Voorspelling terugkeer van de tumor na curatieve resectie in maagcarcinoom op basis van BCL-2 expressie

Voorspelling terugkeer van de tumor na curatieve resectie in maagcarcinoom op basis van BCL-2 expressie
Abstracte achtergrond
Er zijn momenteel geen betrouwbare voorspellende factoren voor maagkanker recidief. Het doel van dit onderzoek was om de relatie tussen de bcl-2-expressie en het risico van maagkanker herhaling te evalueren.
Methods
Van januari 1996 tot december 2007 werden 449 maagkanker patiënten die een curatieve resectie ondergingen retrospectief bestudeerd. De expressieniveaus van bcl-2 werd onderzocht door immunohistochemie. Logistische regressie werd uitgevoerd om onafhankelijke risicofactoren voor de algehele herhaling van maagkanker te identificeren.
Resultaten
151 patiënten (33,6%) ervaren recidieven. De mediane tijd tot recidief was 17,0 maanden, 113 (74,8%) van de patiënten had recidieven binnen 2 jaar. Peritoneale recidief de meest voorkomende patroon, gevolgd door hematogene metastase waarbij de lever was de meest voorkomende plaats. Diepte van de invasie, lymfekliermetastasen, en negatieve expressie van BCL-2 waren onafhankelijke risicofactoren voor de algehele herhaling. De totale overleving tijd van recidiverende patiënten was 22,7 maanden. De mediane overleving na recidief was 6,7 maanden.
Conclusie Ondernemingen De diepte van de invasie, lymfekliermetastasen en de expressie van BCL-2 zijn onafhankelijke factoren voor het voorspellen van maagkanker recidief.
Sleutelwoorden
Maagkanker herhaling klinisch-pathologische factoren bcl-2 Achtergrond
Hoewel het aantal gevallen van maagkanker aanzienlijk daalt al enkele decennia, is het nog steeds de vierde meest voorkomende vorm van kanker en de tweede meest voorkomende oorzaak van kanker overlijden [1, 2]. Hoewel de meeste patiënten met een vroeg stadium maagkanker lange overlevingstijden kan na de operatie ongeveer 40% van de patiënten sterven aan herhaling, zelfs na curatieve chirurgie [3] ondergaat. De aanwezigheid of afwezigheid van herhaling wordt algemeen beschouwd als de meest belangrijke voorspeller voor overleving, de prognose voor patiënten met recidief is zeer somber. Daarom is het erg belangrijk om het risico van herhaling precies te voorspellen in een vroeg stadium om prognose van patiënten met recidief verbeteren. Er is echter aangetoond dat routine follow na operatie bij maagkanker niet bijdraagt ​​tot het detecteren herhaling vroegtijdig [4]. Daarom is het essentieel om factoren die subgroepen van patiënten met agressieve ziekte kunnen identificeren onderzoeken. Onlangs hebben sommige studies aangetoond dat pathologische factoren zoals lymfeklierstatus invasiediepte en tumorgrootte, een cruciale rol spelen bij het voorspellen recidief na gastrectomie [5, 6]. Het is echter moeilijk te voorspellen herhaling gebruikelijke klinische en pathologische factoren. Aangezien sommige biologische markers, zoals oncogenen, tumor-suppressor genen, celcyclus regulatoren en DNA repair genen zijn gerelateerd tumor ontstaan, groei, invasie en metastase, zijn veel onderzoekers op zoek naar nieuwe voorspellende factoren onder deze moleculaire merkers. In een eerdere studie, onderzochten we de prognostische waarde van biologische merkers zoals p53, bcl-2, bax, en c-myc in maagkanker en gevonden dat bcl-2 geassocieerd is met de prognose bij gastrische kankerpatiënten [7]. Daarom hebben we de hypothese dat bcl-2 expressie tumorkarakteristieken kunnen weerspiegelen, en dus dienen als een betrouwbare indicator voor het voorspellen van herhaling. Het doel van de huidige studie is om te bepalen of BCL-2 expressie terugkeer van de ziekte kunnen voorspellen na curatieve resectie bij patiënten met maagkanker.
Methods
Patiënten
Tussen januari 1996 en december 2007, 4426 patiënten met histologisch bevestigde primaire maagdarmkanker onderging gastrectomy bij de afdeling maagkanker en weke delen sarcoom in Fudan University Shanghai Cancer Center. Van deze patiënten, werden 449 gevallen geselecteerd. Deze patiënten 'monsters werden immunohistochemisch gekleurd. Gegevens werden opgehaald uit operatieve en pathologische rapporten van patiënten. Follow-up gegevens werden verkregen via de telefoon, brief, en de polikliniek klinische database. Staging werd uitgevoerd volgens de Unie voor International Cancer Control (UICC) TNM Staging Indeling voor carcinoom van de maag
(Zevende editie, 2010) [8]. Een follow-up van alle patiënten werd volgens onze standaard protocol uitgevoerd (om de drie maanden voor ten minste 2 jaar, om de 6 maanden voor de komende 3 jaar, en na 5 jaar elke 12 maanden voor het leven). De check-up items opgenomen lichamelijk onderzoek, tumor-marker onderzoek, echografie, borst radiografie, computertomografie tomografische scan, en endoscopisch onderzoek. Het bereik van de follow-up was van januari 1996 tot mei 2010. De mediane follow-up tijd was 76,5 maanden op het moment van de analyse. Schriftelijke toestemming was verkregen van alle patiënten, en deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Shanghai Cancer Center van Fudan University. De studie was retrospectief.
Immunohistochemische kleuring
Bcl-2 werd gedetecteerd door de immunohistochemische methode. Antilichamen werden verkregen van Dako (Hamburg, Duitsland). Immunohistochemische kleuring werd uitgevoerd door het verbeterde gemerkte polymeersysteem werkwijze. Paraffine coupes werden deparaffinised met xyleen en gehydrateerd met ethanol /gedemineraliseerd water. Daarna werden de secties geïncubeerd met methanol /0,3% H 2O 2 en geblokkeerd met aspecifieke kleuring blokkeringsreagens. Na overnacht incubatie bij 4 ° C met anti-bcl-2-antilichaam (verdund 1: 100), werden secties behandeld volgens standaard werkwijzen immunoperoxidase. Negatieve controle coupes werden onderworpen aan dezelfde procedure, behalve dat het eerste antilichaam werd vervangen door PBS. Geen positieve kleuring werd waargenomen in de controles. De locatie van de kleuring voor BCL-2 was voornamelijk in het cytoplasma en cytomembrane
Immunohistochemische kleuring:. Het maken Leer Alle schijfjes werden onafhankelijk beoordeeld door twee pathologen. Het percentage immunoreactieve cellen en kleuring intensiteiten werden geëvalueerd. Het percentage immunoreactieve cellen werd beoordeeld op een schaal van 0 tot 4: geen kleuring werd gescoord als 0, 1 tot 10% van de cellen gekleurd gescoord als 1 en 11 tot 50% 2, 51-80% als 3 en 81 tot 100% als 4. De kleuring intensiteiten werden beoordeeld van 0 tot 3: 0 werd gedefinieerd als negatief, zwak 1, 2 als matig en 3 zo sterk, respectievelijk. De ruwe gegevens werden omgezet in een immunohistochemische score (IHS) door vermenigvuldiging van de hoeveelheid en intensiteit scores. Een IHS score van 9 tot 12 werd als sterke immunoreactiviteit (+++), 5-8 als matig (++), 1-4 zwak (+) en 0 als negatief (-). Gevallen met een score van minder dan 1 werden beschouwd als negatief, en die met ≥1 werden beschouwd als positief [9].
Statistische analyse
gegevens werden gepresenteerd als het gemiddelde ± SD of de mediaan van numerieke parameters. kenmerken van de patiënt en de klinische kenmerken werden geanalyseerd met behulp van de tweezijdige Student t-test
of Pearson chikwadraattoets naargelang het geval. Factoren die werden geacht potentieel belang aan univariate analyse werden opgenomen in de multivariate analyse. Logistische regressie werd gebruikt om verwante factoren schatten van herhaling. De geaccepteerde niveau van betekenis was P Restaurant < 0,05. . Statistische analyse en grafieken werden uitgevoerd met SPSS 13.0 statistisch pakket (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)
Resultaten
klinisch-pathologische kenmerken
De studie omvatte 307 mannelijke en 142 vrouwelijke patiënten (2,2: 1 ) met een gemiddelde leeftijd van 57 jaar. Er waren 49 (10,9%) vroege maagkanker en 400 (89,1%) geavanceerd maagkanker. Volgens weefseltype werden goed gedifferentieerde tumoren waargenomen bij 7 (1,5%) patiënten, matig gedifferentieerd in 149 (33,2%) patiënten en poorlydifferentiated tumoren in de overblijvende 293 (65,3%) patiënten. Volgens Borrmann type 49 (10,9%) waren het type 0, 32 (7,1%) type I, 14 (3,1%) type II, 333 (74,2%) type III, en 21 (4,7%) type IV. Van deze patiënten, 147 (32,7%) had tumoren in het bovenste derde van de maag, 65 (14,5%) had tumoren in het middelste derde deel, 212 (47,2%) had tumoren in het onderste deel, en 25 (5,6%) hadden tumoren bezetten tweederde of meer van de maag. Lymfeklier metastase werd waargenomen bij 326 patiënten, en de metastase bedroeg 72,6%. De verdeling van pathologisch stadium was als volgt: 35 (7,8%) patiënten was voor stadium IA, 34 (7,6%) IB, 50 (11,1%) IIA, 75 (16,7%) IIB, 82 (18,3%) IIIA, 80 ( 17,8%) IIIB, en 93 (20,7%) IIIC.
expressie van bcl-2
Bcl-2 expressie was positief in 21,2% van alle maagkanker weefsels. Bcl-2-kleuring werd waargenomen in het cytoplasma en cytomembrane van carcinoomcellen (figuur 1). Bcl-2 expressie werd geassocieerd met pathologische stadium. Er was geen correlatie tussen de bcl-2 en andere pathologische parameters, zoals leeftijd, geslacht, weefseltype, Borrmann type tumor locatie of tumorgrootte. Figuur 1 Positieve expressie van BCL-2 immunohistochemie bij maagkanker weefsel. Een oorspronkelijke vergroting x 100, B oorspronkelijke vergroting × 400.
Tijd tot een recidief en herhaling patroon
Herhaling opgetreden in 151 (33,6%) van de patiënten tijdens de follow-up periode. De mediane tijd tot recidief was 17,0 maanden (range 2,0-91,0 maanden), en de gemiddelde tijd was 21,1 maanden. Bij de patiënten met recidief, 113 (74,8%) hadden een recidief binnen 2 jaar. De frequentie en mate van herhaling worden gedemonstreerd in Figuur 2. Figuur 2 Frequentie van recidief na curatieve werking op jaar. Website van 151 patiënten met recidief, 58 (38,4%) werden gediagnosticeerd met peritoneale herhaling, die de meest voorkomende, 49 (32,5%) patiënten hadden hematogene metastasen, waarbij de tweede meest voorkomende herhalingspatroon was en lever het vaakst betrokken orgaan; werd betrokken bij 57,1% van alle periodieke patiënten. Andere recidieven locoregionale (n = 34, 22,5%), op afstand metastasen (n = 8, 5,3%), of op meerdere plaatsen (n = 2, 1,3%) (Figuur 3). Figuur 3 Patroon van herhaling van na curatieve gastrectomie.
Herhaling-gerelateerde factoren
Univariate analyse toonde aan dat Borrmann type, de diepte van de invasie, lymfeklierstatus, en de expressie van BCL-2 werden in verband gebracht met de algemene herhaling, terwijl leeftijd, geslacht, histologische type, de tumor locatie en tumor size niet (Tabel 1). Logistische regressie werd gebruikt om de onafhankelijke risicofactoren voor de algehele herhaling te identificeren. Er werd aangetoond dat de diepte van de invasie, lymfekliermetastasen, en negatieve expressie van BCL-2 werden onafhankelijke voorspellende factoren voor de algehele recidief (tabel 2) .table 1 Univariate analyse van de risicofactoren voor recidief bij maagkanker verhuur No herhaling
herhaling
P-waarde
(n = 298)
(n = 151)
Leeftijd (jaar), gemiddelde ± SD
57,8 ± 11,9
55,8 ± 12,9
0,095
Gender, man /vrouw
203/95
104/47
0,871
tumorgrootte (cm ), gemiddelde ± SD
4.8 ± 2.5
5,3 ± 2,7
0,054
Tumor locatie, boven /midden /lager /twee of meer
91/38/153/16
56 /27/59/9
0,094
Borrmann type 0 /I /II /III /IV
45/22/9/211/11
4/10/5/122/10
0.002
Histologie, goed /matig /slecht gedifferentieerde
5/101/192
2/48/101
0,899
diepte van de invasie, T1 + T2 /T3 + T4
94/204
16/135
0.000
lymfeklierstatus, negatief /positief
108/190
15/136
0.000
Bcl-2, negatief /positief
226/72
128/23
0.029
Tabel 2 Multivariate analyse uit risicofactoren voor recidief bij maagkanker
Variable
P-waarde
Odds verhouding
95% CI
Age
0,116
0.710
0,463, 1,088
Gender
0.775
1,069
0,677, 1,687
Borrmann soort
0,334
0,872
0.660, 1.152
diepte van invasie
0,017
0,438
0,222, 0,861
lymfeklierstatus
0.000
3,753
2,040, 6,905
Bcl-2
0,047
0,577
0,336, 0,992
Univariate analyse toonde aan dat Borrmann type, de diepte van de invasie, lymfeklierstatus, histologie, geslacht, en expressie van bcl-2 waren geassocieerd met peritoneale herhaling. Logistische regressie bleek dat de diepte van de invasie, lymfeklierstatus, histologie, en BCL-2 waren onafhankelijke voorspellende factoren voor peritoneale herhaling. Tumor locatie en Borrmann type werden in verband met hematogene metastasen, en tumor locatie was de enige onafhankelijke voorspellende factor. Er was geen correlatie tussen de klinisch-pathologische parameters en loco-regionaal recidief.
Prognose van recidiverende patiënten Ondernemingen De overall 5-jaarsoverleving was 52% voor alle patiënten. Vijf-jaars overleving was 58,9% en 45,5% in BCL-2 positieve en bcl-2 negatieve patiënten respectievelijk. In bcl-2 positieve patiënten, pathologisch stadium en tumor locatie sterk beïnvloed prognose, en pathologische etappe was een onafhankelijke prognostische factor. In bcl-2 negatieve patiënten, univariate analyse toonde aan dat Borrmann type, de diepte van de invasie, lymfekliermetastasen, tumorgrootte, tumor locatie en pathologisch stadium significant beïnvloed prognose. Multivariate analyse toonde aan dat lymfkliermetastasen, tumor locatie en pathologisch stadium waren onafhankelijke prognostische factoren. Ondernemingen De mediane overleving van patiënten met recidief was 22,7 maanden. De mediane overleving na recidief was 6,7 maanden. Volgens de verschillende herhaling patronen, de mediane overleving na peritoneale recidief, hematogene metastasen, loco-regionaal recidief, en verre lymfekliermetastasen waren 5,7 maanden (2,6-12,4), 7,3 maanden (2,4-11,7), 7,0 maanden (2,5 tot 17,1), en 6,1 maanden (3,9-7,9), respectievelijk. Patiënten met peritoneale en verre lymfklier recidief hadden een kortere overlevingstijd;
maar dit was niet statistisch significant. Discussion
De belangrijkste bevindingen van deze studie waren dat (1) peritoneaal recidief was de meest voorkomende herhaling patroon na curatieve chirurgie, en (2) de diepte van de invasie, lymfekliermetastasen en negatieve expressie van bcl-2 waren onafhankelijke risicofactoren voor algemene recidief.
Maagkanker is een van de meest voorkomende kwaadaardige tumoren wereldwijd. Hoewel de prognose van patiënten met maagkanker is verbeterd als gevolg van betere diagnostische technieken en therapeutische strategieën, maagkanker blijft de tweede belangrijkste oorzaak van kankersterfte [2]. De sombere prognose van maagkanker is hoofdzakelijk door de frequentie van herhaling en metastase. Daarom is het zeer belangrijk om het patroon van herhaling en de risicofactoren voor herhaling, die kunnen bijdragen tot het voeren van postoperatieve klinische praktijk en follow verduidelijken.
In onze studie, 151 (33,6%) patiënten hadden een recidief tijdens de follow -up periode. De gemiddelde tijd tot recidief was 21,1 maanden; 113 patiënten (74,8%) hadden een recidief binnen 2 jaar. Dit resultaat toont aan dat de meeste maagkanker herhaling optreedt binnen 2 jaar, en is consistent met andere studies [10-12]. Yoo et al.
[12] gemeld 508 patiënten met recidief na curatieve resectie voor maagkanker en toonde aan dat de gemiddelde lengte van de tijd om herhaling was 21,8 maanden. Daarom was het noodzakelijk om de follow binnen 2 jaar na curatieve resectie versterken.
Vermeld is dat de meest voorkomende terugkeerpatronen zijn hematogene herhaling en peritoneale verspreiding bij maagkanker [3, 12-14]. In onze reeks, peritoneale recidief de meest voorkomende patroon, goed voor 38,4% van alle patiënten met een recidief, gevolgd door hematogene metastasen (32,5%). Onze resultaten zijn in overeenstemming met eerdere studies [3, 12]. Maehara et al.
Gemeld [15] dat de peritoneale patroon goed voor 50% van de gevallen, hematogene herhaling voor 40% van de gevallen, en loco-regionale recidief 20%. Echter, er zijn nog een aantal geschillen. Een Italiaanse studie toonde aan dat de meest voorkomende herhaling patroon was loco-regionale, goed voor 45% van alle terugkerende gevallen [16]. Dit verschil wordt aangegeven dat er een aantal verschillen in de herhaling patronen tussen oosterse en westerse landen. Het is mogelijk dat de lage incidentie van lokaal recidief in Oost-studies is het gevolg van het veelvuldig gebruik van D2 lymfe-node dissectie.
Herhaling is frequent bij maagkanker patiënten na radicale gastrectomie ondergingen. Daarom is het belangrijk om de patiënten te identificeren met een hoog risico van herhaling. In deze studie univariate analyse toonde dat Borrmann soort, invasiediepte en lymfeklierstatus geassocieerd met algemene recidief. Logistische regressie toonde aan dat de diepte van de invasie en lymfekliermetastasen waren onafhankelijke risicofactoren voor de algehele herhaling. In overeenstemming met onze bevindingen, hebben eerdere studies is gebleken dat de traditionele clinicopathologische factoren zoals serosal belichting, histologische type, de diepte van de invasie, en lymfeklieren metastase waren risicofactoren voor recidief [17-19]. Echter, traditionele clinicopathologische factoren zijn soms ontoereikend voor het voorspellen van herhaling. Een aantal studies hebben aangetoond dat biomarkers, zoals tumormarkers [20, 21], vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) -familie [22, 23], E-cadherine [24, 25] en microRNA's [26], misschien bruikbaar voor het voorspellen herhaling van maagkanker. Bcl-2 zich op chromosoom 18q21, en codeert voor een 26 kDa eiwit voornamelijk gelocaliseerd in het mitochondriale membraan [27]. Het bcl-2-gen werd eerst beschreven als een oncogen in folliculair lymfoom. Sommige studies hebben aangetoond dat overexpressie van bcl-2 onderdrukt cellulaire proliferatie en is geassocieerd met minder agressief biologisch gedrag [28, 29]. De waarde van bcl-2 in het voorspellen maagkanker recidieven is nog onduidelijk. In een eerder onderzoek bleek dat bcl-2 geassocieerd is met de prognose bij maagkankerpatiënten [7]. Daarom hebben we de hypothese dat bcl-2 de biologische aard van de tumor zou weerspiegelen, en zou als een betrouwbare indicator voor het voorspellen van herhaling te dienen. Volgens onze resultaten de negatieve expressie van bcl-2 is een onafhankelijke risicofactor voor maagkanker recidief. Het exacte mechanisme is nog onduidelijk. Het is mogelijk dat bcl-2 beïnvloedt maagkanker herhaling door het reguleren van de tumorcel biologisch gedrag. Saegusa et al.
[28] gemeld dat het merendeel van bcl-2 + kankercellen in een proliferatieve toestand en de gemiddelde expressie van Ki-67 labeling index en etikettering apoptotische index bcl-2 + brandpunten aanzienlijk lager dan in bcl-2 foci. Aizawa et al.
[30] liet zien dat de expressie van bcl-2 in gevorderde maagkanker geassocieerd met een lagere apoptotische index en een betere prognose. Pietenpol et al.
[31] gemeld dat overexpressie van bcl-2 remt de groei van verschillende vaste-tumorcellijnen.

Conclusie Concluderend, de huidige studie aangetoond dat peritoneale recidief de gemeenschappelijke herhaling patroon na curatieve gastrectomie. Diepte van de invasie, lymfekliermetastasen, en negatieve expressie van BCL-2 voorspellen groter risico van herhaling. Deze bevindingen kunnen een aantal nuttige informatie voor de follow-up te bieden bij maagkanker patiënten die een operatie hebben ondergaan voor resectie. Specifiek moet een intensieve follow-up schema te voeren maagkanker patiënten met een negatieve expressie van bcl-2. Echter, de kleinschaligheid en de retrospectieve opzet waren tekortkomingen van de huidige studie. Verdere grootschalige, dienen toekomstige studies worden uitgevoerd om de bruikbaarheid van BCL-2 te valideren bij het opsporen van de tumor recidief bij patiënten met maagkanker.
Notes
Jianghong Wu, Liu Xiaowen eveneens bijgedragen aan dit werk.
Verklaringen
Dankwoord
Wij danken Ben Liotta voor de Engels taal te bewerken in onze manuscript.
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12957_2013_1895_MOESM2_ESM.tif Authors' 12957_2013_1895_MOESM1_ESM.tif Auteurs originele bestand voor figuur 2 12957_2013_1895_MOESM3_ESM.tif Authors 'originele bestand voor figuur 3 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Authors' bijdragen
JHW, XWL en YNW bedacht en ontwierp de experimenten. JHW en XWL voerde de experimenten. JHW, XWL en HC analyseerden de gegevens. HC en YNW bijgedragen reagentia /materialen /analyse-instrumenten. JHW en XWL schreef de krant. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Gecombineerd epitheliale-mesenchymale transitie met kanker stamcel-achtige marker als voorspellers van herhaling na radicale resectie van de maag cancer
• Vergelijking tussen betere en slecht gedifferentieerde lokaal gevorderde maagkanker in preoperatieve chemotherapie: een retrospectief, vergelijkend onderzoek op een enkele tertiaire zorginstelling