Lineage analýza ranej a pokročilej rúrkové adenokarcinóme žalúdka :? Kontinuálnym alebo diskontinuálnym

Lineage analýza ranej a pokročilej rúrkové adenokarcinóme žalúdka :? Nepretržitý alebo prerušovaný
abstraktné
pozadia
vykorenenie včasného karcinómu žalúdka (GC) je myšlienka prispieť k zníženiu úmrtnosti GC, vzhľadom k tomu, že väčšina skorého pokroku GCS do rozšíreného GC. Avšak, čoskoro GC je alternatívne považovaná za spiace variant GC, a to občas postupuje k pokročilej GC. Cieľom tejto štúdie bolo objasniť rozsah prekrývaniu genetických línií medzi ranej a pokročilej rúrkové adenokarcinómov (vane) žalúdka.
Metódy
Imunohistochemické farbenie na p53 bola vykonaná za použitia 28 chirurgicky resekovány žalúdky 13 intramucosal a 15 invazívne vane. Tým chromosome- a polia založené na komparatívne genómovej hybridizácie (CGH), genomické počtu kópií ústava bola porovnávaná medzi slizničnej a invazívne častí invazívnych kade a medzi slizničnej časťou invazívne a intramucosal vane, kde sa používa 25 a 22 vane, resp. TP53
mutácie v exóne 5-8 bola skúmaná v 20 vane.
Výsledky
chromozomálne CGH bolo zistené, že 4Q + a 11 q + boli častejšie vo vyspelých a ranne vane, respektíve, zatiaľ čo čísla kópie zmeny v 8Q a 17p ukázalo žiadne významné rozdiely medzi ranej a pokročilej vane. Avšak, array CGH odhalila, že zo 13 intramucosal vane skúmaná, strata MYC
(MYC
-) a zisk TP53
(TP53
+) bola zistená v 9 vane a MYC
+ a /alebo TP53
- bola zistená do 3 vane. Zo slizničných vzoriek 9 invazívnych vane, 7 ukázal MYC štáty - /TP53
+ a nikto ukázal MYC
+ a /alebo TP53 štáty -. Z 9 vzoriek z invazívnych častiach 1 (od submukóznymi rakoviny) ukázala MYC
- /TP53
+ a 6 (1 z LIEKU Submukózna a 5 z pokročilých nádorov) ukázala MYC
+ a /alebo TP53
-. Druhé 6 Nádory bežne vykazovali mutantný vzorku (difúzny alebo null) v p53 imunohistochémia a 4 zo 6 nádorov hodnotiteľných pre TP53
analýzu sekvencie odhalila mutácie. Celkový array CGH vzor vyplynulo, že medzi slizničnej a invazívne dielov, genetickej línie bola zistená nesúvislá 5 pokročilých nádorov a kontinuálne do 3 submukóznymi rakoviny.
Závery
genetickej línie často líšili medzi začiatkom a pokročilé vane. MYC
- /TP53
+ a MYC
+ a /alebo TP53
. - Môžu byť podpisy odloženými a agresívne kade, respektíve v žalúdku
Pozadie
rakovinou žalúdka zostáva druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou po celom svete, a to aj napriek nedávnej zníženie jeho mortality vo vyspelých krajinách [1]. Žalúdočné karcinómy (GCS) sú klasifikované morfologicky do 2 hlavných kategórií: trubkový tvoriaci písať a rozptyľovať typ [2, 3], a stagingu do skorých nádorov (zahŕňajúce sliznice a Submucosa) a pokročilej rakoviny (zahŕňajúce muscularis propria alebo hlbšie). Čoskoro GC je považovaný za liečiteľná rakoviny [4]; sa údajne postupuje k pokročilej GC po rôznu dobu trvania ako počiatočnej fáze GC [5, 6]. V Japonsku, čoskoro GC môže byť aktívne resekcia endoskopicky, ako aj chirurgicky [7], založený na princípoch včasnú detekciu a liečbu. Na druhej strane niektoré patológovia tvrdia, že rúrkové tvoriaci neoplastické lézie, ktoré sú obmedzené na sliznicu trvať dlhý čas, alebo sú schopné preniknúť hlbšie tkaniva. Tým sa tieto lézie sa nazývajú dysplázie [4].
V poslednej dobe masovo skríningový program pre neuroblastómu v Japonsku [8-10], ktoré bolo prerušené, pretože bol nájdený prerušovaný genetickej línie medzi včasného a neskoré prezentujúca neuroblastómu. Negatívne a neskoré-prezentujúca (≥1 rok) neuroblastóm ukázal, blízko-diploidii so stratou koncových 1p, zatiaľ čo pozitívny neuroblastóm u dojčiat ukázali, blízko-triploidií bez 1p vymazania [11, 12]. Na druhej strane, komparatívna genomická hybridizácia (CGH) na báze analýzy naznačujú, že vysoko kvalitný atypické adenomatóznej hyperplázie v pľúcach je skutočná prekurzorom bronchioloalveolárnych karcinómu [13]. V žalúdku, to je problém, do akej miery je genetická línia prekrývali v ranej a pokročilej GCS.
V rozptyľovať typ GC sme použili CGH preukázať, že chromozomálne copy-number zmeny v intramucosal Signet-ring karcinómov, ktoré ukázali, vrstvená štruktúra [14] sa dedí v zlomku zle diferencované GC v pokročilých štádiách [15]. Prítomnosť vrstvené štruktúry pečatný prsteň buniek v slizničných častiach týchto pokročilých nádorov tiež navrhol, že pečatný prsteň karcinómov môže byť pravda, prekurzorom zle diferencovaných GC. CGH analýza podľa línie ďalšie podskupiny zle diferencovaných pokročilých GC s rúrkovými dielmi, ale bez vrstvené štruktúry na slizničnej strane bolo zistené, že GC z tejto podskupiny boli odvodené z rúrkového členu v nádoru a boli charakterizované 17p- a 8Q + [16] a inaktivácia divokého typu TP53
mutácií a stratu heterozygotnosti (LOH) [17]. Na stanovenie počiatočnej fáze náprotivok tohto typu GC, sme analyzovali intramucosal rúrkových adenokarcinómov (vane) pomocou CGH. Tieto štúdie zistili, že intramucosal kade ukázal nielen niekoľko chromozomálne zmeny spoločné pre pokročilých GC, ale tiež často ukázal 8q- a 17P +, ktoré boli kriticky odlišný od vyspelých a zle diferencovaných GC [18].
V tejto štúdii, proti kopírovaniu číslo zmeny chromozómov a génov boli skúmané v slizničných a invazívnych častiach ďalšiu sériu počiatočných a pokročilých kade s využitím poľa a chromozomálne CGH. Na základe týchto údajov sme ukázali prípady spojitých a nespojitých línií medzi intramucosal a invazívnych častiach jednotlivých nádorov a zistil, že TP53 stroje a MYC
môže byť dobré línii značky pre žalúdočných vane.
Metódy
Institutional Review Board na lekársku etiku v Shiga University of Medical Science udelený súhlas na vykonávanie tohto výskumu pod podmienkou, že použité materiály musia byť v anonymite.
Nádorové vzorky
Táto štúdia zahŕňala 28 chirurgicky resekciou žalúdky (tabuľka 1) s 13 intramucosal vane a 15 invazívnych kade [6 submukóznu a 9 pokročilé rakoviny, ktoré vtrhli muscularis propria alebo hlbších tkanív (rúrková súčasť každého nádoru bola hodnotená na viac ako 30%)]. Každý žalúdok bol opravený v formalínu a vložené do parafínu. Tie boli vybrané náhodne z materiálov diagnostikovaných v našom oddelení od roku 1996 do roku 2008. histologických typov a nádorových etapy boli stanovené podľa japonskej klasifikácie rakoviny žalúdka [19] a pTNM staging, resp. Keď bol nájdený slizničnej histologický vzorku byť heterogénne v individuálnom invazívne nádor, časť s najnižším stupňom atypism bolo vzaté ako vzorka slizničnej, ktoré môžu zabrániť možnosti re-invázia invazívnych nádorových buniek do sliznice. V invazívnych druhov rakoviny, vzorky DNA boli získané od intramucosal a invazívne parts.Table 1 Súhrn klinických, histopatologických a molekulárno genetických údajov z 25. rúrkového adenokarcinóm žalúdka
Prípad č
Vek /pohlavia
Histologické typ *
Invasion **
LN **
Stage **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
N0
IA
C /A - -
M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2M
81 /F
pap
T1 (SM)
N1
IB
c /a
+ -
S2i
NT /a
+
+
S3M
79 /M
tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /a
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /NT
+
NT
S5M
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
null
NA
A2M
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
c /a
+ -
A2I
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A3i
NT /
+
+
A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS)
N2
IIIA
c /a
null -
A4i
NT /a
null
+
A5m
56 /M
tub1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT -
NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
null
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A9i
NT /a
+
+
* Japonská klasifikácie karcinómu žalúdka; ** Klasifikácia pTNM. V stĺpci veci č M = intramucosal rakoviny; S = rakovina zahŕňajúce Submucosa; A = rakovina v pokročilom štádiu; m = slizničnej časť; i = invazívne časť. V stĺpci CGH, c = chromozomálne CGH; A = array CGH. V stĺpci p53 imunohistochémia (IHC); "+" Znamená, difúzne (viac ako 70%) pozitívnych jadier, "-" znamená, ojedinele (menej ako 5%) pozitívnych jadier; "Null" znamená nie imunoreaktivitu vôbec. V stĺpci TP53
mutácií; "+" A "-" označujú prítomnosť a neprítomnosť mutácie, v danom poradí; NA = nie je možné posúdiť; NT = netestované
Imunohistochémia
Imunohistochemické farbenie bolo vykonané pomocou monoklonálnych protilátok proti proteínu p53 (DO-7, 1: 100, Dako, Glostrup, Dánsko) .. Po antigénu získavania tkanivových rezov v destilovanej vode pri teplote 121 ° C počas 5 min, imunoreaktivita bola detekovaná pomocou nepriameho biotín-streptavidín-peroxidázou spôsobom za použitia Histofine Kit (Nichirei, Tokio, Japonsko) a Diaminobenzidine reakcie. Rezy boli kontrastne hematoxylínom. Diapozitívy negatívnej kontroly bez primárnej protilátky a tie pozitívne kontroly boli spracované paralelne.
Laser mikrodisekcii a príprava DNA
Nádorové bunky boli získané z bodov 5-um hrubé tkaniva s použitím laserového LMD6000 mikrodisekcii systém ( Leica Microsystems, Wetzlar, Nemecko). Pre jednotlivé nádory, nádorové bunky boli získané z oblastí > 3 mm 2, kde rakovinové bunky tvorili ≥90% z celkového počtu buniek. Tieto rakovinové bunky boli štiepené v 200 ul proteinázy K roztoku v koncentrácii 200 ug /ml počas približne 70 hodín pri teplote 37 ° C, s následnou extrakciou fenol /chloroform DNA.
Vcelku amplifikácie genómu
Vzorka DNA bola amplifikovaná s použitím degenerované oligonukleotidy so základným náterom polymerázovej reťazovej reakcie (DOP-PCR) v 2 fázach, ako bolo opísané skôr [20], čo malo za následok produkty PCR viac ako 2 kb vo veľkosti, vhodné pre nick-preklade označovanie CGH.
pre maticu CGH, vzorka DNA bola amplifikovaná s použitím GenomePlex tkanív celého genómu Amplification Kit (WGA2 Kit Sigma, St. Louis, USA) [21]. Pre niektoré vzorky DNA, ktorá nemôže byť dostatočne amplifikovaných sa použil WGA5 Kit (Sigma).
CGH (hybridizácie, sondy značenie DNA a digitálne obrazové analýzy)
DOP-PCR-amplifikovanej nádor a normálne DNA bol označený za použitia fluoresceín-12-dUTP a tetramethylrhodamin-5-dUTP (Roche, Mannheim, Nemecko), v danom poradí, nick translácie [15]. Hybridizácia a obrazovej analýzy boli vykonané, ako bolo opísané skôr [22]. Zisky a straty v počte kópií DNA boli definované zelenej na červenú pomery > 1.2 a < 0,8, resp. Chromozómy 1p32-Pter, 16P, 19, 22 a Y sa z týchto analýz vylúčené.
Array CGH
Oligo CGH mikroskopické sústavy (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, USA) bol použitý v tejto štúdii , v súlade s pokynmi výrobcu. V krátkosti, nádorové a kontrolné DNA bola non-enzýmom označenej s Cy5 a Cy3, v danom poradí, s použitím DNA genómu ULS Etiketovací Kit (Agilent) a kompetitívne hybridizované na mikročipu. Pomocou funkcie Extrakcia Ver.9.5.3 (Agilent), intenzita fluorescencie z nádorov a kontrol bola vypočítaná z hybridizovaných poľa snímok vyhotovených za použitia DNA microarray skener (Agilent). Copy-number zisky a straty boli definované ako základ 2 logaritmus intenzity signálu nádor na pomer intenzity referenčného signálu viac ako 0.3219 a menej ako -0.3219, resp.
Analýza mutácie pre TP53
primer sety boli pripravené pre exóny 5-8 z TP53
, ktoré hybridizují so sprievodnými IntronA každého exónu. Pozri ďalšie súbor 1 pre priame sekvencií. Prvá PCR zmes obsahovala pufra, 200 uM dNTP, 1,5 mM MgCl 2, 0,8 uM priméru, 1 ng /ul vzorku DNA a 0,5 U Platinum Taq (od firmy Invitrogen, California, USA) v 25 ul konečného objemu , Po počiatočnej denaturácie pri teplote 94 ° C po dobu 2 minút, 40 cyklov PCR bolo vykonané pri 94 ° C počas 30 s, 54 ° C po dobu 1 minúty a 72 ° C po dobu 1 min, nasleduje posledné kroku extenzie pri teplote 72 ° C počas 10 min. Po potvrdení PCR produktov na agarózovom géle, sekvencia PCR bola vykonaná s použitím BigDye terminátory v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, California, USA). Reakčná zmes sa skladala z pufra, 2 ul z prvej PCR produktu, 0,15 uM priméru a 0,5 ul BigDye Terminator V 1.1 vo 10 ul konečného objemu. Po počiatočnej denaturáciu pri 96 ° C po dobu 1 minúty, 25 cyklov PCR boli vykonané pri 96 ° C počas 10 sekúnd, 50 ° C počas 5 sekúnd a 60 ° C počas 4 min. Dopredný a spätný sekvencie boli stanovené za použitia ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Mutácie boli zistené porovnaním týchto vzoriek s referenčnou sekvenciou DNA (GenBank prístupové číslo: HSU94788). Alelické status bol stanovený pomocou pomeru zmutovaného špičkových úrovní divokého typu v sekvenčných profilov.
Štatistické analýzy
Pivotných boli analyzované pomocou Fisherovho exaktného testu a skúšky Cochran-Armitage. Rozdiely 2 jednostranných testov s P < 0,05 boli považované za štatisticky významné.
Výsledky
imunohistochemické pre p53
farbenie vzory boli považované za nadmerne vystavený iba vtedy, keď ≥ 70% nádorové bunky vykazovali pozitívne zafarbených jadier pri pohľade z nízkej spotreby poľom. Osem zo 13 intramucosal rakoviny, všetkých 6 submukóznu rakoviny a 4 z 9 pokročilých nádorov sa ukázalo, difúzne pozitívne nukleárny farbenie na p53 (Tabuľka 1). Fokálna vzorec farbenie bol pozorovaný v prípade # A7. Vzor bol považovaný za negatívny (reprezentujúcich divoký typ TP53
), ak je prítomnosť riedke, sporadické a slabé jadrové farbenie bol pozorovaný v < 5% jadier. Null vzorec farbenie bol pozorovaný v prípadoch # A1, # A4 a # A8, čo naznačuje non-sense mutácie TP53
[23].
Chromozomálne CGH
dvadsať päť vzoriek z 25 prípadov (10 slizničnej , 6 a 9 submukóznu pokročilej rakoviny) boli použité pre chromozomálne CGH. Všetky tieto vzorky boli získané od intramucosal lézií, ktoré vykazovali najnižší stupeň atypism.
Kým 4q + došlo vo väčšine prípadov (6/9) pokročilých vane, že nebol detekovaný v 16 počiatku vane (p = 0,0005). Ďalšie významne odlišné chromozomálne zmeny medzi ranej a pokročilej rakoviny bol 11 q +, ktorý bol zistený u 11 z 16 skorých nádorov a 2 9 pokročilých karcinómov (p = 0,0414). Z 10 intramucosal vane skúmaných 3 ukázal stratu 8Q (8q-) a /alebo zisk 17p (17p +), zatiaľ čo 7 a 2 ukázalo 8Q + a 17p-, resp. Z 15 slizničných vzoriek invazívnych kade skúmaných 3 a 4 ukázal 8q- a 17P +, respektíve, zatiaľ čo 7 a 6 vykazovali 8Q + a 17p-, resp.
Array CGH
tridsaťjeden vzorky z 22 prípadov (13 sliznice, 3 submukóznu a 6 pokročilé rakoviny) boli hodnotené za použitia pole CGH (obrázok 1). Vzorky DNA boli získané od intramucosal a /alebo invazívnych lézií. Obrázok 1 Array CGH údaje o MYC a TP53 a TP53 dát sekvenčných Pri ranej a pokročilej rúrkové adenokarcinóme žalúdka. Skoré rakoviny sú rozdelené do intramucosal (m) a rakoviny submukóznymi (SM) rakoviny. Pozri tabuľku 1 pre čísla vzoriek. Číslice sú priemerné test /referenčné pomery array CGH. Významné straty a zisky sú označené červenou a zelenou, resp. Divokého typu (wt) a mutáciu v exóne (ex) a zasahujúce sekvencie (IVS) z TP53
sú označené žlto a šedej, resp.
Ako je znázornené na obrázku 1 a v tabuľke 2, súčasnou stratou MYC
(MYC
-) a zisk TP53
(TP53 +
) boli zistené u 9 z 13 intramucosal vane, 7 z 9 vzoriek slizničných invazívnych vane, 1 z 3 invazívnych vzoriek submukóznymi rakoviny a žiadny z 6 invazívnych vzoriek pokročilej rakoviny. Vzor MYC + stroje a /alebo TP53
- bola zistená u 3 z 13 intramucosal karcinómov, žiadny z 9 vzoriek slizničných invazívnych vane, 1 z 3 vzoriek invazívnych 3 submukóznymi rakoviny a 5 z 6 invazívne vzorky 6 pokročilé cancers.Table 2 zmenách MYC stroje a TP53
kopírovať čísla v ranej a pokročilej rúrkové adenokarcinóme žalúdka
nádor hĺbka
sliznicu
submukóze
MP alebo hlbšie -



sliznice časti
SM
slizničnej na
Hlboké
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *) Sims 3
0
1 (1 *)
4
0 Sims 3 (2 *)
8 q (MYC
) -
3
9 (9 **) Sims 3
2 (2 **) foto 1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) + Sims 3
10 (9 **) Sims 3
2 (2 **)
2 (1 ** ) foto 1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) -
2 Sims 3 (2 *) 2
NETHRY.cz 0
1 (1 *)
4
0
4 (2 *)
SM, Submucosa; MP, muscularis propria. cCGH a aCGH, chromosome- a array-based komparatívne genómovej hybridizácii; Číslice v zátvorkách vyjadrujú celkový počet skúmaných vzoriek. Tučné písmo označuje výsledky aCGH. Hviezdičky v zátvorkách vyjadrujú súčasnosti, myc
+ a TP53
-. Dvojité hviezdičky označujú súčasnosti, o MYC
. - A TP53
+
na celkovom poli založené vzory CGH bolo zistené, že genetické línie byť prerušovaný a neprerušovaný medzi slizničnej a invazívne dielov 5 vyspelých a 3 submukóznymi rakoviny , v uvedenom poradí. Ako je znázornené na obrázku 2, sa vzorka z slizničnej časti # S3 ukázala 4p-, 4q-, 8 q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20Q + a Y-, zatiaľ čo vzorky z invazívne časti # S3 zdedil rovnaké odchýlky od slizničnej časti, ukázal ďalšie aberácie (2q-, 7p +, 8p-, 10p + 14q + a 20Q +) a stratil 4p- a 22q +. V # S1, zisky 1q, 14q, 19 a 20, a stratou 18q bol obyčajný slizníc a submukóznymi vzoriek, hoci zisky 1q, 14q, 19q a 20 v submukóze boli mierne nižšie ako významné úrovne. V # S2, obyčajná zmena v oboch slizníc a submukóznymi časťou bol zisk 20p. Vzorka submukóznu ukázalo dodatočné zisky v 10p, 12 a 13q a strát v 3Q, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10q, 12p, 14q, 16 a 19p. Vzorka sliznice ukázal stratu 18q, ktorá bola obnovená do vzorky submukóznu, prípadne uniparentální dizomií [24, 25]. V # A1, # A3, A4, # # A8 a A9 #, odchýlky vo vzorkách z slizničných častí neboli detekované v tých inváznych častí. V # A2, kontinuita genetických línií nie je možné posúdiť z dôvodu absencie významných copy-number zmien v slizničnej časti. Obrázok 2 Array CGH profilov. Chromozomálne oblasti počtu kópií aberácií v slizničnej časti # S3 (S3M) sú zahrnuté v zásade tie, ktoré v invazívnym časti (S3i), zatiaľ čo tie, ktoré sa v sliznice časti # A1 (A1M) sú odlišné od tých na invazívnu časti (A1i)
TP53
mutácie analýza
mutácie boli zistené v 7 z nádorov, ktoré boli skúmané na sekvenčné analýzu exónov 5-8 z TP53
(obrázok 1, tabuľka 3) :. 1 10 intramucosal rakoviny, 2 z 3 submukóznymi rakoviny, ako aj všetky 4 pokročilej rakoviny (iba invazívne časti). Vo všetkých týchto 7 nádorov TP53
alela bola hemizygotní s výnimkou 1, rakoviny intramucosal (# M12) s heterozygotnou vzorkou pre exón-8 mutácií (obrázok 3) a difúzny alebo nulovým vzorkou pre p53, ako je uvedené imunohistochémia. Č TP53
mutácie bola zistená v p53- vzoriek, ako je znázornené na obrázku 4. V p53 + /vzoriek null, 2 z 15 vzoriek slizničnej časti ukázalo, TP53
mutáciu, zatiaľ čo 6 zo 7 vzoriek invazívne časti ukázal TP53
mutáciu (p = 0,0023). V 1 zo submukóznymi rakoviny ukazujú TP53
+ a hemizygotní mutácie (invazívna časť # S2), TP53
+ môže odrážať uniparentální polyzomie [24, 25] .Table 3 počet kópií zmeny TP53
a MYC stroje a p53 imunoreaktivity v testovaných vzoriek pre mutáciu analýzy
Prípad č
MYC
TP53
Mutácie TP53exons 5-8
mutovaná alela
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
hm - -
M4 -
+
hm
ns -
M5
-
+
hm
ns
+
M6 -
+
hm -
+
M7
ns
+
hm -
+
M8 -
+
hm
ns -
M9 -
+
hmôt
ns
+
M10 -
+
hm -
+
M11
ns
-
hmôt
ns -
M12
+ -
exónov 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M -
+
hm -
+
S1i
-
+
hm -
+
S2M -
+
hm -
+
S2i
ns
+
exón 7
hemi
ns
+
S3M
ns
ns
exón 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
exóny 5/6/8
hemi
ns
+
A1M -
+
hm
-
null
A1i
+ -
NA -
null
A2M -
+
hm
ns
+
A2I
+ -
exón 8
hemi
ns
+
A3M -
+
hm
ns
+
A3i - -
exón 5
hemi -
+
A4M -
+
WT -
null
A4i
ns
ns
exón 5
hemi
ns
null
A8m
ns
+
hmôt -
null
A8i
+ -
numerickou apertúrou
ns
null
A9m -
+
hm -
+
A9i
+
+
exon 6
hemi
ns
+
ns = nie je významný; hm = wild type; NA = nie je možné posúdiť; hemi = hemizygotní; . = Hetero heterozygotné
M12, exón 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); exón 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, exón 7: C242F (TGC > TTC)
S3M, exón 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, exón 5: A161V ( GCC > GTC); exon 6: T211I (ACT > ATT); exón 8: R273S (CGT > AGT)
A2I, exón 8: R273 H (CGT > CAT)
A3i, exón 5: A161T (GCC > ACC)
A4i, exón 5: IVS5 + 1G > T
A9i, exón 6: Y220C (TAT > TGT)
Obrázok 3 TP53 mutácií vzory. Heterozygotná mutácia s významným divokého typu zložky v exóne 8 (A) a hemizygotní v exóne 5 (B) v rakovine intramucosal (# M12). Mutácie v iných nádorov skúmaných boli hemizygotní, ako je uvedené v jazyku C # (S2).
Obrázok 4 vzťahy medzi p53 imunohistochemicky, počet kópií TP53 a hot spot mutácie TP53. Pre "p53 +" a "p53-", pozri legendu v tabuľke 1. "TP53
+", "TP53 štáty -" a "TP53
n /s" naznačujú značnú copy-number zisku a straty a žiadne významné zmeny, resp. Číslice v zátvorke označujú počet vzoriek invazívnych častiach. Číslice sú vzorové čísla. Číslice v zátvorke označujú počet vzoriek invazívnych častiach. NA = nie je možné posúdiť.
Na druhej strane, v slizničných vzoriek, difúzna /vzor null bola často spojená s divokým typom TP53
. Za účelom vysvetlenia tohto javu nie je známy MDM2
počet kópií bola skúmaná pomocou poľa dát CGH. Z celkového počtu 22 vzoriek hodnoteného pre TP53
mutácie analýzy, MDM2
ukázal stratu copy-číslo v 10 z 14 vzoriek s divokým TP53 stroje a 1 z 8 vzoriek s TP53
mutáciou . (p = 0.0237)
Diskusia
V intramucosal vane, chromozomálne CGH odhalil 8q- a /alebo 17P + s frekvenciou 3 z 10 skúmaných nádorov; Tieto zmeny boli častejšie v predchádzajúcej štúdii, ktorá použitého náhodný označovania plniaci [18]. V tejto štúdii, 8 q + bola často zistená ako v intramucosal rakoviny (7/10) a invazívnych nádorov (7/15); Avšak, vyššie uvedené predchádzajúce údaje zriedka ukázala 8Q +. Tieto rozdiely môžu odrážať rozdiely v metódach používaných na označovanie; CGH výsledky s prekladom označenia nick alebo náhodného označovania plniaceho boli porovnané signály FISH, a zistilo sa, že nick preklad označenie nezriedka ukázal falošne pozitívne zisky [26]. Avšak, s použitím rovnakých podmienok označovania, boli zistené významné rozdiely vo výskyte 4q + a 11 q + medzi začiatkom a pokročilé rakoviny, čo pravdepodobne odráža rozdiely v genetických línií medzi nimi. Chromozomálne CGH údaje o pokročilých nádorov v tejto štúdii boli konzistentné s predchádzajúcou chromozomálnych dátami získanými CGH s prekladovou označovanie nick pre pokročilých GC (tj 17p- a 8 q + boli pomerne časté) [27-30].
Hoci klinicky rozoznateľné skoré rakoviny sú všeobecne považovaný za predchodcu pokročilej rakoviny [5, 6] sa intramucosal a invazívne časti vyspelých vaničiek často ukázal nesúhlasné čísla kópiu MYC stroje a TP53
v tejto štúdii: MYC štáty - a TP53
+ v 5 zo 6 vzoriek slizničných častí, ako je bežne ako v intramucosal rakoviny skúmaným a MYC
+ a /alebo TP53 štáty - v 5 zo 6 vzoriek invazívnych častí. Okrem toho, na základe celkovej pole CGH vzoru slizničnej a invazívne častí nádorov, prerušovaný genetickej línie bola nájdená v 5 zo 6 pokročilej rakoviny. Z tohto dôvodu sa zdá, že nádorové klonov slizničných častiach pokročilých karcinómov neboli prekurzory invazívneho časti, ale intramucosal rakoviny minute, ktoré pravdepodobne koexistovali s invazívnej rakoviny. Bolo zistené, že viac minute rakoviny sú bežnejšie v sudoch, než v nediferencovaných typu GC [31]. V pokročilých vane je intramucosal prekurzor invazívne zložky mohli byť stratené v dôsledku ulcerácie v nádoru, alebo prekurzor nebola skúmaná, pretože sa nezhodovali s časťou najnižšieho stupňa atypism, ku ktorému vyšetrenie slizničnej časť invazívnej GC bola obmedzená v tejto štúdii.
na druhej strane, v submukóznymi rakoviny, kontinuálne genetickej línie bola nájdená vo všetkých 3 submukóznymi nádorov skúmanej. Môže to byť preto, že slizničné časť je v podstate zachovaný v ranom GC a pretože slizničnej predchodca invazívneho zložky ukázal najnižší stupeň atypism a nebola vylúčená zo súčasných poľa analýzy. Sliznice a invazívne diely mali spoločné regióny počtu kópií aberácií s súhlasných zarážky, a väčšina zmien v slizničnej časti boli zahrnuté ako u invazívnej časti. . Na úrovni génov, počet kópiu MYC stroje a TP53
boli konzistentné medzi slizníc a submukóznymi dielov 2 3 submukóznymi karcinómov
TP53 štáty - a /alebo MYC
+ vzorka bol zistený nielen v invazívnych častiach 1 z submukóznymi rakoviny a väčšinu pokročilých nádorov, ale aj v 3 z 13 intramucosal rakoviny. U týchto nádorov p53 imunohistochémia ukázala rozptýlené alebo null (mutácie) vzor (tabuľky 1 a 3), čo naznačuje, že TP53
- môže odrážať Loh a výsledný inaktiváciu divokého typu TP53
. Sekvenovania analýzy mutácie horúcich miest TP53
preukázali, že boli zistené hemizygotní mutácie (tj mutácie a LOH) v slizničných vzoriek 1 z 3 intramucosal karcinómov a 1 rakovina podslizničním s TP53 štátmi - vzoru, as rovnako ako invazívne častí 4 pokročilých nádorov, ktoré boli informatívne pre TP53
analýzu mutácií. Taký inaktiváciu divokého typu TP53
, čo môže spôsobiť ďalšie genómovej nestabilite, boli často hlásené v pokročilých GC [15, 17]. Gen miesto MYC
je tiež známe, že často ukázať, copy-number zisky alebo amplifikácie v rôznych pokročilých nádorov [32]. MYC
+ /TP53
- tak môže byť odôvodnené ako podpisu agresívny GC
Bolo zistené, že LOH, rovnako ako mutácie TP53
častejšie detekované v pokročilých GC ako na začiatku. GC [17, 33], a to, že v ranom GC, TP53
mutácie sú častejšie detekované v submukóznymi vane, než v intramucosal vane [34, 35]. Tento trend bol pozorovaný v tejto štúdii, ale mutácie analýzy ukázali, že horúce miesto mutácie neboli detekované v slizničnej časti nádorov, s výnimkou 1, rakoviny intramucosal (# M12). Okrem toho, copy-number strata MDM2
, ktorá hrá úlohu v degradácii p53 [36], v korelácii s difúznou Nadmerná expresia p53 v neprítomnosti TP53
mutácie. Tento jav je takmer hlásené, ale môže byť jedným z mechanizmov Nadmerná expresia p53 v ranom GC.
V skorých nádorov, môže byť spiace a invazívne zložky, rovnako ako skutočné prekurzory pokročilej rakoviny. Medzi prvé rakoviny skúmanej v tejto štúdii, invazívne časť 1 nádoru (# S3) a 3 intramucosal rakoviny (# M11, M12 a # # M13), ukázala, že podpis rakoviny agresívne (MYC
+ a /alebo TP53
-) a časté mutácie TP53
; Avšak, v 1 rakoviny submukóznu (# S1) alebo invazívnych časti ukázalo podpis rakoviny spiace (MYC
- /TP53
+).

• GASTRICHIP: resekcia D2 a hyperthermic intraperitoneálnej chemoterapie u lokálne pokročilého karcinómu žalúdka: randomizovaná a multicentrická štúdia fázy III study
• Časové údaje o vplyve ukončení alkoholu na riziko rakoviny žalúdka - meta-analysis