Forudsigelse af tumor tilbagefald efter kurativ resektion i gastrisk karcinom baseret på bcl-2 expression

Forudsigelse af tumor tilbagefald efter kurativ resektion i gastrisk karcinom baseret på bcl-2-ekspression
Abstract
Baggrund
Der er i øjeblikket ingen pålidelige prædiktive faktorer for gastrisk cancer tilbagefald. Formålet med denne undersøgelse var at vurdere forholdet mellem bcl-2 ekspression og risikoen for mavekræft tilbagefald.
Metoder
Fra januar 1996 til december 2007 blev 449 mavekræft patienter, som gennemgik helbredende resektion retrospektivt undersøgt. Ekspressionsniveauerne af bcl-2 blev undersøgt ved immunhistokemi. Logistisk regression blev udført for at identificere uafhængige risikofaktorer for den samlede gentagelse af mavekræft.
Resultater
151 patienter (33,6%) oplevede gentagelser. Den mediane tid til tilbagefald var 17,0 måneder, 113 (74,8%) patienter havde tilbagefald inden for 2 år. Peritoneal tilbagefald var den mest udbredte mønster, efterfulgt af hæmatogen metastase, hvor leveren var den mest almindelige sted. Dybde af invasion, lymfeknudemetastaser, og negative udtryk for bcl-2 var uafhængige risikofaktorer for den samlede gentagelse. Den samlede overlevelsestid af tilbagevendende patienter var 22,7 måneder. Den mediane overlevelsestid efter tilbagefald var 6,7 måneder.
Konklusion
Dybden af ​​invasion, lymfeknudemetastaser og udtryk for bcl-2 er uafhængige faktorer til at forudsige mavekræft tilbagefald.
Nøgleord
mavekræft tilbagefald klinisk-patologiske faktorer bcl-2 Baggrund
Selvom forekomsten af ​​mavekræft er faldet væsentligt i flere årtier, er det stadig den fjerde mest almindelige kræftform og den næsthyppigste årsag til kræft død [1, 2]. Selvom størstedelen af ​​patienter med tidlige fase mavekræft kan have lange overlevelsestider efter operationen, ca. 40% af patienterne dør af tilbagefald, selv efter at have gennemgået kurativ [3] kirurgi. Tilstedeværelsen eller fraværet af tilbagefald er almindeligt anset for at være den vigtigste prædiktor for overlevelse, som prognosen for patienter med recidiv er yderst nedslående. Derfor er det meget vigtigt præcist at forudsige risikoen for tilbagefald på et tidligt stadium for at forbedre prognosen for patienter med tilbagefald. Det er imidlertid blevet påvist, at rutinemæssig opfølgning efter operation for mavekræft er ikke nyttige i at opdage tilbagefald på et tidligt tidspunkt [4]. Derfor er det vigtigt at undersøge specifikke faktorer, der kan identificere undergrupper af patienter med mere aggressive sygdom. For nylig har nogle undersøgelser vist, at patologiske faktorer såsom lymfeknude-status, dybde af invasion, og tumorstørrelse, spiller en afgørende rolle i at forudsige tilbagefald efter gastrektomi [5, 6]. Det er imidlertid vanskeligt at forudsige fornyet anvendelse af almindelige klinisk-patologiske faktorer. Eftersom nogle biologiske markører, såsom onkogener, tumorsuppressorgener, celle-cyklus regulatorer og DNA reparation gener, er relateret til tumorgenese, vækst, invasion og metastase, er mange forskere søger efter nye prædiktive faktorer blandt disse molekylære markører. I en tidligere undersøgelse vurderede vi den prognostiske værdi af biologiske markører, såsom p53, bcl-2, Bax og c-myc i gastrisk cancer, og fundet, at bcl-2 blev signifikant associeret med prognosen hos mavecancerpatienter [7]. Derfor vi hypotese, at bcl-2-ekspression kan afspejle tumor egenskaber, og dermed fungere som en pålidelig indikator for forudsigelse af tilbagefald. Formålet med den aktuelle undersøgelse er at fastslå, hvorvidt bcl-2-ekspression kan forudsige recidiv efter kurativ resektion hos patienter med mavekræft.
Metoder
Patienter
Mellem januar 1996 og december 2007 4.426 patienter med histologisk bekræftet primær gastrisk adenocarcinom gennemgik gastrektomi ved Institut for mavekræft og bløddelssarkom i Fudan University Shanghai Cancer center. Ud af disse patienter blev 449 sager udvalgt. Disse patienters prøver blev farvet immunhistokemisk. Data blev hentet fra patienternes operative og patologiske rapporter. Opfølgende data blev opnået ved telefon, brev, og den ambulante kliniske database. Iscenesættelse blev udført i overensstemmelse med Union for International Cancer Control (UICC) TNM Iscenesættelse Klassificering for Carcinoma af maven
(Syvende udgave, 2010) [8]. En opfølgning af alle patienter blev udført i henhold til vores standard-protokol (hver tredje måned i mindst 2 år, hver 6. måned for de næste 3 år, og efter 5 år hver 12. måned for livet). Check-up poster, der indgår fysisk undersøgelse, tumor-markør undersøgelse, ultralyd, bryst radiografi, CT-scanning, og endoskopisk undersøgelse. Rækken af ​​opfølgeren var fra januar 1996 til maj 2010. Den mediane follow-up tid var 76,5 måneder på tidspunktet for analysen. Skriftligt informeret samtykke var blevet indhentet fra alle patienter, og denne undersøgelse blev godkendt af Etisk Komité Shanghai Cancer Center of Fudan University. Undersøgelsen var retrospektiv.
Immunohistokemisk farvning
Bcl-2 blev detekteret ved den immunhistokemiske metode. Antistoffer blev erhvervet fra Dako (Hamburg, Tyskland). Immunhistokemisk farvning blev udført ved den udvidede mærkede polymersystem metode. Paraffinsnit blev deparaffinised med xylen og hydreret med ethanol /deioniseret vand. Snit blev derefter inkuberet med methanol /0,3% H 2O 2 og blokeret med uspecifik farvning blokerende reagens. Efter inkubation natten over ved 4 ° C med anti-bcl-2-antistof (fortyndet 1: 100) blev snit behandlet ifølge standard immunoperoxidase metoder. Negative kontrolsnit blev underkastet den samme fremgangsmåde, bortset fra at det første antistof blev erstattet af PBS. Ingen positiv farvning blev observeret i kontrollerne. Placeringen af ​​farvning for bcl-2 var overvejende cytoplasma og cytomembrane
immunhistokemisk farvning:. Scorer
Alle skiver blev uafhængigt evalueret af to patologer. Procentdelen af ​​immunoreaktive celler og farvningsintensiteter blev evalueret. Procentdelen af ​​immunoreaktive celler blev gradueret på en skala fra 0 til 4: ingen farvning blev bedømt som 0, 1 til 10% af celler farvet scoret som 1, 11 til 50% som 2 51 til 80% som 3, og 81 til 100% som 4. farvningsintensiteter blev gradueret fra 0 til 3: 0 blev defineret som negativ, 1 som svag, 2 som moderat og 3 så stærk, hhv. De rå data blev konverteret til en immunhistokemisk score (IHS) ved at multiplicere mængden og intensitet scoringer. En IHS score på 9 til 12 blev betragtet som stærk immunoreaktivitet (+++), 5 til 8 som moderat (++), 1 til 4 som svag (+), og 0 som negativ (-). Tilfælde med en score på mindre end 1, blev betragtet som negative, og dem med ≥1 blev betragtet som positiv [9].
Statistisk analyse
Data blev præsenteret som gennemsnit ± SD eller medianen for numeriske parametre. Patienternes funktioner og kliniske karakteristika blev analyseret under anvendelse af to-halet Student t-test
eller Pearson chi-square test efter behov. Faktorer, der blev anset for potentielle betydning på univariat analyse blev inkluderet i den multivariate analyse. Logistisk regression blev anvendt til at estimere relaterede faktorer for tilbagefald. Det accepterede signifikansniveau var P
< 0,05. . Statistiske analyser og grafik blev udført ved hjælp af SPSS 13.0 statistisk pakke (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA)
Resultater
klinisk-patologisk karakteristika
Undersøgelsen omfattede 307 mandlige og 142 kvindelige patienter (2,2: 1 ) med en gennemsnitsalder på 57 år. Der var 49 (10,9%) tidlige gastrisk kræft og 400 (89,1%) avancerede gastrisk kræft. Ifølge histologisk type, blev observeret veldifferentierede tumorer i 7 (1,5%) patienter, moderat differentierede i 149 (33,2%) patienter, og poorlydifferentiated tumorer i de resterende 293 (65,3%) patienter. Ifølge BORRMANN type, 49 (10,9%) var type 0, 32 (7,1%) type I, 14 (3,1%) type II, 333 (74,2%) type III, og 21 (4,7%) type IV. Af disse patienter, 147 (32,7%) havde tumorer placeret i den øverste tredjedel af maven, 65 (14,5%) havde tumorer i den midterste tredjedel, 212 (47,2%) havde tumorer i den nederste tredjedel, og 25 (5,6%) havde tumorer besætter to tredjedele eller mere i maven. Lymfeknudemetastase blev observeret hos 326 patienter, og metastase sats var 72,6%. Fordelingen af ​​patologiske stadium var som følger: 35 (7,8%) patienter tilhørte fase IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%) IIIB, og 93 (20,7%) IIIC.
ekspression af bcl-2
Bcl-2-ekspression var positiv i 21,2% af alle mavekræft væv. Bcl-2-farvning blev observeret i cytoplasmaet og cytomembrane af carcinomaceller (figur 1). Bcl-2-ekspression var associeret med patologisk stadium. Der var ingen korrelation mellem bcl-2 og andre patologiske parametre, såsom alder, køn, histologisk type, BORRMANN type, tumor location, eller tumorstørrelse. Figur 1 Positive ekspression af bcl-2 immunhistokemi i gastrisk cancer væv. En original forstørrelse × 100, B oprindelige forstørrelse × 400.
Tid til tilbagefald og gentagelse mønster
Gentagelse fandt sted i 151 (33,6%) patienter i follow-up perioden. Den mediane tid til tilbagefald var 17,0 måneder (interval fra 2,0 til 91,0 måneder), og den gennemsnitlige tid var 21,1 måneder. Blandt patienter med tilbagefald, 113 (74,8%) havde tilbagefald inden for 2 år. Hyppigheden og antallet af tilbagefald er demonstreret i figur 2. Figur 2 Hyppigheden af ​​tilbagefald efter kurativ operation for år.
Af de 151 patienter med recidiv, 58 (38,4%) blev diagnosticeret med peritoneal tilbagefald, som var de mest udbredte, 49 (32,5%) patienter havde hæmatogene metastaser, som var den anden mest almindelige gentagelse mønster, og lever var hyppigst involverede organ; det blev impliceret i 57,1% af alle tilbagevendende patienter. Andre gentagelser blev loco-regional (n = 34, 22,5%), fjernt lymfeknudemetastaser (n = 8, 5,3%), eller på flere steder (n = 2, 1,3%) (Figur 3). Figur 3 Mønster for fornyet efter kurativ gastrektomi.
Gentagelse-relaterede faktorer
univariat analyse viste, at BORRMANN type, dybde invasion, lymfeknude status, og ekspressionen af ​​bcl-2 blev forbundet med den samlede recidiv, mens alder, køn, histologisk type, tumor placering, og tumor størrelse var ikke (tabel 1). Logistisk regression blev anvendt til at identificere de uafhængige risikofaktorer for den samlede gentagelse. Det blev påvist, at dybden af ​​invasion, lymfeknudemetastaser, og negative udtryk for bcl-2 blev uafhængige prædiktive faktorer for den samlede recidiv (tabel 2) .table en univariat analyse af risikofaktorer for tilbagefald i mavekræft
Nej gentagelse
gentagelse
P-værdi
(n = 298)
(n = 151)
Alder (år), gennemsnit ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
Køn, mand /kvinde
203/95
104/47
0,871
Tumor størrelse (cm ), gennemsnit ± SD
4,8 ± 2,5
5,3 ± 2,7
0,054
Tumor placering, øvre /midterste /nederste /to eller flere
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
BORRMANN type, 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0,002
Histologi, godt /moderat /dårligt differentieret
5/101/192
2/48/101
0,899
dybde invasion, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0.000
Lymfeknude status, negativ /positiv
108/190
15/136
0,000
Bcl-2, negativ /positiv
226/72
128/23
0,029
Tabel 2 Multivariate analysisof risikofaktorer for tilbagefald i mavekræft
Variabel
P-værdi
Odds forholdet
95% CI
Age
0,116
0.710
0,463, 1,088
Køn
0,775
1,069
0,677, 1,687
BORRMANN typen
0,334
0,872
0.660, 1,152
dybde invasion
0,017
0,438
0,222, 0,861
Lymfeknude status
0,000
3,753
2.040, 6,905
Bcl-2
0,047
0,577
0,336, 0,992
univariat analyse viste, at BORRMANN type, dybde invasion, lymfeknude status, histologi, køn, og ekspression af bcl-2 blev forbundet med peritoneal gentagelse. Logistisk regression viste, at dybden af ​​invasion, lymfeknude status, histologi, og bcl-2 var uafhængige prædiktive faktorer for peritoneal gentagelse. Tumor placering og BORRMANN typen var relateret til hæmatogene metastaser, og tumor placering var den eneste uafhængige prædiktiv faktor. Der var ingen sammenhæng mellem klinisk-patologiske parametre og loco-regional tilbagefald.
Prognose af tilbagevendende patienter
Den samlede 5-årige overlevelsesrate var 52% for alle patienter. Fem-årige overlevelsesrate var 58,9% og 45,5% i bcl-2 positive og bcl-2-negative patienter hhv. I bcl-2-positive patienter, patologisk stadium og tumor placering påvirkes væsentligt prognose og patologisk stadium var en uafhængig prognostisk faktor. I bcl-2 negative patienter viste univariat analyse, BORRMANN type, dybde af invasion, lymfeknudemetastaser, tumorstørrelse, tumor placering og patologisk stadium signifikant påvirket prognose. Multivariate analyse viste, at lymfeknudemetastaser, tumor placering og patologiske stadium var uafhængige prognostiske faktorer.
Den mediane overlevelsestid for patienter med tilbagefald var 22,7 måneder. Den mediane overlevelsestid efter tilbagefald var 6,7 måneder. Ifølge de forskellige gentagelse mønstre, median overlevelsestid efter peritoneal gentagelse, hæmatogene metastaser, loco-regional tilbagefald, og fjerne lymfeknudemetastaser var 5,7 måneder (2,6-12,4), 7,3 måneder (2,4 til 11,7), 7,0 måneder (2,5 til 17.1), og 6,1 måneder (3,9 til 7,9), hhv. Patienter med peritoneal og fjernt lymfeknude gentagelse havde en kortere overlevelsestid; men dette var ikke statistisk signifikant.
Diskussion
De vigtigste resultater i denne undersøgelse var, at (1) peritoneal gentagelse var den mest udbredte gentagelse mønster efter kurativ kirurgi, og (2) dybden af ​​invasion, lymfeknudemetastaser og negativ ekspression af bcl-2 var uafhængige risikofaktorer for samlet gentagelse.
mavekræft er en af ​​de mest almindelige ondartede sygdomme i verden. Selvom prognosen for patienter med mavekræft er forbedret som følge af bedre diagnostiske teknikker og terapeutiske strategier, mavekræft er stadig den næststørste årsag til kræft-relaterede dødsfald [2]. Den dystre prognose for mavekræft skyldes hovedsagelig at hyppigheden af ​​tilbagefald og metastaser. Derfor er det meget vigtigt at afklare mønster af gentagelser, og risikofaktorer for tilbagefald, som kan bidrage til gennemførelsen af ​​postoperativ klinisk praksis og opfølgning.
I vores undersøgelse, 151 (33,6%) patienter havde tilbagefald i follow -up periode. Den gennemsnitlige tid til tilbagefald var 21,1 måneder; 113 patienter (74,8%) havde tilbagefald inden for 2 år. Dette resultat viser, at de fleste mavekræft tilbagefald sker inden for 2 år, og er i overensstemmelse med andre undersøgelser [10-12]. Yoo et al.
[12] rapporterede 508 patienter med tilbagefald efter kurativ resektion for mavekræft og viste, at den gennemsnitlige tid til tilbagefald var 21,8 måneder. Derfor var det nødvendigt at styrke opfølgning inden for 2 år efter kurativ resektion.
Det er blevet rapporteret, at de mest almindelige gentagelse mønstre er hæmatogen tilbagefald og peritoneal udbredelse i gastrisk kræft [3, 12-14]. I vores serie, peritoneal gentagelse var den mest almindelige mønster, der tegner sig for 38,4% af alle patienter med tilbagefald, efterfulgt af hæmatogene metastaser (32,5%). Vore resultater stemmer overens med tidligere undersøgelser [3, 12]. Maehara et al.
Rapporteret [15], at den peritoneale mønster tegnede sig for 50% af tilfældene, hæmatogen recidiv for 40% af tilfældene, og loco-regional tilbagefald til 20%. Men der er stadig nogle tvister. En italiensk undersøgelse viste, at den mest almindelige gentagelse mønster var loco-regional, der tegner sig for 45% af alle tilbagevendende sager [16]. Denne forskel indikerede, at der er nogle forskelle i tilbagefald mønstre mellem østlige og vestlige lande. Det er muligt, at den lave forekomst af lokalt recidiv i Eastern undersøgelser skyldes den omfattende brug af D2 lymfe-knude dissektion.
Gentagelse er hyppige i mavecancerpatienter efter undergår radikale gastrektomi. Derfor er det vigtigt at identificere patienter med en høj risiko for tilbagefald. I denne undersøgelse viste univariat analyse, BORRMANN type, dybde af invasion, og lymfeknude-status var forbundet med overordnede gentagelse. Logistisk regression viste, at dybden af ​​invasion og lymfeknudemetastaser var uafhængige risikofaktorer for den samlede gentagelse. I overensstemmelse med vores resultater, har tidligere undersøgelser vist, at traditionelle klinisk-patologiske faktorer som serosa eksponering, histologisk type, dybde af invasion, og lymfeknudemetastase var risikofaktorer for tilbagefald [17-19]. Men traditionelle klinisk-patologiske faktorer er til tider utilstrækkelige til forudsigelse af tilbagefald. En række undersøgelser har indikeret, at biomarkører, såsom tumormarkører [20, 21], vaskulær endothelial vækstfaktor (VEGF) [22, 23], E-cadherin [24, 25], og microRNAer [26], kan være nyttig til at forudsige gentagelse af gastrisk cancer. Bcl-2 placeret på kromosom 18q21, og koder for et 26 kDa-protein lokaliseret primært i den mitokondriske membran [27]. Bcl-2-genet blev først beskrevet som et onkogen i follikulært lymfom. Nogle undersøgelser har vist, at overekspression af bcl-2 undertrykt cellulær proliferation og var forbundet med mindre aggressiv biologisk adfærd [28, 29]. Værdien af ​​bcl-2 i forudsige gastrisk cancer tilbagefald er stadig uklar. I en tidligere undersøgelse fandt vi, at bcl-2 blev signifikant associeret med prognosen hos mavecancerpatienter [7]. Derfor fremsatte vi den hypotese, at bcl-2 kan afspejle den biologiske natur af tumoren, og ville tjene som en pålidelig indikator for forudsigelse af tilbagefald. Ifølge vores resultater, den negative ekspression af bcl-2 er en uafhængig risikofaktor for mavekræft tilbagefald. Den nøjagtige mekanisme er stadig uklart. Det er muligt, at bcl-2 påvirker gastrisk cancer tilbagefald ved at regulere tumorcellen biologisk adfærd. Saegusa et al.
[28] rapporterede, at størstedelen af ​​bcl-2 + cancerceller er i et Non-proliferativ tilstand, og den gennemsnitlige ekspression af Ki-67 mærkningsindeks og apoptotisk mærkningsindeks i Bcl-2 + foci er betydeligt lavere end den, bcl-2 foci. Aizawa et al.
[30] viste, at ekspression af bcl-2 i fremskreden mavekræft er associeret med en lavere apoptotisk indeks og en bedre prognose. Pietenpol et al.
[31] rapporterede, at overekspression af bcl-2 hæmmer væksten af ​​flere faststof-tumorcellelinier.
Konklusion
Som konklusion den foreliggende undersøgelse viste at peritoneal tilbagefald på den mest fælles gentagelse mønster efter kurativ gastrektomi. Dybde af invasion, lymfeknudemetastaser, og negativ ekspression af bcl-2 forudsige større risiko for tilbagefald. Disse resultater kan give nogle nyttige oplysninger til opfølgning i mavecancerpatienter, der har gennemgået operation for resektion. Konkret er det nødvendigt at gennemføre en intensiv opfølgning plan for mavecancerpatienter med negativ udtryk for bcl-2. Men den lille målestok og den retrospektive design var mangler ved den aktuelle undersøgelse. Yderligere storstilet bør prospektive undersøgelser skal udføres for at validere nytten af ​​bcl-2 i at opdage tumor tilbagefald hos patienter med mavekræft.
Notes
Jianghong Wu, Xiaowen Liu bidrog ligeligt til dette arbejde.
Erklæringer
tak
Vi takker Ben Liotta til redigering engelsk i vores manuskript.
forfattere 'originale filer indsendt til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12957_2013_1895_MOESM1_ESM.tif Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12957_2013_1895_MOESM2_ESM.tif Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12957_2013_1895_MOESM3_ESM.tif Forfatternes oprindelige fil til figur 3 konkurrerende interesser
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere ' bidrag
JHW, XWL og YNW udtænkt og designet eksperimenterne. JHW og XWL udførte eksperimenterne. JHW, XWL og HC analyserede data. HC og YNW bidrog reagenser /materialer /analyseværktøjer. JHW og XWL skrev papiret. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Kombineret epithelial-mesenchymal overgang med cancer stamcelle-lignende markering som prædiktorer for tilbagefald efter radikal resektion for mavekræft
• Sammenligning mellem bedre og dårligt differentieret lokalt avanceret mavekræft i præoperativ kemoterapi: en retrospektiv, sammenlignende undersøgelse på et enkelt tertiær pleje institut