Lineage analys av tidiga och avancerade rörformiga adenokarcinom i magen: kontinuerliga eller diskontinuerliga

Lineage analys av tidiga och avancerade rörformiga adenokarcinom i magen:? Kontinuerliga eller diskontinuerliga Bild Sammanfattning
Bakgrund
utrotning av magcancer tidigt ( GC) tros bidra till minskning av dödligheten hos GC, med tanke på att de flesta av de tidiga GC framsteg avancerade GC. Men tidigare GC alternativt betraktas som en vilande variant av GC, och det sällan fortskrider till avancerad GC. Syftet med denna studie var att klargöra omfattningen av överlappning av genetiska linjer mellan tidig och avancerade rörformade adenokarcinom (badkar) i magen.
Metoder
Immunhistokemisk färgning för p53 utfördes med hjälp av 28 kirurgiskt resekterade magar med 13 intramucosal och 15 invasiva badkar. Genom chromosome- och array-baserade jämförande genomisk hybridisering (CGH), genomiskt kopieantal konstitution jämfört mellan slemhinna och invasiva delar av invasiva Tubs och mellan slemhinnor delar av invasiva och intramucosal badkar, med hjälp av 25 och 22 baljor, respektive. TP53
mutation i exon 5-8 undersöktes i 20 baljor.
Resultat
Kromosom CGH avslöjade att 4q + och 11q + var vanligare i avancerade och tidiga badkar, respektive, medan antalet exemplar förändringar i 8Q och 17p visade inga signifikanta skillnader mellan tidiga och avancerade badkar. Visade dock array CGH att av de 13 intramucosal Tubs undersöktes, förlust av MYC
(MYC Omdömen -) var och vinst på TP53
(TP53
+) detekteras i 9 baljor och MYC
+ och /eller TP53 Omdömen - upptäcktes i 3 bad. Av slemhinnor prover av 9 invasiva badkar, 7 visade MYC Omdömen - /TP53
+ och ingen visade MYC
+ och /eller TP53 Omdömen -. Av de 9 prover från invasiva delar, en (från submukosala cancer) visade MYC Omdömen - /TP53
+ och 6 (1 från submukosala och 5 från avancerad cancer) visade MYC
+ och /eller TP53
-. De senare 6 tumörerna visade vanligen en mutant mönster (diffus eller null) i p53 immunohistokemi, och 4 av de 6 tumörerna kan bedömas för TP53
sekvensanalys avslöjade mutationer. Den totala array CGH mönster indikerade att, mellan slemhinna och invasiva delar, genetiska härstamning hittades diskontinuerligt i 5 avancerad cancer och kontinuerlig i 3 submukosala cancer.
Slutsatser
Genetiska linjer ofta skilde mellan början och avancerade badkar. MYC Omdömen - /TP53
+ och MYC
+ och /eller TP53 Omdömen -. Kan vara underskrifter vilande och aggressiva badkar, respektive, i magen
Bakgrund
Magcancer fortfarande den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterade dödsfall i världen, trots en ny minskning av sin dödlighet i de utvecklade länderna [1]. Gastric karcinom (GCS) klassificeras morfologiskt i 2 huvudkategorier: tubulär bildande typ och diffus typ [2, 3] och i byggnadsställning, i början av cancer (som omfattar slemhinna och submukosa) och avancerad cancer (som omfattar muscularis propria eller djupare). Tidigt GC anses vara en härdande cancer [4]; det sägs utvecklas till avancerad GC efter varierande löptider som ett tidigt skede av GC [5, 6]. I Japan kan tidigt GC aktivt opererande endoskopiskt liksom kirurgiskt [7], baserad på principerna om tidig upptäckt och behandling. Å andra sidan, en del patologer hävdar att de rörformiga bildande neoplastiska lesioner som är begränsade till slemhinnan ta en lång tid eller inte kan invadera djupare vävnader. Därigenom är dessa lesioner kallas dysplasi [4].
Nyligen har en mass screeningprogram för neuroblastom i Japan [8-10] avbröts eftersom ett diskontinuerligt genetisk härstamning fanns mellan tidig och sen presenter neuroblastom. Negativa och sena presenterande (≥1 år) neuroblastom visade nästan diploidy med förlust av terminal 1p, medan positiva neuroblastom hos spädbarn visade nästan triploidy utan 1p deletion [11, 12]. Å andra sidan, föreslog jämförande genomisk hybridisering (CGH) -baserad analys att höggradig atypisk adenomatös hyperplasi i lungan är den sanna prekursorn för bronchioloalveolar karcinom [13]. I magen, är det ett problem i vilken utsträckning genetisk härstamning överlappas i början och avancerade GC.
I diffus typ GC, använde vi CGH att visa att kromosom kopietal förändringar i intramucosal signet-ring cellscancer som visade en skiktad struktur [14] ärvdes på en bråkdel av dåligt differentierade GC vid avancerade stadier [15]. Närvaron av en skiktad struktur av klackring celler i de mukosala delarna av dessa avancerade cancerformer föreslog också att klackring cellscancer kan vara en sann prekursor av dåligt differentierade GC. CGH-baserade härstamning analys av en annan delmängd av dåligt differentierade avancerade GC med rörformade komponenter men ingen skiktad struktur i slemhinnans delen visade att GC av denna undergrupp härleddes från ett rörformat komponent i en tumör och kännetecknades av 17p- och 8Q + [16] och inaktivering av vildtyp-TP53
genom mutation och förlust av heterozygositet (LOH) [17]. I syfte att bestämma den tidig motsvarighet av denna typ av GC, analyserade vi intramucosal rörformiga adenokarcinom (TUBS) med användning av CGH. Dessa studier fann att intramucosal Tubs visade inte bara flera kromosomförändringar gemensamma för avancerade GC men också ofta visade 8q- och 17p + som var kritiskt skiljer sig från avancerade och dåligt differentierade GC [18].
I den aktuella studien, upphovsrätt antalet byten av kromosomer och gener undersöktes i slemhinnor och invasiva delar av en annan serie av tidiga och avancerade tubs använder array och kromosomala CGH. Baserat på dessa data visade vi fall av kontinuerliga och diskontinuerliga linjer mellan intramucosal och invasiva delar av individuella tumörer och funnit att TP53 Mössor och MYC
kan vara bra härstamning markörer för gastric Tubs.
Metoder
Institutional Review Board medicinsk etik vid Shiga University of Medical Science godkänts för att genomföra denna forskning under förutsättning att de material som används måste vara anonym.
Tumör prover
denna studie inkluderade 28 kirurgiskt resekterade magar (tabell 1) med 13 intramucosal baljor och 15 invasiva tubs [6 submukosala och 9 avancerad cancer som invaderade muscularis propria eller djupare vävnader (den rörformiga komponenten i varje tumör bedömdes vara mer än 30%)]. Varje mage fixerades i formalin och bäddades in i paraffin. Dessa valdes ut slumpmässigt från de material som diagnostiseras i vår avdelning från 1996 till 2008. Histologisk typer och tumörstadier bestämdes enligt den japanska klassificering för magcancer [19] och pTNM iscensättning, respektive. När en slemhinna histologiska mönster befanns vara heterogen i en enskild invasiv tumör var delen med lägst betyg atypism tas som mucosal provet som kan förhindra möjligheten att åter invasion av invasiva cancerceller i slemhinnan. I invasiv cancer, har DNA-prover som erhållits från intramucosal och invasiva parts.Table 1 Sammanfattning av kliniska, histopatologiska och molekylärgenetiska data för 25 rörformiga adenokarcinom i magen
ärende nr
Ålder /kön
Histologisk typ *
Invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M) Review N0
IA
c /a -
-
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2m
81 /F
pap
T1 (SM) katalog N1
IB
c /a
+ -
S2i
NT /a
+
+
S3M
79 /M
tub1
T1 (SM) Review N0
IA
c /a
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM) katalog N0
IA
c /NT
+
NT
S5M
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
null
NA
A2m
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS) katalog N0
IB
c /a
+ -
A2I
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS) Review N1
II
c /a
+ -
a3Jag
NT /en
+
+
A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS) katalog N2
IIIA
c /a
null -
A4i
NT /a
null
+
A5M
56 /M
tub1
T2 (MP) Review N0
IB
c /NT -
NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
null
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS) Review N1
II
c /a
+ -
A9i
NT /a
+
+
* japanska klassificering av magcancer; ** PTNM klassificering. I kolumnen av mål nr, M = intramucosal cancer; S = cancer innefattande submukosa; A = avancerad cancer; m = mucosal del; i = invasiv del. I kolumnen av CGH, c = kromosomalt CGH; a = array CGH. I kolumnen av p53 immunohistokemi (IHC); "+" Anger diffust (> 70%) positiva kärnor, "-" anger sporadiskt (< 5%) positiva kärnor; "Null" anger ingen immunoreaktivitet alls. I kolumnen av TP53
mutation; "+" Och "-" anger närvaro och frånvaro av mutation, respektive; NA = inte kan bedömas; NT = ej testad
Immunohistokemi
Immunhistokemisk färgning utfördes med monoklonala antikroppar mot p53-protein (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danmark).. Efter antigenåtervinning av vävnadssnitt i destillerat vatten vid 121 ° C under 5 minuter, tillsattes immunoreaktivitet detekteras av en indirekt biotin-streptavidin-peroxidas-metoden med användning av Histofine Kit (Nichirei, Tokyo, Japan) och diaminobensidin reaktion. Snitten motfärgades med hematoxylin. Glas av den negativa kontrollen utan primär antikropp och de av den positiva kontrollen bearbetades parallellt.
Laser microdissection och DNA-framställning
Tumörceller erhölls från 5-um-tjocka vävnadssektioner med användning av en LMD6000 laser microdissection system ( Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland). För enskilda tumörer, har cancerceller som erhållits från områden > 3 mm 2, där cancerceller stod för ≥90% av det totala celltalet. Dessa cancerceller digererades i 200 | il proteinas K-lösning vid en koncentration av 200 | ig /ml i cirka 70 timmar vid 37 ° C, följt av fenol /kloroform DNA-extraktion.
Hela genomet amplifiering
Prov DNA amplifierades användning av degenererade oligonukleotid-primade polymerase chain reaction (DOP-PCR) i 2 faser, såsom beskrivits tidigare [20], vilket resulterade i PCR-produkter mer än 2 kb i storlek, lämplig för nick-translation märkning av CGH. Hus till array CGH, var prov-DNA amplifierades med användning av GenomePlex Tissue hela genomet Amplification Kit (WGA2 Kit; Sigma, St. Louis, USA) [21]. För vissa DNA-prov som inte kunde tillräckligt amplifierade ades WGA5 Kit (Sigma) användes.
CGH (hybridisering, sond-DNA-märkning och bildanalys) Review DOP-PCR-amplifierade tumör och normal DNA märktes med användning av fluorescein-12-dUTP och tetrametylrodamin-5-dUTP (Roche, Mannheim, Tyskland), respektive, genom nick-translation [15]. Hybridiserings- och bildanalyser utfördes såsom beskrivits tidigare [22]. Vinster och förluster i DNA-kopietal definierades av grönt till rött förhållanden > 1,2 och < 0,8 respektive. Kromosomer 1p32-pter, 16p, 19, 22 och Y uteslöts från dessa analyser.
Array CGH
Oligo CGH microarray (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) användes i denna studie , i enlighet med tillverkarens instruktioner. I korthet var tumör och kontroll-DNA icke-enzymatiskt märkt med Cy5 och Cy3, respektive, med hjälp av Genome DNA ULS Märkning Kit (Agilent) och konkurrenskraftigt hybridiserade till microarray. Med användning Feature Extraction Ver.9.5.3 (Agilent), fluorescensintensiteten av tumörerna och kontroller beräknades från de hybridiserade array bilder som tagits med användning av en DNA-mikromatris scanner (Agilent). Kopietal vinster och förluster definierades som bas två logaritmen av tumören signalintensiteten med referenssignalen intensitetsförhållandet mer än 0,3219 och mindre än -0,3219, respektive.
Mutationsanalys för TP53
PCR primeruppsättningar framställdes för exoner 5-8 av TP53
, som hybridiserar till de flankerande introner av varje exon. Se ytterligare en fil 1 för primersekvenser. Den första PCR-blandningen bestod av en buffert, 200 ^ M dNTP, 1,5 mM MgCb 2, 0,8 | iM primer, 1 ng /| il DNA-provet och 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, Kalifornien, USA) i en 25-pl slutlig volym . Efter initial denaturering vid 94 ° C under 2 min, var 40 cykler av PCR utfördes vid 94 ° C under 30 sek, 54 ° C under 1 min och 72 ° C under 1 min, följt av det slutliga förlängningssteg vid 72 ° C under 10 min. Efter bekräftelse av PCR-produkter med hjälp av agarosgelelektrofores, var sekvensen PCR utfördes med användning av BigDye Terminators v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Kalifornien, USA). Reaktionsblandningen bestod av en buffert, 2 pl av den första PCR-produkten, 0,15 | iM primer och 0,5 pl BigDye Terminator V 1,1 i en 10-il slutlig volym. Efter initial denaturering vid 96 ° C under 1 min, var 25 cykler av PCR utfördes vid 96 ° C under 10 sek, 50 ° C under 5 sek och 60 ° C under 4 min. Fram- och back sekvenser bestämdes med användning av ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Mutationer detekterades genom att jämföra dessa prover till referens DNA-sekvensen (GenBank accessionsnummer: HSU94788). Allelisk status bestämdes med användning av förhållandet av mutant till vildtyp toppnivåer i sekvenseringsprofiler.
Statistiska analyser
Beredskaps tabeller analyserades med Fishers exakta test och Cochran-Armitage test. Skillnader på två sidiga tester med P < 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.
Resultat
Immunohistokemi för p53
Färgningsmönstren ansågs överuttryckt endast när ≥70% tumörcellerna uppvisade positivt färgade kärnor när de ses i en låg effekt fältet. Åtta av de 13 intramucosal cancer, alla 6 submukosala cancer och 4 av de 9 avancerad cancer visade diffust positiv nukleär färgning för p53 (tabell 1). En brännfärgningsmönster observerades i fallet # A7. Ett mönster ansågs negativa (representerande vildtyp TP53
) när närvaron av glesa, sporadisk och svag nukleär färgning observerades i < 5% av kärnorna. Ett nollfärgningsmönster observerades i fall # A1, # A4 och # A8, vilket tyder på en icke-sense-mutation av TP53
[23].
Kromosomal CGH
Tjugofem prover från 25 fall (10 mucosal 6 submukosal och 9 avancerad cancer) användes för kromosom CGH. Alla dessa prover erhölls från intramucosal skador som visade lägst betyg atypism.
Medan 4Q + inträffade i de flesta (6/9 fall) av avancerade Tubs var det inte registreras i 16 början Tubs (P = 0,0005). En annan signifikant skillnad kromosomförändringar mellan tidig och avancerad cancer var 11q +, som upptäcktes i 11 av de 16 tidiga cancer och två av de 9 avancerad cancer (P = 0,0414). Av de 10 intramucosal tubs undersökta, 3 visade förlust av 8q (8q-) och /eller förstärkningen av 17p (17p +), medan 7 och 2 visade 8q + och 17p-, respektive. Av de 15 mukosala prover av invasiva tubs undersökta, 3 och 4 visade 8q- och 17p +, respektive, medan 7 och 6 visade 8q + och 17p-, respektive.
Array CGH
Trettioen prover från 22 fall (13 slemhinna, 3 submukös och 6 avancerad cancer) bedömdes med hjälp array CGH (Figur 1). DNA-prover erhölls från intramucosal och /eller invasiva skador. Figur 1 Array CGH data för MYC och TP53 och TP53 sekvensdata i början och avancerade rörformiga adenokarcinom av magen. Tidiga cancer är indelade i intramucosal (m) cancer och submukosala (sm) cancer. Se tabell 1 för provnummer. Siffror är medelvärden test /referensförhållanden av array CGH. Betydande förluster och vinster indikeras med rött och grönt, respektive. Vild typ (wt) och mutation i exon (ex) och mellanliggande sekvens (IVS) av TP53
indikeras med gult och grått, respektive.
Som visas i figur 1 och tabell 2, åtföljande förlust av MYC
(MYC
-) och förstärkningen hos TP53
(TP53 +
) detekterades i 9 av de 13 intramucosal tubs, 7 av de 9 mukosala prover av invasiva tubs, en av de 3 invasiva prover av submukosala cancrar och ingen av de 6 invasiva prover av avancerad cancer. Ett mönster av MYC +
och /eller TP53
- detekterades i tre av de 13 intramucosal cancer, ingen av de 9 mukosala prover av invasiva tubs, en av de 3 invasiva prov av 3 submukosala cancrar och fem av de sex invasiva prov av sex avancerade cancers.Table 2 Förändringar i MYC Mössor och TP53
kopiera nummer i början och avancerade rörformiga adenokarcinom av magen
tumör~~POS=TRUNC djup
slemhinna
submucosa
MP eller djupare -


vid Mukös del
SM
slemhinnor del
djupt
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *) katalog 3
0
en (1 *) 4
0
3 (2 *) Review 8Q (MYC
) -
3
nio (9 **) katalog 3
2 (2 **) Review en (1 **) katalog 0
5 (5 **) Review 1 (0 **) Review 17p (TP53
) +
3
10 (9 **) katalog 3
2 (2 **) Review 2 (1 ** ) 1
6 (5 **) Review 1 (0 **) Review 17p (TP53
) - 2
3 (2 *) Review 2
0
en (1 *) 4
0
4 (2 *) Review SM, submukosa; MP, muscularis propria. cCGH och aCGH, chromosome- och array-baserade jämförande genomisk hybridisering; Siffror inom parentes anger det totala antalet av de undersökta proverna. Fetstil indikerar resultaten av aCGH. Asterisker inom parentes anger samtidighets av MYC
+ och TP53 Omdömen -. Dubbla asterisker indikerar samtidighets av MYC Omdömen -. Och TP53
+
Baserat på den totala matrisen CGH mönster har genetiska linjer visat sig vara diskontinuerliga och kontinuerliga mellan slemhinna och invasiva delar i 5 avancerade och 3 submukosala cancer , respektive. Såsom visas i figur 2, provet från den mukosala del av # S3 visade 4p-, 4q-, 8q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20q + och Y-, medan provet från den invasiva delen av # S3 ärvt samma avvikelser från slemhinna del visade ytterligare avvikelser (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q + och 20q +) och förlorade 4p- och 22q +. I # S1, vinster av 1q, 14q, 19 och 20, och förlust av 18q var vanligt i slemhinnor och submukosala prover, men vinsterna av 1q, 14q, 19q och 20 i submukosa var något mindre än den betydande. I # S2, en gemensam förändring både på slemhinnor och submukosala delar var en vinst på 20p. Den submukosala provet visade ytterligare uppgångar i 10p, 12 och 13q och förluster i 3q, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10q, 12p, 14q, 16 och 19p. Mucosal provet visade förlust av 18q, som återställdes i submukosala provet, eventuellt genom uniparental disomy [24, 25]. I # A1, # A3, # A4, # A8 och A9 # ades avvikelser i proverna från slemhinnor delar inte upptäcks i de av de invasiva delar. I # A2, kan kontinuiteten av genetiska linjer inte bedömas på grund av avsaknad av signifikanta kopietal förändringar i slemhinnans del. Figur 2 Array CGH-profiler. De kromosomala regionerna av kopietal aberrationer i den mukosala del av # S3 (S3M) ingår i stort sett i de i den invasiva delen (S3i), medan de i den mukosala del av # A1 (A1m) skiljer sig från de hos den invasiva delen (A1i) Review TP53
mutationsanalys
Mutationer upptäcktes i 7 av de tumörer som undersöktes med avseende på sekvensanalys av exoner 5-8 av TP53
(figur 1, tabell 3):. 1 av 10 intramucosal cancer, två av de 3 submukosala cancer och alla 4 avancerad cancer (endast de invasiva delar). I alla dessa 7 tumörer, den TP53
allelen var hemizygot utom i ett intramucosal cancer (# M12) med ett heterozygot mönster för en exon-8 mutation (figur 3) och ett diffust eller ett nollmönster för p53, såsom indikeras av immunohistokemi. Ingen TP53
mutation detekterades i p53- prover, såsom visas i fig 4. I p53 + /null prover, två av de 15 prover av den mukosala delen visade TP53
mutation, medan 6 av de 7 prover av invasiva delen visade TP53
mutation (P = 0,0023). I en av de submukosala cancer visar TP53
+ och en hemizygot mutation (den invasiva delen av # S2), TP53
+ kan återspegla uniparental polysomy [24, 25] .table 3 kopietal förändringar i TP53
och MYC Mössor och p53 immunreaktivitet i de testade för mutation prover analyseras
ärende nr
MYC

TP53
Mutation av TP53exons 5-8
Mutant allel
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
vikt Omdömen - -
M4 -
+
vikt
ns -
M5 Omdömen -
+
vikt
ns
+
M6 -
+
vikt -
+
M7
ns
+
vikt -
+
M8 -
+
vikt
ns -
M9 -
+
vikt
ns
+
M10 -
+
vikt -
+
M11
ns
-
wt
ns -
M12
+ -
Exonerna 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M -
+
vikt -
+
S1i Omdömen -
+
vikt -
+
S2m -
+
vikt -
+
S2i
ns
+
exon 7
hemi
ns
+
S3M
ns
ns
exon 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
exon 5/6/8
hemi
ns
+
A1m -
+
vikt Omdömen -
null
A1i
+ -
NA -
null
A2m -
+
vikt
ns
+
A2I
+ -
exon 8
hemi
ns
+
A3M -
+
vikt
ns
+
a3Jag Omdömen - -
exon 5
hemi -
+
A4M -
+
wt -
null
A4i
ns
ns
exon 5
hemi
ns
null
A8M
ns
+
wt -
null
A8i
+ -
NA
ns
null
A9m -
+
vikt -
+
A9i
+
+
exon 6
hemi
ns
+
ns = ej signifikant; wt = vildtyp; NA = inte kan bedömas; hemi = hemizygota; . Hetero = heterozygot
M12, exon 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); exon 8: R267R (CGG > CGA) Review S2i, exon 7: C242F (TGC > TTC) Review S3M, exon 8: R273S (CGT > AGT) Review S3i, exon 5: A161V ( GCC > GTC); exon 6: T211I (ACT > ATT); exon 8: R273S (CGT > AGT) Review A2I, exon 8: R273 H (CGT > CAT) Review a3Jag, exon 5: A161T (GCC > ACC) Review A4i, exon 5: IVS5 + 1G > T
A9i, exon 6: Y220C (TAT > TGT) Review Figur 3 TP53 mutation mönster. En heterozygot mutation med en betydande vildtyp komponent i exon 8 (A) och en hemizygot mutation i exon 5 (B) i ett intramucosal cancer (# M12). Mutationer i andra tumörer som undersöktes var hemizygot som visas i C (# S2).
Figur 4 Relationer mellan p53 immunohistokemi, kopienummer TP53 och hot spot mutation av TP53. För "p53 +" och "p53-", se legenden i tabell 1. "TP53
+", "TP53 Omdömen -" och "TP53
n /s" tyder på betydande kopietal vinst och förlust , och ingen signifikant förändring, respektive. Siffror inom parentes anger antalet prov i invasiva delar. Siffror är provnummer. Siffror inom parentes anger antalet prov i invasiva delar. NA = inte utvärderas i.
Å andra sidan, i de mukosala prover, var det diffusa /null mönster som ofta förknippas med vildtyp TP53
. För att förklara detta fynd var MDM2
kopietal undersöktes med hjälp av array CGH uppgifter. Av totalt 22 prover bedömas för TP53
mutationsanalys, MDM2
visade kopietal förlust i 10 av de 14 prover med vild-typ TP53 Mössor och en av de 8 prover med TP53
mutation . (P = 0,0237) katalog Diskussion
i intramucosal tubs, kromosomalt CGH avslöjade 8q- och /eller 17p + vid en frekvens av 3 av 10 tumörer som undersöktes; Dessa förändringar var vanligare i en tidigare studie som använde slumpmässig priming märkning [18]. I den aktuella studien var 8Q + ofta upptäcks både i intramucosal cancer (7/10) och invasiv cancer (7/15); Men, den ovan nämnda tidigare data visade sällan 8Q +. Dessa skillnader kan spegla skillnader i märkningsmetoder som används; CGH resultat med nick translation märkning eller slumpmässig priming märkning jämfördes med FISH signaler, och det konstaterades att nick translation märkningen inte sällan visade falskt positiva vinster [26]. Men användning av samma betingelser märkning, betydande skillnader i förekomsten av 4q + och 11q + upptäcktes mellan tidiga och avancerad cancer, möjligen återspeglar skillnader i genetiska linjer mellan dem. Kromosomal CGH data för avancerad cancer i denna studie överensstämde med tidigare kromosomala CGH data som erhållits med nick-translation märkning av avancerade GC (dvs 17p- och 8Q + var ganska vanligt) [27-30].
Även om kliniskt urskiljbara tidiga cancer är i allmänhet anses föregångarna av avancerad cancer [5, 6], de intramucosal och invasiva delar av avancerade tubs visade ofta disharmoniska kopieantal av MYC Mössor och TP53
i denna studie: MYC Omdömen - och TP53
+ i 5 av de 6 prover av slemhinnor delar, så ofta som i intramucosal cancer undersöktes och MYC
+ och /eller TP53 Z - i 5 av de 6 prover av invasiva delar. Dessutom, baserat på den totala matrisen CGH mönster av den mukosala och invasiva delar av tumörer gavs en diskontinuerlig genetiska härstamning finns i 5 av de 6 avancerad cancer. Det förefaller därför att tumör klonerna i de mukosala delarna av de avancerade cancerformer inte var föregångare av den invasiva delen, men minuten intramucosal cancer som förmodligen samexisterade med invasiv cancer. Det har rapporterats att flera minuten cancer är vanligare i badkar än i odifferentierad typ GC [31]. I avancerade badkar, kanske intramucosal föregångare till en invasiv komponent har förlorats på grund av sårbildning i tumören, eller föregångaren var inte undersöktes eftersom den inte sammanfaller med den del av lägsta graden av atypism, till vilken prövningen av slemhinnans del av invasiv GC var begränsad i föreliggande studie.
Å andra sidan, i submukosala cancer, en kontinuerlig genetiska härstamning hittades i alla de 3 submukosala tumörer som undersökts. Det kan bero på att mucosal delen är i princip kvar i början av GC och eftersom slemhinna föregångare till en invasiv komponent visade lägst betyg atypism och inte undantas från den nuvarande uppsättningen analyser. Slemhinna och invasiva delar hade gemensamma regioner kopietal aberrationer med samstämmiga brytpunkter, och de flesta av förändringarna i slemhinnan del ingick i de av invasiva delen. . På gennivå, kopierings antalet MYC Mössor och TP53
överensstämde mellan slemhinnor och submukosala delar i 2 av de 3 submukosala cancer
TP53 Omdömen - och /eller MYC
+ mönster detekterades inte bara i de invasiva delar av en av de submukosala cancrar och de flesta av de avancerade cancerformer utan även i tre av de 13 intramucosal cancer. I dessa tumörer, p53 immunohistokemi visade en diffus eller null (mutation) mönster (Tabell 1 och 3), vilket antyder att TP53
- kan återspegla LOH och den resulterande inaktivering av vildtyp TP53
. Sekvensering analyser av mutations hotspots i TP53
har visat att hemizygot mutationer (dvs mutation och LOH) upptäcktes i slemhinnor prover av en av de 3 intramucosal cancer och en submukosala cancer med TP53 Z - mönster, som samt invasiva delar av 4 avancerad cancer som var informativ för TP53
mutationsanalys. Sådan inaktivering av vildtyp TP53
, vilket kan orsaka ytterligare genomisk instabilitet, har ofta rapporterats i avancerade GCS [15, 17]. Den MYC
genlocus är också känt att ofta visa kopietal vinster eller förstärkningar i olika avancerad cancer [32]. MYC
+ /TP53 Omdömen - kan därmed försvaras som undertecknandet av aggressiva GC
Det har rapporterats att LOH liksom mutationer av TP53
oftare upptäcks i avancerade GC än i början. GC [17, 33], och att, inom tidigt GCS, TP53
mutationer oftare detekteras i submukosala tUBS än i intramucosal baljor [34, 35]. Denna tendens observerades också i denna studie, men mutation studier har visat att hot spots mutationer inte upptäcktes i slemhinnans del av tumörerna, utom i ett intramucosal cancer (# M12). Dessutom kopietal förlust av MDM2
, som spelar en roll i p53 nedbrytning [36], korrelerade med diffus p53-överuttryck i frånvaro av en TP53
mutation. Detta fenomen är knappast rapporterats, men skulle kunna vara en av mekanismerna för p53 uttryck i början av GC.
I tidiga cancer, kan det vara vilande och invasiva komponenter samt sanna föregångare av avancerad cancer. Bland de tidiga cancer som undersöktes i denna studie, en invasiv del av en tumör (# S3) och 3 intramucosal cancer (# M11, # M12 och # M13) visade undertecknandet av aggressiv cancer (MYC
+ och /eller TP53 Omdömen -) och frekventa mutationer av TP53
; men i en submukosala cancer (# S1), de invasiva delar visade undertecknandet av vilande cancer (MYC Omdömen - /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 resektion och hyper intraperitoneal kemoterapi vid lokalt avancerad magsäckscancer: en randomiserad och multicenter fas III-studie
• Tids egenskaper effekten av alkohol upphörande på risken för magcancer - en metaanalys