Lineage analyysi varhaisen ja kehittyneiden putkimainen adenokarsinoomat mahan: jatkuva tai epäjatkuva?

Lineage analyysi varhaisen ja kehittyneiden putkimainen adenokarsinoomat mahan: jatkuva tai epäjatkuva?
Tiivistelmä
tausta
hävittäminen varhaisen mahakarsinooman ( GC) on arveltu osaltaan väheneminen kuolleisuutta GC, koska suurin osa varhaisen GC edistymisestä kehittynyt GC. Kuitenkin varhainen GC vaihtoehtoisesti pidetään lepotilassa variantti GC, ja se harvoin etenee kehittynyt GC. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, missä määrin päällekkäisiä geneettisten suvusta varhaisen ja kehittyneet putkimainen adenokarsinoomat (porealtaat) vatsaan. Tool Menetelmät
immunohistokemiallinen värjäys p53 suoritettiin käyttäen 28 kirurgisesti resektoitiin mahat 13 intramucosal ja 15 invasiivisia porealtaat. By chromosome- ja array-pohjainen vertaileva genominen hybridisaatio (CGH), genomista kopioluku perustuslaki verrattiin välillä limakalvon ja invasiivisia osia invasiivisen porealtaat ja välillä limakalvon osien invasiivisia ja intramucosal Tubs, käyttämällä 25 ja 22 porealtaat, vastaavasti. TP53
mutaatio eksonien 5-8 tutkittiin 20 porealtaat.
Tulokset
Kromosomi CGH paljasti, että 4q + ja 11q + olivat yleisempiä kehittynyt ja varhaisen Tubs vastaavasti taas kopioluvun muutoksia 8q ja 17p osoittivat ei ole merkittäviä eroja aikaisin ja kehittyneet porealtaat. Kuitenkin array CGH paljasti, että on 13 intramucosal Tubs tutkittiin menetys MYC
(MYC
-) ja voitto TP53
(TP53
+) havaittiin 9 porealtaat ja MYC
+ ja /tai TP53
- havaittiin 3 porealtaat. Niistä limakalvonäytteistä 9 invasiivisia Tubs, 7 osoitti MYC
- /TP53
+ eikä kukaan osoittivat MYC
+ ja /tai TP53
-. Niistä 9 näytteitä invasiivisen osista, 1 (mistä limakalvon alaista syövät) osoitti MYC
- /TP53
+ ja 6 (1 mistä limakalvon alaista ja 5 kehittyneistä syövät) osoitti MYC
+ ja /tai TP53
-. Jälkimmäinen 6 kasvaimia yleisesti osoitti mutantti kuvio (diffuusi tai nolla) p53 Immunohistokemian ja 4 6 kasvainten arvioitavissa varten TP53
sekvenssianalyysi paljasti mutaatioita. Yleinen array CGH malli osoitti, että välissä limakalvon ja invasiivisia osia, geneettinen linjaa havaittiin epäjatkuva 5 kehittyneitä syöpiä ja jatkuva 3 limakalvon alaista syövissä.
Johtopäätökset
Genetic suvusta usein vaihteli alussa ja kehittyneet porealtaat. MYC
- /TP53
+ ja MYC
+ ja /tai TP53
- voi olla allekirjoitukset ja lepäävien aggressiivinen Tubs vastaavasti mahalaukussa.
Tausta
Mahasyöpää edelleen toiseksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti huolimatta viimeaikaisesta vähenemisestä sen kuolleisuuden kehittyneissä maissa [1]. Mahakarsinoomat (GC) luokitellaan morfologisesti osaksi 2 pääryhmään: putkimainen muodostavia tyyppi ja hajanainen tyyppi [2, 3], ja lavastus, osaksi varhain syöpiä (johon limakalvolla että submukoosassa) ja pitkälle edenneitä syöpiä (joihin muscularis propria tai syvempi). Early GC pidetään parannettavissa syöpä [4]; se kuulemma etenee kehittynyt GC jälkeen eri ajanjaksoja kuin alkuvaiheessa GC [5, 6]. Japanissa alussa säilyttäjät voidaan aktiivisesti resektoitiin endoskooppisesti sekä kirurgisesti [7], joka perustuu periaatteisiin varhaisen havaitsemisen ja hoidon. Toisaalta, jotkut patologit väittävät, että putkimainen muodostava neoplastisia vaurioita, jotka rajoittuvat limakalvon kestää kauan tai voi hyökätä syvemmälle kudoksiin. Siten nämä leesiot kutsutaan dysplasia [4].
Äskettäin massa-seulontaohjelman varhaishermosolukasvaimesta Japanissa [8-10] on jäädytetty, koska epäjatkuva geneettinen linjaa välillä havaittiin alku- ja myöhään esittelevien varhaishermosolukasvaimesta. Negatiiviset ja myöhäinen esittelevien (≥1 vuosi) varhaishermosolukasvaimesta osoitti lähes diploidiaan menetys terminaalin 1p, kun taas positiivinen neuroblastoomat pikkulapsilla osoitti lähes triploidy ilman 1p poisto [11, 12]. Toisaalta, vertaileva genominen hybridisaatio (CGH) -pohjaisen analyysi viittasi siihen, että korkea-asteen epätyypillinen adenomatoottisen hyperplasian keuhkoissa on todellinen esiaste bronchioloalveolar karsinooma [13]. Vatsassa, se on ongelma, missä määrin geneettinen linjaa on päällekkäin alussa ja kehittynyt GC.
Hajanainen tyyppi GC, käytimme CGH osoittamaan, että kromosomi kopioluvun muutoksia vuonna intramucosal sinettisormus-rengas solukarsinoomat jotka osoittivat kerroksellinen rakenne [14] olisi peritty murto huonosti eriytetty GC at vaiheissa [15]. Läsnäolo kerrosrakennetta sinettisormus solujen limakalvon osissa näiden kehittyneiden syöpiä ehdotti myös, että sinettisormus solukarsinoomat voi olla todellinen esiaste huonosti eriytetty GC. CGH-pohjainen sukujuuret analyysi toisen osajoukon huonosti eriytetty kehittynyt GC kanssa putkimainen komponentteja mutta ei kerrosrakenne limakalvon osassa kävi ilmi, että GC tämän alijoukon olivat peräisin putkimainen osa kasvain ja leimasi 17p- ja 8q + [16] ja inaktivointi villityyppi- TP53
mutaation ja heterotsygoottisuuden menetys (LOH) [17]. Sen määrittämiseksi alkuvaiheen vastine tämäntyyppisen GC, analysoimme intramucosal putkimainen adenokarsinoomat (porealtaat) käyttäen CGH. Nämä tutkimukset osoittivat, että intramucosal porealtaat osoitti paitsi useita kromosomaalisia muutoksia yhteinen laajennettuihin GC vaan myös usein osoitti 8q- ja 17p + jotka olivat kriittisesti erilaisia ​​kehittyneitä ja huonosti eriytetty GC [18].
Tässä tutkimuksessa, tekijänoikeuden useita muutoksia kromosomien ja geenien tutkittiin limakalvon ja invasiivisia osia toisesta sarjasta varhain ja kehittyneiden porealtaat käyttämällä array ja kromosomi CGH. Näiden tietojen perusteella, osoitimme tapauksissa jatkuva ja epäjatkuva suvusta välillä intramucosal ja invasiivisia osia yksittäisten kasvainten ja totesi, että TP53
ja MYC
voi olla hyvä linjaa merkkiaineita mahalaukun porealtaat. Tool Menetelmät
Institutional Review Board Medical Ethics Shiga University of Medical Science hyväksyneet sen käydä tätä tutkimusta edellyttäen, että käytettyjen materiaalien on oltava nimetön.
Kasvainten näytteet
tutkimukseen osallistui 28 kirurgisesti resektoitiin vatsat (taulukko 1) kanssa 13 intramucosal porealtaat ja 15 invasiivisia porealtaat [6 limakalvon alaista ja 9 kehittyneitä syöpiä, jotka tunkeutuneet muscularis propriaan tai syvemmälle kudoksiin (putkimainen osa kunkin kasvaimen arvioitiin olevan yli 30%)]. Kukin vatsa fiksoitiin formaliiniin ja upotettiin parafiiniin vaha. Nämä valittiin sattumanvaraisesti materiaaleista diagnosoitu meidän osastolla vuodesta 1996 vuoteen 2008. histologinen tyypit ja kasvainten vaiheissa määritettiin mukaan Japani luokittelu mahasyövän [19] ja pTNM lavastus, vastaavasti. Kun limakalvon histologista malli todettiin olevan heterogeeninen yksilössä invasiivisia kasvain, osa, jolla on pienin arvosana atypism otettiin limakalvon näyte, joka voi estää mahdollisuutta uudelleen hyökkäystä kohdunkaulan syöpä solujen limakalvon. Invasiivisen syövät, DNA-näytteet saatiin intramucosal ja invasiivisen parts.Table 1 Yhteenveto kliinisistä, histopatologisten ja molekyyligeneettiset tiedot 25 putkimainen adenokarsinooma mahalaukussa
Case No.
ikä /sukupuoli
histologinen tyyppi *
Invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M) B N0
IA
c /a -
-
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2M
81 /F
pap
T1 (SM) B N1
IB
c /a
+ -
S2i
NT /a
+
+
S3M
79 /M
tub1
T1 (SM) B N0
IA
c /a
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM) B N0
IA
c /NT
+
NT
S5M
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
null
NA
a2m
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS) B N0
IB
c /a
+ -
A2I
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS) B N1
II
c /a
+ -
A3i
NT /
+
+
A4m
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS) B N2
IIIA
c /a
null -
a4Minulla
NT /a
null
+
A5m
56 /M
tub1
T2 (MP) B N0
IB
c /NT -
NT
A5l; tä varten
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
null
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS) B N1
II
c /a
+ -
A9i
NT /a
+
+
* japani luokittelu mahakarsinooman; ** PTNM luokitus. Kun sarakkeessa Asia, M = intramucosal syöpä; S = syöpä johon submukoosasta; A = kehittynyt syöpä; m = limakalvon osan; i = invasiivisia osa. Kun sarakkeessa CGH, c = kromosomi CGH; a = array CGH. Sarakkeessa p53 immunohistokemiallinen (IHC); "+" Osoittaa, diffuusisti (> 70%) positiivinen ytimet, "-" ilmaisee satunnaisesti (alle 5%), positiiviset ytimet; "Null" tarkoittaa, ettei immunoreaktiivisuus lainkaan. Sarakkeessa on TP53
mutaation; "+" Ja "-" osoittaa, läsnä ollessa ja puuttuessa mutaation, vastaavasti; NA = ei arvioitavissa; NT = ei testattu.
Immunohistokemia
immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin monoklonaalisten vasta-aineiden p53-proteiinin (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Tanska). Sen jälkeen, kun antigeeni haku kudosleikkeiden tislattuun veteen 121 ° C: ssa 5 min, immunoreaktiivisuus havaittiin epäsuoralla biotiini-streptavidiini-peroksidaasia menetelmää käyttäen Histofine Kit (Nichirei, Tokio, Japani) ja diaminobentsidiini reaktio. Leikkeet vastavärjättiin hematoksyliinillä. Dioja negatiivisen kontrollin ilman primaarista vasta-ainetta ja niille positiivisen kontrollin käsiteltiin rinnakkain.
Laser mikrodissektion ja DNA: n valmistus
Syöpäsolut saatiin 5-pm paksu kudosleikkeiden käyttäen LMD6000 laser mikrodissektion järjestelmän ( Leica Microsystems, Wetzlar, Saksa). Yksittäisten kasvaimet, syöpä-solut saatiin alueita > 3 mm 2, jossa syöpäsolut osuus ≥90% koko solujen määrä. Nämä syöpäsolut pilkottiin 200 ul: aan proteinaasi K -liuosta, jonka pitoisuus on 200 ug /ml noin 70 tuntia 37 ° C: ssa, mitä seurasi fenoli /kloroformilla DNA: n uuttaminen.
Kaikkiaan genomin monistamisen
näyte-DNA: ta monistettiin käyttäen degeneroituneita oligonukleotidiohjatulla pohjustetaan polymeraasiketjureaktio (DOP-PCR) in 2 vaihetta, kuten aiemmin on kuvattu [20], mikä johti PCR-tuotteita yli 2 kb kooltaan, sopii nick-translaatio merkinnät CGH.
for array CGH, näyte DNA monistettiin käyttämällä GenomePlex Tissue Whole Genome Amplification Kit (WGA2 Kit, Sigma, St. Louis, USA) [21]. Joillekin DNA-näytteet, joita ei voitu riittävästi monistettu, The WGA5 Kit (Sigma) käytettiin.
CGH (hybridisaatio, koetin DNA merkintöjä ja digitaalinen kuva-analyysi) B DOP-PCR-monistettu kasvain ja normaali DNA leimattiin käyttämällä fluoreseiini-12-dUTP ja tetrametyylirodamiini-5-dUTP (Roche, Mannheim, Saksa), tässä järjestyksessä, nick käännös [15]. Hybridisaatio ja kuva-analyysit suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [22]. Voitot ja tappiot DNA-kopion määrä määriteltiin vihreästä punaiseksi suhteet > 1,2 ja < 0,8, tässä järjestyksessä. Kromosomit 1p32-pter, 16p, 19, 22 ja Y suljettiin pois analyyseistä.
Array CGH
Oligo CGH mikrosiru (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) käytettiin tässä tutkimuksessa mukaan valmistajan ohjeiden. Lyhyesti, kasvain ja kontrolli-DNA oli ei-entsymaattisesti leimattu Cy5: llä ja Cy3, vastaavasti, käyttäen genomista DNA ULS Labelling Kit (Agilent) ja kilpailukykyisesti hybridisoitiin microarray. Käyttämällä Feature Extraction Ver.9.5.3 (Agilent), fluoresenssin intensiteetti kasvaimia ja hallintalaitteet laskettiin hybridisoitunut array otetut kuvat käyttämällä DNA-siru skanneri (Agilent). Kopioluvun voitot ja tappiot määriteltiin pohja 2 logaritmi kasvaimen signaalin voimakkuutta referenssisignaalin intensiteetin suhde yli 0,3219 ja pienempi kuin -0,3219, vastaavasti.
Mutaatio analyysi TP53
PCR alukesarjoista valmisteltiin eksonit 5-8 ja TP53
, jotka hybridisoituvat reunustavien intronit kunkin eksonin. Katso lisää tiedosto 1 alukesekvenssejä. Ensimmäisessä PCR-seos koostui puskuria, 200 uM dNTP: itä, 1,5 mM MgCI 2, 0,8 uM aluketta, 1 ng /ul: n näyte DNA: ta ja 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, Kalifornia, USA) kanssa 25 ul: n lopulliseen tilavuuteen . Jälkeen alkudenaturaatio 94 ° C 2 min, 40 sykliä PCR suoritettiin 94 ° C: ssa 30 sekuntia, 54 ° C 1 min ja 72 ° C 1 min, jota seurasi lopullinen pidennys 72 ° C ° C: ssa 10 min. Vahvistamisen jälkeen PCR-tuotteet agaroosigeelielektroforeesilla, sekvenssi PCR suoritettiin käyttämällä BigDye terminaattori v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Kalifornia, USA). Reaktioseos koostui puskuria, 2 pl ensimmäisen PCR-tuotteen, 0,15 uM aluketta ja 0,5 ui BigDye Terminator V 1.1 10 ui: n lopullisessa tilavuudessa. Jälkeen alkudenaturaatio 96 ° C 1 min, 25 PCR-sykliä suoritettiin 96 ° C: ssa 10 sekuntia, 50 ° C: ssa 5 s ja 60 ° C: ssa 4 minuutin ajan. Eteenpäin ja taaksepäin sekvenssit määritettiin käyttäen ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Mutaatiot havaittiin vertaamalla kyseiset näytteet viite DNA-sekvenssi (GenBank: HSU94788). Alleelisia tila määritettiin käyttäen suhdetta mutantti villityyppiseen huipputasolle sekvensointi profiileja.
Tilastolliset analyysit
virhematriiseja analysoitiin Fisherin testiä ja Cochran-Armitage testejä. Erot 2-puolinen testit P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.
Tulokset
immunohistokemiaallisesti p53
värjäyskuviot katsottiin yli-ilmentyy vasta kun ≥70% kasvainsoluja osoitti positiivisesti värjäytyneet ytimet katsottaessa vähän virtaa kenttään. Kahdeksan 13 intramucosal syövät, kaikki 6 limakalvon alaista syöpien ja 4 9 kehittyneitä syöpiä osoitti hajanaisesti positiivinen tumavärjäystä p53 (taulukko 1). Keskipiste värjäys malli havaittiin tapauksessa # A7. Kuviota pidettiin negatiivinen (edustaa villityypin TP53
), kun läsnä on harva, satunnaista ja heikko tumavärjäystä havaittiin alle 5%: n ytimeksi. Null värjäys malli havaittiin tapauksissa # A1, # A4 ja # A8, mikä viittaa ei-tunne mutaatio TP53
[23].
Kromosomi CGH
Kaksikymmentäviisi näytettä 25 tapauksessa (10 limakalvon , 6 limakalvon alaista ja 9 edenneisiin syöpiin) käytettiin kromosomaalisen CGH. Kaikki nämä näytteet saatiin intramucosal vaurioita, jotka osoittivat alimman luokan atypism.
Vaikka 4q + esiintyi suurimmalla (6/9 tapausta) kehittyneiden Tubs, sitä ei ole havaittu 16 alussa porealtaat (P = 0,0005). Toinen merkittävästi erilaisia ​​kromosomi muutos varhaisen ja pitkälle edenneitä syöpiä oli 11q +, joka havaittiin 11 16 varhain syöpiä ja 2 9 pitkälle edenneitä syöpiä (P = 0,0414). Niistä 10 intramucosal Tubs tutkitaan, 3 osoitti menetys 8q (8q-) ja /tai voitto 17p (17p +), kun taas 7 ja 2 osoittivat 8q + ja 17p-, vastaavasti. Niistä 15 limakalvonäytteistä invasiivisia Tubs tutki, 3 ja 4 osoitti 8q- ja 17p +, vastaavasti, kun taas 7 ja 6 osoittivat 8q + ja 17p-, vastaavasti.
Array CGH
Kolmekymmentäyksi näytteet 22 tapauksessa (13 limakalvojen, 3 limakalvon alaista ja 6 edenneisiin syöpiin) arvioitiin käyttäen array CGH (kuvio 1). DNA-näytteet hankittiin intramucosal ja /tai invasiiviseen vaurioita. Kuva 1 Array CGH tiedot MYC ja TP53 ja TP53 sekvenointitulosten alussa ja kehittyneet putkimainen adenokarsinoomia vatsaan. Varhainen syöpien jaetaan intramucosal (m) syöpiä ja limakalvon alaista (SM) syöpiä. Katso Taulukko 1 näytteen numeroita. Numerot ovat keskiarvo testi /viittaus suhteet array CGH. Merkittäviä tappioita ja voittoja on merkitty punaisella ja vihreällä, tässä järjestyksessä. Villityypin (wt) ja eksonissa (ex) ja välissä sekvenssin (IVS) ja TP53
on merkitty keltainen ja harmaa, vastaavasti.
Kuten on esitetty kuviossa 1 ja taulukossa 2, samanaikainen menetys MYC
(MYC
-) ja voitto TP53
(TP53 +
) havaittiin 9 13 intramucosal porealtaat, 7 9 limakalvonäytteistä invasiivisia Tubs, 1 3 invasiivisen näytteitä submukosaalisen syöpien ja yksikään 6 invasiivisen näytteet kehittyneitä syöpiä. Kuviota MYC +
ja /tai TP53
- havaittiin 3 13 intramucosal syöpiä, yksikään 9 limakalvonäytteistä invasiivisia Tubs, 1 3 invasiivisen näytteitä 3 limakalvon alaista syöpien ja 5 6 invasiivisia näytteitä 6 edennyt cancers.Table 2 muutostyöt MYC
ja TP53
kopioida numeroita alussa ja kehittyneet putkimainen adenokarsinoomista mahan
Kasvainten syvyys
Mucosa
submukoosassa
MP tai syvempää -



Limakalvorokotteita osa
SM
Limakalvorokotteita osa
Deep
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *) B 3
0
1 (1 *) B 4
0
3 (2 *) B 8q (MYC
) -
3
9 (9 **) B 3
2 (2 **) B 1 (1 **) B 0
5 (5 **)
1 (0 **) B 17p (TP53
) +
3
10 (9 **) B 3
2 (2 **) B 2 (1 ** )
1
6 (5 **) B 1 (0 **) B 17p (TP53
) -
2
3 (2 *) B 2
0
1 (1 *) B 4
0
4 (2 *)
SM, The submukoosasta; MP, muscularis propria. cCGH ja aCGH, chromosome- ja array-pohjainen vertaileva genominen hybridisaatio; Numerot suluissa osoittavat kokonaismäärä tutkitut näytteet. Lihavoituna osoittaa tulokset aCGH. Tähdet Suluissa samanaikaisuuden MYC
+ ja TP53
-. Double tähdellä osoittavat samanaikaisuuden MYC
- ja TP53
+.
Perustuu yleiseen array CGH kuvioita, geneettinen suvusta todettiin olevan epäjatkuva ja keskeytyksettä limakalvon ja invasiivisen osat 5 kehittyneitä ja 3 limakalvon alaista syöpien vastaavasti. Kuten kuviossa 2 on esitetty, näytteen limakalvon osa # S3 osoitti 4p-, 4q-, 8q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20q + ja Y-, kun taas näyte invasiivisen osa # S3 perinyt saman poikkeavuuksien päässä limakalvon osasta, osoitti lisäksi poikkeamia (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14 q + ja 20q +) ja menetti 4p- ja 22q +. Vuonna # S1, voittoja 1Q, 14 q, 19 ja 20, ja menetys 18q oli yleistä limakalvon ja limakalvon alaista näytteitä, vaikka voittoja 1q, 14 q, 19q ja 20. submukoosassa olivat hieman vähemmän kuin merkittävälle tasolle. Vuonna # S2, yhteinen muutos sekä limakalvon ja limakalvon alaista osat oli voitto 20p. Limakalvon alaista näyte osoitti ylimääräisiä voittoja 10p, 12 ja 13q ja tappiot 3Q, 4, 5, 8p, 9P, 9q, 10q, 12p, 14 q, 16 ja 19p. Limakalvon näyte osoitti menetys 18q, joka palautettiin submukosaalisen näytteessä mahdollisesti uniparentaalinen disomia [24, 25]. In # A1, # A3, # A4, # A8 ja # A9, poikkeamia näytteet limakalvon osista ei havaittu näissä invasiivisen osia. Vuonna # A2, jatkuvuus geneettinen suvusta ei voitu arvioida, koska ei ole merkittäviä kopioluvun muutoksia limakalvon osaan. Kuvio 2 Array CGH profiileja. Kromosomaalinen alueet kopioluvun poikkeamia limakalvon osassa # S3 (S3M) sisältyvät periaatteessa ne, jotka invasiivisia osassa (S3i), kun taas ne, limakalvon osassa # A1 (A1M) ovat erilaiset kuin invasiivisen osan (A1i).
TP53
mutaation analyysi
Mutaatiot havaittiin 7 kasvaimia, jotka tutkittiin sekvenssianalyysi eksonien 5-8 TP53
(kuvio 1, taulukko 3): 1 10 intramucosal syöpiä, 2 3 submukosaalisen syövät ja kaikki 4 pitkälle edenneitä syöpiä (vain invasiivisia osia). Kaikissa näissä 7 Tuumorien TP53
alleeli oli hemizygous lukuun ottamatta 1 intramucosal syöpä (# M12), jossa on heterotsygoottinen malli eksonin 8 mutaatio (kuvio 3) ja diffuusi tai nolla malli p53, kuten on esitetty immunohistokemia. Ei TP53
mutaatio havaittiin p53- näytteissä, kuten on esitetty kuviossa 4. p53 + /null näytteitä, 2 15 näytteitä limakalvon osan osoitti TP53
mutaatio, kun taas 6 7 näytettä invasiivisen osa osoittivat TP53
mutaatio (P = 0,0023). In 1 submukosaalisen syöpien osoittaa TP53
+ ja hemizygous mutaatio (invasiivista osa # S2), TP53
+ voi heijastaa uniparentaalinen polysomy [24, 25] .table 3 Kopioi numero muutoksia TP53
ja MYC
ja p53 immunoreaktiivisuus näytteistä testattiin mutaation analyysejä
Case No.
MYC

TP53
mutaatio TP53exons 5-8
Mutant alleeli
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
paino- -
-
M4 -
+
paino-
ns -
M5
-
+
paino-
ns
+
M6 -
+
paino- -
+
M7
ns
+
paino- -
+
M8 -
+
paino-
ns -
M9
- +
paino-
ns
+
M10 -
+
paino- -
+
M11
ns
-
paino-
ns
- M12
+ -
eksonit 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M
- +
paino- -
+
S1i
-
+
paino- -
+
S2M
- +
paino- -
+
S2i
ns
+
eksoni 7
hemi
ns
+
S3M
ns
ns
eksonin 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
eksonit 5/6/8
hemi
ns
+
A1M
- +
paino-
-
null
A1i
+ -
NA -
null
a2m
- +
paino-
ns
+
A2I
+ -
eksonin 8
hemi
ns
+
A3M
- +
paino-
ns
+
A3i
-
- eksoni 5
hemi -
+
A4m
- +
p- -
null
a4Minulla
ns
ns
eksoni 5
hemi
ns
null
A8m
ns
+
paino -
null
A8i
+
- NA
ns
null
A9m
- +
paino- -
+
A9i
+
+
eksonin 6
hemi
ns
+
ns = ei merkitsevä; paino = villityyppi; NA = ei arvioitavissa; hemi = hemizygous; hetero = heterotsygoottinen.
M12, eksoni 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); eksonin 8: R267R (CGG > CGA) B S2i, eksoni 7: C242F (TGC > TTC) B S3M, eksonin 8: R273S (CGT > AGT) B S3i, eksoni 5: A161V ( GCC > GTC); eksoni 6: T211I (ACT > ATT); eksonin 8: R273S (CGT > AGT) B A2I, eksonin 8: R273 H (CGT > CAT) B A3i, eksoni 5: A161T (GCC > ACC) B a4Minulla, eksoni 5: IVS5 + 1G > T
A9i, eksonin 6: Y220C (TAT > TGT) B Kuva 3 TP53 mutaatio kuvioita. Heterotsygoottinen mutaatio, jolla on merkittävä villityypin komponentti eksonissa 8 (A) ja hemizygous eksonissa 5 (B) käytettäessä intramucosal syöpä (# M12). Mutaatiot muissa kasvaimissa tutkittu olivat hemizygous esitetyn C (# S2).
Kuva 4 väliset suhteet p53 Immunohistokemian kopioida useita TP53 ja hot spot mutaatio TP53. Sillä "p53 +" ja "p53-", katso legenda taulukossa 1. "TP53
+", "TP53
-" ja "TP53
n /s" osoittaa huomattavia kopioluvun voitto ja tappio , eikä merkittävää muutosta vastaavasti. Numerot suluissa osoittavat näytteiden lukumäärää invasiivisia osia. Numerot ovat näyte numeroita. Numerot suluissa osoittavat näytteiden lukumäärää invasiivisia osia. NA = ei arvioitavissa.
Toisaalta, että limakalvonäytteistä, diffuusi /null pattern usein liittyy villikannan TP53
. Jotta selittää havainnon MDM2
kopioluku tutkittiin käyttäen array CGH tiedot. Yhteensä 22 näytettä arvioidaan TP53
mutaation analyysi, MDM2
osoitti kopioluvun tappio 10 14 näytteiden villityypin TP53
ja 1 8 näytteiden TP53
mutaatio (P = 0,0237).
keskustelu
intramucosal Tubs, kromosomi CGH paljasti 8q- ja /tai 17p + taajuudella 3 10 kasvaimet tutkitaan; nämä muutokset olivat yleisempiä aikaisemmassa tutkimuksessa käytetty satunnaisesti alustavaa merkintöjä [18]. Esillä olevassa tutkimuksessa, 8q + on usein havaittu sekä intramucosal syövissä (7/10) ja invasiivisia syöpiä (7/15); kuitenkin edellä mainitut aiempiin tietoihin harvoin osoittivat 8q +. Nämä eroavuudet voivat heijastaa eroja merkinnöissä käytetyt menetelmät; CGH tuloksia lovitranslaatio merkintöjä tai satunnaisesti alustavaa merkintöjä verrattiin FISH-signaalit, ja todettiin, että lovitranslaatio merkintöjä ei harvoin osoitti vääriä positiivisia voittoja [26]. Kuitenkin käyttäen samoja merkintöjä olosuhteissa, merkittäviä eroja ilmaantuvuus 4q + ja 11q + välillä havaittiin varhain ja edenneisiin syöpiin, mikä saattaa johtua eroista geneettinen suvusta niiden välillä. Kromosominen CGH data kehittyneitä syöpiä tässä tutkimuksessa olivat yhdenmukaisia ​​aiempien kromosomi CGH saadut tiedot lovitranslaatio merkinnät kehittynyt GC (eli 17p- ja 8q + olivat melko yleinen) [27-30].
Kliinisesti havaittavissa varhain syövät ovat yleensä pidetään esiasteita edenneisiin syöpiin [5, 6] intramucosal ja invasiivisia osaa kehittyneiden Tubs usein osoitti ristiriitainen kopio numerot MYC
ja TP53
tässä tutkimuksessa: MYC
- ja TP53
+ in 5 6 näytteitä limakalvon osia, kuten yleisesti kuin intramucosal syöpiä tutkitaan, ja MYC
+ ja /tai TP53
- in 5 6 näytteiden invasiivisia osia. Lisäksi, joka perustuu yleiseen array CGH kuvio limakalvon ja invasiivisia osaa kasvainten, epäjatkuvan geneettinen linjaa havaittiin 5 6 kehittyneitä syöpiä. Näin ollen näyttää siltä, ​​että kasvain kloonien limakalvon osien edenneisiin syöpiin eivät esiasteita invasiivisen osan, mutta minuutin intramucosal syöpiä, jotka todennäköisesti rinnakkain kanssa invasiivisia syöpiä. On raportoitu, että useita minuutin syövät ovat yleisempiä ruukussa kuin eriytymättömissä-tyyppinen GC [31]. Kehittyneissä Tubs The intramucosal edeltäjä invasiivisen komponentin ehkä menetetty vuoksi haavaumat kasvain, tai edeltäjä ei ole tutkittu, koska se ei ole sama osan alimman luokan atypism, johon tutkimista limakalvon osa invasiivisen GC rajoittui tässä tutkimuksessa.
Toisaalta, limakalvonalaiskerroksen syöpien, jatkuva geneettinen linjaa havaittiin kaikissa 3 limakalvon alaista kasvaimet tutkittiin. Se voi olla, koska limakalvon osa on periaatteessa säilytetty alussa GC ja koska limakalvon edeltäjä invasiivisen komponentin osoitti alimman luokan atypism ja ei suljettu pois esillä array analyysit. Limakalvon ja invasiivisia osia oli yhteinen alueilla kopioluvun kromosomipoikkeavuuksien kanssa yhdenmukaisia ​​raja-arvot, ja suurin osa muutoksista limakalvon osaan sisällytettiin ne invasiivisen osan. Tällä geeni tasolla kopio numerot MYC
ja TP53
olivat yhdenmukaisia ​​limakalvon ja limakalvon alaista osia 2 3 submukosaalisen syöpiä.
TP53
- ja /tai MYC
+ kuvio havaittiin paitsi invasiivisia osat 1 submukosaalisen syöpien ja useimmat pitkälle edenneisiin syöpiin, mutta myös 3 13 intramucosal syöpiä. Näiden kasvainten p53 immunohistokemia osoitti diffuusin tai nolla (mutaatio) kuvio (taulukot 1 ja 3), mikä viittaa siihen, että TP53
- voi heijastaa LOH ja tuloksena inaktivaation villityypin TP53
. Sekvensointi analyysit mutaation hot spots TP53
ovat osoittaneet, että hemizygous mutaatiot (mutaation ja LOH) havaittiin limakalvon näytteitä 1 3 intramucosal syöpien ja 1 limakalvon alaista syövän kanssa TP53
- kuvio, kuten sekä invasiivisia osat 4 kehittyneitä syöpiä, jotka olivat informatiivisia TP53
mutaation analyysi. Tällainen inaktivointi villityyppi- TP53
, joka voi aiheuttaa lisää perimän epävakaisuuden, on usein raportoitu kehittynyt GC [15, 17]. Myc
geenilokuksesta tunnetaan myös usein näyttää kopioluvun voittoja tai monistuksia eri kehittyneitä syöpiä [32]. MYC
+ /TP53
- voidaan siten perusteltua, koska allekirjoitus aggressiivinen GC.
On raportoitu, että LOH sekä mutaatioita TP53
ovat useammin havaitaan kehittynyt GC kuin alussa GC [17, 33], ja että sisällä varhain säilyttäjät, TP53
mutaatiot useammin havaitaan limakalvonalaiskerroksen porealtaat kuin intramucosal Tubs [34, 35]. Tämä suuntaus havaittiin myös tässä tutkimuksessa, mutta mutaatio analyysit osoittivat, että hot spot mutaatioita ei havaittu limakalvon osassa kasvaimia, paitsi 1 intramucosal syöpä (# M12). Lisäksi, kopioluvun menetys MDM2
, joka on rooli p53 hajoamiseen [36], korreloi diffuusi p53 yli-ilmentymisen poissa ollessa TP53
mutaatio. Tämä ilmiö on tuskin raportoitu, mutta voisi olla yksi niistä mekanismeista p53 yli-ilmentymisen alussa GC.
Alussa syöpiä, voi olla lepotilassa ja invasiivisia komponentteja sekä todellisen esiasteita kehittyneitä syöpiä. Niistä varhain syöpiä tarkasteltu tässä tutkimuksessa, invasiivisen osa 1 kasvain (# S3) ja 3 intramucosal syöpiä (# M11, # M12 ja # M13) osoitti allekirjoitus aggressiivinen syöpä (MYC
+ ja /tai TP53
-) ja usein mutaatioita TP53
; Kuitenkin 1 submukoosinen syöpä (# S1), invasiivista osat osoittivat allekirjoittamista lepotilassa syöpä (MYC
- /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 resektio ja hypertermistä vatsaonteloon kemoterapiaa paikallisesti edenneessä mahakarsinoo-: satunnaistettu ja monikeskustutkimus vaiheen III tutkimuksessa
• Aikakäyttäytyminen alkoholin vaikutusta lopettamista on mahasyövän - meta-analyysi