Lineage analiza ranog i razvijenog cjevaste adenokarcinoma želuca: kontinuirani ili diskontinuirani

loze analiza ranog i razvijenog cjevaste adenokarcinoma želuca:? Kontinuirane ili diskontinuirane pregled apstraktne pregled Pozadina pregled iskorjenjivanje početkom želučanog karcinoma ( GC) je mislio da doprinesu smanjenju smrtnosti GC, s obzirom da je većina ranih GCS napredak u naprednim GCS. Međutim, početkom GC alternativno smatra uspavan varijanta GC, a nerijetko napreduje do napredne GC. Cilj ovog istraživanja bio je pojasniti razmjere preklapanja genetskih loza između rane i uznapredovale cjevaste adenokarcinoma (kupališta) u želucu. Pregled Metode pregled Imunohistokemijsko bojanje p53 provedena je pomoću 28 kirurški resected želuce s 13 intramucosal i 15 invazivne kace. Do chromosome- i polja bazi komparativne genomske hibridizacije (CHG), genomska broj kopija ustav je u odnosu između sluznice i invazivnih dijelovima invazivnih kace i između sluznice dijelovima invazivnih i intramucosal kupališta, s 25 i 22 kupališta, respektivno. TP53 pregled mutacija u eksona 5-8 ispitana je u 20 kupališta. | Rezultati
kromosomske CGH otkrila da 4Q + i 11q + bili su češći u razvijenim i početkom kace, odnosno, dok se kopirati broj mijenja u 8q i 17p pokazao nema značajne razlike između ranog i razvijenog kace. Međutim, niz CGH otkrila je da, od 13 intramucosal kace ispituje, gubitak myc
(myc
-) i dobit od TP53 pregled (TP53 pregled +) otkrivena je u 9 kace i myc
+ i /ili TP53 pregled - otkrivena je u 3 kace. Od mukozne uzorcima 9 invazivnih kace, 7 pokazala myc
- /TP53
+ i nitko pokazala myc
+ i /ili TP53
-. Od 9 uzorcima od invazivnih dijelova, 1 (od raka submukozalnim) pokazala myc pregled - /TP53 pregled + i 6 (1 iz submukozne i 5 od uznapredovalog raka) pokazala myc pregled + i /ili TP53
-. Potonji 6 tumori obično su pokazali mutant uzorak (difuzne ili nikakav) u p53 imunohistokemijski, i 4 od 6 tumora porezu za TP53 pregled, analizu sekvencija pokazala mutacije. Ukupni polja CGH uzorak pokazuje da je, između sluznice i invazivnih dijelova, genetska loza pronađena je diskontinuirana u 5 uznapredovalog raka i kontinuirano u 3 raka submukozalnim.
Zaključke
Genetske loze često razlikovala između ranog i razvijenog kace. Myc pregled - /TP53 pregled + i myc pregled + i /ili TP53 pregled -. Mogu biti potpisi mirovanje i agresivnih kupališta, odnosno, u želucu pregled Pozadina pregled, rak želuca ostaje drugi najčešći uzrok smrti od raka povezanih širom svijeta, unatoč nedavnom padu u svojoj smrtnosti u razvijenim zemljama [1]. Želučani karcinom (GCS) klasificirani su morfološki u 2 glavne kategorije: cjevasti koji stvaraju vrstu i difuzni tip [2, 3] i, skele, u ranim karcinoma (koji uključuju sluznicu i submukoze) i napredne raka (uključujući muskularis propria ili dublje). Rano GC smatra rak izlječiv [4]; to je navodno napreduje do napredne GC nakon različitog trajanja kao ranoj fazi GC [5, 6]. U Japanu, početkom GCS mogu aktivno resected endoskopski, kao i kirurški [7] koji se temelji na načelima ranog otkrivanja i liječenja. S druge strane, neki patolozi tvrde da su cjevasti za formiranje maligne lezije koje su ograničena na sluznicu potrajati dugo vremena ili ne mogu upasti dublja tkiva. Na taj način, ove promjene su pozvani displazija [4]. Pregled Nedavno program masovnog screeninga za neuroblastoma u Japanu [8-10] je suspendiran jer je utvrđeno diskontinuirani genetski loza između early- i kasnih prezentiraju neuroblastoma. Negativne i kasno-predstavljanje (≥1 godina) neuroblastomi pokazali blizu diploidiju s gubitkom terminala 1p, dok pozitivne neuroblastome u dojenčadi pokazali blizu Triploidija bez 1p brisanje [11, 12]. S druge strane, komparativna genomska hibridizacija (CHG) based analiza sugerira da visoko kvalitetni atipična hiperplazija adenomatozna u plućima je pravi preteča bronhioalveolarni karcinoma [13]. U želucu, to je problem u kojoj mjeri genetski loza se preklapati u rane i uznapredovale GCS.
Difuznim tipa GCS, koristili smo CGH pokazati da kromosomske copy-broj promjene u staničnim intramucosal pečatnjak-prsten karcinoma koje su pokazale slojevita struktura [14] su naslijedili u djeliću slabo diferenciranih GCS u uznapredovalom stadiju [15]. Prisutnost slojevitoj strukturi stanice pečatni prsten u mukozne dijelova tih uznapredovalog raka je također predložio da stanica pečatni prsten karcinoma može biti pravi preteča slabo diferenciranih GCS. CGH-based loza analiza drugoj podskupini slabo diferenciranih naprednih GCS s cjevastih dijelova, ali ne i slojevite strukture u dijelu sluznice otkrila da GCS ove podgrupe su izvedeni iz cjevastog dijela u tumoru, a karakterizira 17P i 8q + [16] i inaktivacija divljeg tipa TP53
mutacijom i gubitak heterozigotnost (Loh) [17]. Da bi se utvrdilo u ranoj fazi pandan ove vrste GC, analizirali smo intramucosal cjevaste adenokarcinome (kupališta) pomoću CGH. Ove studije su otkrili da su intramucosal kace je pokazao ne samo nekoliko kromosomskih promjena zajedničke naprednih GCS ali i često pokazao 8q- i 17p + koji su bili kritički razlikuje od naprednih i slabo diferenciranih GCS [18].
U ovom istraživanju, autorskih broj promjene kromosoma i gena su ispitani u sluznice i invazivnih dijelova drugom nizu ranog i razvijenog kace pomoću polja i kromosomske CGH. Na temelju tih podataka, pokazali smo slučajeve stalnog i povremenog loza između intramucosal i invazivnih dijelovima pojedinih tumora i utvrdili da TP53 pregled i myc pregled mogu biti dobre loze markere za želučane kace. Pregled Metode
Institutional Review Board na medicinsku etiku na Shiga Sveučilišta medicinskih znanosti suglasnost za provođenje ovog istraživanja pod uvjetom da upotrijebljeni materijali moraju biti anonimni.
uzoraka tumora pregled Ovo istraživanje je uključeno 28 kirurški resected želuce (Tablica 1) sa 13 intramucosal kace i 15 invazivne kace [6 submukozna i 9 uznapredovalog raka koje su izvršile invaziju muskularis propria ili dublja tkiva (da se cjevasti dio svakog tumora je ocijenjena više od 30%)]. Svaki trbuh fiksirane u formalinu i uklopljene u parafin. To su bili slučajnim odabirom iz materijala dijagnosticiran u našem odjelu od 1996. do 2008. histoloških tipova i tumorskih stadija su određeni prema japanskoj klasifikaciji rak želuca [19] i pTNM uprizorenja, odnosno. Kada je pronađen za sluznicu histološki uzorak biti heterogena u pojedinoj invazivnih tumora, dio s najnižom ocjenom atypism je uzeta kao uzorak sluznice koji može spriječiti mogućnost ponovnog invazije invazivnih stanica raka u sluznici. U invazivnih karcinoma, DNA uzorci su dobiveni iz intramucosal i invazivne parts.Table 1. Sažetak kliničkih, patohistološke i molekularne genetske podatke od 25 cjevasti adenokarcinoma želuca pregled Case pregled Starost /spol
Histološki tip pregled br *
Invazija **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ PAP pregled T1 (M) pregled N0 pregled IA pregled C /A Netlogu -
- M9 pregled 51 /M pregled tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a pregled +
- S2M pregled, 81 /F pregled PAPA pregled T1 (SM) pregled N1 pregled IB pregled c /a pregled +
- S2i pregled NT /a pregled + pregled + pregled S3M pregled 79 /M pregled tub1 pregled T1 (SM) pregled N0 pregled IA pregled c /a pregled + pregled + pregled S3i pregled NT /a pregled + pregled + pregled S4M pregled 63 /M pregled tub2 > tub1 pregled T1 (SM) pregled N0 pregled IA pregled c /NT pregled + pregled NT pregled S5m pregled 75 /M pregled, papa > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a pregled null pregled NA
A2M
73 /M pregled tub1 > tub2 pregled T2 (SS) pregled N0 pregled IB pregled c /a pregled +
- A2i pregled NT /a pregled + pregled +
A3m
56 /M pregled PAPA pregled T2 (SS) pregled N1 pregled II pregled, c /a pregled +
- A3i pregled NT /pregled + pregled + pregled A4m
81 /M pregled tub2 /PAP pregled T2 (SS) pregled N2 pregled IIIA pregled c /a pregled null
- A4i pregled NT /a pregled null pregled + pregled A5m pregled 56 /M pregled tub1 pregled T2 (MP) pregled N0 pregled IB pregled c /NT
- NT pregled A5i Netlogu NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a pregled null pregled NA
A9m
67 /F pregled tub2 pregled T2 (SS) pregled N1 pregled II pregled, c /a pregled +
- A9i pregled NT /a pregled + pregled + pregled * Japanski klasifikacija želučanog karcinoma; ** PTNM klasifikacija. U stupcu predmetu broj, M = raka intramucosal; S = raka uključuje submukozi; A = uznapredovali rak; m = za sluznicu dio; i = invazivni dio. U stupcu CGH, c = kromosomske CGH; a = array CGH. U stupcu p53 imunohistokemijom (IHH); "+" Označava difuzno (> 70%) pozitivnih jezgri, "-" označava sporadično (< 5%) pozitivnih jezgri; "Null" označava ne imunoreaktivnost na sve. U stupcu TP53 pregled mutacije; "+" I "-" ukazuju na prisutnost i odsutnost mutacije, odnosno; NA = nije podložan porezu; NT = nije testirano pregled Imunohistokemija pregled Imunokemijsko bojenje je izvršeno s monoklonskim antitijelima prema p53 proteina (do-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Denmark).. Nakon dohvat antigena presjeka tkiva u destiliranoj vodi pri 121 ° C tijekom 5 minuta, imunoreaktivnost je detektiran posrednim biotin-streptavidin-peroksidaze metodi uporabom Histofine Kit (Nichirei, Tokyo, Japan) i diaminobenzidin reakcije. Sekcije su prebrojane s hematoksilinom. Snimci negativne kontrole bez primarnog antitijela i one u pozitivnoj kontroli obrađeno paralelno. Pregled Laser Mikrodisek i pripremu DNA pregled Tumorske stanice su dobivene od odjeljaka 5 um debljine tkiva pomoću sustava LMD6000 laser mikrodisekcijom ( Leica Microsystems, Wetzlar, Njemačka). Za pojedinačne tumora, stanice raka su dobiveni iz područja > 3 mm 2, gdje stanice raka iznosio ≥90% od ukupnog broja stanica. Te stanice raka su razgrađen u 200 ul proteinazom K otopini pri koncentraciji od 200 ug /ml tijekom približno 70 sati na 37 ° C, nakon čega slijedi ekstrakcija fenolom /kloroformom DNA.
Genoma pojačanje pregled Uzorak DNK umnožena upotrebom degeneriranog oligonukleotidno-primernom lančane reakcije polimeraze (DOP-PCR) u 2 faze, kao što je prethodno opisano [20], što je rezultiralo PCR produkata više od 2 kb, prikladni za nick pomični označavanju CGH.
za niz CGH, uzorak DNK umnožena pomoću GenomePlex tkiva genoma Amplification Kit (WGA2 Kit, Sigma, St. Louis, USA) [21]. Za neke DNK uzorke koji nisu mogli biti dovoljno pojačanih je WGA5 Kit (Sigma) bio zaposlen.
CHG (hibridizacije, sonda označavanje DNA i analiza digitalnih slika)
DOP-PCR uvećan tumor i normalne DNK je označen pomoću fluorescein-12-dUTP i tetrametilrodamin 5-dUTP (Roche, Mannheim, Njemačka), odnosno, nick translation [15]. Hibridizaciju i slikovni analiza izvedena kako je prethodno opisano [22]. Dobici i gubici u broju kopija DNA definirani su zelene do crvene omjera > 1.2 i < 0,8, respektivno. Kromosomi 1p32-pter, 16p, 19, 22 i Y bili su isključeni iz tih analiza. Pregled Array CGH
Oligo CGH mikročipa (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) je korišten u ovom istraživanju u skladu s uputama proizvođača. Ukratko, tumor i kontrole je DNA neenzimski označeni Cy5 i Cy3, odnosno, uporabom Genomne DNA ULS naljepnicom Kit (Agilent) i kompetitivno hibridizira s microarray. Korištenje značajke Vađenje Ver.9.5.3 (Agilent) je intenzitet fluorescencije tumora i kontrola je izračunata iz hibridizacije array fotografije snimljene pomoću DNA microarray skener (Agilent). Copy-broj dobici i gubici koji su definirani kao baza 2 logaritma intenziteta signala tumor na omjer intenziteta referentni signal više od 0.3219 i manje od -0.3219, respektivno. Pregled Mutacija analiza za TP53 pregled PCR seta bili spremni za egzona 5-8 od TP53
koja hibridizira bočnih introna svakog eksona. Vidi još datoteke 1 za sekvencijama. Prvi PCR smjesa je sadržavala pufer, 200 uM dNTP, 1,5 mM MgClz 2, 0.8 uM primer, 1 ng /ul uzorka DNA i 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, California, USA) u 25 ul konačnog volumena , Nakon početne denaturacije pri 94 ° C 2 min, 40 ciklusa PCR-a su provedena na 94 ° C 30 sekundi, 54 ° C tijekom 1 min i 72 ° C tijekom 1 min, nakon čega je konačni korak ekstenzije na 72 ° C, 10 min. Nakon potvrde PCR proizvoda elektroforezom na agaroznom gelu, slijed PCR je izvedena pomoću BigDye Terminatora v1.1 Ciklus sekvencioniranja Kit (Applied Biosystems, Kalifornija, SAD). Reakcijska smjesa je sadržavala pufer, 2 ul prve PCR produkta, 0,15 uM početnice i 0.5 ul BigDye Terminator V 1.1 u 10 ul konačnog volumena. Nakon početne denaturacije na 96 ° C kroz 1 min, 25 ciklusa PCR-a su provedena na 96 ° C tijekom 10 sekundi, 50 ° C tijekom 5 sekundi i 60 ° C kroz 4 min. U naprijed i natrag sekvence su određene uporabom ABI Prism 3100 Genetska Analyser (Applied Biosystems). Mutacije su otkrivene usporedbom tih uzoraka s referentnom DNA sekvence (GenBank pristupni broj: HSU94788). Alelne stanje određeno je pomoću omjera mutanta na vršnim divljeg tipa u redoslijeda profila. Pregled Statističke analize
nepredviđenih tablice su analizirani pomoću Fisher-ovog točnog testa i Cochran-Armitage testovima. Razlike u 2-sided testovima s P < 0.05 se smatraju statistički značajna. Pregled Rezultati
imunohistokemijski na p53
bojenja uzoraka smatrani su prekomjerno izražen samo kad ≥70% tumorske stanice pokazuju pozitivno obojenih jezgara kada se gleda u području male snage. Osam od 13 intramucosal rakova, svih 6 submukozno raka i 4 od 9 uznapredovalog raka su pokazali difuzno pozitivno nuklearne bojanje p53 (Tablica 1). Je središnje bojenje uzorak je promatrana u slučaju # A7. Uzorak se smatra negativnim (koji predstavlja divlji tip TP53
) kada je uočeno prisustvo šturi, sporadično i slabe nuklearne bojenja < 5% od jezgre. Nulti bojenje uzorak je promatrana u slučajevima # A1, # A4 i # A8, što upućuje na ne-osjetilno mutaciju TP53 pregled, [23]. Pregled kromosomskih CGH
dvadeset i pet uzoraka od 25 slučajeva u (10 za sluznicu 6 submukozna i 9 uznapredovalog raka) korišteni su za kromosomske CGH. Svi ovi uzorci su dobiveni iz intramucosal lezija koje su pokazale najniži stupanj atypism.
Dok 4Q + dogodila u većini (6/9 slučajeva) naprednih kace, nije bio otkriven u ranim kace 16 (P = 0,0005). Još značajno različite kromosomske promjene između rane i uznapredovale karcinome je 11q +, koja je otkrivena u 11 od ranog raka 16 i 2 od 9 uznapredovalog raka (P = 0,0414). Od 10 intramucosal kace ispitanih, 3 pokazao je gubitak 8q (8q-) i /ili dobit od 17p (17p +), dok je 7 i 2 je pokazao 8q + i 17P, respektivno. Od 15 sluznice uzorcima invazivnih kace ispitanih, 3 i 4 su pokazali 8q- i 17p +, odnosno, dok je 7 i 6 pokazali 8q + i 17P, respektivno. Pregled Array CGH
trideset i jednu uzoraka iz 22 slučajeva (13 mukozno, 3 submukozna i 6 uznapredovalog raka) određene su pomoću nizova CGH (slika 1). DNA uzorci su dobiveni iz intramucosal i /ili invazivnim lezijama. Slika 1 Array CGH podaci myc i TP53 i TP53 sekvenciranja podataka u ranim i naprednih cjevaste adenokarcinoma želuca. Rani karcinom su podijeljeni u intramucosal (m) raka i submukozalnim (SM) karcinoma. Pogledajte tablici 1 za brojeve uzoraka. Brojevi su srednje test /referentni omjeri polja CGH. Značajni gubici i dobici su označeni crvenom i zelenom bojom, respektivno. Divljeg tipa (wt) i mutacije u eksonu (ex) i intervencijama sekvenca (IVS) od TP53 pregled označene su žutim i sive, redom.
Kao što je prikazano na slici 1 i Tablici 2, popratni gubitak myc
(myc pregled -) i pojačanje TP53 pregled (TP53 + Netlogu) otkrivene su u 9 od 13 intramucosal kace, 7 od 9 sluznice uzoraka invazivnih kace u, jedan od 3 invazivnih uzoraka karcinoma submukozalnim a nitko od 6 invazivnih uzoraka uznapredovalog raka. Obrazac myc + pregled i /ili TP53 Netlogu - otkrivena je u 3 oblika raka 13 intramucosal, nitko od 9 sluznice uzoraka invazivnih kace u, jedan od 3 invazivnih uzoraka 3 raka submukozalnim i 5 od 6 invazivne uzorci 6 napredno cancers.Table 2 Promjene myc Netlogu i TP53 pregled kopirati brojeve u ranim i naprednih cjevaste adenokarcinoma želuca pregled tumora dubina
sluznicu
submukoza
MP ili dublja -
pregled pregled pregled za sluznicu dijelu
SM
za sluznicu dio
Deep
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2x)
3
0 pregled 1 (1 *) pregled, 4
0 pregled 3 (2x) pregled 8q (myc pregled) -
3 pregled, 9 (9 **) pregled 3 pregled 2 (2 **) pregled, 1 (1 **) pregled, 0 pregled pet (5 **)
1 (0 **) pregled, 17p (TP53 pregled) + pregled 3 pregled, 10 (9 **) pregled 3 pregled 2 (2 **) pregled 2 (1 ** )
1 pregled 6 (5 **) pregled, 1 (0 **) pregled, 17p (TP53 pregled) - pregled 2 pregled, tri (2x) pregled 2 pregled, 0 pregled 1 (1 *) pregled, 4
0 pregled 4 (2x)
SM, submukozi; MP, muskularis propria. cCGH i aCGH, chromosome- i niz bazi komparativne genomske hibridizacije; Brojevi u zagradama označavaju ukupan broj ispitanih uzoraka. Bold slova pokazuje rezultate aCGH. Zvjezdice u zagradama označavaju prateća od myc pregled + i TP53 Netlogu. - Dupli zvjezdice označavaju prateća od myc Netlogu. - I TP53 pregled +
s obzirom na cjelokupni niz CGH uzorke, genetske loze su pronađeni biti isprekidan i kontinuirano između sluznice i invazivnih dijelova u 5 napredne i 3 raka submukozalnim , respektivno. Kao što je prikazano na slici 2, uzorak iz sluznice dijela # S3 pokazali 4p-, 4q-, 8q + 9p-, 13q + 15q-, 18q-, 20q + i Y-, a uzorak s invazivnog dio # S3 naslijedio iste odstupanja od dijela sluznice, pokazali su dodatne aberacije (2q-, 7p +, 8p-, 10p + 14q + i 20q +) i izgubio 4p- i 22q +. U # S1, dobici 1Q, 14q, 19. i 20., te gubitak 18q je čest u sluznice i submukozalnim uzoraka, iako su dobici od 1Q, 14q, 19q i 20 u submukozi bili su nešto manji od značajnu razinu. U # S2, što je uobičajena promjena u oba sluznice i submukozalnim dijelova bio dobitak od 20P. Uzorak submukozna pokazao dodatne dobitke u 10p, 12 i 13q i gubitaka u 3. kvartalu, 4, 5, 8P, 9p, 9q, 10Q, 12P, 14q, 16 i 19p. Uzorak za sluznicu pokazala gubitak 18q, koja je obnovljena u uzorku submukozne, možda uniparental disomije [24, 25]. U # A1, # A3, # A4, # A8 i A9 #, odstupanja u uzorcima iz sluznice dijelovi nisu otkrivene su u onima od invazivnih dijelova. U # A2, kontinuitet genetskih loza ne može procijeniti zbog nepostojanja značajnih copy-broj promjena u dijelu sluznice. Slika 2 Array CGH profile. U kromosomske regije broja kopija aberacija u sluznice dio # S3 (S3M) uključeni uglavnom u onima u invazivnom dijela (S3i), dok su one u sluznice dio # A1 (A1m) su različiti od onih invazivne strane (A1i) pregled TP53 pregled analiza mutacija pregled mutacija otkrivene su u 7 od tumora koji su ispitano za analizu sekvenci egzona 5-8 od TP53 pregled (Slika 1, Tablica 3). 1. 10 intramucosal raka, dva od rakova 3 submukozalnim i sve 4 uznapredovalog raka (samo invazivne dijelovi). U svim tim 7 tumori, TP53 pregled alela bila hemizigotni osim u 1. raka intramucosal (# M12) s heterozigotnom uzorak za eksona-8 mutacije (slika 3) i difuzni ili null uzorak za p53, kao što je naznačeno imunohistokemija. Ne TP53 pregled mutacija nije detektiran u uzorcima p53-, kao što je prikazano na slici 4. p53 + /null uzoraka, 2 od 15 uzoraka iz dijela sluznice pokazala TP53 pregled mutacija, a 6 od 7 uzoraka invazivnog dijela pokazala TP53 pregled mutaciju (P = 0,0023). U 1. raka submukozalnim pokazuju TP53 pregled + i hemizigotni mutacija (invazivni dio # S2), TP53 pregled + odražavaju uniparental polysomy [24, 25] .table 3 broja kopija promjene TP53 Netlogu i myc pregled i p53 imunoreaktivnost u ispitanim za mutaciju uzoraka analizira pregled Case No.
myc
pregled TP53
Mutacija TP53exons 5-8
Mutant alel
MDM2
p53 IHC
M3
- pregled + pregled mas pregled -
- M4
- + pregled mas pregled ns
- M5 pregled - pregled + pregled mas pregled ns pregled + pregled M6
- + pregled mas
- + pregled M7 pregled ns
+ pregled mas
- + pregled M8
- + pregled mas pregled ns
- M9
- + pregled mas pregled ns pregled + pregled M10
- + pregled mas
- + pregled M11 pregled ns pregled -
mas pregled ns
- M12
+
- Egzoni 5/8
polu /hetero
ns
+
M13 Netlogu +
- NA pregled ns
- S1m
- + pregled mas
- + pregled S1i pregled -
+ pregled mas
- + pregled S2M
- + pregled mas
- + pregled S2i pregled ns pregled + pregled eksona 7 pregled hemi pregled ns pregled + pregled S3M pregled ns pregled ns pregled eksona 8
hemi pregled ns pregled + pregled S3i pregled +
- eksona 5/6/8 pregled hemi pregled ns pregled + pregled A1m
- + pregled mas pregled - pregled null pregled A1i pregled +
- NA
- nula pregled A2M
- + pregled mas pregled ns
+ pregled A2i pregled +
- eksona 8
hemi pregled ns pregled + pregled A3m
- + pregled mas pregled ns pregled + pregled A3i pregled -
- eksona 5
hemi
- + pregled A4m
- + pregled wt
- nula pregled A4i pregled ns pregled ns pregled eksona 5
hemi pregled ns pregled nula pregled A8m pregled ns pregled +
mas
- nula pregled A8i pregled +
- NA pregled ns
nula pregled A9m
- + pregled mas
- + pregled A9i pregled + pregled + pregled eksona 6
hemi pregled ns pregled + pregled, ns = nije značajno; wt = divlji tip; NA = nije podložan porezu; hemi = hemizigotni; . Hetero = heterozigotni
M12, eksona 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); eksona 8: R267R (CGG > CGA) pregled S2i, eksona 7: C242F (TGC > TTC) pregled S3M, eksona 8: R273S (CGT > AGT) pregled S3i, eksona 5: A161V ( GCC > GTC); eksona 6: T211I (ACT > ATT); eksona 8: R273S (CGT > AGT) pregled A2i, eksona 8: R273 H (CGT > MAČKA) pregled A3i, eksona 5: A161T (GCC > ACC) pregled A4i, eksona 5: IVS5 + 1G > T
A9i, ekson 6: Y220C (TAT > TGT)
Slika 3 TP53 uzoraka mutacije. Heterozigotnih mutacija sa značajnim divljeg tipa komponenti u eksonu 8 (A) i hemizigotnih mutacije u eksonu 5 (B) u nekom intramucosal raka (# M12). Mutacije u drugim tumorima ispitivane su hemizigotni kao što je prikazano na C (# S2).
Slika 4 odnosa između p53 imunohistokemijski, broj kopija za TP53 i vruća točka mutacije TP53. Za "p53 +" i "p53-", vidi legendu u tablici 1. "TP53 pregled +", "TP53
-" i "TP53 pregled n /s" ukazuju na značajnu copy-broj dobitak i gubitak i bez značajne promjene, respektivno. Brojevi u zagradama označavaju broj uzoraka u invazivnih dijelova. Brojevi su uzorak brojevi. Brojevi u zagradama označavaju broj uzoraka u invazivnih dijelova. NA = nije oporeziv. Pregled, s druge strane, u mukozne uzorcima, difuzno /null uzorak je često povezana s divljim tipom TP53 Netlogu. Da bi se to objasnilo, MDM2 pregled, broj kopija ispitana je pomoću array CGH podatke. Od ukupno 22 uzoraka ocijeniti i za TP53
mutacije analize, MDM2 pregled pokazao gubitak copy-broj u 10 od 14 uzoraka s divljim tipom TP53 Netlogu i 1 od 8 uzoraka s TP53
mutacije . (p = 0,0237) pregled Rasprava pregled U intramucosal kace, kromosomski CGH otkrila 8q- i /ili 17p + na frekvenciji od 3 od 10 tumora ispitanih; ove promjene su češći u prethodnom istraživanju koje koristi slučajni temeljni etiketiranje [18]. U ovom istraživanju, 8q + često je detektiran u intramucosal karcinomima (7/10), a u invazivnih tumora (7/15); Međutim, gore spomenuti prethodni podaci rijetko pokazali 8q +. Te razlike mogu odražavaju razlike u metodama označavanja koji se koriste; CGH rezultati sa nick prevođenje označavanje ili slučajnih inicijalni označavanje uspoređeni su s RIBA signale, a utvrđeno je da je nick prevođenje označavanje nerijetko pokazala lažne pozitivne dobitke [26]. Međutim, uz iste uvjete označavanja, otkrivene su značajne razlike u incidenciji 4Q + i 11q + između ranog i razvijenog raka, vjerojatno odražava razlike u genetskim lozama među njima. Kromosomska CGH podaci uznapredovalog raka u ovoj studiji bili su u skladu s prethodno kromosomskim CGH podataka dobivenih sa nick prevođenje obilježavanja za napredna GCS (tj 17P i 8q + bili su prilično uobičajene) [27-30].
Iako klinički razlučiva rani karcinomi su općenito smatra prekursore uznapredovalog raka [5, 6], intramucosal i invazivnih dijelovi naprednih kace često pokazali discordant broj kopija za myc Netlogu i TP53 pregled u ovoj studiji: myc
- i TP53 pregled + u 5 od 6 uzoraka za mukozne dijelova, obično kao u raka intramucosal ispitivanih i myc
+ i /ili TP53
- u 5 od 6 uzoraka invazivnih dijelova. Pored toga, na osnovu ukupne polja CGH uzorak sluznice, invazivnim dijelova tumora diskontinuirano genetska loza pronađen je u 5 od 6 uznapredovalog raka. Stoga, čini se da tumorske klonovi na mukozne dijelova uznapredovalog raka nisu preteče invazivnog dijela, ali minuta intramucosal raka koje vjerojatno koegzistirao s invazivnim raka. On je izvijestio da više raka minute su češći u kace nego u nediferencirane tipa GCS [31]. U naprednim kace je intramucosal prethodnik invazivna komponente su možda izgubili zbog ulceracija u tumor ili preteča nije ispitan jer nije podudaraju s dijelom najnižom ocjenom atypism, na koju se pregled sluznice dio invazivne GCS je zatvoren u ovom istraživanju.
s druge strane, u karcinomima submukozalnim, kontinuirani genetska loza pronađena je u sve 3 submukozalnim tumora ispitanih. To može biti zato što sluznice dio je u osnovi zadržao početkom GCS i zato što sluznice prethodnika invazivna komponente pokazao najmanje stupanj atypism i nije bila isključena iz analize sadašnjosti polje. Sluznice i invazivnih dijelovi imali zajedničke regije broja kopija aberacija s neproturječnih prijelomnih točaka, a većina promjena u dijelu sluznice su bili uključeni u one invazivne strane. . Na razini gena, kopija broj myc Netlogu i TP53 pregled bili dosljedni između sluznice i submukozalnim dijelova u 2 od karcinoma 3 submukozalnim
TP53
- i /ili myc
+ uzorak otkriven je ne samo u invazivnim dijelovima 1. raka submukozalnim, a većina od uznapredovalog raka, ali iu tri od 13 intramucosal rakova. U tih tumora, p53 imunohistokemijski je na difuznu ili null (mutacija) uzorak (Tablice 1 i 3), što ukazuje da je TP53 pregled - može odražavati LOH i dobijeno inaktivaciju divljeg tipa TP53 Netlogu. Sekvencioniranje analizama mutacija žarišta za TP53 pregled su pokazali da su hemizigotni mutacije (tj mutacija i Loh) su pronađene u mukoznim uzorcima 1 karcinoma 3 intramucosal i 1 raka submukozne s TP53
- uzorak, kao što je i invazivnih dijelovima 4 uznapredovalog raka koje su informativni za TP53 pregled, analiza mutacija. Takav inaktivacija divljeg tipa TP53 Netlogu što može uzrokovati daljnje genomske nestabilnosti, je često prijavljen u naprednim GCS [15, 17]. Gen lokus myc pregled je također poznato da često pokazuju copy-broj dobitke ili pojačanja u raznim naprednim raka [32]. Myc pregled + /TP53 pregled - dakle može se opravdati kao potpis agresivnog GC
On je izvijestio da je LOH, kao i mutacije TP53 pregled češće otkrivena u naprednim GCS nego ranije. GCS [17, 33], te da, u roku od ranog GCS, TP53 pregled mutacije češće otkrivena u submukozalnim kace nego u intramucosal kace [34, 35]. Ova tendencija je također zabilježena u ovoj studiji, a mutacija analize pokazuju daje vruća točka mutacije nisu detektirane u sluznice dijelu tumora, osim u 1 rak intramucosal (# M12). Osim toga, broj kopija-gubitak MDM2
, koji igra važnu ulogu u razgradnji p53 [36], u korelaciji s difuzno p53 prekomjerne ekspresije u odsustvu TP53
mutacija. Ovaj fenomen jedva se prijavio, ali bi mogao biti jedan od mehanizama p53 prekomjernom ekspresijom početkom GCS.
U ranim raka, postoji svibanj biti uspavan i invazivne komponente kao pravi prethodnici uznapredovalog raka. Među ranim raka ispitanih u ovom istraživanju, invazivni dio 1. tumora (# S3) i 3 intramucosal raka (# M11, M12 # i # M13) pokazala je potpis agresivnog raka (myc pregled + i /ili TP53 pregled -) i česte mutacije TP53 Netlogu; Međutim, u 1 rak submukozne (# S1), invazivna dijelovi pokazali potpis uspavan raka (myc pregled - /TP53 pregled +).

• GASTRICHIP: D2 resekcija i Hipertermija u trbušnu šupljinu kemoterapije u lokalno uznapredovalim želučanog karcinoma: randomizirano i multicentrično ispitivanje faze III study
• Vrijeme Karakteristike alkohola prestanka na rizik od raka želuca - meta-analiza