Lineage analizė ankstyvosios ir progresuojančios vamzdinių adenokarcinomos skrandį? Nuolatinio arba nenuolatinio

Lineage analizės pradžioje ir pažangių vamzdinių adenokarcinomos skrandį? Nepertraukiamas arba nutraukiamas
Anotacija
faktai
panaikinimo ankstyvo skrandžio karcinoma ( GC) manoma, kad prisidėti prie sumažėjimo GC mirtingumo, turint omenyje, kad dauguma anksti gCS pereiti į pažengusių gCS. Tačiau anksti GC alternatyviai laikomas ramybės variantas GC, ir ji retai progresuoja į išplėstinę GC. Šio tyrimo tikslas buvo išsiaiškinti sutapimu genetinių linijų apimtį tarp ankstyvosios ir progresuojančios vamzdinių adenokarcinomos (vonios) skrandžio.
Metodai
imunohistocheminis dažymas p53 buvo atliekama naudojant 28 chirurginiu rezekcijos skrandžius su 13 intramucosal ir 15 invazinės vonios. Iki chromosome- ir masyvo pagrindu lyginamosios genomo hibridizacijos (CGH), genomo kopijų skaičiaus konstitucija buvo palyginti tarp gleivinės ir invazinių dalių invazinių vonios ir tarp gleivinės dalių invazinių ir intramucosal vonios, naudojant 25 ir 22 vonios, atitinkamai. TP53
mutacija egzonų 5-8 buvo ištirta 20 kubilams.
Rezultatai
chromosomų CGH parodė, kad 4Q + ir 11q + buvo labiau paplitusi išsivysčiusiose, tiek ankstyvųjų vonios, atitinkamai, o kopijuoti skaičius kinta 8q ir 17P parodė jokių reikšmingų skirtumų tarp ankstyvosios ir progresuojančios vonios. Tačiau, masyvas CGH atskleidė, kad iš 13 intramucosal vonios išnagrinėjo, praradimas MYC
(MYC UAB -) ir pelnas TP53
(TP53
+) buvo aptikta 9 Vonios ir MYC
+ ir /ar TP53 UAB - buvo aptiktas 3 vonios. Iš gleivinės mėginiai 9 invazinių vonios, 7 parodė Myc CR.LT - /TP53
+ ir nė parodė Myc
+ ir /ar TP53 UAB -. Iš 9 mėginių iš invazinių dalys, 1 (iš gleivine vėžio) parodė MYC UAB - /TP53
+ 6 (1 iš gleivine ir 5 iš pažangių vėžio) parodė MYC
+ ir /ar TP53
-. Pastarieji 6 navikai dažniausiai parodė mutantas modelis (išplitęs arba NULL) į p53 imunohistocheminiu ir 4 iš 6 navikų įgyvendinamų už TP53
sekos analizė atskleidė, mutacijas. Bendras masyvo CGH modelis parodė, kad tarp gleivinės ir invazinių dalys, genetinis Lineage buvo nustatyta nenuolatinio 5 pažangių vėžio ir nuolatinis 3 gleivine vėžio.
Išvadas
Genetiniai linijas dažnai skyrėsi ankstyvųjų ir pažangių vonios. MYC UAB - /TP53
+ ir MYC
+ ir /ar TP53 UAB -. Gali būti neveikiančių ir agresyvių vonios, atitinkamai parašai, skrandyje
faktai
skrandžio vėžys išlieka antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio mirčių visame pasaulyje, nepaisant neseniai sumažėjo jų mirtingumas išsivysčiusiose šalyse [1]. Skrandžio karcinomos (GKS) yra klasifikuojami morfologiškai į 2 pagrindines kategorijas: vamzdinis formavimo tipą ir difuzinio tipo [2, 3], ir, sustojimo, į ankstyvųjų vėžio (įtraukiant gleivinę ir submucosa) bei pažangių vėžio (jiems muscularis propria arba giliau). Anksti GC laikomas išgydomas vėžys [4]; tai pranešama progresuoja į išplėstinę GC po įvairaus trukmę kaip anksti GC [5, 6]. Japonijoje, anksti GCS gali būti aktyviai rezekcijos endoskopijos, taip pat chirurginiu būdu [7], remiantis ankstyvojo aptikimo ir gydymo principus. Kita vertus, kai kurie patologai teigia, kad vamzdiniai formavimo navikinių, kurie apsiriboja gleivinės užtrukti ilgą laiko arba negali įsiveržti į gilesnius audinius. Taigi, šie pakitimai yra vadinami displazija [4].
Neseniai masinės atrankos programa neuroblastomų Japonijoje [8-10] buvo sustabdytas, nes nepertraukiamo genetinė linija buvo nustatyta tarp ankstyvos, ir vėlai pateikdama neuroblastomų. Neigiami ir vėlai pateikdama (≥1 metus) neuroblastomų parodė beveik diploidy su nuostolių terminalo 1p, o teigiami neuroblastomų kūdikiams parodė beveik triploidy be 1p ištrynimą [11, 12]. Kita vertus, lyginamoji genomo hibridizacijos (CGH) pagrįsti analizė rodo, kad aukštos kokybės netipiškas adenomatozinio hiperplazija plaučiuose yra tikroji pirmtakas bronchioloalveolar karcinoma [13]. Skrandyje, tai yra problema, kokiu mastu genetinis Lineage yra sutapo ankstyvosios ir progresuojančios GCS.
Difuzinis tipo GKS, mes panaudojome CGH įrodyti, kad chromosomų kopija numeris pakitimus intramucosal antspaudo žiedas ląstelių karcinomos, kad parodė, sluoksniuotos struktūros [14] buvo paveldėta iš prastai diferencijuotų gCS frakcija ne stadijose [15]. Iš sluoksniuotos struktūros Sygnet ląstelių gleivinės dalių šių pažangių vėžio buvimą taip pat siūlė, kad antspaudo žiedas ląstelių karcinoma gali būti tiesa pirmtakas blogai diferencijuotų GCS. CGH pagrindu Lineage analizė kitą menkai diferencijuotų pažangių GCS su vamzdinių komponentų, bet ne sluoksniuotos struktūros gleivinės dalis pogrupyje parodė, kad GCS šio pogrupyje buvo kilęs iš vamzdinio komponento naviko ir buvo būdingas 17p- ir 8q + [16] ir dezaktyvavimo laukinio tipo TP53
pagal mutacijos ir praradimo heterozigotiškumu (LOH) [17]. Siekiant nustatyti ankstyvos stadijos kolega šio GC tipo, mes analizuojami intramucosal vamzdinių adenokarcinoma (vonios), naudojant CGH. Šie tyrimai parodė, kad intramucosal vonios parodė ne tik keletą chromosomų pokyčių bendras pažangių GCS bet taip pat dažnai parodė 8q- ir 17P + kad buvo kritiškai skiriasi nuo pažangių ir blogai diferencijuotų GCS [18].
Šioje studijoje, Kopijavimas numeris pokyčiai chromosomų ir genų buvo nagrinėjamas gleivinės ir invazinių dalių kitos pradžioje ir pažangių vonios naudojant masyvo ir chromosomų CGH serijos. Remiantis šiais duomenimis, mes parodė atvejus tęstinis ir nenuolatinio linijų tarp intramucosal ir invazinių dalių atskirų navikų ir nustatė, kad TP53 parsisiųsti ir MYC
gali būti geras Lineage žymekliai skrandžio vonios.
Metodai
institucinis apžvalga valdyba medicinos etikos ne Shiga universiteto medicinos mokslų suteikė patvirtinimą atlikti šiuos tyrimus su sąlyga, kad naudojamos medžiagos turi būti anonimiški.
navikų mėginiai
Šiame tyrime dalyvavo 28 chirurginiu rezekcijos skrandžius (1 lentelė) 13 intramucosal vonios ir 15 invazinės kubilai [6 Po gleivine ir 9 Išplėstinė vėžio kad įsiveržė į muscularis propria ar gilesnius audinius (vamzdinis elementas kiekvienam naviko buvo įvertintas daugiau nei 30%)]. Kiekvienas skrandis buvo fiksuojami formalinu ir įdėta į parafinas. Tai buvo atrinkti atsitiktine tvarka iš medžiagų diagnozuotų mūsų departamentas nuo 1996 iki 2008 histologinis tipai ir naviko stadijos buvo nustatomas atsižvelgiant į japonų klasifikatoriaus skrandžio vėžio [19] ir pTNM sustojimo, atitinkamai. Kai buvo rastas gleivinės histologinis modelis bus nevienalytė individuali invazinio naviko, dalis su žemiausią lygį nuo atypism buvo laikoma gleivinės mėginio, kuris gali užkirsti kelią pakartotiniam invazijos invazinių vėžinių ląstelių į gleivinę galimybę. Be invazinių vėžio, DNR mėginiai buvo paimti iš intramucosal ir invazinės parts.Table 1 suvestinė klinikinių, histopatologinių ir molekulinių genetinių duomenų 25 kanalėlių adenokarcinoma skrandžio
Byla Nr
Amžius /Lytis
histologinis tipas *
invazija **
LN **
etapas **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ PAP
T1 (M)
N0
IA
/a -
- CR.LT M9
51 /m
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /A
+ -
S2M
81 /M
PAP
T1 (cm)
N1
IB
/a
+ -
S2i
NT /A
+
+
S3m
79 /m
tub1
T1 (cm)
N0
IA
/a
+
+
S3i
NT /A
+
+
S4M
63 /m
tub2 > tub1
T1 (cm)
N0
IA
C /NT
+
NT
S5m
75 /m
PAP > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /A
niekinis
NP
A2M
73 /m
tub1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
/a
+ -
A2I
NT /A
+
+
A3m
56 /m
PAP
T2 (SS)
N1
II
/a
+ -
A3I
NT /
+
+
A4m
81 /m
tub2 /PAP
T2 (SS)
N2
IIIA
/a
niekinis -
A4i
NT /A
niekinis
+
A5M
56 /m
tub1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT -
NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /A
niekinis
NP
A9m
67 /M
tub2
T2 (SS)
N1
II
/a
+ -
A9i
NT /A
+
+
* Japonijos klasifikacija skrandžio karcinoma; ** PTNM klasifikacija. Tuo atveju, kai ne, M = intramucosal vėžio skiltyje; S = vėžys įtraukiant submucosa; A = pažengęs vėžys; M = gleivinės dalis; i = invazinių dalį. Atsižvelgiant į CGH skiltyje, c = chromosomų CGH; a = array CGH. Atsižvelgiant į p53 imunohistocheminiu (IHC) stulpelyje; "+" Rodo difuziškai (> 70%) teigiami branduoliai "-" reiškia, sporadiškai (< 5%) teigiami branduoliai; "Nulis" parodo ne reaktyvumas ne visiems. Atsižvelgiant į TP53
mutacijos skiltyje; "+" Ir "-" rodo buvimą ir nebuvimą mutacijos, atitinkamai; NA = nevertintini; NT = neišbandyta
imunohistocheminis
imunohistocheminį dažymo buvo atliktas su monokloninių antikūnų p53 baltymo (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danija).. Po to, kai antigeno paėmimo iš audinių pjūvių į distiliuotą vandenį, esant 121 ° C temperatūroje 5 min, reaktyvumas buvo aptikta netiesioginės biotinas-streptavidino-peroksidazės metodu, naudojant tą Histofine komplektas (Nichirei, Tokijas, Japonija) ir diaminobenzidinas reakciją. Skyriai buvo counterstained hematoksilinu. Skaidrės neigiamos kontrolės, be pirminės antikūnų ir tiems, teigiamos kontrolės buvo apdorojami lygiagrečiai.
Lazeriniai microdissection ir DNR preparatas
Naviko ląstelių gauta iš 5 mkm storio audinių skyriuose naudojant LMD6000 lazerio microdissection sistemą ( Leica Microsystems, Wetzlar, Vokietija). Už atskirų navikų, vėžio ląstelės buvo gauti iš sričių > 3 mm 2, kur vėžinės ląstelės sudarė už ≥90% viso ląstelių skaičiaus. Šie vėžio ląstelės buvo suardomas 200 pL proteinazės K tirpale yra 200 mikrogramų /ml koncentracijai maždaug 70 h 37 ° C temperatūroje, o po to fenolis /chloroformas DNR išskyrimo.
Visą genomą amplifikacija
mėginio DNR buvo sustiprina naudojant peraugti oligonukleotido gruntuotas polimerazės grandininę reakciją (DOP-PGR) 2 etapus, kaip aprašyta anksčiau [20], o tai lėmė PGR produktų daugiau nei 2 kb dydžio, tinka už CGH Nikas-vertimo ženklinimo.
dėl masyvo CGH, mėginio DNR buvo papildyta naudojant GenomePlex Audinių visą genomą amplifikacija rinkinį (WGA2 rinkiniu; Sigma, St Louis, JAV) [21]. Kai DNR mėginių, kurie negalėjo būti pakankamai stiprintuvu, The WGA5 komplektas (sigma), dirbo.
CGH (hibridizacija, zondas DNR ženklinimo ir skaitmeninės vaizdo analizės)
DOP-PGR sustiprina naviką ir DNR buvo ženklinami naudojant fluoresceino-12-dUTP ir tetramethylrhodamine-5-dUTP (Roche, Manheimas, Vokietija), atitinkamai, pagal slapyvardį vertimas [15]. Hibridizacijos ir vaizdo analizė buvo vykdomi, kaip aprašyta anksčiau [22]. Pelnas ir nuostoliai DNR kopijų skaičiaus buvo apibrėžta žalia raudonų santykis > 1.2 ir < 0,8, atitinkamai. Chromosomos 1p32-pter, 16p, 19, 22 ir Y buvo pašalintas iš šių analizių.
Array CGH
oligo CGH mikrogardeliq (60 K, 60-Mer) (Agilent, Santa Clara, JAV) buvo naudojamas šiame tyrime , pagal gamintojo instrukcijas. Trumpai tariant, naviko ir kontrolės DNR buvo ne fermentais paženklinti Cy5 ir Cy3, atitinkamai, naudojant genomo DNR KV ženklinimo rinkinį (AGILENT) ir konkurencingomis hibridizavosi į mikrogardeliq. Naudojant požymių išskyrimas Ver.9.5.3 (Agilent), fluorescencijos intensyvumas navikų ir kontrolės buvo apskaičiuojamas iš hibridizavosi masyvo vaizdų užfiksuoti naudojant DNR mikrogardeliq skaitytuvas (AGILENT). Kopijuoti numeris pelnas ir nuostoliai buvo apibrėžiamas kaip pagrindas 2 logaritmas navikas signalo intensyvumo su etalonine signalo intensyvumo santykis daugiau nei 0.3219 ir mažiau nei -0.3219, atitinkamai.
Mutacija analizė TP53
PGR pradmenų rinkinius buvo parengta egzonų 5-8 TP53
, kuris Lytiškai į gretutines intronai kiekvieno egzono. Žiūrėti papildomą failą 1 už pradmenų sekas. Pirmasis PGR mišinys sudarytas iš buferinio tirpalo, 200 pM dNTP, 1,5 mM MgCl 2, 0,8 mkm gruntas, 1 ng /mikrol, mėginio DNR ir 0,5 U Platina Taq (Invitrogen, California, JAV) 25-mikrol, galutinis tūris , Po pirminio denatūruojant esant 94 ° C temperatūroje 2 min, 40 ciklų PGR buvo atlikti 94 ° C temperatūroje 30 sekundžių, 54 ° C temperatūroje 1 min ir 72 ° C temperatūroje 1 min, o po to galutiniu pratęsimo žingsnyje, esant 72 ° C temperatūroje, 10 min. Patvirtinus PGR produktų agarozės gelio elektroforezės, seka PGR buvo atliekama naudojant BigDye Terminatorius v1.1 ciklas Sequencing Kit (taikoma BIOSYSTEMS, Kalifornija, JAV). Reakcijos mišinys sudarytas iš buferinio tirpalo, 2 mikrol pirmojo PGR produkto, 0,15 mkm grunto ir 0,5 mikrol BigDye Terminatorius V 1,1 per 10-mikrol, galutinio tūrio. Po pirminio denatūruojant esant 96 ° C temperatūroje 1 min, 25 ciklų PGR buvo atlikti 96 ° C temperatūroje 10 sekundžių, 50 ° C temperatūroje 5 sek ir 60 ° C temperatūroje iki 4 min. Į priekį ir atgal sekos buvo nustatomas naudojant ABI PRISM 3100 Genetinis Analyzer (taikomoji BIOSYSTEMS). Mutacijos buvo aptikti šiuos pavyzdžius, lyginant su nuoroda DNR sekos (GenBank prisijungimas numeris: HSU94788). Alelių statusas nustatomas naudojant mutantas santykis laukinio tipo piko lygių sekos profilius.
Statistines analizes
Nepaprastosios stalai buvo analizuojami miesto Fišerio testą ir Cochran-Armitage bandymus. Skirtumai 2-sided bandymus su P < 0,05 buvo laikomi statistiškai reikšmingas.
Rezultatai
imunohistocheminis už p53
Dažymo modelių buvo laikomi ekspresija tik tada, kai ≥ 70% vėžinių ląstelių parodė teigiamai tamsintas branduolius žiūrint į mažos galios srityje. Aštuonios iš 13 intramucosal vėžio, visi 6 gleivine vėžio ir 4 iš 9 pažangių vėžio difuziškai parodė teigiamą branduolinę dažymas, p53 (1 lentelė). Židinio dažymo modelis buvo pastebėtas atvejis # A7. Rašte buvo laikomas neigiamu (ty laukinio tipo TP53
), kai buvo pastebėta, kad retas, atsitiktinio ir silpnos branduolinės dažymo buvimas < 5% branduolių. Tuščia dažymo modelis buvo pastebėtas atvejais # A1 # A4 ir A8 #, tai rodo ne prasme mutacija TP53
[23].
Chromosomų CGH
dvidešimt penkių mėginių iš 25 atvejų (10 gleivinės 6 Po gleivine ir 9 Išplėstinė vėžio) buvo naudojami chromosomų CGH. Visi šie mėginiai buvo imami iš intramucosal pažeidimų, kurie parodė mažiausią laipsnio atypism.
Nors 4q + įvyko balsų dauguma (6/9 atvejų) pažangių kubilai, jis nebuvo aptikta 16 ankstyvųjų kubilai (p = 0,0005). Kitas labai skiriasi chromosomų pokyčiai tarp ankstyvosios ir progresuojančios vėžio buvo 11q + ", kuri buvo aptikta 11 iš 16 pirmųjų vėžio ir 2 9 pažangių vėžio (p = 0,0414). Iš 10 intramucosal vonios ištirtų 3 parodė nuostolį 8q (8q-) ir /ar pelnas 17P (17p +), o 7 ir 2 parodė 8q + ir 17p-, atitinkamai. Iš 15 gleivinės mėginiai invazinių vonios tirtų, 3 ir 4 parodė 8q- ir 17P +, atitinkamai, o 7 ir 6 parodė 8q + ir 17p-, atitinkamai.
Masyvas CGH
trisdešimt vienas mėginius iš 22 atvejų (13 gleivinės, 3 Po gleivine ir 6 Išplėstinė vėžio) buvo įvertinti naudojant masyvo CGH (1 paveikslas). DNR mėginiai buvo paimti iš intramucosal ir /arba invazinė pažeidimų. 1 pav Array CGH duomenys MYC ir TP53 TP53 ir sekos duomenų ankstyvosios ir progresuojančios vamzdinių adenokarcinomos skrandį. Ankstyvi vėžio skirstomi į intramucosal (m) vėžio ir gleivine (cm) vėžio. Žiūrėti 1 lentelę imties skaičių. Skaitmenys yra vidutinis testas /pagalbos koeficientai masyvo CGH. Reikšmingi nuostoliai ir pelnas, yra pažymėti raudona ir žalia, atitinkamai. Laukinio tipo (WT) ir mutacija Exon (ex) ir įstojusi į bylą seka (IVS) ir TP53
nurodytos su geltona ir pilka, atitinkamai.
Kaip parodyta 1 paveiksle ir 2 lentelėje, kartu praradimas MYC
(MYC UAB -) ir pelnas TP53
(TP53 +
) buvo aptikta 9 iš 13 intramucosal vonios, 7 iš 9 gleivinės mėginiai invazinių vonios, 1 iš 3 invazinių pavyzdžių gleivine vėžio ir nė vienas iš 6 invazinių mėginių pažangiosios vėžio. Iš MYC + parsisiųsti ir /ar TP53
modelis - buvo aptiktas 3 iš 13 intramucosal vėžio, nė iš 9 gleivinės mėginiai invazinių vonios, 1 iš 3 invazinių pavyzdžių 3 gleivine vėžio ir 5 6 invazinės mėginiai 6 išplėstas cancers.Table 2 pakitimai MYC
ir TP53
kopijuoti numerius ankstyvosios ir progresuojančios vamzdinių adenokarcinomos skrandžio
Naviko gylis
gleivinės pervežimas pervežimas Submucosa pervežimas pervežimas MP ar giliau - CR.LT


gleivinės dalis
S.
gleivinės detalių ir
giliai
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *)
3
0
1 (1 *)
4
0
3 (2 *)
8q (MYC
) -
3
9 (9 **)
3
2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) +
3
10 (9 **)
3
2 (2 **)
2 (1 ** )
1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) - CR.LT 2
3 (2 *)
2
0
1 (1 *)
4
0
4 (2 *)
SM, kad submucosa; MP, The muscularis Propria. cCGH ir aCGH, chromosome- ir masyvo pagrindu lyginamosios genomo hibridizacijos; Skaitmenimis lenktiniuose skliaustuose nurodyti bendrą skaičių mėginių tirtų. Paryškintomis raidėmis rodo aCGH rezultatus. Žvaigždutė skliausteliuose nurodyti vyksmo myc
+ ir TP53 UAB -. Dviviečiai žvaigždutes rodo vyksmo myc UAB -. Ir TP53
+
pagrįstas bendru masyvo CGH modelius, buvo rasta genetiniai linijas būti pertraukiami ir nuolat tarp gleivinės ir invazinių dalių 5 pažangi ir 3 gleivine vėžio , atitinkamai. Kaip parodyta 2 paveiksle, ėminys iš gleivinės dalį # S3 parodė 4p-, 4q-, 8q + 9p-, 13q + 15q-, 18q-, 20Q + ir Y, o mėginio iš S3 # invazinės dalis paveldėjo tuos pačius aberacijas iš gleivinės pusės, parodė papildomų aberacijas (2q-, 7p + 8p-, 10p + 14q + ir 20Q +) ir prarado 4p- ir 22q +. Be # S1, pelnas iš 1Q, 14q, 19 ir 20, ir praradimo 18q buvo paplitusi gleivinės ir pogleivio mėginių, nors iš 1Q, 14q, 19q ir 20 submucosa pelnas buvo šiek tiek mažesnis nei didelė lygiu. Be # S2, bendra pokytis tiek gleivinės ir pogleivio dalių buvo 20P pelnas. Po gleivine pavyzdys parodė papildomų laimėjimų 10P, 12 ir 13q ir nuostolių 3Q, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10Q, 12p, 14q, 16 ir 19p. Gleivinės mėginys parodė nuostolį 18q, kuri buvo atstatyta po gleivine mėginio, galbūt uniparental disomy [24, 25]. Be # A1, # A3, # A4, # A8 ir A9 #, aberacijų mėginiuose iš gleivinės dalių nebuvo aptikta tų invazinių dalių. Į # A2, genetinių linijų tęstinumo negali būti įvertintas dėl to, kad didelių kopija numeris pokyčių pagal gleivinės pusės nėra. 2 pav Array CGH profiliai. Į chromosomų regionai kopijos numeris aberacijų gleivinės dalį # S3 "(S3m) yra įtraukti iš esmės į tuos invazinės dalis (S3i), o tie, gleivinės dalį # A1 (A1m) yra skiriasi nuo invazinės dalis (A1i)
TP53 mutacija
analizė
mutacijos buvo aptikta apie navikų 7, kurios buvo tikrinamos sekos analizės egzonų 5-8 TP53
(1 paveiksle, 3 lentelė). 1 kad 10 intramucosal vėžio, 2 iš 3 gleivine vėžio ir visi 4 pažangios vėžio (tik invazinių dalys). Visais šiais 7 auglių TP53
alelis buvo hemizygous išskyrus 1 intramucosal vėžiu (# M12) su heterozigotinės modelis už Exon-8 mutacijos (3 paveikslas) ir išplitęs arba null modelį p53, kaip nurodyta imunohistocheminis. Nėra TP53 mutacija
buvo aptiktas p53- pavyzdžių, kaip parodyta 4 paveiksle p53 + /null mėginių, 2 iš 15 mėginių gleivinės dalis parodė, TP53 mutacija
, o 6 iš 7 mėginiuose invazinės dalis parodė, TP53 mutacija
(p = 0,0023). 1 iš po gleivine vėžio rodomi TP53
+ ir hemizygous mutacija (invazinė dalis # S2), TP53
+, gali atspindėti uniparental polysomy [24, 25] .table 3 kopijos numeris pokyčius TP53
ir MYC parsisiųsti ir p53 reaktyvumas į ištirtų mutacijos mėginių analizes
Byla Nr
MYC

TP53
mutacija TP53exons 5-8
mutantas alelio
MDM2
p53 IHC
M3
- CR.LT +
masės UAB -
- M4 -
+
masės
ns -
M5 UAB -
+
masės
ns
+
M6 -
+
WT -
+
M7
ns
+
WT -
+
M8 -
+
masės
ns -
M9 -
+
masės
ns
+
M10 -
+
WT -
+
M11
ns UAB -
WT
ns -
M12 pervežimas + -
egzonų 5/8 pervežimas hemikalciui /heteroatomas pervežimas ns pervežimas + pervežimas M13
+ -
NP
ns -
S1M -
+
WT -
+
S1i UAB -
+
WT -
+
S2M -
+
WT -
+
S2i
ns
+
Exon 7
Hemi
ns
+
S3m
ns
ns
Exon 8
Hemi
ns
+
S3i
+ -
egzonų 5/6/8
Hemi
ns
+
A1m -
+
masės UAB -
niekinis
A1i
+ -
NP -
niekinis
A2M -
+
masės
ns
+
A2I
+ -
Exon 8
Hemi
ns
+
A3m -
+
masės
ns
+
A3I UAB -
- Exon 5
Hemi -
+
A4m -
+
WT -
niekinis
A4i
ns
ns
Exon 5
Hemi
ns
niekinis
A8m
ns
+
WT -
niekinis
A8i
+ -
na
ns
niekinis
A9m -
+
WT -
+
A9i
+
+
Exon 6
Hemi
ns
+
ns = nėra reikšminga; WT = laukinio tipo; NA = nevertintini; Hemi = hemizygous; . Hetero = heterozigotinės
M12, Exon 5: R175H (CGC > ŠMC), C182C (TGC > TGT), S183L (TBS > TTA); Exon 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, Exon 7: C242F (TGC > TTC)
S3m, Exon 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, Exon 5: A161V ( GCC > GTC); galinio egzono 6: T211I (ACT > ATT); Exon 8: R273S (CGT > AGT)
A2I, Exon 8: R273 H (CGT > CAT)
A3I, Exon 5: A161T (GCC > ACC)
A4i, Exon 5: IVS5 + 1G > T
A9i, Exon 6: Y220C (TAT > TGT)
3 pav TP53 mutacijų modelius. Heterozigotinės mutacija su reikšmingu laukinio tipo komponentas egzono 8 (A) ir hemizygous mutacijos Exon 5 (b) yra intramucosal vėžiu (# M12). Mutacijos kitų navikų tirtų buvo hemizygous kaip parodyta C (# S2).
4 pav ryšius tarp p53 imunohistocheminiu, kopijuoti skaičių TP53 ir karšto vietoje mutacija TP53. Dėl "p53 +" ir "p53-", matyti 1 lentelėje "TP53
+ legendą," TP53 CR.LT - "ir" TP53
N /S "rodo didelę kopija numeris Pelnas ir nuostolis ir jokių reikšmingų pokyčių, atitinkamai. Skaitmenimis lenktiniuose skliaustuose nurodyti mėginių skaičių invazinių dalių. Skaitmenys yra imties numeriai. Skaitmenimis lenktiniuose skliaustuose nurodyti mėginių skaičių invazinių dalių. NA = nevertintini.
Kita vertus, gleivinės mėginiai, neapibrėžtumo /null modelis buvo dažnai siejamas su laukinio tipo TP53
. Siekiant paaiškinti šią išvadą, kad MDM2
kopija skaičius buvo tiriama naudojant masyvo CGH duomenis. Iš 22 mėginių iš viso vertinamas TP53 mutacijų pervežimas analizė, MDM2
parodė kopija numeris nuostolį 10 iš 14 mėginių laukinio tipo TP53
ir 1 iš 8 bandinių su TP53 mutacijos pervežimas . (p = 0.0237)
Diskusijos
Be intramucosal vonios, chromosomų CGH atskleidė 8q- ir /arba 17P + esant 3 dažnį iš 10 auglių ištirti; šie pokyčiai dažnesni ankstesniame tyrime, kad naudojamas atsitiktinis užpildymo ženklinimo [18]. Šioje studijoje, 8q + buvo dažnai aptinkama tiek intramucosal vėžio (7/10) ir invazinių vėžio (7/15); Tačiau pirmiau minėta ankstesniais duomenimis retai parodė 8q +. Šie neatitikimai gali atspindėti skirtumus ženklinimo metodų; CGH rezultatai su slapyvardį vertimo ženklinimo arba atsitiktinių gruntavimo ženklinimo buvo palyginti žvejoti signalus, ir buvo nustatyta, kad Nikas vertimas ženklinimas neretai parodė klaidingai teigiami pelną [26]. Tačiau, naudojant tuos pačius ženklinimo sąlygas, ir didelių skirtumų 4Q + sergamumas 11q + buvo aptikta tarp ankstyvosios ir progresuojančios vėžio, galbūt atspindi skirtumus genetinių linijų tarp jų. Chromosomų CGH duomenys pažangių vėžio šiame tyrime atitiko ankstesnę chromosomų CGH duomenimis, gautais su slapyvardį vertimo ženklinimo pažengusiems GCS (ty 17p- ir 8q + buvo gana dažni) [27-30].
Nors kliniškai pastebimas anksti vėžio paprastai laikomi Išplėstinė vėžio pirmtakais [5, 6] intramucosal ir invazinių dalys pažangių kubilai dažnai parodė prieštaringi kopijavimo skaičių MYC
ir TP53
šiame tyrime: MYC CR.LT - ir TP53
+ 5 iš 6 bandinių gleivinės dalis, kaip dažnai, kaip ir intramucosal vėžio išnagrinėta ir MYC pervežimas + ir /ar TP53 UAB - 5 iš 6 bandinių invazinių dalių. Be to, atsižvelgiant į bendrą masyvo CGH modelis Gleivinių ir invazinių dalių auglių, nepertraukiamo genetinė linija buvo nustatyta, į 5 iš 6 Papildomos vėžio. Todėl atrodo, kad navikas klonai iš gleivinės dalių pažangių vėžio nebuvo pirmtakai invazinės dalį, bet minutės intramucosal vėžio kad tikriausiai egzistavo su invazinių vėžio. Buvo pranešta, kad daug minutės vėžio yra labiau paplitęs kubilai nei nediferencijuotos tipo GCS [31]. Išsivysčiusiose kubilai, The intramucosal pirmtakas invazinės komponento galėjo būti prarastas dėl išopėjimo į naviko, ar pirmtakas nebuvo nagrinėjamas, nes jis nesutapo su žemiausią lygį nuo atypism dalis, į kurią iš gleivinės tyrimas dalis invazinė gcs buvo tik šiame tyrime.
kita vertus, gleivine, vėžio, tęstinis genetinė linija buvo nustatyta, visose 3 gleivine navikų įvertinamų. Tai gali būti, nes gleivinės dalis iš esmės yra saugomi pradžioje GCS ir dėl gleivinės pirmtakas invazinės komponento parodė mažiausią laipsnio atypism ir nebuvo įtrauktas į šią masyvo analizę. Gleivinės ir invazinių dalys turėjo bendrus regionų kopijų skaičiaus aberacijos su neprieštaringų ribines vertes, ir dauguma iš gleivinės pusės pokyčiai buvo įtraukta į tų invazinių dalis. . Tuo genų lygmenyje, kopija numeriai MYC
ir TP53
derinosi tarp gleivinės ir pogleivio dalių 2 3 gleivine vėžio
TP53 CR.LT - ir /arba Myc
+ modelis buvo aptikta ne tik invazinių dalių 1 iš gleivine vėžio ir didžiausią dalį papildomų vėžio bet taip pat 3 iš 13 intramucosal vėžio. Be šių navikų, p53 imunohistocheminis parodė išplitęs arba niekinis (mutacija) modelį (1 ir 3 lenteles), o tai rodo, kad TP53 UAB - gali atspindėti Loh ir gautą nukenksminimą laukinio tipo TP53
. Sekos analizė mutacijos karštieji TP53
parodė, kad hemizygous mutacijos (ty mutacijos ir Loh) buvo aptikta gleivinės mėginiai 1 iš 3 intramucosal vėžio ir 1 gleivine vėžio su TP53 UAB - modelį, kaip pat invazinių dalių 4 pažangių vėžio, kurie buvo informatyvus TP53 mutacijų
analizė. Toks inaktyvacijai laukinio tipo TP53
, kuris gali sukelti tolesnį genomo nestabilumą, buvo dažnai pranešė pažangių GCS [15, 17]. Myc
genų lokusas taip pat žinoma, kad dažnai rodo kopija numeris pelną ar amplifikaoija įvairių pažangių vėžio [32]. MYC
+ /TP53 UAB - taip gali būti pateisinamas kaip agresyvaus GC parašu
Buvo pranešta, kad LOH taip pat mutacijos TP53
dažniau aptinkama pažangių GCS nei per anksti. gCS [17, 33], ir kad per anksti gCS, TP53
mutacijos dažniau aptinkama gleivine kubilai nei intramucosal kubilai [34, 35]. Ši tendencija taip pat buvo pastebėta, kad šioje studijoje, tačiau mutacijos tyrimai rodo, kad karšto vietoje mutacijos nebuvo aptikta gleivinės dalis navikų, išskyrus 1 intramucosal vėžiu (# M12). Be to, kopijuoti numeris praradimas MDM2
, kuris vaidina svarbų vaidmenį p53 degradacijos [36], susijęs su difuzine p53 raiškos esant TP53 mutacija pervežimas nėra. Šis reiškinys vargu pranešta, bet gali būti viena iš p53 raiškos ankstyvą GCS mechanizmus.
Pradžioje vėžio, gali būti neveikli ir invazinių komponentai, taip pat tiesa pirmtakai pažangių vėžio. Tarp ankstyvųjų vėžio tirtų šioje studijoje, invazinis 1 naviko (# S3) ir 3 intramucosal vėžio dalis (# M11, M12 # ir # M13) parodė, kad agresyvi vėžio (MYC
+ ir /ar TP53 parašą UAB -) ir dažnai mutacijos TP53
; Tačiau 1 gleivine vėžio (# S1), invazinės dalys parodė ramybės vėžio parašas (MYC UAB - /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 rezekcija ir hipertermiškos pilvaplėvės ertmę chemoterapija vietiškai išplitusiu skrandžio karcinoma III tyrimas atsitiktinių imčių ir daugiacentrinį etapas
• Laiko charakteristikos alkoholio nutraukimo dėl skrandžio vėžio rizikos poveikis - metaanalizė