Analiza Lineage zgodnjih in naprednih cevastih adenokarcinoma želodca:? neprekinjeno ali nezvezne

Analiza Lineage zgodnjih in naprednih cevastih adenokarcinoma želodca:? trajnih ali občasnih
abstraktnih
Ozadje
boja zgodnjega raka želodca (GC) je mislil, da prispevajo k zmanjšanju umrljivosti GC, saj je večina zgodnje GCS napredku naprednih GK. Vendar pa je v začetku GC alternativno šteje mirovanju varianta GC, in je redko napreduje do naprednih GC. Cilj te raziskave je bil, da se pojasni obseg prekrivanja genetskih linij med prej in naprednih cevastih adenokarcinome (kadi) v želodcu.
Metode
je Imunohistokemijsko za p53 izvede z 28 kirurško resekcija želodca z 13 intramucosal in 15 invazivne kadi. Z chromosome- in temelji na matriki primerjalne genomske hibridizacije (CGH), je genomske število kopij ustava v primerjavi med sluznico in invazivnih delov invazivnih kadi in med sluznice delih invazivnih in intramucosal kadi, s 25 in 22 kadi oz. TP53
mutacija v eksonov 5-8 je bila preučena v 20 kadi.
Rezultati
kromosomske CGH pokazala, da 4Q + in 11q + pogostejši pri naprednih in zgodnjih kadi, v tem zaporedju, medtem ko kopiranje število sprememb v 8q in 17P pokazala ni bistvenih razlik med prvih in naprednih kadi. Vendar matrika CGH je pokazala, da je od 13 intramucosal kadi preučiti, izguba myc
(myc
-) je bila in dobiček TP53
(TP53
+) zaznali v 9 kadi in myc
+ in /ali TP53
- je bila odkrita v 3 kadi. Vzorcev sluzničnih 9 invazivnih kadi, 7 pokazala myc
- /TP53
+ in nihče pokazala myc
+ in /ali TP53
-. Od 9 vzorcev iz invazivnih delov, 1 (od Submukozno raka), je pokazala MYC
- /TP53
+ in 6 (1 od Submukozno in 5 iz naprednih raka), je pokazala MYC
+ in /ali TP53
-. Slednji 6 tumorji pogosto pokazala mutant vzorec (razpršeno ali null) v p53 imunohistokemijo, in 4 od 6 tumorjev obdavčljivimi za TP53
sekvenčno analizo pokazala mutacije. Celoten niz CGH vzorec je pokazala, da med sluznico in invazivnih delov, je genetska rod našel prekinjen v 5 naprednih raka in nepretrgano 3 Submukozno raka.
Sklepe
Genetski rodovi pogosto razlikovala od zgodnjih in naprednih kadi. MYC
- /TP53
+ in MYC
+ in /ali TP53
-. Lahko podpise mirujočih in agresivne kadi, in sicer v želodcu
Ozadje
raka želodca ostaja drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu, kljub nedavnemu znižanju v svoji umrljivosti v razvitih državah [1]. Želodčni karcinomi (GCS) so razvrščeni morfološko v 2 glavni kategoriji: cevni tvorijo vrsto in razpršenega tipa [2, 3], v uprizoritvi, v zgodnjih raka (ki vključujejo sluznico in submucosa) in naprednih raka (ki vključujejo muscularis Propria ali globlje). Zgodnje GC velja za rak ozdravljiva [4]; je domnevno napreduje do naprednih GC po različnih trajanj kot zgodnji fazi GC [5, 6]. Na Japonskem, lahko predčasno GK aktivno resekcija endoskopsko kot tudi kirurško [7], ki temelji na načelih zgodnjega odkrivanja in zdravljenja. Po drugi strani pa nekateri patologi menijo, da cevasto tvori neoplastične lezije, ki so omejene na sluznico traja dolgo časa, ali ne morejo napasti globljih tkiv. S tem se lezije imenujemo displazija [4].
Nedavno program množično presejanje za nevroblastomi na Japonskem [10/08], ki je bila prekinjena, ker je bilo ugotovljeno, prekinjenega genetska rod med zgodnjega in poznih-predstavitev nevroblastomi. Negativne in pozno-predstavitev (≥1 leto) nevroblastomi pokazala skoraj Diploidnost z izgubo terminala 1P, medtem ko pozitivni nevroblastomi pri dojenčkih je pokazala skoraj triploidnosti brez 1p izbris [11, 12]. Po drugi strani, primerjalna genomska hibridizacija (CGH), ki temelji analiza pokazala, da je visoko kakovosten netipično adenomatozna hiperplazija v pljučih pravi predhodnik bronchioloalveolar karcinoma [13]. V želodcu, je to problem, v kolikšni meri je genetska rod prekrita v začetku leta in napredne GCS.
V difuzna tipa GK smo uporabili CGH dokazati, da kromosomskih copy-številčne spremembe v intramucosal pečat obroč celic karcinoma, ki so pokazali plastna struktura [14] so podedovali v delčku slabo diferenciranih GK v poznejših fazah [15]. Prisotnost plastovito strukturo Pečatnjak celic v sluzničnih dele teh naprednih raka tudi kažejo, da lahko pečat obroč celic karcinoma pravi predhodnik slabo diferenciranih GK. temelji CGH analiza rodu v drugi podskupini slabo diferenciranih naprednih GK s cevastimi sestavnih delov, vendar ne slojno strukturo na sluznico delu je pokazala, da so bili GK na tej podskupini izhaja iz cevastega komponente tumorja in so bili značilni 17p- in 8q + [16] in inaktivacije z divjim tipom TP53
ga mutacije in izgube heterozigotnosti (LOH) [17]. Da bi ugotovili, na zgodnji stopnji kolega te vrste GC, smo analizirali intramucosal cevaste adenokarcinomov (kadi) z uporabo CGH. Te raziskave so pokazale, da so intramucosal kadi pokazala ne samo več kromosomskih sprememb so skupne napredne GK pogosto pa tudi pokazala 8q- in 17p +, ki so bili kritično drugačen od razvitih in slabo diferencirane GK [18].
V tej študiji, avtorske številka spremembe kromosomov in genov so bili pregledani v sluznice in invazivnih delih drugi seriji začetnih in naprednih kadi z uporabo nizov in kromosomske CGH. Na podlagi teh podatkov smo pokazali primere stalno in občasne linije med intramucosal in invazivnih delih posameznih tumorjev in ugotovila, da je lahko TP53
in MYC
dobre rodovno označevalcev za želodčne kadi.
Metode
institucionalni Pregled odbor za medicinsko etiko pri Shiga University of Medical Science podelila odobritev za izvedbo te raziskave o stanju, da morajo biti uporabljeni materiali anonimen.
tumorja vzorce
Ta študija je vključevala 28 kirurško resekcija želodca (tabela 1), s 13 intramucosal vedra in 15 invazivne kadi [6 Submukozno in 9 napredne raka, ki vdrejo v muscularis Propria ali globlja tkiva (cevasti del vsakega tumorja je bila ocenjena na več kot 30%)]. Vsak želodec je bil določen s formalinom in vgrajeni v parafinskega voska. Ti so bili izbrani naključno iz materialov, diagnosticiranih v našem oddelku od leta 1996 do 2008. histološke vrste in tumor faze so bili določeni v skladu z japonsko klasifikaciji želodca raka [19] in pTNM uprizoritve oz. Ko je bila sluznice histološki vzorec ugotovi, da je heterogena v posameznem invazivno tumorja je bil del z najnižjo stopnjo atypism vzame sluznico vzorcu, ki lahko prepreči možnost ponovne invazije invazivnih rakavih celic v sluznici. V invazivnih vrst raka, so bili vzorci DNA, pridobljeni iz intramucosal in invazivne parts.Table 1 Povzetek kliničnih, histopatoloških in molekularno genetskimi podatki 25 cevastega adenokarcinomom želodca
Case No.
starost /spol
histološki tip *
Invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
N0
IA
c /s -
-
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /leto
+ -
s2m
81 /F
pap
T1 (SM)
N1
IB
c /leto
+ -
S2i
NT /leto
+
+
S3M
79 /M
tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /leto
+
+
S3i
NT /leto
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /NT
+
NT
S5m
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /leto
null
NA
A2M
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
c /leto
+ -
A2i
NT /leto
+
+
A3m
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /leto
+ -
A3i
NT /
+
+
A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS)
N2
IIIA
c /leto
null -
A4i
NT /leto
null
+
A5m
56 /M
tub1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT -
NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /leto
null
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /leto
+ -
A9i
NT /leto
+
+
* japonski klasifikacija raka želodca; ** Razvrstitev pTNM. V stolpcu zadevi št, M = raka intramucosal; S = rak vključuje submucosa; A = napredovalega raka; m = sluznice del; i = invazivne del. V stolpcu CGH, c = kromosomske CGH; a = matrika CGH. V stolpcu p53 imunohistokemiji (IHC); "+" Označuje, difuzno (> 70%) pozitivnih jeder, "-" označuje sporadično (< 5%) pozitivnih jeder; "Null", izhaja radioinkorporacijo sploh. V stolpcu TP53
mutacije; "+" In "-" pomeni prisotnost in odsotnost mutacije, oziroma; NA = ni mogoče oceniti; NT = ni preizkušen
Imunohistokemija
Imunohistokemijsko je bila izvedena z monoklonskih protiteles proti proteinu p53 (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danska).. Po pridobivanje antigena odsekov tkiva v destilirani vodi pri 121 ° C 5 min smo radioinkorporacijo zazna posrednega biotina-streptavidina-peroksidaze metode z uporabo Histofine Kit (Nichirei, Tokyo, Japonska) in diaminobenzidine reakcijo. Oddelki so jih nasprotno s hematoksilinom. Tobogani za negativno kontrolo brez primarnega protitelesa in tiste pozitivne kontrole smo obdelali vzporedno.
Laser mikrodisekcijo in priprava DNA
tumorske celice smo pridobili iz oddelkov 5 mikrometrov debelih tkiva z uporabo sistema LMD6000 laser mikrodisekcijo ( Leica Microsystems, Wetzlar, Nemčija). Za posamezne tumorjev, smo rakave celice dobimo iz območij > 3 mm 2, pri čemer rakave celice predstavljali ≥ 90% celotnega števila celic. Te rakave celice smo razgradili v 200 ul s proteinazo K raztopini pri koncentraciji 200 ug /ml za približno 70 ur pri 37 ° C, čemur sledi ekstrakcija fenol /kloroform DNA.
Celotnega genoma ojačanja
bil vzorec DNK ojačani uporabo degenerirano-oligonukleotida napolniti verižna reakcija s polimerazo (DOP-PCR) v 2 fazah, kot je opisano zgoraj [20], kar je povzročilo produktov PCR več kot 2 kb v velikosti, primerni za označevanje nick-prevajalski za CGH.
za paleto CGH, je vzorec DNK pomnožili z GenomePlex Tissue Whole Genome Amplification Kit (WGA2 Kit; Sigma, St. Louis, ZDA) [21]. Za nekatere vzorce DNK, ki jih ni bilo mogoče dovolj pomnoženih smo uporabili WGA5 Kit (Sigma).
CGH (hibridizacijo, sonda označevanje DNA in digitalne slikovne analize)
DOP-PCR-pomnožene tumor in normalne DNK je bil označen z uporabo fluorescein-12-dUTP in tetramethylrhodamine-5-dUTP (Roche, Mannheim, Nemčija), v tem zaporedju, ki ga nick prevajanje [15]. Hibridizacija in slikovne analize so bile izvedene kot prej [22] opisano. Dobički in izgube v številu kopij DNA so bili opredeljeni v zelene do rdeče razmerij > 1.2 in < 0,8 oz. Kromosomi 1p32-pter, 16P, 19, 22 in Y so bili izključeni iz teh analiz.
Array CGH
oligo CGH mikromrež (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, ZDA) je bila uporabljena v tej študiji v skladu z navodili proizvajalca. Na kratko je tumor in kontrolno DNK neencimsko označeni s Cy5 in Cy3, oziroma s pomočjo genomu DNA ULS označevanja Kit (Agilent) in konkurenčno hibridizira na mikromrežnem. Uporaba Feature Pridobivanje Ver.9.5.3 (Agilent), intenziteta fluorescence tumorja in kontrol smo izračunali iz hibridiziranih matrični slike, posnete z uporabo DNA mikromrež skener (Agilent) a. Copy-številka dobički in izgube, ki so bili opredeljeni kot osnova 2 logaritmom intenzivnost tumor signala do razmerja referenčna intenzitete signala več kot 0.3219 in manj kot -0.3219, oz.
Analiza mutacij za TP53
PCR primer sklopov so bili pripravljeni za eksonov 5-8 od TP53
, ki hibridizirajo na spremljajoče intronov vsakega eksonu. Glej dodatno sliko 1 za ali osnovne sekvence. Prva PCR zmes sestavljena iz medpomnilnika, 200 uM dNTP-jev, 1,5 mM MgCl 2, 0,8 uM primer, 1 ng /ul vzorca DNK in 0,5 U platina Taq (Invitrogen, Kalifornija, ZDA) v 25-ul končnem volumnu . Po začetni denaturaciji pri 94 ° C za 2 min, smo izvedli 40 cikli PCR pri 94 ° C 30 sekund, 54 ° C 1 min in 72 ° C, 1 minuto, nato pa končni fazi razširitve pri 72 ° C 10 min. Po potrditvi PCR produkta, ki ga agarozno gelsko elektroforezo, je zaporedje PCR izvedli s pomočjo BigDye končniki v1.1 Cycle sekvenciranje (Applied Biosystems, Kalifornija, ZDA). Reakcijsko zmes sestavljen iz pufra, 2 ul prvega produkta PCR, 0,15 pM osnovnim in 0,5 ul BigDye Terminator V 1,1 v 10-ul končnega volumna. Po začetni denaturaciji pri 96 ° C 1 minuto, smo izvedli 25 cikli PCR pri 96 ° C za 10 sekund, 50 ° C za 5 sekund in 60 ° C za 4 minute. Za naprej in nazaj sekvence smo določili z ABI Prism 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Mutacije so bile ugotovljene s primerjavo teh vzorcev zaporedju referenčno DNK (GenBank pristop številka: HSU94788). Alelna stanje je bilo ugotovljeno z razmerjem mutant na ravni divjih vrhov v zaporedja profilih.
Statistične analize
nepredvidljivih mize so bili analizirani s Fisherjev natančni test in test Cochran-Armitage. Razlike v 2 dvostranskih testih z P < 0.05 so menili, da so statistično značilne.
Rezultati
imunohistokemija za p53
vzorcev barvanjem šteje bili prekomerno samo, če ≥ 70% tumorskih celic je pokazala pozitivno obarvajo jedra, gledano na področju nizke porabe. Osem od 13 intramucosal raka, vseh 6 Submukozno raka in 4 od 9 naprednih raka na difuzno pokazala pozitivno jedrske barvanje za p53 (tabela 1). Osrednja obarvanja vzorec je bil opažen v primeru # A7. Vzorec je štelo negativna (predstavlja divjega tipa TP53
), ko smo opazili prisotnost redke, sporadične in šibko jedrsko barvanjem v < 5% jedra. Null obarvanje vzorec je bil opažen v primerih # A1, # A4 in # A8, kar kaže na non-sense mutacijo TP53
[23].
Kromosomska CGH
petindvajset vzorcev iz 25 primerih (10 sluznice smo uporabili 6 Submukozno in 9 napredne rak) za kromosomsko CGH. Vsi vzorci so bili pridobljeni iz intramucosal poškodb, ki so pokazali najnižjo razred atypism.
Medtem 4q + je prišlo v večini (6/9 primerov) naprednih kadi, ni bila odkrita v 16 zgodnjih kadi (P = 0,0005). Druga bistveno drugačen sprememba kromosomskih med prej in naprednih rakov je bil 11q +, ki je bila odkrita v 11 od 16 zgodnjih rakov in 2 9 naprednih raka (P = 0,0414). Od 10 intramucosal kadi pregledanih 3 pokazala izgubo 8q (8q-) in /ali dobiček 17P (17p +), medtem ko je 7 in 2 je pokazala 8q + in 17p- oz. Od 15 sluznice vzorcev invazivnih kadi pregledanih, 3 in 4, je pokazala 8q- in 17p +, v tem zaporedju, medtem ko je 7 in 6 je pokazala 8q + in 17p- oz.
Array CGH
enaintrideset vzorcev iz 22 primerih (13 sluznice, so bile ocenjene 3 Submukozno in 6 naprednih rak) z nizom CGH (slika 1). DNA vzorci so pridobljeni iz intramucosal in /ali invazivnih lezij. Slika 1 Array podatki CGH o myc in TP53 in podatkov TP53 zaporedja v zgodnjih in naprednih cevastih adenokarcinome v želodcu. Zgodnje oblike raka so razdeljeni v intramucosal (m) raka in Submukozno (SM) raka. Glejte tabeli 1 za število vzorcev. Številke so srednje Test /referenčne razmerja diod CGH. Precejšnje izgube in dobički so označene z rdečo in zeleno, oz. Divjega tipa (WT) in mutacije v eksonu (ex) in posredovanje zaporedje (MSOV) od TP53
so označena z rumeno in sivo oz.
Kot je prikazano na sliki 1 in tabeli 2, sočasna izguba myc
(MYC
-) in dobiček TP53
(TP53 +
) so bile odkrite v 9 od 13 intramucosal kadi, 7 9 sluznice vzorcev invazivnih kadi, 1 od 3 invazivnih vzorcev Submukozno raka in nobeden od 6 invazivnih vzorcev naprednih raka. Vzorec myc +
in /ali TP53
- je bila odkrita v 3 od 13 intramucosal raka, nobeden od 9 sluznice vzorcev invazivnih kadi, 1 od 3 invazivnih vzorcih 3 Submukozno raka in 5 od 6 invazivne vzorci 6 napredno cancers.Table 2 s spremembami na myc
in TP53
kopirate klicne številke v zgodnjih in naprednih cevastih adenokarcinome v želodcu
tumorja globina
sluznice
Submucosa
MP ali globlje -



sluznice del
SM
sluznice del
Deep
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *)
3
0
1 (1 *)
4
0
3 (2 *)
8q (MYC
) -
3
9 (9 **)
3
2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) +
3
10 (9 **)
3
2 (2 **)
2 (1 ** )
1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) -
2
3 (2 *)
2
0
1 (1 *)
4
0
4 (2 *)
SM, je submucosa; MP je muscularis Propria. cCGH in aCGH, chromosome- in nizi, ki temeljijo na primerjalnih genomske hibridizacije; Številke v oklepaju navede skupno število vzorcev pregledanih. Krepka pisava kaže rezultate aCGH. Zvezdice v oklepajih kažejo sočasnosti v myc
+ in TP53
-. Dvojni asterisk označuje sočasnosti v myc
-. In TP53
+
temelji na celotni niz vzorcev CGH, je bilo ugotovljeno, da so prekinjene in neprekinjeno med sluznico in invazivnih delov v 5 naprednih in 3 Submukozno raka genetski rodovi oz. Kot je prikazano na sliki 2, se vzorec iz sluznice del # S3 pokazala 4p-, 4q-, 8q + 9p-, 13q + 15q-, 18q-, 20q + in Y, medtem ko vzorcu invazivnega del # S3 podedovali enake aberacije iz sluznico delu, je pokazala dodatne aberacije (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q + in 20q +) in je izgubil 4p- in 22q +. V # S1, je bil dobiček iz 1Q, 14q, 19 in 20, in izgubo 18q pogoste v sluznici in Submukozno vzorcev, čeprav so bili dobički 1Q, 14q, 19q in 20 v submucosa nekoliko manj kot visoka stopnja. V # S2, je skupna sprememba v obeh sluznice in Submukozno deli dobiček za 20p. Vzorec Submukozno pokazala dodatne dobičke v 10p, 12 in 13q in izgub v 3q, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10q, 12p, 14q, 16 in 19p. Vzorec sluznice je pokazala izgubo 18q, ki je bila obnovljena v vzorcu Submukozno, po možnosti z uniparental disomija [24, 25]. V # A1, # A3, # A4, # A8 in # A9, aberacije v vzorcih iz sluznice dele, ki niso bili odkriti v tistih invazivnih delov. V # A2, kontinuiteta genetskih linij ni bilo mogoče oceniti zaradi odsotnosti pomembnih copy-število sprememb v sluznice delu. Slika 2 Array CGH profili. V kromosomske regije kopijo število aberacij na sluznico delu # S3 (S3M) so vključeni v bistvu v tistih invazivnega dela (S3i), medtem ko so tiste na sluznico delu # A1 (A1m) razlikujejo od tistih invazivne dela (A1i)
TP53
bila analiza mutacij
mutacij zazna 7. tumorjev, ki so preverjali analizo sekvenčno eksonov 5-8 od TP53
(slika 1, tabela 3). 1 je 10 intramucosal raka, 2 od 3 Submukozno raka in vse 4 napredne raka (samo invazivnih deli). V vseh teh 7 tumorji je TP53
alel je hemizigotnih razen v 1 intramucosal raku (# M12) z heterozigotnem vzorec za izdajo ekson-8 mutacije (slika 3) in razpršenih ali ničelno vzorec za p53, kot kaže imunohistokemija. No TP53
mutacija bila odkrita v p53- vzorcev, kot je prikazano na sliki 4. V p53 + /ničelnih vzorcev, 2 od 15 vzorcev sluznico dela pokazala TP53
mutacijo, medtem 6 od 7 vzorcev invazivne del pokazala TP53
mutacije (P = 0,0023). V 1 izmed Submukozno raka kažejo, TP53
+ in hemizigotnih mutacija (invazivnega del # S2), TP53
+ lahko odraža uniparental polysomy [24, 25] .table 3 kopiranja spremembe števila TP53
in MYC
in p53 radioinkorporacijo v vzorcih za mutacijo analize
Case No.
MYC

TP53
mutacija TP53exons 5-8
Mutant alel
Mdm2
p53 IHC
M3
-
+
mas
- -
M4 -
+
mas
ns -
M5
-
+
mas
ns
+
M6 -
+
mas -
+
M7
ns
+
mas -
+
M8 -
+
mas
ns -
M9 -
+
mas
ns
+
M10 -
+
mas -
+
M11
ns
-
mas
ns -
M12
+ -
eksonov 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M -
+
mas -
+
S1i
-
+
mas -
+
s2m -
+
mas -
+
S2i
ns
+
ekson 7
hemi
ns
+
S3M
ns
ns
eksonu 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
eksonov 5/6/8
hemi
ns
+
A1m -
+
mas
-
null
A1i
+ -
NA -
null
A2M -
+
mas
ns
+
A2i
+ -
eksonu 8
hemi
ns
+
A3m -
+
mas
ns
+
A3i
- -
ekson 5
hemi -
+
A4M -
+
ut -
null
A4i
ns
ns
ekson 5
hemi
ns
null
A8m
ns
+
mas -
null
A8i
+ -
NA
ns
null
A9m -
+
mas -
+
A9i
+
+
eksonu 6
hemi
ns
+
ns = ni pomembna; mas = divjega tipa; NA = ni mogoče oceniti; hemi = hemizigotnih; . Hetero = heteroze
M12, ekson 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); eksonu 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, ekson 7: C242F (TGC > TTC)
S3M, eksonu 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, ekson 5: A161V ( GCC > GTC); eksonu 6: T211I (ACT > ATT); eksonu 8: R273S (CGT > AGT)
A2i, eksonu 8: R273 H (CGT > CAT)
A3i, ekson 5: A161T (GCC > ACC)
A4i, ekson 5: IVS5 + 1G > T
A9i, eksonu 6: Y220C (TAT > TGT)
Slika 3 TP53 mutacijo vzorce. Heterozigotnem mutacije s pomembnim sestavine divjega tipa v eksonu 8 (A) in hemizigotnih mutacijo v EXON 5 (b) na raka intramucosal (# M12). Mutacije v drugih tumorjev preučilo hemizigotnih, kot je prikazano v C (# S2).
Slika 4 odnosov med p53 imunohistokemijo, število kopij TP53 in vroče točkovno mutacijo TP53. Za "p53 +" in "p53-" glej legendo v tabeli 1. "TP53
+", "TP53
-" in "TP53
n /s" kažejo pomembno copy-številko dobiček in izgubo in ni bistveno spremenila, oz. Številke v oklepaju je navedeno število vzorcev pri invazivnih delov. Številke so vzorčne številke. Številke v oklepaju je navedeno število vzorcev pri invazivnih delov. NP = ni mogoče oceniti.
Po drugi strani pa v vzorcih sluznice, je difuzna /nično vzorec pogosto povezana z divjim tipom TP53
. Da bi razložili to ugotovitev je bila preučena Mdm2
število kopij z uporabo nizov podatkov CGH. Od skupno 22 vzorcev ocenjenih za TP53
analizo mutacij, Mdm2
pokazala izgubo copy-številk v 10 od 14 vzorcev z divjim tipom TP53
in 1 od 8 vzorcev z TP53
mutacijo . (p = 0.0237)
Razprava
V intramucosal kadi, kromosomske CGH pokazala 8q- in /ali 17p + pri frekvenci 3 od 10 tumorjev pregledujejo; Te spremembe so bile bolj pogoste v prejšnji raziskavi, ki se uporablja naključno označevanje osnovnim cepljenjem [18]. V tej študiji so 8q + pogosto odkrijejo tako intramucosal raka (7/10) in invazivnih vrst raka (7/15); Vendar pa je omenjeno prejšnji podatki redko pokazali 8q +. Te razlike lahko odražajo razlike v metodah označevanja, ki se uporabljajo; CGH rezultati z nick prevajanje označevanje ali naključno označevanje primarnem so bili v primerjavi z RIB signale, in ugotovljeno je bilo, da je nick prevod označevanje neredko pokazala lažno pozitivnih koristi [26]. Vendar pa z uporabo enake pogoje za označevanje, so bile ugotovljene pomembne razlike v pojavnosti 4Q + in 11q + od zgodnjih in naprednih raka, kar je verjetno posledica razlik v genetskih linije med njimi. Kromosomske CGH podatki naprednih raka v tej študiji, so bili v skladu s prejšnjim kromosomskih podatkov CGH pridobljenih z nick označevanje prevajanja za napredovalo GK (tj 17p- in 8q + so precej pogosta) [27-30].
Čeprav so klinično opazne zgodnje oblike raka na splošno šteje predhodnike naprednih raka [5, 6], intramucosal in invazivne deli naprednih kadi pogosto pokazala neharmonične število kopij za myc
in TP53
v tej raziskavi: MYC
- in TP53
+ v 5 6 vzorcev sluznice delov, kot je običajno kot v intramucosal raka pregledanih in MYC
+ in /ali TP53
- v 5 6 vzorcev invazivnih delov. Poleg tega na osnovi celotne matrike CGH vzorcu sluznice in invazivnih delov tumorjev, smo prekinjenega genetska rod dalo v 5 6 naprednih raka. Zato se zdi, da je tumor kloni v sluznice delih naprednih raka niso bili predhodniki invazivnega dela, ampak minute intramucosal raka, ki verjetno sobivala z invazivnimi vrstami raka. Ugotovljeno je bilo, da so več minute raka pogostejša pri kadi kot v nediferencirani tipa GK [31]. V razvitih kadi, morda intramucosal predhodnik invazivne komponente so bili izgubljeni zaradi razjede v tumor ali predhodnik ni bilo preverjeno, ker ne ujema z delom na najnižjo stopnjo atypism, na katero se pregled sluznice del invazivnega GK je bila omejena v tej študiji.
po drugi strani, v Submukozno raka, neprekinjeno genetski rodu je bilo ugotovljeno v vseh 3 Submukozno tumorjev pregledanih. Morda zato, ker se sluznice del v bistvu zadržijo v začetku GK in ker sluznice predhodnik invazivne komponente pokazala najnižjo stopnjo v atypism in ni bila izključena iz analize ta niz. Mukozni in invazivne deli imeli skupne regije kopijo število aberacij z skladnih prelomnih točk, in večina sprememb v sluznico delu so bile v tistih invazivne dela. . Na ravni genov, se število kopij za myc
in TP53
bili skladni med sluznice in Submukozno delov v 2 3 Submukozno raka
TP53
- in /ali myc
+ vzorec bila zaznana, ne samo v invazivnih delih 1 iz Submukozno raka in najbolj naprednih raka, temveč tudi pri 3 od 13 intramucosal raka. V teh tumorjev, p53 imunohistokemija pokazala razpršeno ali nična (mutacija) vzorec (tabele 1 in 3), kar kaže, da je TP53
- lahko odraža Loh in posledični inaktivacijo divjega tipa TP53
. Zaporedja analiza mutacij vročih točk za TP53
so pokazale, da so bili hemizigotnih mutacije (tj mutacijah in loh) odkrita v vzorcih sluzničnih 1 od 3 intramucosal raka in 1 Submukozno raka z TP53
- vzorec, kot je tudi o invazivnih deli 4 naprednih raka, ki so informativne za TP53
analizo mutacij. Takšna inaktivacijo divjega tipa TP53
, ki lahko povzročijo nadaljnje genomske nestabilnosti, je bilo pogosto poročali v naprednih GK [15, 17]. MYC
gen locus je tudi znano, da pogosto kažejo copy-številko dobičke ali ojačitve v različnih naprednih raka [32]. MYC
+ /TP53
- lahko torej upravičena kot podpis agresivnega GC
Ugotovljeno je bilo, da je LOH kot tudi mutacije TP53
pogosteje odkrita v naprednih GK kot v začetku leta. GK [17, 33], in da je v začetku leta GK, TP53
mutacije pogosteje odkrita v Submukozno kadi kot v intramucosal kadi [34, 35]. To je bilo opaziti tudi v tej študiji, vendar analize mutacija je pokazala, da hot spot mutacije niso bili odkriti v sluznice delu tumorjev, razen v 1 intramucosal raka (# M12). Poleg tega je izguba copy-število Mdm2
, ki igra pomembno vlogo pri razgradnji p53 [36], povezano z razpršeno p53 prekomerno v odsotnosti TP53
mutacija. Ta pojav je redko poročajo, vendar pa bi lahko bil eden od mehanizmov p53 prekomerno v začetku GK.
V zgodnjih raka, lahko pride v mirujočem stanju in invazivne komponente, kot tudi pravi predhodniki naprednih raka. Med zgodnjih rakov, obravnavanih v tej študiji, invazivne del 1 tumorja (# S3) in 3 intramucosal raka (# M11, # M12 in # M13), je pokazala, da podpis agresivnega raka (MYC
+ in /ali TP53
-) in pogoste mutacije TP53
; Vendar pa v 1 Submukozno raka (# S1), so invazivne deli pokazala podpis mirujočem raka (MYC
- /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 resekcijo in hipertermični intraperitonealno kemoterapijo v lokalno napredovalega raka želodca: randomizirana in multicentrična faze III study
• značilnosti časovne o vplivu alkohola prenehanja zaradi tveganja za nastanek raka na želodcu - meta-analiza