Lineage analyse av tidlige og avanserte rørformede adenokarsinomer i magen: kontinuerlig eller diskontinuerlig

Lineage analyse av tidlige og avanserte rørformede adenokarsinomer i magen:? Kontinuerlige eller usammenhengende
Abstract
Bakgrunn
Utryddelse av tidlig magekreft (GC) er tenkt å bidra til reduksjon i dødelighet av GC, gitt at de fleste av de tidlige GCer fremgangen til de avanserte GCer. Imidlertid er tidlig GC alternativt betraktes som en hvilende variant av GC, og det sjelden utvikler seg til avanserte GC. Hensikten med denne studien var å avklare omfanget av overlapping av genetiske linjene mellom tidlig og avanserte rørformede adenokarsinomer (badekar) i magen
. Metoder
Immunhistokjemisk farging for p53 ble utført med 28 kirurgisk resected mager med 13 intramucosal og 15 invasive kar. Ved chromosome- og matrisebaserte komparativ genomisk hybridisering (CGH), ble genomisk kopiantall grunnlov forhold mellom slimhinnene og invasive deler av invasive badekar og mellom slimhinne deler av invasive og intramucosal kar, som bruker 25 og 22 kar, henholdsvis. TP53
mutasjon i eksoner 5-8 ble undersøkt i 20 kar.
Resultater
kromosom CGH avslørt at 4Q + og 11q + var mer vanlig i avanserte og tidlig badekar, henholdsvis, mens kopiere nummeret endres i 8q og 17p viste ingen signifikante forskjeller mellom tidlige og avanserte kar. Men, array CGH viste at av de 13 intramucosal Tubs undersøkt, tap av MYC plakater (MYC
-) ble og gevinst på TP53 plakater (TP53
+) påvist i 9 kar og MYC
+ og /eller TP53 Anmeldelser - ble oppdaget i 3 kar. Av de slimhinneprøver av 9 invasive stamper, 7 viste MYC Anmeldelser - /TP53
+ og ingen viste MYC
+ og /eller TP53 Anmeldelser -. Av de 9 prøvene fra invasive deler, en (fra submukøse kreft) viste MYC Anmeldelser - /TP53
+ og 6 (1 fra submucosal og 5 fra avansert kreft) viste MYC
+ og /eller TP53
-. De sistnevnte 6 tumorer som vanligvis viser en mutant mønster (diffus eller null) i p53 immunhistokjemi, og 4 av de 6 tumorer assessable for TP53
sekvensanalyse viste mutasjoner. Den samlede utvalg CGH mønster antydet at mellom slimhinnene og invasive deler, ble genetisk avstamning funnet usammenhengende i 5 avansert kreft og kontinuerlig i 3 submukøse kreft.
Konklusjoner
genetiske linjene ofte skilte mellom tidlige og avanserte kar. MYC
- /TP53
+ og MYC
+ og /eller TP53.
- Kan være underskriftene sovende og aggressive badekar, henholdsvis i magen
Bakgrunn
Magekreft er fortsatt den nest vanligste årsaken til kreftrelaterte dødsfall i verden, til tross for en fersk nedgang i sin dødelighet i utviklede land [1]. Gastric karsinom (GCS), klassifiseres morfologisk inn i 2 hovedkategorier: rørformet dannende type og diffuse typen [2, 3], og i oppsetningen, i tidlig kreft (som involverer mucosa og submucosa) og avanserte kreftformer (som involverer muskularis propria eller dypere). Tidlig GC er ansett som en helbredelig kreft [4]; det angivelig utvikler seg til avanserte GC etter varierende varighet som et tidlig stadium av GC [5, 6]. I Japan, kan tidlig GCer aktivt resected endoskopisk samt kirurgisk [7], basert på prinsippene om tidlig oppdagelse og behandling. På den annen side er det enkelte patologer hevder at de rørformede dannende neoplastiske lesjoner som er begrenset til mucosa ta lang tid til eller ikke er i stand til å invadere dypere vev. Dermed er disse lesjonene kalles dysplasi [4].
Nylig ble en masseundersøkelsesprogram for neuroblastomer i Japan [8-10] ble suspendert fordi en usammenhengende genetisk avstamning ble funnet mellom tidlig- og sen-presentere neuroblastomer. Negative og sen-presentasjon (≥1 år) neuroblastomer viste nesten diploidy med tap av terminal 1p, mens positive neuroblastomer hos spedbarn viste nesten triploidy uten 1p sletting [11, 12]. På den annen side, sammen genomisk hybridisering (CGH) -baserte analyser antydet at høyverdig atypisk adenomatøs hyperplasi i lungen er den sanne forløperen til bronchioloalveolar karsinom [13]. I magesekken, er det et problem i hvilken grad genetisk avstamning er overlappet i tidlig og avanserte GCer.
I diffus typen GCer, brukte vi CGH for å vise at kromosomale kopi-antall forandringer i intramucosal signet-ring karsinomer som viste en lagdelt struktur [14] ble arvet i en brøkdel av dårlig differensierte GCer på avanserte stadier [15]. Tilstedeværelsen av en lagdelt struktur med signet ring celler i slimhinne deler av disse avanserte kreftformer også foreslått at signet ring karsinomer kan være en sann forløper for dårlig differensierte GCer. CGH-baserte avstamning analyse av en annen undergruppe av dårlig differensierte avanserte GCer med rørformede komponenter, men ingen lagdelt struktur i slimhinne delen avdekket at GCer av denne undergruppen var avledet fra et rørformet komponent i en tumor og ble karakterisert ved 17p- og 8q + [16] og inaktivering av villtype-TP53
ved mutasjon og tap av heterozygositet (LOH) [17]. For å bestemme tidlig stadium motstykke til denne type GC, analyserte vi intramucosal rørformede adenokarsinomer (kar) ved hjelp av CGH. Disse studiene fant at intramucosal kar viste ikke bare flere kromosomforandringer felles for avanserte GCer men viste også ofte 8q- og 17p + som var kritisk forskjellig fra avanserte og dårlig differensiert GCer [18].
I denne studien, ko- antall endringer av kromosomer og gener ble undersøkt i slimhinnene og invasive deler av en annen serie av tidlige og avanserte kar ved hjelp av matrise og kromosom CGH. Basert på disse dataene, vi demonstrert tilfeller av kontinuerlige og diskontinuerlige linjene mellom intramucosal og invasive deler av enkelte svulster og fant at TP53 Hotell og MYC
kan være gode avstamning markører for mage kar.
Metoder
Institutional Review Board på medisinsk etikk ved Shiga University of Medical Science gitt godkjenning for å drive denne forskningen på betingelse av at materialene som brukes må være anonym.
Tumorprøver prøver~~POS=HEADCOMP
denne studien inkluderte 28 kirurgisk resected mager (tabell 1) med 13 intramucosal stamper og 15 invasive kar [6 submucosal og 9 avanserte kreftformer som invaderte muskularis propria eller dypere vev (den rørformede komponent av hver tumor ble vurdert til å være mer enn 30%)]. Hver magen ble løst i formalin og innstøpt i parafinvoks. Disse ble tilfeldig valgt fra materialene diagnostisert i vår avdeling fra 1996 til 2008. Histologisk typer og tumorstadier ble bestemt i henhold til den japanske Klassifisering av magekreft [19] og pTNM iscenesettelse, henholdsvis. Når en slimhinne histologisk mønster ble funnet å være heterogene i et individ invasive svulster, ble den delen med den laveste grad av atypism tatt som slimhinne prøven som kan hindre muligheten for re-invasjon av invasive kreftceller inn i slimhinnen. I invasiv kreft, ble DNA-prøver hentet fra intramucosal og invasiv parts.Table en oppsummering av kliniske, histopatologiske og molekylærgenetiske data for 25 rørformet adenokarsinom i magen
case No.
Alder /kjønn
Histologisk type *
Invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
N0
IA
c /a -
-
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2m
81 /F
pap
T1 (SM)
N1
IB
c /a
+ -
S2i
NT /a
+
+
S3M
79 /M
tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /a
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /NT
+
NT
S5m
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
null hoteller, NA
A2M
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
c /a
+ -
a2Jeg
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A3i
NT /en
+
+
A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS)
N2
IIIA
c /a
null -
a4Jeg
NT /a
null
+
A5M
56 /M
tub1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT -
NT
a5Jeg
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
null hoteller, NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A9i
NT /a
+
+ product: * japansk klassifisering av magekreft; ** PTNM klassifisering. I kolonnen over Case Nei, M = intramucosal kreft; S = kreft involverer submucosa; A = fremskreden kreft; m = mucosal del; i = invasiv del. I kolonnen av CGH, c = kromosomalt CGH; en = array CGH. I kolonnen av p53 immunhistokjemi (IHC); "+" Indikerer diffust (ved 70%) positive kjerner, "-" indikerer sporadisk (mindre enn 5%) positive kjerner; "Null" indikerer ingen immunreaktivitet i det hele tatt. I kolonnen for TP53
mutasjon; "+" Og "-" indikerer nærvær og fravær av mutasjon, henholdsvis; NA = ikke aktuelle; NT = ikke testet
Immunohistochemistry
Immunhistokjemisk farging ble utført med monoklonale antistoffer mot p53 protein (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danmark).. Etter antigen gjenfinning av vevssnittene i destillert vann ved 121 ° C i 5 minutter, ble immunreaktivitet detektert ved en indirekte biotin-streptavidin-peroksidase-metoden ved hjelp av Histofine Kit (Nichirei, Tokyo, Japan) og diaminobenzidin reaksjon. Seksjonene ble kontra med haematoxylin. Lysbilder av den negative kontrollen uten det primære antistoff og de til den positive kontrollen ble behandlet parallelt.
Laser mikrodisseksjon og DNA-preparat
Svulstceller ble oppnådd fra 5-um tykke vevssnitt ved hjelp av en laser LMD6000 mikrodisseksjon system ( Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland). For individuelle tumorer, ble kreftceller oppnådd fra områder > 3 mm 2, hvor kreftcellene utgjorde ≥90% av det totale celletall. Disse kreftcellene ble spaltet i 200 pl proteinase K-oppløsning ved en konsentrasjon på 200 ug /ml til ca 70 timer ved 37 ° C, etterfulgt av fenol /kloroform-DNA-ekstraksjon.
Antall genom-amplifikasjon
Prøve-DNA ble amplifisert ved bruk av degenererte oligonukleotid-primet polymerasekjedereaksjon (DOP-PCR) i 2 faser, slik som beskrevet tidligere [20], noe som resulterte i PCR-produktene mer enn 2 kb i størrelse, egnet for nick-translasjon for merking CGH.
for matrisen CGH, prøve-DNA ble forsterket ved hjelp av GenomePlex Tissue Whole Genome Amplification Kit (WGA2 Kit, Sigma, St. Louis, USA) [21]. For enkelte DNA-prøver som ikke kunne bli tilstrekkelig forsterket, ble WGA5 Kit (Sigma) anvendes.
CGH (hybridisering, probe DNA-merking og digital bildeanalyse)
DOP-PCR-amplifisert tumor og normal-DNA ble merket ved hjelp fluorescein-12-dUTP og tetra-5-dUTP (Roche, Mannheim, Tyskland), respektivt, ved nick-translasjon [15]. Hybridiserings- og bildeanalyser ble utført som beskrevet tidligere [22]. Gevinst og tap i DNA kopiantall ble definert av grønn til rød forholdstall > 1,2 og < 0,8, henholdsvis. Kromosomer 1p32-Pter, 16p, 19, 22 og Y ble ekskludert fra analysene.
Array CGH
Oligo CGH mikromatriser (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) ble brukt i denne studien , i henhold til produsentens instruksjoner. I korte trekk, tumor og kontroll DNA var ikke-enzymatisk merket med henholdsvis Cy5 og Cy3, ved hjelp av Genome DNA ULS Merking Kit (Agilent) og konkurranse hybridisert til microarray. Bruke Feature Extraction Ver.9.5.3 (Agilent), fluorescens intensitet av svulstene og kontrollene ble beregnet ut fra de hybridiserte array-bilder tatt med et DNA microarray scanner (Agilent). Kopi-antall Avvik ble definert som base 2 logaritmen av tumoren signalintensiteten til det referansesignalintensitetsforholdet mer enn 0,3219 og mindre enn -0,3219, respektivt.
Mutasjonsanalyse for TP53
PCR primersett ble fremstilt etter eksonene 5-8 TP53
, som hybridiserer til de flankerende introner i hvert exon. Se ytterligere fil 1 for primer sekvenser. Den første PCR-blanding besto av en buffer, 200 uM dNTP, 1,5 mM MgCl 2, 0,8 uM primer, 1 ng /ul prøve-DNA og 0,5 U platina Taq (Invitrogen, California, USA) i en 25 ul sluttvolum . Etter innledende denaturering ved 94 ° C i 2 minutter, ble 40 cykler av PCR utført ved 94 ° C i 30 sek, 54 ° C i 1 minutt og 72 ° C i 1 minutt, fulgt av den endelige forlengelsestrinn ved 72 ° C i 10 min. Etter bekreftelse av PCR produktene ved agarosegel-elektroforese, ble sekvensen PCR utført ved hjelp av BigDye Terminators v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, California, USA). Reaksjonsblandingen besto av en buffer, 2 pl av det første PCR-produktet, 0,15 uM primer og 0,5 ul BigDye Terminator V 1,1 i 10 ul sluttvolum. Etter innledende denaturering ved 96 ° C i 1 min, ble 25 cykler av PCR utført ved 96 ° C i 10 sek, 50 ° C i 5 sekunder og 60 ° C i 4 min. Forover- og revers sekvenser ble bestemt ved bruk av ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Mutasjoner ble detektert ved å sammenligne disse prøver til referanse DNA-sekvensen (GenBank tilgangsnummer: HSU94788). Allelic status ble bestemt ved hjelp av forholdet mellom mutant til villtype toppnivåer i sekvense profiler
. Statistiske analyser
Beredskaps bord ble analysert ved Fishers eksakte test og Cochran-Armitage tester. Forskjeller av to-sidige tester med P < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Immunohistochemistry for p53
Farging mønstre ble ansett overexpressed bare når ≥70% tumorcellene viste positivt farget atomkjerner sett i et lavt strømforbruk feltet. Åtte av de 13 intramucosal kreftformer, alle 6 submukosale kreftformer og 4 av de 9 avansert kreft viste diffust positiv nukleær farging for p53 (tabell 1). Et samlingsfargemønster ble observert i tilfelle # A7. Et mønster ble ansett som negativt (som representerer villtype-TP53
) når det ble observert at tilstedeværelse av sparsom, sporadisk og svak nukleær farging på mindre enn 5% av kjernene. En null fargemønster ble observert i tilfeller # A1, # A4 og # A8, noe som tyder på en ikke-følelse mutasjon av TP53 product: [23].
Kromosom CGH
Tjuefem prøver fra 25 tilfeller (10 slimhinne , 6 submucosal og 9 avansert kreft) ble anvendt for kromosomal CGH. Alle disse prøvene ble hentet fra intramucosal lesjoner som viste den laveste karakteren atypism.
Mens 4Q + skjedde i de fleste (6/9 tilfeller) av avanserte badekar, ble det ikke påvist i de 16 første kar (P = 0,0005). En annen vesentlig forskjellige kromosomale endring mellom tidlig og avansert kreft var 11q +, som ble påvist i 11 av de 16 tidlig kreft og 2 av de 9 avansert kreft (P = 0,0414). Av de 10 intramucosal Tubs undersøkt, 3 viste tap av 8q (8q-) og /eller gevinst på 17p (17p +), mens 7 og 2 viste 8q + og 17p- hhv. Av de 15 slimhinneprøver av invasive kar undersøkt, 3 og 4 viste 8q- og 17p +, henholdsvis, mens 7 og 6 viste 8q + og 17p- hhv.
Array CGH
Tretti-en prøver fra 22 tilfeller (13 slimhinnene, 3 submucosal og 6 avansert kreft) ble vurdert ved hjelp av matrise CGH (figur 1). DNA-prøver ble oppnådd fra intramucosal og /eller invasive lesjoner. Figur 1 Array CGH data av MYC og TP53 og TP53 sekvense data i tidlige og avanserte rørformede adenokarsinomer av magen. Tidlig kreft er delt inn intramucosal (m) kreft og submukøse (SM) kreft. Se tabell 1 for prøvenummer. Tallene er gjennomsnitts test /referanse prosenter av matrise CGH. Vesentlige tap og gevinster er merket med rødt og grønt, henholdsvis. Villtype (wt) og mutasjon i exon (ex), og intervenerende sekvens (IVS) for TP53
er angitt med gul og grå, respektivt.
Som vist i figur 1 og tabell 2, samtidig tap av MYC
(MYC
-) og gevinst på TP53 plakater (TP53 +
) ble påvist i ni av de 13 intramucosal badekar, 7 av de 9 slimhinneprøver av invasive kar, en av de 3 invasive prøver av submukøse kreft og ingen av de 6 invasive prøver av avansert kreft. Et mønster av MYC + Hotell og /eller TP53 Anmeldelser - ble oppdaget i tre av de 13 intramucosal kreft, ingen av de 9 slimhinneprøver av invasive kar, en av de 3 invasive prøver av 3 submukøse kreft og 5 av 6 invasive prøver av seks avanserte cancers.Table 2 Endringer av MYC Hotell og TP53
kopiere numre i tidlige og avanserte rørformede adenokarsinomer av magen
Tumor dybde
Slimhinner
submucosa
MP eller dypere -



slimhinner del
SM
slimhinnene del
Deep
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *)
3
0
1 (1 *)
4
0
3 (2 *)
8q (MYC
) -
3
ni (9 **)
3
2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) +
3
10 (9 **)
3
2 (2 **)
2 (1 ** )
1 6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) -
2
3 (2 *)
2
0
1 (1 *)
4
0
4 (2 *)
SM, submucosa; MP, muskularis propria. cCGH og aCGH, chromosome- og matrisebaserte komparativ genomisk hybridisering; Tall i parentes angir det totale antall av de undersøkte prøvene. Fet bokstaver indikerer resultatene av aCGH. Stjernene i parentes indikerer concomitance av MYC
+ og TP53
-. Doble stjernene indikerer concomitance av MYC.
- Og TP53
+
Basert på den generelle rekke CGH mønstre, ble genetiske linjene funnet å være usammenhengende og kontinuerlig mellom slimhinnene og invasive deler i 5 avansert og 3 submukøse kreft hhv. Som vist i figur 2, prøven fra slimhinne del av # S3 viste 4p-, 4q-, 8q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20Q + og Y, mens prøven fra invasive del av # S3 arvet de samme avvik fra slimhinnene del, viste flere avvik (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q + og 20Q +) og tapte 4p- og 22q +. I # S1, gevinster av 1Q, 14q, 19 og 20, og tap av 18q var vanlig i slimhinnene og submukøse prøver, selv om gevinstene av 1Q, 14q, 19q og 20 i submucosa var litt mindre enn den betydelig nivå. I # S2, en vanlig endring i både slimhinne og submukøse deler var en gevinst på 20 p. Den submucosal prøve viste flere gevinster i 10p, 12 og 13q og tap i 3. kvartal, 4, 5, 8p, 9 p, 9q, 10Q, 12p, 14q, 16 og 19p. Slimhinnene prøve viste tap av 18q, som ble restaurert i submucosal prøven, eventuelt ved uniparental disomy [24, 25]. I # A1, # A3, # A4, # A8 og # A9, ble avvik i prøvene fra de slimhinne deler ikke påvist i de av invasive deler. I # A2, kan kontinuiteten av genetiske linjene ikke evalueres på grunn av fraværet av vesentlige kopi-antall endringer i den mukosale side. Figur 2 Array CGH profiler. Den kromosomale regioner av kopitall aberrasjoner i slimhinne del av # S3 (S3M) er inkludert i utgangspunktet i de i den invasive delen (S3i), mens de i den mucosal del av # A1 (A1 m) er forskjellige fra de av invasive del (a1Jeg)
TP53
ble detektert mutasjonsanalyse
Mutasjoner i 7 av de tumorene som ble kontrollert for sekvensanalyse av exoner 5-8 av TP53 plakater (figur 1, tabell 3). en av 10 intramucosal kreft, 2 av de 3 submukøse kreft og alle 4 avansert kreft (bare de invasive deler). I alle disse 7 tumorer, TP53
allelet ble hemizygous unntatt i en intramucosal kreft (# M12) med en heterozygot mønster for en exon-8-mutasjon (figur 3) og en diffus eller et null mønster for p53, som indikert av immunhistokjemi. Ingen TP53
mutasjon ble detektert i p53- prøver, som vist i figur 4. I p53 + /null prøver, 2 av de 15 prøver av slimhinne del viste TP53
mutasjon, mens 6 av de 7 prøver av invasive delvis viste TP53
mutasjon (P = 0,0023). I en av de submukøse kreft viser TP53
+ og en hemizygous mutasjon (invasiv del av # S2), TP53
+ kan reflektere uniparental polysomy [24, 25] .table tre kopiantall endringer av TP53
og MYC Hotell og p53 immunoreaktivitets i prøvene som ble testet for mutasjonsanalyser
case No.
MYC <.no> TP53
Mutasjon av TP53exons 5-8
Mutant allel
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
vekt -
-
M4 -
+
vekt
ns -
M5
-
+
vekt
ns
+
M6 -
+
vekt -
+
M7
ns
+
vekt -
+
M8 -
+
vekt
ns -
M9 -
+
vekt
ns
+
M10 -
+
vekt -
+
M11
ns
-
vekt
ns -
M12
+ -
Eksoner 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1m -
+
vekt -
+
S1i
-
+
vekt -
+
S2m -
+
vekt -
+
S2i
ns
+
ekson 7
hemi
ns
+
S3M
ns
ns
ekson 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
eksoner 5/6/8
hemi
ns
+
A1 m -
+
vekt
-
null
a1Jeg
+ -
NA -
null
A2M -
+
vekt
ns
+
a2Jeg
+ -
ekson 8
hemi
ns
+
A3M -
+
vekt
ns
+
A3i -
-
ekson 5
hemi -
+
A4M -
+
wt -
null
a4Jeg
ns
ns
ekson 5
hemi
ns
null
A8m
ns
+
vekt -
null
A8i
+ -
NA
ns
null
A9m -
+
vekt -
+
A9i
+
+
exon 6
hemi
ns
+
ns = ikke signifikant; wt = vill type; NA = ikke aktuelle; hemi = hemizygous; . Hetero = heterozygot
M12, ekson 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); ekson 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, ekson 7: C242F (TGC > TTC)
S3M, ekson 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, ekson 5: A161V ( GCC > GTC); exon 6: T211I (ACT > ATT); ekson 8: R273S (CGT > AGT)
a2Jeg, ekson 8: R273 H (CGT > CAT)
A3i, ekson 5: A161T (GCC > ACC)
a4Jeg, ekson 5: IVS5 + 1G > T
A9i, ekson 6: Y220C (TAT > TGT)
Figur 3 TP53 mutasjonsmønstre. En heterozygot mutasjon med en betydelig vill-type komponent i ekson 8 (A) og en hemizygous mutasjon i exon 5 (B) i en intramucosal kreft (# M12). Mutasjoner i andre svulster undersøkte var hemizygous som vist i C (# S2).
Figur 4 Forholdet mellom p53 immunhistokjemi, kopiere antall TP53 og hot spot mutasjon av TP53. For "p53 +" og "p53-", se legenden i Tabell 1. "TP53
+", "TP53
-" og "TP53
n /s" indikerer betydelig kopitall gevinst og tap , og ingen vesentlig endring, respektivt. Tall i parentes angir antall sampler i invasive deler. Tallene er prøvenummer. Tall i parentes angir antall sampler i invasive deler. NA = ikke aktuelle.
På den annen side, i slimhinneprøver, ble det diffuse /null mønster ofte forbundet med vill-type TP53
. For å forklare dette funn ble MDM2
kopiantallet undersøkt ved hjelp av matrise CGH-data. Av totalt 22 prøver vurderes for TP53
mutasjonsanalyse, MDM2
viste kopitall tap i 10 av de 14 prøvene med vill-type TP53
og en av de 8 prøvene med TP53
mutasjon . (P = 0,0237)
diskusjon
i intramucosal stamper, kromosom CGH avslørt 8q- og /eller 17p + med en frekvens på 3 av 10 svulster undersøkt; disse endringene var mer vanlig i en tidligere studie som brukes tilfeldig priming merking [18]. I denne studien ble 8q + hyppig påvist både i intramucosal kreft (7/10) og invasive krefttyper (7/15); Men den ovennevnte tidligere data viste sjelden 8Q +. Disse uoverensstemmelsene kan gjenspeile forskjeller i merke metoder som brukes; CGH resultater med nick oversettelse merking eller tilfeldig priming merking ble sammenlignet med FISH signaler, og det ble funnet at nick oversettelse merking ikke sjelden viste falske positive gevinster [26]. Men ved å bruke de samme merking forhold, signifikante forskjeller i forekomsten av 4Q + og 11q + ble påvist mellom tidlig og avansert kreft, muligens gjenspeiler forskjeller i genetiske linjene mellom dem. Kromosom CGH data av avansert kreft i denne studien var i samsvar med tidligere kromosom CGH data innhentet med nick oversettelse merking for avanserte GCer (dvs. 17p- og 8q + var ganske vanlig) [27-30].
Selv om klinisk merk tidlig kreft er vanligvis vurderes forløperne til avansert kreft [5, 6], de intramucosal og invasive deler av avanserte kar viste ofte uharmoniske kopiantall av MYC Hotell og TP53
i denne studien: MYC
- og TP53
+ i 5 av de 6 prøver av slimhinne deler, så vanlig som i intramucosal kreft undersøkt, og MYC
+ og /eller TP53
- i 5 av de 6 prøver av invasiv deler. I tillegg, basert på den totale matrise CGH mønster av mucosal invasive og deler av tumor, ble en diskontinuerlig genetisk avstamning funnet i 5 av de 6 avansert kreft. Derfor ser det ut til at tumor klonene i slimhinne deler av avansert kreft ikke var forløpere av invasive del, men liten intramucosal kreftformer som sannsynligvis coexisted med invasiv kreft. Det har blitt rapportert at flere minutt kreft er mer vanlig i kar enn i udifferensiert type GCer [31]. I avanserte kar, kan det hende at intramucosal forløperen til en invasiv komponent har gått tapt på grunn av sårdannelse i svulsten, eller forløperen ble ikke undersøkt fordi det ikke sammenfaller med den delen av laveste grad av atypism, som behandlingen av slimhinne del av invasive GCer ble innesperret i den foreliggende undersøkelse.
på den annen side, i submukosale kreftformer, en kontinuerlig genetisk avstamning ble funnet i alle de 3 submukosale svulster undersøkt. Det kan være på grunn slimhinne del er i utgangspunktet fastholdt i tidlig GCer og fordi den mucosal forløper av en invasiv komponent viste den laveste grad av atypism og er ikke ekskludert fra den foreliggende matrise analysene. Slimhinnene og invasive deler hadde felles områder av kopitall avvik med samstemmige stoppunkter, og de fleste av endringene i slimhinnene del ble inkludert i de av invasive delen. . På gennivå, kopierings antall MYC Hotell og TP53
var i overensstemmelse mellom slimhinne og submukøse deler i 2 av de 3 submukøse kreft
TP53
- og /eller MYC
+ mønster ble påvist ikke bare i de invasive delene av en av de submukosale kreft og de fleste av avansert kreft, men også i 3 av de 13 intramucosal kreft. I disse svulstene, p53 immunhistokjemi viste en diffus eller null (mutasjon) mønster (tabell 1 og 3), noe som tyder på at TP53 Anmeldelser - kan reflektere LOH og den resulterende inaktivering av villtype TP53
. Sekvense analyser av mutasjons hot spots i TP53
har vist at hemizygous mutasjoner (dvs. mutasjon og LOH) ble påvist i slimhinne prøver av en av de 3 intramucosal kreft og en submucosal kreft med TP53 Z - mønster, som samt invasiv deler av de 4 avansert kreft som var informativ for TP53
mutasjon analyse. En slik inaktivering av vill-type TP53
, noe som kan føre til ytterligere genomiske ustabilitet, er blitt rapportert hyppig i avanserte GCer [15, 17]. Den MYC
gen locus er også kjent å vise ofte kopitall gevinst eller amplifikasjoner i ulike avansert kreft [32]. MYC
+ /TP53 Anmeldelser - dermed kan rettferdiggjøres som signaturen aggressive GC
Det har blitt rapportert at LOH samt mutasjoner av TP53
oftere påvist i avanserte GCer enn i begynnelsen. GCer [17, 33], og at innen tidlig GCer, TP53
mutasjoner er oftere påvist i submukøse kar enn i intramucosal kar [34, 35]. Denne tendensen ble også observert i denne studien, men mutasjon analyser indikerte at hot spot mutasjoner ikke ble påvist i slimhinnene del av svulstene, bortsett fra i en intramucosal kreft (# M12). I tillegg kopitall tap av MDM2
, som spiller en rolle i p53-degradering [36], korrelert med diffus p53 overekspresjon i fravær av en TP53
mutasjon. Dette fenomenet er neppe rapportert, men kan være en av mekanismene for p53 overekspresjon tidlig GCer.
I tidlige kreft, det kan være sovende og invasive komponenter samt sanne forløpere for avansert kreft. Blant de tidlige kreft undersøkt i denne studien, en invasiv del av en svulst (# S3) og 3 intramucosal kreft (# M11, # M12 og # M13) viste underskrift av aggressiv kreft (MYC
+ og /eller TP53
-) og hyppige mutasjoner av TP53
; men i en submucosal kreft (# S1), viste invasive deler underskrift av sovende kreft (MYC Anmeldelser - /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 reseksjon og hyper intraperitoneal kjemoterapi i lokalavansert magekreft: en randomisert og multisenter fase III study
• Tid karakteristikker av effekten av alkohol opphør på risikoen for magekreft - en meta-analysis