenie. Rozsah odpovediam na tieto bol od januára 1996 do mája 2010. Stredná doba sledovania bola 76,5 mesiacov v čase analýzy. Písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov, a táto štúdia bola schválená etickou komisiou Shanghai Cancer Center of Fudan University. Štúdia bola retrospektívna.
Imunohistochemické farbenie
Bcl-2 bola detekovaná imunohistochemické metódy. Protilátky boli zakúpené od Dako (Hamburg, Nemecko). Imunohistochemické farbenie bolo vykonané pomocou rozšírenej označeného spôsobu polymér systému. Parafínové rezy boli deparaffinised xylénom a hydratovaný etanol /deionizovanou vodou. Rezy potom boli inkubované s metanol /0,3% H 2O 2 a blokované nešpecifické farbenie blokujúce činidlá. Po inkubácii cez noc pri 4 ° C s anti-Bcl-2 protilátky (zriedenej 1: 100), rezy boli spracované podľa štandardných metód imunoperoxidázovému. Negatívne kontrolné rezy boli podrobené rovnakému postupu, okrem toho, že sa prvá protilátka bol nahradený PBS. Žiadny pozitívny farbenie bolo pozorované u kontrol. Umiestnenie farbenie pre bcl-2 bol prevažne v cytoplazme a cytomembrány
Imunohistochemické farbenie :. Bodovanie
Všetky rezy boli nezávisle vyhodnocovaný dvoma patológmi. Percento imunoreaktívnych buniek a farbenie intenzít boli hodnotené. Percento imunoreaktívnych buniek bola odstupňovaná na stupnici od 0 do 4: bez sfarbenie bola hodnotená ako 0, 1 až 10% buniek zafarbených zaznamenal ako 1, 11 až 50%, ako 2, 51 až 80%, ako 3, a 81 až 100% je 4. farbenie intenzity boli odstupňované 0-3: 0 bola definovaná ako negatívne, 1 ako je slabý, 2 ako mierna, a 3 ako silný, resp. Hrubé údaje boli prevedené na imunohistochemické skóre (IHS) vynásobením množstva a intenzita skóre. IHS skóre 9-12 bol považovaný za silného imunoreaktivity (+++), 5-8 ako stredná (++), 1-4 ako nedostačujúca (+), a 0 ako negatívne (-). Prípady sa skóre menším ako 1 boli považované za negatívne, a tí s ≥1 boli považované za pozitívny [9].
Štatistická analýza
Údaje boli prezentované ako priemer ± SD alebo mediánu pre číselné parametre. funkcie pacienta a klinické charakteristiky boli analyzované pomocou dvojchvostý Student t-test
alebo Pearson Test chi-square podľa potreby. Faktory, ktoré boli považované za potenciálne význam na jednorozmerné analýzy boli zahrnuté do viacrozmerné analýzy. Logistická regresia bola použitá na odhad súvisiace faktory recidívy. Prijatá Hladina významnosti bola P Hotel < 0.05. . Štatistické analýzy a grafiky boli vykonané pomocou SPSS 13.0 štatistický balíček (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)
Výsledky
klinicko-charakteristiky
Do štúdie bolo zahrnutých 307 mužských a 142 ženských pacientov (2,2: 1 ) s priemerným vekom 57 rokov. Tam bolo 49 (10,9%) skoré žalúdočné rakoviny a 400 (89,1%), pokročilé žalúdočné rakoviny. Podľa histologického typu, dobre diferencované nádory boli pozorované v 7 (1,5%) pacientov, mierne diferencované 149 (33,2%) pacientov, a poorlydifferentiated nádorov v zostávajúcich 293 (65,3%) pacientov. Podľa typu Borrmann, 49 (10,9%) bolo typ 0, 32 (7,1%) typu I, 14 (3,1%) typu II, 333 (74,2%) typu III a 21 (4,7%), typ IV. Z týchto pacientov, 147 (32,7%) mala nádory umiestnené v hornej tretine žalúdka, 65 (14,5%) mala nádory v jednej tretine, 212 (47,2%) mala nádory v dolnej tretine, a 25 (5,6%) mal nádory, ktoré zaberajú dve tretiny alebo viac žalúdka. Lymfatických uzlín bola pozorovaná u 326 pacientov, a miera metastáz bola 72,6%. Distribúcia patologickým štádiom bola nasledujúca: 35 (7,8%) pacientov patril ku štádiu IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%), IIIB, a 93 (20,7%), IIIc.
expresie bcl-2
Bcl-2 expresie bola pozitívna v 21,2% všetkých žalúdočných rakovinových tkanív. Bcl-2 farbenie bol pozorovaný v cytoplazme a cytomembrány karcinómu buniek (obrázok 1). Bcl-2 expresia bola spojená s patologickou fáze. Nebola nájdená žiadna korelácia medzi bcl-2 a iných patologických parametrov, ako je vek, pohlavie, histologický typ, typ Borrmann, umiestnenie nádoru alebo veľkosti nádoru. Obrázok 1 Pozitívne expresie bcl-2, imunohistochémia v žalúdočnej tkanive rakoviny. Originál zväčšenie x 100, B pôvodné zväčšenie x 400.
Čas recidívy a opakovanie vzor
recidívy došlo u 151 (33,6%) pacientov v priebehu sledovaného obdobia. Medián času do recidívy bola 17,0 mesiacov (rozmedzie od 2,0 do 91,0 mesiacov) a priemerná doba bola 21,1 mesiaca. Medzi pacientmi s recidívou, 113 (74,8%) mal recidívu do 2 rokov. Frekvencia a rýchlosť opakovania sú znázornené na obrázku 2. Obrázok 2 Frekvencia opakovania po kuratívny operácii podľa roku.
Z celkového počtu 151 pacientov s recidívou, 58 (38,4%) bolo diagnostikovaných s peritoneálnej opakovania, ktorý bol najviac prevládajúce, 49 (32,5%) pacienti mali hematogénne metastázy, ktorý bol druhým najčastejším opakovanie vzor, ​​a pečeň bola najčastejšou príčinou varhany; bol zapojený do 57,1% všetkých opakujúcich sa pacientov. Ďalšie opakovanie sa lokomotívou regionálne (n = 34, 22,5%), vzdialených metastáz v lymfatických uzlinách (n = 8, 5,3%), alebo na viacerých miestach (n = 2, 1,3%) (obrázok 3). Obrázok 3 Vzor opakovanie po kuratívny gastrektómia.
recidíva súvisiace faktory
jednorozmerné analýzy vyplynulo, že typ Borrmann, hĺbku invázie, stav lymfatických uzlín a expresie bcl-2 boli spojené s celkovým opakovaní, zatiaľ čo vek, pohlavie, histologický typ, umiestnenie nádoru a nádor veľkosť neboli (tabuľka 1). Logistická regresia bola použitá na identifikáciu nezávislé rizikové faktory pre celkové opakovanie. Bolo preukázané, že hĺbka invázie, metastáz lymfatických uzlín, a negatívne expresie bcl-2 boli nezávislé prediktívne faktory pre celkové recidívy (tabuľka 2) .Table 1 Jednorozmerná analýza rizikových faktorov recidívy rakoviny žalúdka
č opakovanie
recidíva
P-hodnota
(n = 298)
(n = 151)
vek (roky), priemer ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
pohlavia, muži /ženy
203/95
104/47
0,871
veľkosť nádoru (cm ), priemer ± SD
4,8 ± 2,5
5,3 ± 2,7
0,054
lokalizácia nádoru, horné /stredná /dolnej /dva alebo viac
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
typu Borrmann, 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0,002
histológia, no /mierne /zle diferencované
5/101/192
2/48/101
0,899
hĺbkou invázie, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0,000
stav lymfatických uzlín, negatívny /pozitívny
108/190
15/136
0,000
Bcl-2, negatívny /pozitívny
226/72
128/23
0,029
Tabuľka 2 Multivariate analysisof rizikové faktory pre vznik recidívy u karcinómu žalúdka
Variable P-hodnota
Odds pomer
95% CI
Age
0,116 0,710
0,463, 1,088
Pohlavie
0,775 1,069
0,677, 1.687
typ Borrmann
0,334 0,872
0,660, 1,152
Hĺbka invázie
0,017 0,438
0,222, 0,861
lymfatických stave node
0.000
3,753
2,040, 6,905
Bcl-2
0,047 0,577
0,336, 0,992
jednorozmerné analýzy ukázali, že typ Borrmann, hĺbkou invázie, stav lymfatických uzlín, histológie, pohlavie, a expresie bcl-2 bola spojená s peritoneálnej recidívy. Logistická regresia ukázala, že hĺbka invázie, stav lymfatických uzlín, histológie a bcl-2 boli nezávislé prediktívnu faktory pre peritoneálnej recidívy. lokalizácia nádoru a typ Borrmann sa týkali hematogénne metastázy, a umiestnenie nádoru bol jediný nezávislý prediktívne faktor. Nebola nájdená žiadna korelácia medzi klinicko-parametrami a loco-regionálnej recidívy.
Prognóza recidivujúcich pacientov
Celková 5-ročné prežitie bolo 52% pre všetkých pacientov. Päť-ročné prežitie bola 58,9% a 45,5% v bcl-2 pozitívnych a Bcl-2 negatívnych pacientov. V bcl 2-pozitívnych pacientov, patologické štádium a umiestnenie nádoru významne ovplyvnená prognózu, a patologické štádium bol nezávislý prognostický faktor. V bcl-2 negatívnych pacientov, jednorozmerné analýza ukázala, že typ Borrmann, hĺbkou invázie, metastáz lymfatických uzlín, veľkosť nádoru, lokalizácia nádoru a patologickej fáze významne ovplyvnená prognózu. Multivariačný analýza ukázala, že metastázy do lymfatických uzlín, umiestnenia nádoru a patologické štádium boli nezávislé prognostické faktory.
Stredná doba prežitia u pacientov s recidívou bol 22,7 mesiaca. Medián doby prežitia po recidívy bola 6,7 ​​mesiaca. Podľa rôznych vzorov opakovaní, stredná doba prežitia po peritoneálnej recidívy, hematogénne metastázy, loco-regionálnej recidívy a vzdialených metastáz do lymfatických uzlín bol 5,7 mesiaca (06.02.-04.12.), 7,3 mesiaca (2,4 až 11,7), 7,0 mesiaca (2,5 až 17.1), a 6,1 mesiaca (3,9 až 7,9), v danom poradí. Pacienti s peritoneálnej a vzdialenej recidívy lymfatických uzlín mal kratšie doby prežitia; avšak toto nebolo štatisticky významné.
Diskusia
hlavných záverov štúdie bolo, že (1) peritoneálnej recidíve bol najviac prevláda opakovanie vzor po kuratívnou operácii, a (2) hĺbka invázie, metastázy do lymfatických uzlín a negatívne expresie bcl-2 boli nezávislé rizikové faktory pre celkové opakovanie.
karcinóm žalúdka je jedným z najčastejších malígnych ochorení na celom svete. Aj keď je prognóza pacientov s rakovinou žalúdka sa zlepšila v dôsledku lepšej diagnostickej techniky a terapeutické stratégie, rakovina žalúdka je stále druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou [2]. Neutešenej Prognóza rakoviny žalúdka je spôsobené hlavne na frekvencii recidívy a metastáz. Preto je veľmi dôležité objasniť vzor recidívy a rizikové faktory pre opakovanie, čo môže prispieť k vykonávaniu pooperačnej klinickej praxe a následku.
V našej štúdii, 151 (33,6%) pacienti mali recidívu počas následných záber obdobie. Priemerná doba recidívy bola 21,1 mesiaca; 113 pacientov (74,8%) k recidíve počas 2 rokov. Tento výsledok ukazuje, že väčšina žalúdka recidívy rakoviny počas 2 rokov, a je v súlade s inými štúdiami [10-12]. Yoo et al.
[12] popísali 508 pacientov s recidívou po kuratívny resekcii karcinómu žalúdka, a ukázal, že stredná dĺžka času do recidívy bola 21,8 mesiaca. Z tohto dôvodu bolo potrebné posilniť sledovacie do 2 rokov po kuratívnu resekcii.
Bolo zistené, že najčastejšou opakovanie je hematogénne recidívy a peritoneálnej šírenie u karcinómu žalúdka [3, 12-14]. V našom seriáli, peritoneálnej opakovanie bol najčastejšie vzor, ​​čo predstavuje 38,4% všetkých pacientov s recidívou, nasleduje hematogénne metastázami (32,5%). Naše výsledky sú v súlade s predchádzajúcimi štúdiami [3, 12]. Maehara et al.
Hlásených [15], že peritoneálnej vzor predstavovali 50% prípadov, hematogénne recidívy u 40% prípadov, a loco-regionálnej recidívy 20%. Avšak, ešte stále existujú niektoré spory. Talianska štúdia ukázala, že najčastejším opakovanie vzor bol loco-regionálnej, čo predstavuje 45% všetkých opakujúcich sa prípadov [16]. Tento nepomer je uvedené, že existujú určité rozdiely v opakovaní vzorov medzi východnej a západnej krajiny. Je možné, že nízky výskyt lokálnej recidívy vo východných štúdií je vzhľadom k rozsiahlemu využitiu D2 lymfatických uzlín pitva.
Recidíva je častý u pacientov s karcinómom žalúdka po tom, čo podstúpil radikálnu gastrektómii. Z tohto dôvodu je dôležité na identifikáciu pacientov s vysokým rizikom recidívy. V tejto štúdii, jednorozmerné analýza ukázala, že typ Borrmann, hĺbka invázie, a stav lymfatických uzlín boli spojené s celkovým opakovanie. Logistickej regresie preukázané, že hĺbka invázie a metastáz lymfatických uzlín boli nezávislé rizikové faktory pre celkové opakovanie. V súlade s našimi zisteniami, predchádzajúce štúdie ukázali, že tradičné klinicko-patologické faktory, ako je serózna expozícia, histologických typov, hĺbkou invázie a metastáz lymfatických uzlín boli rizikové faktory recidívy [17-19]. Avšak, tradičné klinicko-patologické faktory sú niekedy nedostatočné pre predikciu recidívy. Rad štúdií ukázala, že biomarkery, ako sú nádorové markery [20, 21], vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), rodina [22, 23], E-cadherin [24, 25], a microRNA [26], môže byť užitočné pre predikciu recidívy rakoviny žalúdka. Bcl-2 sa nachádza na chromozóme 18q21, a kóduje 26-kDa proteín lokalizovaný prevažne v mitochondriálnej membrány [27]. Gen bcl-2 bol prvýkrát opísaný ako onkogén u folikulovom lymfómu. Niektoré štúdie ukázali, že nadmerná expresia bcl-2 potlačiť proliferáciu buniek a bola spojená s menej agresívne správanie biologických [28, 29]. Avšak hodnota bcl-2 v predikciu recidívy rakoviny žalúdka je stále nejasná. V predchádzajúcej štúdii sme zistili, že bcl-2 bola významne spojená s prognózou u pacientov s rakovinou žalúdka [7]. Preto sme predpokladali, že bcl-2 môže odrážať biologickú povahu nádoru, a bude slúžiť ako spoľahlivý indikátor pre predpovedanie opakovanie. Podľa našich výsledkov, negatívne expresie bcl-2 je nezávislý rizikový faktor pre žalúdočné recidívy rakoviny. Presný mechanizmus je stále nejasná. Je možné, že bcl-2 ovplyvňuje žalúdočné recidívu rakoviny tým, že reguluje nádorových buniek biologické správanie. Saegusa et al.
[28] hlásil, že väčšina bcl-2 + rakovinových buniek sú v nonproliferative stave, a priemerná expresie Ki-67 indexom označovanie a apoptotického indexu označovanie v bcl-2 + ohniskách sú výrazne nižšie než v bcl-2 ložísk. Aizawa et al.
[30] ukázali, že expresia bcl-2 v pokročilým karcinómom žalúdka je spojený s nižším apoptotického indexu a lepšiu prognózu. Pietenpol et al.
[31] uvádzajú, že zvýšená expresia bcl-2 inhibuje rast niektorých bunkových línií pevné nádoru. Záver
uvedeného vyplýva, že táto štúdia preukázala, že peritoneálnej opakovanie bol najviac spoločný opakovanie vzor po kuratívny gastrektómia. Hĺbka invázie, metastáz lymfatických uzlín, a negatívne expresie bcl-2 predvídať väčšie riziko recidívy. Tieto nálezy môžu poskytnúť niektoré užitočné informácie pre Followup u pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí podstúpili chirurgický zákrok pre resekcii. Konkrétne, je nutné vykonať intenzívne následné plán pre pacientov s rakovinou žalúdka s negatívne expresie bcl-2. Avšak, v malom meradle a retrospektívnu konštrukcie boli nedostatky súčasnej štúdii. Ďalej large-scale, prospektívnej štúdie by mali byť vykonané na overenie užitočnosť bcl-2 pri odhaľovaní recidíve nádoru u pacientov s rakovinou žalúdka.
Notes
Jianghong Wu, Xiaowen Liu prispelo rovnakou mierou na tejto práci.
Vyhlásenia
poďakovanie
ďakujeme Ben Liotta pre editáciu anglického jazyka v našej rukopisu.
autorov pôvodné predloženej súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor na obrázku 1 12957_2013_1895_MOESM2_ESM.tif autorského 12957_2013_1895_MOESM1_ESM.tif autorov pôvodného súboru na obrázku 2 12957_2013_1895_MOESM3_ESM.tif autorského pôvodného súboru pre obrázok 3 protichodnými záujmami
Autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.
Autori" príspevky
JHW, XWL a YNW pochopil a navrhol experimenty. JHW a XWL vykonané experimenty. JHW, XWL a HC analyzoval dáta. HC a YNW prispel reagencií /materiály /analytické nástroje. JHW a XWL napísal na papier. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Kombinovaná epiteliálne-mezenchýmových prechod s rakovinou kmeňových buniek podobné značky ako prediktory recidívy po radikálnej resekcii žalúdka pre cancer
• Porovnanie medzi lepšie a zle diferencovaný lokálne pokročilého karcinómu žalúdka v predoperačnej chemoterapii: retrospektívnej, porovnávacie štúdie v jedinom terciárnom porovnaní staro…