Lineage analyse af tidlige og avancerede rørformede adenocarcinomer i maven:? Kontinuerlig eller diskontinuerlig

Lineage analyse af tidlige og avancerede rørformede adenocarcinomer i maven:? Kontinuerlige eller diskontinuerlige
Abstrakt
Baggrund
Udryddelse af tidlig gastrisk karcinom (GC) menes at bidrage til reduktion i dødeligheden af ​​GC, da de fleste af den tidlige GCS fremskridt til de avancerede GC'ers. Imidlertid er tidlig GC alternativt betragtes som en sovende variant af GC, og det sjældent udvikler sig til avancerede GC. Formålet med denne undersøgelse var at præcisere omfanget af overlapning af genetiske afstamninger mellem tidlig og fremskreden rørformede adenocarcinomer (badekar) af maven.
Metoder
immunhistokemisk farvning for p53 blev udført under anvendelse 28 kirurgisk resektion maver med 13 intramucosal og 15 invasive badekar. Ved chromosome- og array-baserede komparativ genomisk hybridisering (CGH) blev genomisk kopi nummer forfatning forhold mellem slimhinde og invasive dele af invasive baljer og mellem slimhinder dele af invasive og intramucosal bøtter, der bruger 25 og 22 bøtter hhv. TP53
mutation i exon 5-8 blev undersøgt i 20 bøtter.
Resultater
Kromosomal CGH afslørede, at 4q + og 11q + var mere almindelige i avancerede og tidlige baljer, henholdsvis, mens kopiere nummer ændringer i 8Q og 17p viste ingen signifikante forskelle mellem tidlige og avancerede badekar. vifte CGH viste imidlertid, at af de 13 intramucosal Baljer undersøgt, tab af MYC
(MYC
-) blev og gevinst på TP53
(TP53
+) påvist i 9 baljer og MYC
+ og /eller TP53
- blev fundet i 3 bøtter. Af de slimhinder prøver af 9 invasive bøtter, 7 viste MYC
- /TP53
+ og ingen viste MYC
+ og /eller TP53
-. Af de 9 prøver fra invasive dele, 1 (fra submukøse kræft) viste MYC
- /TP53
+ og 6 (1 fra submukøs og 5 fra fremskredne kræftformer) viste MYC
+ og /eller TP53
-. Sidstnævnte 6 tumorer almindeligvis viste en mutant mønster (diffus eller null) i p53 immunohistokemi, og 4 af de 6 tumorer vurderbare til TP53
sekvensanalyse viste mutationer. Den samlede vifte CGH mønster viste, at mellem slimhinde og invasive dele, blev genetiske afstamning fundet diskontinuert i 5 fremskredne kræftformer og løbende i 3 submukøse kræftformer.
Konklusioner
Genetiske slægter ofte afveg mellem tidlige og avancerede badekar. MYC
- /TP53
+ og MYC
+ og /eller TP53
-. Kan være underskrifter fra sovende og aggressive baljer, henholdsvis i maven
Baggrund
mavekræft stadig den næsthyppigste årsag til cancer-relaterede dødsfald på verdensplan, trods en nylig fald i dødeligheden i udviklede lande [1]. Gastric karcinomer (GCS) er klassificeret morfologisk i 2 hovedkategorier: rørformet-dannende type og diffus form [2, 3] og i iscenesættelse, i begyndelsen af ​​kræft (involverer slimhinden og submucosa) og avancerede kræftformer (involverer muscularis propria eller dybere). Tidlig GC anses en hærdelig cancer [4]; det efter sigende skrider til avanceret GC efter varierende varigheder som et tidligt tidspunkt i GC [5, 6]. I Japan kan tidlig GC'er aktivt resektion endoskopisk samt kirurgisk [7], baseret på principperne om tidlig påvisning og behandling. På den anden side er nogle patologer hævder, at de rørformede-dannende neoplastiske læsioner, der er begrænset til slimhinden tage lang tid eller er ude af stand til at invadere dybere væv. Derved er disse læsioner kaldes dysplasi [4].
Nylig har en masse-screening program for neuroblastomer i Japan [8-10] blev suspenderet, fordi en diskontinuerlig genetisk afstamning blev fundet mellem tidlige og de sene-præsenterende neuroblastomer. Negative og sene-præsentere (≥1 år) neuroblastomer viste nær-diploidi med tab af terminal 1p, mens positive neuroblastomer hos spædbørn viste nær-triploidy uden 1p sletning [11, 12]. På den anden side, komparativ genomisk hybridisering (CGH) -baseret analyse foreslog, at høj kvalitet atypisk adenomatøs hyperplasi i lungen er den sande forløber for bronchioloalveolar carcinom [13]. I maven, er det et problem, i hvilket omfang genetiske afstamning er overlappet i tidlig og fremskreden GC'er.
I diffus form GCS, vi brugte CGH at påvise, at kromosomal kopital ændringer i de intramucosal signet-ring cellecarcinomer som viste en lagdelt struktur [14] blev nedarvet i en brøkdel af dårligt differentierede GCS på fremskredne stadier [15]. Tilstedeværelsen af ​​en lagdelt struktur i signetring celler i mucosale dele af disse avancerede cancere også foreslået, at signetring cellecarcinomer kan være en sand precursor for dårligt differentierede GCS. CGH-baserede afstamning analyse af en anden undergruppe af dårligt differentierede avancerede GCS med rørformede komponenter, men ingen lagdelte struktur i den mucosale del afslørede, at GC'ers af denne undergruppe blev afledt fra et rørformet element i en tumor og blev karakteriseret ved 17p- og 8Q + [16] og inaktivering af vildtype-TP53
ved mutation og tab af heterozygositet (LOH) [17]. For at bestemme den tidlige modstykke til denne type af GC, vi analyserede intramucosal rørformede adenokarcinomer (badekar) ved hjælp af CGH. Disse undersøgelser viste, at de intramucosal badekar viste ikke kun flere kromosomale ændringer fælles for avancerede GC'ers men også ofte viste 8q- og 17p + der var kritisk anderledes avancerede og dårligt differentierede GCS [18].
I den foreliggende undersøgelse, kopi- antal ændringer i kromosomer og gener blev undersøgt i slimhinder og invasive dele af en anden serie af tidlige og avancerede bøtter bruger array og kromosomal CGH. Baseret på disse data, viste vi tilfælde af kontinuerlig og diskontinuerlige slægter mellem intramucosal og invasive dele af individuelle tumorer og fandt, at TP53
MYC
kan være gode afstamning markører for gastrisk bøtter.
Metoder
Institutional Review Board om medicinsk etik ved Shiga University of Medical Science meddelt godkendelse til udførelse af denne forskning på betingelse af, at de anvendte materialer skal være anonym.
Tumorprøver
denne undersøgelse omfattede 28 kirurgisk resektion maver (tabel 1) med 13 intramucosal bøtter og 15 invasive bøtter [6 submukøst og 9 avancerede cancere, invaderede muscularis propria eller dybere væv (den rørformede komponent i hver tumor blev vurderet til at være mere end 30%)]. Hver mave blev fikseret i formalin og indlejret i paraffinvoks. Disse blev udvalgt tilfældigt fra de materialer, diagnosticeret i vores afdeling fra 1996 til 2008. Histologisk typer og tumor stadier blev bestemt ifølge den japanske Klassificering af gastrisk kræft [19] og pTNM iscenesættelse hhv. Når en slimhinde histologisk mønster viste sig at være heterogen i en individuel invasiv tumor, blev den del med den laveste kvalitet af atypism tages som slimhinde prøve, der kan forhindre muligheden for re-invasion af invasive kræftceller i slimhinden. I invasive kræftformer, blev DNA-prøver opnået fra intramucosal og invasive parts.Table 1 Resumé af kliniske, histopatologiske og molekylærgenetiske data for 25 rørformet adenokarcinom mave
Case No.
Alder /køn
Histologisk typen *
invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
n0
IA
c /a -
-
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2M
81 /F
pap
T1 (SM)
N1
IB
c /a
+ -
S2i
NT /a
+
+
S3m
79 /M
tub1
T1 (SM)
n0
IA
c /en
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
n0
IA
c /NT
+
NT
S5M
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /en
null
NA
A2M
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)
n0
IB
c /a
+ -
A2I
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
a3Jeg
NT /en
+
+
A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS)
N2
IIIA
c /a
null -
a4Jeg
NT /en
null
+
A5M
56 /M
tub1
T2 (MP)
n0
IB
c /NT -
NT
a5Jeg
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /en
null
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A9i
NT /a
+
+
* japansk klassificering af gastrisk karcinom; ** PTNM klassificering. I kolonnen af ​​sag, M = intramucosal kræft; S = cancer involverer submucosa; A = fremskreden kræft; m = slimhinde del; i = invasiv del. I kolonnen for CGH, c = kromosomale CGH; a = array CGH. I kolonnen af ​​p53 immunhistokemisk (IHC); "+" Angiver diffust (> 70%) positive kerner, "-" angiver sporadisk (< 5%) positive kerner; "Null" angiver ingen immunreaktivitet overhovedet. I kolonnen af ​​TP53
mutation; "+" Og "-" indikerer tilstedeværelse og fravær af mutation, henholdsvis; NA = ikke kan vurderes; NT = ikke testet
Immunhistokemi
Immunhistokemisk farvning blev udført med monoklonale antistoffer mod p53-protein (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danmark).. Efter antigen-genvinding af vævssnit i destilleret vand ved 121 ° C i 5 minutter blev immunreaktivitet detekteret ved en indirekte biotin-streptavidin-peroxidase metode under anvendelse af Histofine Kit (Nichirei, Tokyo, Japan) og diaminobenzidin reaktion. Snittene blev modfarvet med hæmatoxylin. Objektglas med den negative kontrol uden det primære antistof og de af den positive kontrol blev forarbejdet parallelt.
Laser mikrodissektion og DNA-fremstilling
Tumorceller blev opnået fra 5-um-tykke vævssnit under anvendelse af en LMD6000 laser mikrodissektion systemet ( Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland). For individuelle tumorer blev cancerceller opnået fra områder > 3 mm 2, hvor kræftceller udgjorde ≥90% af det totale celletal. Disse cancerceller blev spaltet i 200 pi proteinase K-opløsning ved en koncentration på 200 ug /ml i ca. 70 timer ved 37 ° C efterfulgt af phenol /chloroform DNA-ekstraktion.
Whole genomamplifikation
Prøve-DNA blev amplificeret anvendelse af degenererede oligonucleotid-primet polymerasekædereaktion (DOP-PCR) i 2 faser, som tidligere beskrevet [20], hvilket resulterede i PCR-produkter mere end 2 kb i størrelse, egnet til nick-translation mærkning af CGH. Hus til opstilling CGH, prøve-DNA blev amplificeret under anvendelse af GenomePlex Tissue Whole Genome Amplification Kit (WGA2 Kit, Sigma, St. Louis, USA) [21]. For nogle DNA-prøver, der kan ikke i tilstrækkelig amplificeret, blev WGA5 Kit (Sigma) anvendes.
CGH (hybridisering, probe DNA-mærkning og digital billedanalyse)
DOP-PCR-amplificeret tumor og normalt DNA blev mærket ved anvendelse af fluorescein-12-dUTP og tetramethylrhodamin-5-dUTP (Roche, Mannheim, Tyskland), henholdsvis ved nick translation [15]. Hybridisering og billedfiler analyser blev udført som tidligere [22] beskrevne. Gevinster og tab i DNA-kopier, blev defineret af grøn til rød nøgletal > 1,2 og < 0,8 hhv. Kromosomer 1p32-pter, 16p, 19, 22 og Y blev ekskluderet fra disse analyser.
Array CGH
Oligo CGH microarray (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) blev anvendt i denne undersøgelse ifølge producentens instruktioner. Kort fortalt, tumor og kontrol-DNA var ikke-enzymatisk mærket med Cy5 og Cy3 henholdsvis anvendelse af Genome DNA ULS Labelling Kit (Agilent) og kompetitivt hybridiseret til mikroarrayet. Brug Feature Extraction Ver.9.5.3 (Agilent), fluorescensintensiteten af ​​tumorer og kontroller blev beregnet ud fra de hybridiserede array-billeder taget ved hjælp af en DNA-microarray-scanner (Agilent). Kopital og -tab blev defineret som bunden 2 logaritmen af ​​tumoren signalintensitet af referencesignalet intensitetsforhold mere end 0,3219 og mindre end -0,3219 henholdsvis.
Mutation analyse for TP53
PCR primersæt blev fremstillet til exons 5-8 of TP53
, som hybridiserer til de flankerende introner af hver exon. Se yderligere fil 1 for primersekvenser. Den første PCR-blandingen bestod af en buffer, 200 uM dNTP'er, 1,5 mM MgCl 2, 0,8 uM primer, 1 ng /pl prøve-DNA og 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, Californien, USA) i en 25-pi slutvolumen . Efter indledende denaturering ved 94 ° C i 2 minutter blev 40 cykler af PCR udført ved 94 ° C i 30 sek, 54 ° C i 1 min og 72 ° C i 1 min, efterfulgt af endelig ekstension ved 72 ° C i 10 min. Efter bekræftelse af PCR-produkter ved agarosegelelektroforese, blev sekvensen PCR udført under anvendelse af BigDye Terminators v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Californien, USA). Reaktionsblandingen bestod af en puffer, 2 pi af den første PCR-produkt, 0,15 pM primer og 0,5 pi BigDye Terminator V 1.1 i en 10 pi slutvolumen. Efter indledende denaturering ved 96 ° C i 1 min, blev 25 cykler af PCR udført ved 96 ° C i 10 sek, 50 ° C i 5 sek og 60 ° C i 4 min. Fremad og bagud sekvenser blev bestemt under anvendelse af ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Mutationer blev påvist ved at sammenligne disse prøver til referencen DNA-sekvensen (GenBank accession nummer: HSU94788). Allel status blev bestemt under anvendelse af forholdet mellem mutant med vildtype-topniveauer i sekventering profiler.
Statistiske analyser Salg kontingenstabeller blev analyseret ved Fishers eksakte test og Cochran-Armitage test. Forskelle af 2-sidede test med P < 0,05 blev anset for at være statistisk signifikant.
Resultater
Immunhistokemi for p53
farvede mønstre blev anset overudtrykt kun når ≥70% tumorceller viste positivt farvede kerner, når de ses i en energibesparende felt. Otte af de 13 intramucosal cancere, alle de 6 submukøse cancere og 4 af de 9 fremskredne kræftformer viste diffust positiv nuklear farvning for p53 (tabel 1). Et brændpunkt farvningsmønster blev observeret i tilfælde # A7. Et mønster blev betragtet negativ (der repræsenterer vildtype-TP53
), når tilstedeværelsen af ​​sparse, sporadisk og svag nuklear farvning blev observeret i < 5% af kernerne. En null farvningsmønster blev observeret i tilfælde # A1, # A4 og # A8, hvilket tyder på en ikke-sense mutation af TP53
[23].
Kromosomal CGH
Femogtyve prøver fra 25 sager (10 slimhinde , 6 submukøse og 9 fremskredne kræftformer) blev anvendt til kromosomal CGH. Alle disse prøver blev indhentet fra intramucosal læsioner, der viste den laveste kvalitet af atypism.
Mens 4q + fandt sted i de fleste (6/9 tilfælde) af avancerede baljer, blev det ikke påvist i de 16 tidlige bøtter (P = 0,0005). En anden signifikant forskellig kromosomale forandringer mellem tidlige og fremskredne cancere var 11q +, som blev påvist i 11 af de 16 tidlige cancere og 2 af 9 avancerede cancere (P = 0,0414). Af de 10 intramucosal bøtter undersøgte, 3, viste tab af 8q (8q-) og /eller forstærkning af 17p (17p +), mens 7 og 2 viste 8q + og 17p- hhv. Af de 15 slimhinder prøver af invasive Baljer undersøgte, 3 og 4 viste 8q- og 17p + henholdsvis mens 7 og 6 viste 8q + og 17p- hhv.
Array CGH
Enogtredive prøver fra 22 tilfælde (13 mucosal, 3 submucosal og 6 avancerede cancere) blev vurderet ved anvendelse af matrix CGH (figur 1). DNA-prøver blev opnået fra intramucosal og /eller invasive læsioner. Figur 1 Array CGH data for MYC og TP53 og TP53 sekventering data i tidlige og avancerede rørformede adenokarcinomer af maven. Tidlige cancere er opdelt i intramucosal (m) cancere og submukøse (SM) cancere. Se Tabel 1 for prøvenumre. Tal er middel test /reference- forhold af arrayet CGH. Betydelige tab og gevinster er angivet med rød og grøn, hhv. Vildtype (wt) og mutation i exon (ex) og intervenerende sekvens (IVS) af TP53
er angivet med gul og grå, henholdsvis.
Som vist i figur 1 og tabel 2, ledsagende tab af MYC
(MYC
-) og gevinst på TP53
(TP53 +
) blev påvist i 9 af de 13 intramucosal badekar, 7 af de 9 slimhinde prøver af invasive baljer, 1 af de 3 invasive prøver af submukøse kræft og ingen af ​​de 6 invasive prøver af fremskredne kræftformer. Et mønster af MYC +
og /eller TP53
- blev påvist i 3 af de 13 intramucosal cancere, ingen af ​​de 9 mucosale prøver af invasive bøtter, 1 af de 3 invasive prøver af 3 submukøse cancere og 5 i 6 invasive prøver af 6 avancerede cancers.Table 2 Ændringer af MYC
og TP53
kopiere tal i tidlige og avancerede rørformede adenokarcinomer af maven
Tumor dybde
mucosa
Submucosa
MP eller dybere -



mucosal del
SM
Mukosa del
Deep
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *)
3
0
1 (1 *)
4
0
3 (2 *)
8Q (MYC
) -
3
9 (9 **)
3
2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) +
3
10 (9 **)
3
2 (2 **)
2 (1 ** )
1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) -
2
3 (2 *)
2
0
1 (1 *)
4
0
4 (2 *)
SM, submucosa; MP, muscularis propria. cCGH og aCGH, chromosome- og array-baserede komparativ genomisk hybridisering; Tal i parentes angiver det samlede antal af de undersøgte prøver. Fed skrift viser resultaterne af aCGH. Stjernerne i parentes angiver samtidigheden af ​​MYC
+ og TP53
-. Dobbelt stjerner angiver samtidigheden af ​​MYC
-. Og TP53
+
Baseret på den samlede vifte CGH mønstre blev genetiske slægter fundet at være diskontinuert og kontinuerlig mellem slimhinde og invasive dele i 5 avancerede og 3 submukøse kræft , henholdsvis. Som vist i figur 2, prøven fra mucosale del af # S3 viste 4p-, 4q-, 8Q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20q + og Y-, mens prøven fra invasive del af # S3 arvet de samme afvigelser fra slimhinde del, viste yderligere afvigelser (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q + og 20Q +) og tabte 4p- og 22q +. I # S1, gevinster på 1q, 14q, 19 og 20, og tab af 18q var almindelig i slimhinder og submukøse prøver, selvom gevinsterne ved 1q, 14q, 19q og 20 i submucosa var lidt mindre end den betydeligt niveau. I # S2, en fælles ændring i både slimhinder og submukøse dele var en gevinst på 20p. Den submukøse prøve viste yderligere gevinster i 10p, 12 og 13q og tab i 3. kvartal, 4, 5, 8 p, 9p, 9q, 10Q, 12p, 14q, 16 og 19p. Den mucosale prøve viste tab af 18q, som blev restaureret i det submukøse prøven, eventuelt ved uniparental disomi [24, 25]. I # A1, # A3, # A4, # A8 og # A9 blev afvigelser i prøverne fra de slimhinder dele ikke påvist i de af de invasive dele. I # A2, kan kontinuiteten af ​​genetiske afstamninger ikke vurderes på grund af fraværet af signifikante kopital ændringer i den mucosale side. Figur 2 Array CGH profiler. Det kromosomale regioner af kopital afvigelser i den mucosale del af # S3 (S3m) er inkluderet grundlæggende i dem i den invasive del (S3i), mens tallene i den mucosale del af # A1 (A1m) er forskellige fra dem for den invasive del (A1i)
TP53
blev påvist mutation analyse
Mutationer i 7 af de tumorer, der blev undersøgt for sekvensanalyse af exon 5-8 af TP53
(figur 1, tabel 3):. 1 af de 10 intramucosal cancere, 2 af de 3 submukøse cancere og alle 4 fremskredne cancere (kun de invasive dele). I alle disse 7 tumorer TP53
allel var hemizygot undtagen i 1 intramucosal cancer (# M12) med en heterozygot mønster for en exon-8 mutation (figur 3) og en diffus eller en null mønster for p53, som angivet ved immunhistokemi. Nr TP53
mutation blev påvist i p53 prøver, som vist i figur 4. I p53 + /null prøver, 2 af de 15 prøver af den mucosale del viste TP53
mutation, hvorimod 6 af de 7 prøver af invasiv del viste TP53
mutation (P = 0,0023). I en af ​​de submukøse kræftformer viser TP53
+ og en hemizygote mutation (den invasive del af # S2), TP53
+ kan afspejle uniparental polysomy [24, 25] .table 3 kopiantals ændringer i TP53
og MYC
p53 immunoreaktivitet i de testede for mutation prøver analyser
Case No.
MYC

TP53
Mutation af TP53exons 5-8
Mutant allel
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
wt -
-
M4 -
+
wt
ns -
M5
-
+
vægt
ns
+
M6 -
+
vægt -
+
M7
ns
+
vægt -
+
M8 -
+
wt
ns -
M9 -
+
vægt
ns
+
M10 -
+
vægt -
+
M11
ns
-
wt
ns -
M12
+ -
Exon 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M -
+
vægt -
+
S1i
-
+
vægt -
+
S2M -
+
vægt -
+
S2i
ns
+
exon 7
hemi
ns
+
S3m
ns
ns
exon 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
exons 5/6/8
hemi
ns
+
A1m -
+
wt
-
null
A1i
+ -
NA -
null
A2M -
+
wt
ns
+
A2I
+ -
exon 8
hemi
ns
+
A3M -
+
vægt
ns
+
a3Jeg
- -
exon 5
hemi -
+
A4M -
+
vægt- -
null
a4Jeg
ns
ns
exon 5
hemi
ns
null
A8m
ns
+
wt -
null
A8i
+ -
NA
ns
null
A9m -
+
vægt -
+
A9i
+
+
exon 6
hemi
ns
+
ns = ikke signifikant; wt = vildtype; NA = ikke kan vurderes; hemi = hemizygote; . Hetero = heterozygot
M12, exon 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); exon 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, exon 7: C242F (TGC > TTC)
S3m, exon 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, exon 5: A161V ( GCC > GTC); exon 6: T211I (ACT > ATT); exon 8: R273S (CGT > AGT)
A2I, exon 8: R273 H (CGT > CAT)
a3Jeg, exon 5: A161T (GCC > ACC)
a4Jeg, exon 5: IVS5 + 1G > T
A9i, exon 6: Y220C (TAT > TGT)
Figur 3 TP53 mutation mønstre. Et heterozygot mutation med en signifikant vildtype-komponent i exon 8 (A) og en hemizygote mutation i exon 5 (B) i et intramucosal cancer (# M12). Mutationer i de andre tumorer undersøgte var hemizygote som vist i C (# S2).
Figur 4 relationer blandt p53 immunhistokemi, kopiere antal TP53 og hot spot mutation af TP53. For "p53 +" og "p53", se legenden i tabel 1. "TP53
+", "TP53
-" og "TP53
n /s" tyder på betydelig kopi-nummer gevinst og tab , og ingen væsentlige ændringer, hhv. Tal i parentes angiver antallet af prøver i invasive dele. Tal er prøvenumre. Tal i parentes angiver antallet af prøver i invasive dele. NA = ikke kan vurderes.
På den anden side, i slimhinder prøver blev den diffuse /null mønster ofte forbundet med vildtype-TP53
. For at forklare dette fund blev MDM2
kopital undersøgt under anvendelse Array CGH data. Af i alt 22 prøver vurderet for TP53
mutation analyse, MDM2
viste kopi-nummer tab i 10 af de 14 prøver med vildtype-TP53
en af ​​de 8 prøver med TP53
mutation . (P = 0,0237)
diskussion Salg In intramucosal bøtter, kromosomale CGH afslørede 8q- og /eller 17p + med en frekvens på 3 ud af 10 undersøgte tumorer; Disse ændringer var mere almindelige i en tidligere undersøgelse, bruges random priming mærkning [18]. I nærværende undersøgelse blev 8Q + ofte opdaget både intramucosal kræftformer (7/10) og invasive kræftformer (7/15); imidlertid den ovennævnte tidligere data sjældent viste 8Q +. Disse uoverensstemmelser kan afspejle forskelle i mærkning metoder; CGH resultater med nick translation mærkning eller random priming mærkning blev sammenlignet med FISH-signaler, og det blev konstateret, at nick translation mærkning ikke sjældent viste falsk-positive gevinster [26]. Men ved hjælp af de samme betingelser mærkning, blev påvist signifikante forskelle i forekomsten af ​​4q + og 11q +, mellem tidlige og fremskredne kræftformer, hvilket muligvis afspejler forskelle i genetiske afstamninger mellem dem. Kromosomal CGH data for fremskredne kræftformer i denne undersøgelse var i overensstemmelse med tidligere kromosomale CGH data opnået med nick translation mærkning af avancerede GCS (dvs. 17p- og 8Q + var ganske almindeligt) [27-30].
Selvom klinisk mærkbare tidlige kræftformer er generelt betragtes forløbere for fremskredne kræftformer [5, 6], de intramucosal og invasive dele af avancerede baljer ofte viste disharmoniske kopi antal MYC
og TP53
i denne undersøgelse: MYC
- og TP53
+ i 5 af de 6 prøver af de mucosale dele, som almindeligvis som i de undersøgte intramucosal kræftformer og MYC
+ og /eller TP53
- i 5 af de 6 prøver af de invasive dele. Desuden baseret på den samlede matrix CGH mønster af den mucosale og invasive dele af tumorer, blev en diskontinuerlig genetisk afstamning fundet i 5 af de 6 fremskredne kræftformer. Derfor ser det ud til, at tumor kloner i de slimhinder dele af fremskredne kræftformer ikke var forløbere for den invasive del, men minut intramucosal kræftformer, der formentlig sameksisterede med de invasive kræftformer. Det er blevet rapporteret, at flere minute kræftformer er mere almindelige i bøtter end i udifferentieret-typen GC'er [31]. I avancerede baljer, måske den intramucosal precursor for en invasiv komponent er gået tabt som følge af ulceration i tumoren, eller precursoren blev ikke undersøgt, fordi den ikke faldt sammen med den del af den laveste kvalitet af atypism, hvortil behandlingen af ​​mucosale del af invasiv GCS var begrænset i den foreliggende undersøgelse.
på den anden side, i submukøse cancere, en kontinuerlig genetisk afstamning blev fundet i alle de 3 submukøse tumorer undersøgt. Det kan være, fordi den mucosale del er dybest set tilbageholdes i begyndelsen GC'er og fordi den mucosale precursor af en invasiv komponent viste den laveste grad af atypism og blev ikke udelukket fra denne matrix analyser. Den mucosale og invasive dele havde fælles regioner af kopital aberrationer med samstemmende breakpoints, og de fleste af ændringerne i den mucosale side blev inkluderet i de af den invasive del. . På det gen-niveau, kopien antal MYC
og TP53
var konsistent mellem slimhinder og submukøse dele i 2 af de 3 submukøse kræftformer
TP53
- og /eller MYC
+ mønster blev påvist ikke kun i de invasive dele 1 af de submukøse cancere og de fleste af de avancerede cancere, men også i 3 af de 13 intramucosal cancere. I disse tumorer udviste p53 immunohistokemi et diffust eller nul (mutation) mønster (tabel 1 og 3), hvilket antyder, at TP53
- kan afspejle LOH og den resulterende inaktivering af vildtype-TP53
. Sekventering analyser af mutations brændpunkter TP53
har vist, at hemizygote mutationer (dvs. mutation og LOH) blev påvist i slimhinder prøver af en af ​​de 3 intramucosal kræftformer og en submukøs kræft med TP53
- mønster, som samt de invasive dele af de 4 fremskredne cancere, der var informativt for TP53
mutationsanalyse. Sådan inaktivering af vildtype-TP53
, hvilket kan forårsage yderligere genomisk ustabilitet, er ofte blevet rapporteret i avancerede GCS [15, 17]. Myc
gen locus er også kendt på ofte vise kopital gevinster eller amplifikationer i forskellige avancerede cancere [32]. MYC
+ /TP53
- kan således begrundes som undertegnelsen af ​​aggressive GC
Det er blevet rapporteret, at LOH samt mutationer af TP53
oftere påvist i avancerede GC'ers end i begyndelsen. GCS [17, 33], og at der inden begyndelsen af ​​GCS, TP53
mutationer oftere påvist i submukøse TUBS end i intramucosal bøtter [34, 35]. Denne tendens blev også observeret i den foreliggende undersøgelse, men mutation analyser indikerer, at hotspot mutationer ikke blev påvist i den mucosale del af tumorerne, undtagen i 1 intramucosal cancer (# M12). Desuden kopital tab af MDM2
, som spiller en rolle i p53 nedbrydning [36], korreleret med diffus p53-overekspression i fravær af en TP53
mutation. Dette fænomen er næppe rapporteret, men kunne være en af ​​mekanismerne i p53 overekspression i begyndelsen GC'er.
I begyndelsen af ​​kræft, der kan være hvilende og invasive komponenter samt ægte forløbere for fremskredne kræftformer. Blandt de tidlige kræftformer undersøgt i den foreliggende undersøgelse, en invasiv del af en tumor (# S3) og 3 intramucosal kræftformer (# M11, # M12 og # M13) viste undertegnelsen af ​​aggressiv kræft (MYC
+ og /eller TP53
-) og hyppige mutationer af TP53
; dog i en submukøse kræft (# S1), viste de invasive dele undertegnelsen af ​​hvilende kræft (MYC
- /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 resektion og hypertermisk intraperitoneal kemoterapi i lokalt fremskreden gastrisk karcinom: et randomiseret og multicenter fase III-study
• Tid karakteristika effekten af ​​alkohol ophør på risikoen for mavekræft - en meta-analysis