analyse de Lineage des adénocarcinomes tubulaires précoces et avancées de l'estomac:

analyse continue ou discontinue de Lineage des adénocarcinomes tubulaires précoces et avancées de l'estomac:? continues ou discontinues
Résumé de l'arrière-plan
élimination de carcinome gastrique précoce ( GC) est pensé pour contribuer à la réduction de la mortalité des GC, étant donné que la plupart des progrès GCS tôt pour les GCS avancés. Cependant, GC précoce est encore considéré comme une variante de dormance de GC, et il progresse rarement à GC avancé. Le but de cette étude était de clarifier la portée du chevauchement des lignées génétiques entre le début et les adénocarcinomes tubulaires avancés (Tubs) de l'estomac
. Méthodes
coloration immunohistochimique pour p53 a été réalisée en utilisant 28 estomacs réséquées chirurgicalement avec 13 intramuqueux et 15 Tubs envahissantes. Par hybridation génomique comparative chromosome- et basée sur la baie (CGH), constitution du nombre de copies génomique a été comparée entre la muqueuse et les parties invasives des Tubs invasives et entre les parties muqueuses des Tubs invasives et intramuqueux, en utilisant 25 et 22 Tubs, respectivement. TP53 de la mutation dans exons 5-8 a été examinée dans 20 Tubs.
Chromosomiques CGH de résultats a révélé que 4q + et 11q + étaient plus fréquents dans les cuves, respectivement avancées et au début, alors que le nombre de copies change en 8q et 17p a montré aucune différence significative entre Tubs précoces et avancées. Cependant, CGH array a révélé que, sur les 13 Tubs intramuqueux examiné, la perte de MYC
(MYC
-) et gain de (TP53
+) de TP53 a été détecté dans 9 Tubs et MYC
+ et /ou TP53
- a été détectée dans 3 bains. Parmi les échantillons de la muqueuse de 9 Tubs invasives, 7 ont montré MYC
- /TP53
+ et aucun montré MYC
+ et /ou TP53
-. Parmi les 9 échantillons provenant des parties invasives, 1 (à partir de cancers de la sous-muqueuse) a montré MYC
- /+ et TP53
6 (1 et 5 de la sous-muqueuse de cancers avancés) a montré MYC
+ et /ou TP53
-. Les 6 dernières tumeurs couramment ont montré un motif mutant (diffus ou nul) en p53 immunohistochimie, et 4 des 6 tumeurs évaluables pour l'analyse de la séquence de TP53 ont révélé des mutations. Le tableau schéma global CGH a indiqué que, entre la muqueuse et les parties invasives, lignée génétique a été trouvée discontinue dans 5 cancers avancés et continue en 3 cancers sous-muqueux.
Lignées génétiques de Conclusions diffèrent souvent entre les premières et avancées Tubs. MYC
- /TP53
+ et MYC
+ et /ou TP53
-. Peut-être les signatures de Tubs, respectivement dormants et agressifs, dans l'estomac
fond
cancer gastrique reste la deuxième cause la plus fréquente de décès liés au cancer dans le monde entier, malgré une baisse récente de son taux de mortalité dans les pays développés [1]. Les carcinomes gastriques (GCS) sont classés morphologiquement en 2 grandes catégories: tubulaire formant le type et le type diffus [2, 3] et, dans la mise en scène, dans les cancers précoces (impliquant la muqueuse et la sous-muqueuse) et les cancers avancés (impliquant la musculeuse ou Plus profond). GC précoce est considéré comme un cancer curable [4]; il progresse aurait à GC avancé après des durées variables comme un stade précoce du GC [5, 6]. Au Japon, au début de glucocorticoïdes peut être réséquée activement endoscopically ainsi que chirurgicalement [7], sur la base des principes de la détection précoce et le traitement. D'autre part, certains pathologistes soutiennent que les lésions néoplasiques tubulaires formant qui sont confinés à la muqueuse prennent beaucoup de temps ou sont incapables d'envahir les tissus plus profonds. De ce fait, ces lésions sont appelées dysplasie [4].
Récemment, un programme de masse-dépistage de neuroblastomes au Japon [8-10] a été suspendu en raison d'une lignée génétique discontinue a été trouvée entre le début et, et les neuroblastomes fin présentatrices. neuroblastomes négatifs et tardifs présentatrices (≥1 an) ont montré quasi-diploïdie avec la perte de la borne 1p, alors que les neuroblastomes positifs chez les nourrissons ont montré quasi-triploïdie sans 1p suppression [11, 12]. D'autre part, l'hybridation génomique comparative (CGH) analyse à base a suggéré que de haute qualité hyperplasie atypique adénomateux dans le poumon est le véritable précurseur du carcinome bronchiolo [13]. Dans l'estomac, il est un problème dans quelle mesure lignée génétique est chevauchée au début et avancé GCS.
Dans le type diffus GCS, nous avons utilisé CGH pour démontrer que chromosomique nombre de copies des altérations dans les carcinomes intramuqueux chevalière qui ont montré une structure en couches [14] ont été hérité en une fraction de GCS différenciés mal à des stades avancés [15]. La présence d'une structure en couches de cellules en bague chevalière dans les parties muqueuses de ces cancers avancés a également suggéré que les carcinomes de chevalière peut être un véritable précurseur de GCS mal différenciés. l'analyse de la lignée à base CGH d'un autre sous-ensemble de GCS avancées peu différenciées avec des éléments tubulaires, mais aucune structure à couches dans la partie de la muqueuse a révélé que GCS de ce sous-ensemble ont été dérivées à partir d'un élément tubulaire dans une tumeur et ont été caractérisées par 17p et 8q + [16] et l'inactivation de type sauvage TP53
par mutation et perte d'hétérozygotie (LOH) [17]. Afin de déterminer la contrepartie à un stade précoce de ce type de GC, nous avons analysé les adénocarcinomes tubulaires intramuqueux (Tubs) en utilisant CGH. Ces études ont montré que les Tubs intramuqueux ont montré non seulement plusieurs changements chromosomiques commun aux glucocorticoïdes avancés, mais ont également montré fréquemment 8q- et 17p + qui étaient différents de manière critique de GCS avancés et mal différenciés [18].
Dans la présente étude, d'auteur nombre de changements chromosomes et les gènes ont été examinés dans les muqueuses et invasives parties d'une autre série de Tubs précoces et avancées en utilisant tableau et chromosomique CGH. Sur la base de ces données, nous avons démontré des cas de lignées continues et discontinues entre intramuqueux et parties invasives des tumeurs individuelles et a constaté que TP53
et MYC
peuvent être de bons marqueurs de la lignée des Tubs gastriques.
Méthodes
La Institutional Review Board sur l'éthique médicale à l'Université des sciences médicales de Shiga a approuvé pour mener cette recherche sur la condition que les matériaux utilisés doivent être anonymes.
échantillons tumoraux
cette étude a inclus 28 estomacs chirurgicalement réséquées (tableau 1) avec 13 Tubs intramuqueux et 15 Tubs invasives [6 muqueux et 9 cancers avancés qui ont envahi la musculeuse ou des tissus plus profonds (l'élément tubulaire de chaque tumeur a été évaluée à plus de 30%)]. Chaque estomac a été fixé au formol et inclus dans de la cire de paraffine. Ceux-ci ont été choisis au hasard parmi les matériaux diagnostiqués dans notre département de 1996 à 2008. types et stades tumoraux histologiques ont été déterminés selon la classification japonaise du cancer gastrique [19] et pTNM mise en scène, respectivement. Quand un motif histologique de la muqueuse a été jugée hétérogène dans une tumeur invasive individuelle, la partie avec le plus bas degré de atypisme a été pris comme échantillon de la muqueuse qui peut empêcher la possibilité de ré-invasion de cellules cancéreuses invasives dans la muqueuse. Dans les cancers invasifs, des échantillons d'ADN ont été obtenus à partir de intramuqueux et invasive parts.Table 1 Résumé des données génétiques cliniques, histopathologiques et moléculaires de 25 adénocarcinome tubulaire de l'estomac
cas n °
âge /sexe
Le type histologique *
Invasion **
LN **
étape **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
N0
IA
c /a
-
- M9
51 /M
Bain1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+
- 81 /F
pap
T1 (SM) de S2m
N1
IB
c /a
+
- S2i
NT /a
+
+
79 /M
Bain1
T1 (SM) de S3M
N0
IA
c /a
+
+
S3i
NT /a
+
+
S4M
63 /M
tub2 > Bain1
T1 (SM)
N0
IA
c /NT
+
75 /M
pap >
NT
S5M; tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
null NA
A2m
73 /M
Bain1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
c /a
+
- A2i
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /a
+
- A3i
NT /un
+
+
A4M
81 /tub2 /pap M
T2 (SS)
N2
IIIA
c /a
null
- A4i
NT /a
null
+
A5m
56 /M
Bain1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT
- NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
null
NA
A9M
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /a
+
- A9i
NT /a
+
+
* classification japonaise du cancer de l'estomac; ** Classification pTNM. Dans la colonne des cas Non, M = cancer intramuqueux; S = cancer impliquant la sous-muqueuse; A = cancer avancé; m = une partie de la muqueuse; i = partie invasive. Dans la colonne de CGH chromosomique c = CGH; a = array CGH. Dans la colonne de p53 immunohistochimie (IHC); "+" Indique diffusément (> 70%) des noyaux positifs, "-" indique sporadiquement (< 5%) noyaux positifs; "Null" indique aucune immunoréactivité du tout. Dans la colonne de TP53 de la mutation; "+" Et "-" indique la présence et l'absence de mutation, respectivement; NA = non évaluable; NT = non testé

immunohistochimie La coloration immunohistochimique a été réalisée avec des anticorps monoclonaux dirigés contre la protéine p53 (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Danemark).. Après extraction de l'antigène des coupes de tissus dans de l'eau distillée à 121 ° C pendant 5 min, une immunoréactivité est détectée par un procédé biotine-streptavidine peroxydase en utilisant le kit indirect Histofine (Nichirei, Tokyo, Japon) et la réaction de la diaminobenzidine. Les sections ont été colorées avec de l'hématoxyline. Diapositives du contrôle négatif sans anticorps primaire et ceux du contrôle positif ont été traités en parallèle. Microdissection
laser et préparation d'ADN
cellules tumorales ont été obtenues à partir de coupes de tissus 5 um d'épaisseur en utilisant un système LMD6000 de microdissection laser ( Leica Microsystems, Wetzlar, Allemagne). Pour les tumeurs individuelles, les cellules cancéreuses ont été obtenues à partir des zones > 3 mm 2, où les cellules cancéreuses ont représenté ≥90% du nombre total de cellules. Ces cellules cancéreuses ont été digérés dans 200 pl de solution de proteinase K à une concentration de 200 ug /ml pendant environ 70 h à 37 ° C, suivie d'une extraction de l'ADN au phénol /chloroforme.
Entier amplification du génome
échantillon d'ADN a été amplifié en utilisant dégénérée polymerase chain reaction oligonucléotide-apprêté (DOP-PCR) en 2 phases, comme décrit précédemment [20], ce qui a donné lieu à des produits de PCR plus de 2 kb de taille, adapté à l'étiquetage nick-traduction pour le CGH.
pour tableau CGH, l'ADN de l'échantillon a été amplifié en utilisant le GenomePlex Tissue Kit Whole Genome Amplification (Kit WGA2; Sigma, St. Louis, États-Unis) [21]. Pour certains échantillons d'ADN qui ne pouvaient pas être amplifiés suffisamment, le kit de WGA5 (Sigma) a été utilisé.
CGH (hybridation, sonde marquage d'ADN et d'analyse d'image numérique)
tumeur DOP-amplifié par PCR et l'ADN normal a été marquée en utilisant fluorescéine-12-dUTP et tétraméthylrhodamine-5-dUTP (Roche, Mannheim, Allemagne), respectivement, par translation de coupure [15]. Les analyses d'hybridation et de l'image ont été effectuées comme décrit précédemment [22]. Les gains et les pertes dans le nombre de copies d'ADN ont été définis par le vert aux ratios rouges > 1,2 et < 0,8, respectivement. Chromosomes 1p32-pter, 16p, 19, 22 et Y ont été exclus de ces analyses.
CGH array
Oligo CGH microarray (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, Etats-Unis) a été utilisé dans cette étude , conformément aux instructions du fabricant. En bref, l'ADN de la tumeur et le contrôle était non-enzymatiquement marqué avec Cy5 et Cy3, respectivement, en utilisant l'étiquetage Kit génome ADN ULS (Agilent) et compétitive hybridée à la puce. Utilisation de la fonctionnalité d'extraction Ver.9.5.3 (Agilent), l'intensité de fluorescence des tumeurs et les témoins a été calculé à partir des images matricielles capturées hybridées à l'aide d'un scanner de microréseaux d'ADN (Agilent). Les gains et les pertes du nombre de copies ont été définies comme logarithme en base 2 de l'intensité du signal de la tumeur au rapport de l'intensité du signal de référence de plus de 0,3219 et inférieur à -0,3219, respectivement.
L'analyse des mutations pour TP53
PCR ensembles d'amorces ont été préparées pour les exons 5-8 de TP53
qui hybrident introns flanquant de chaque exon. Voir fichier supplémentaire 1 pour les séquences d'amorces. Le premier mélange de PCR consistait en un tampon, 200 uM de dNTP, MgCl 1,5 mM 2, 0,8 pM d'amorce, 1 ng /échantillon d'ADN pl et 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, Californie, Etats-Unis) dans un volume final de 25 ul . Après dénaturation initiale à 94 ° C pendant 2 min, 40 cycles de PCR ont été réalisées à 94 ° C pendant 30 s, 54 ° C pendant 1 min et 72 ° C pendant 1 min, suivie par l'étape d'extension finale à 72 ° C pendant 10 minutes. Après confirmation des produits de PCR par électrophorèse sur gel d'agarose, la séquence PCR a été réalisée en utilisant le kit de séquençage de cycle v1.1 BigDye Terminators (Applied Biosystems, Californie, USA). Le mélange réactionnel est constitué d'un tampon, 2 ul du premier produit de PCR, 0,15 pM d'amorce et 0,5 pi BigDye Terminator 1,1 V dans un volume final de 10 ul. Après dénaturation initiale à 96 ° C pendant 1 min, 25 cycles de PCR ont été réalisées à 96 ° C pendant 10 s, 50 ° C pendant 5 s et 60 ° C pendant 4 min. Les séquences avant et arrière ont été déterminées en utilisant l'ABI PRISM 3100 Analyseur génétique (Applied Biosystems). Des mutations ont été détectées en comparant ces échantillons à la séquence d'ADN de référence (GenBank, numéro d'accession: HSU94788). état allélique a été déterminée en utilisant le rapport du mutant à des niveaux de pointe de type sauvage dans les profils de séquençage
. Analyses statistiques
tableaux de contingence ont été analysés par le test exact de Fisher et les tests de Cochran-Armitage. Différences de tests 2 faces avec P < Résultats de 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.
immunohistochimie pour p53
modèles de coloration ont été considérés comme surexprimés uniquement lorsque les cellules ≥70% tumorales ont montré des noyaux colorées positivement vu dans un champ de faible puissance. Huit des 13 cancers intramuqueux, tous les cancers de la sous-muqueuse 6 et 4 des 9 cancers avancés ont montré diffusément une coloration nucléaire positive pour p53 (Tableau 1). Un motif de coloration focale a été observée dans le cas n ° A7. Un modèle a été considéré comme négatif (représentant le type sauvage TP53
) lorsque la présence d'une coloration nucléaire clairsemée, sporadique et faible a été observée dans < 5% des noyaux. Un motif de coloration nulle a été observée dans les cas # A1, A4 et # # A8, ce qui suggère une mutation non-sens de [23]
. Chromosomiques CGH de TP53
Vingt-cinq échantillons de 25 cas (10 muqueuse , 6 muqueux et 9 cancers avancés) ont été utilisés pour chromosomique CGH. Tous ces échantillons ont été obtenus à partir de lésions intramuqueux qui ont montré le plus bas degré de atypisme.
Alors 4q + ont eu lieu dans la majorité (6/9 des cas) des Tubs avancés, il n'a pas été détecté dans les 16 premiers Tubs (P = 0,0005). Un autre changement chromosomique significativement différent entre les cancers précoces et avancés était 11q +, qui a été détecté dans 11 des 16 cancers précoces et 2 des 9 cancers avancés (P = 0,0414). Sur les 10 Tubs intramuqueux examinés, 3 ont montré une perte de 8q (8q-) et /ou gain de 17p (17p +), tandis que 7 et 2 ont montré 8q + et 17p, respectivement. Sur les 15 échantillons de la muqueuse de Tubs invasives examinés, 3 et 4 ont montré 8q- et 17p +, respectivement, tandis que 7 et 6 ont montré 8q + et 17p, respectivement.
CGH array
Trente et un échantillons de 22 cas (13 muqueuse, 3 muqueux et 6 cancers avancés) ont été évalués en utilisant CGH array (Figure 1). les échantillons d'ADN ont été obtenus à partir intramuqueux et /ou des lésions invasives. Figure 1 Tableau des données CGH de MYC et TP53 et des données de séquençage de TP53 dans les adénocarcinomes tubulaires précoces et avancées de l'estomac. Les premiers cancers sont divisés en intramuqueux (m) et cancers muqueux (sm) cancers. Se reporter au tableau 1 pour les numéros d'échantillons. Numéraux sont des ratios moyens de CGH array test /de référence. les pertes et les gains significatifs sont indiqués en rouge et vert, respectivement. de type sauvage (wt) et une mutation dans l'exon (ex) et de la séquence intermédiaire (IVS) de TP53
sont indiqués en jaune et gris, respectivement.
Comme le montre la figure 1 et le tableau 2, la perte concomitante de MYC
(MYC
-) et gain de (le TP53 +
) de TP53 ont été détectés dans 9 des 13 TUBS intramuqueux, 7 des 9 échantillons de muqueuses de Tubs invasives, 1 des 3 échantillons de cancers invasifs sous-muqueux et aucun des 6 échantillons invasif des cancers avancés. Un motif de MYC +
et /ou TP53
- a été détectée dans 3 des cancers de intramuqueux 13, aucun des 9 échantillons de muqueuses de Tubs invasives, 1 des 3 échantillons invasives de 3 cancers sous-muqueux et 5 des 6 échantillons invasives de 6 avancées cancers.Table 2 Transformations de MYC
et TP53
nombre de copies dans les adénocarcinomes tubulaires précoces et avancées de l'estomac
tumeur profondeur
Muqueuse
Submucosa
MP ou plus profond -



partie muqueux
SM
Deep muqueux partie
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *) 3
0
1 (1 *) 4
0
3 (2 *)
8q (MYC
) -
3
9 (9 **) 3
2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) + 3
10 (9 **) 3
2 (2 **)
2 (1 ** ) 1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) - 2
3 (2 *)
2
0
1 (1 *) 4
0
4 (2 *)
SM, la sous-muqueuse; MP, la musculeuse. CCGH et aCGH, basés-réseau chromosome- et hybridation génomique comparative; Les chiffres entre parenthèses indiquent le nombre total des échantillons examinés. Les caractères gras indiquent les résultats de aCGH. Les astérisques entre parenthèses indiquent concomitance de MYC
+ et TP53
-. Les doubles astérisques indiquent la concomitance de MYC
-. TP53 et s +
Sur la base de la matrice globale des motifs CGH, lignées génétiques se sont révélés être discontinu et continu entre la muqueuse et les parties invasives dans 5 les cancers avancés et 3 de la sous-muqueuse , respectivement. Comme on le voit sur la figure 2, l'échantillon de la partie de la muqueuse # S3 a montré 4p-, 4q-, 8q + 9p-, 13q + 15q-, 18q-, 20q + et Y-, alors que l'échantillon de la partie invasive d'# S3 hérité des mêmes aberrations de la partie de la muqueuse, a montré des aberrations supplémentaires (2q-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q + et 20q +) et a perdu 4p- et 22q +. Dans # S1, les gains de 1q, 14q, 19 et 20, et la perte de 18q était commune dans les échantillons de la muqueuse et la sous-muqueuse, bien que les gains de 1q, 14q, 19q et 20 dans la sous-muqueuse ont été légèrement inférieur au niveau significatif. Dans # S2, un changement commun dans les deux parties de la muqueuse et la sous-muqueuse était un gain de 20p. L'échantillon de sous-muqueux a montré des gains supplémentaires en 10p, 12 et 13q et des pertes de 3q, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10q, 12p, 14q, 16 et 19p. L'échantillon de la muqueuse a montré une perte de 18q, qui a été restaurée dans l'échantillon sous-muqueux, éventuellement par disomie uniparentale [24, 25]. Dans # A1, A3 #, # A4, A8 et # # A9, des aberrations dans les échantillons provenant des parties de la muqueuse ont été détectés dans celles des parties invasives. Dans # A2, la continuité des lignées génétiques n'a pas pu être évalué en raison de l'absence d'importantes altérations du nombre de copies dans la partie de la muqueuse. Figure 2 tableaux profils CGH. Les régions chromosomiques du nombre de copies des aberrations dans la partie de la muqueuse # S3 (S3M) sont inclus essentiellement dans ceux de la partie invasive (S3i), alors que ceux de la partie de la muqueuse # A1 (A1m) sont différents de ceux de la partie invasive (A1i)
de TP53
analyse de mutations
mutations ont été détectées dans sept des tumeurs qui ont été examinées pour l'analyse des séquences des exons 5-8 de TP53 de (la figure 1, tableau 3). 1 les 10 cancers intramuqueux, 2 des cancers 3 sous-muqueux et les 4 cancers avancés (uniquement les pièces invasives). Dans tous ces tumeurs 7, TP53
allèle était hémizygotes, sauf dans le cancer intramuqueux 1 (# M12) avec un motif hétérozygote pour une mutation de l'exon 8 (figure 3) et un diffus ou un motif nul pour p53, comme il est indiqué par immunohistochimie. Aucune mutation n'a été TP53
détecté dans des échantillons p53-, comme le montre la figure 4. Dans p53 + /échantillons nuls, 2 des 15 échantillons de la partie de la muqueuse a montré TP53 de la mutation, alors que 6 des 7 échantillons de partie invasive a montré TP53 de la mutation (P = 0,0023). Dans 1 des cancers sous-muqueux montrant TP53
+ et une mutation hemizygous (la partie invasive de # S2), TP53
+ peut refléter polysomie uniparental [24, 25] .table 3 Copie nombre de changements TP53
et MYC
et p53 immunoréactivité dans les échantillons testés pour la mutation des analyses
cas n °
MYC
TP53
Mutation de TP53exons 5-8
allèle mutant
MDM2
p53 IHC
M3
-
+
poids
-
- M4
- +
poids
ns
- M5
-
+
poids
ns
+
M6
- +
poids
- +
M7
ns
+
poids
- +
M8
- +
poids
ns
- M9
- +
poids
ns
+
M10
- +
poids
- +
M11
ns
-
en poids
ns
- M12
+
- exons 5/8
hémi /hétéro
ns
+
M13
+
- NA
ns
- S1m
- +
poids
- +
S1i
-
+
poids
- +
S2m
- +
poids
- +
S2i
ns
+
exon 7
hémi
ns
+
S3M
ns ns

exon 8
hémi
ns
+
S3i
+
- exons 5/6/8
hémi
ns
+
A1m
- +
poids
-
null
A1i
+
- NA
- null
A2m
- +
poids
ns
+
A2i
+
- exon 8
hémi
ns
+
A3M
- +
poids
ns
+
A3i
-
- exon 5
hémi
- +
A4M
- +
wt
- null
A4i
ns ns

exon 5
hémi
ns
null
A8M
ns
+
en poids
- null
A8i
+
- NA de ns
null
A9M
- +
en poids
- +
A9i
+
+
exon 6
hémi
ns
+
ns = non significatif; poids = type sauvage; NA = non évaluable; hémi = hemizygous; . Hétéro = hétérozygote
M12, exon 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); exon 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, exon 7: C242F (TGC > TTC)
S3M, exon 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, exon 5: A161V ( GCC > GTC); exon 6: T211I (ACT > ATT); exon 8: R273S (CGT > AGT)
A2i, exon 8: R273 H (CGT > CAT)
A3i, exon 5: A161T (GCC > ACC)
A4i, exon 5: IVS5 + 1G > T
A9i, exon 6: Y220C (TAT > TGT)
Figure 3 TP53 profils de mutation. Une mutation hétérozygote avec une composante significative de type sauvage dans l'exon 8 (A) et une mutation dans l'exon 5 hemizygous (B) dans un cancer intramuqueux (# M12). Des mutations dans les autres tumeurs examinées étaient hémizygotes comme indiqué dans C (# S2).
Figure 4 Relations entre p53 immunohistochimie, le nombre de TP53 et de mutation de point chaud de la TP53 copier. Pour "p53 +" et "p53", voir la légende dans le tableau 1. "TP53
+", "TP53
-" et "TP53
n /s" indiquent un gain significatif du nombre de copies et la perte et aucun changement significatif, respectivement. Les chiffres entre parenthèses indiquent le nombre d'échantillons dans les parties envahissantes. Numéraux sont des nombres d'échantillons. Les chiffres entre parenthèses indiquent le nombre d'échantillons dans les parties envahissantes. NA = non évaluable.
D'autre part, dans les échantillons de la muqueuse, diffus /motif nul a été souvent associée à de type sauvage TP53
. Pour expliquer cette conclusion, la MDM2 de numéro de copie a été examinée à l'aide des données CGH array. Sur un total de 22 échantillons évalués pour TP53
analyse de mutation, MDM2
a montré la perte du nombre de copies dans 10 des 14 échantillons avec de type sauvage TP53
et 1 des échantillons 8 avec TP53
mutation . Discussion de
(P = 0,0237) Dans Tubs intramuqueux, chromosomal CGH révélé 8q- et /ou 17p + à une fréquence de 3 sur 10 tumeurs examinées; ces changements ont été plus fréquents dans une étude précédente qui a utilisé aléatoire étiquetage d'amorçage [18]. Dans la présente étude, 8q + a souvent été détectée à la fois dans les cancers intramuqueux (7/10) et dans les cancers invasifs (7/15); cependant, les données précédentes mentionné ci-dessus a montré que rarement 8Q +. Ces écarts peuvent refléter des différences dans les méthodes d'étiquetage utilisées; Résultats CGH avec nick étiquetage de traduction ou aléatoire étiquetage d'amorçage ont été comparés aux signaux FISH, et il a été constaté que l'étiquetage nick de traduction assez souvent montré des gains faux positifs [26]. Cependant, en utilisant les mêmes conditions d'étiquetage, des différences significatives dans l'incidence des 4q + et 11q + ont été détectés entre précoces et avancés cancers, reflétant peut-être des différences de lignées génétiques entre eux. données chromosomiques CGH de cancers avancés dans cette étude étaient compatibles avec chromosomiques précédente des données CGH obtenus avec nick étiquetage de traduction pour GCS avancés (ie 17p et 8q + étaient assez communs) [27-30].
Bien que les cancers précoces cliniquement perceptibles sont généralement considérés comme les précurseurs de cancers avancés [5, 6], les intramuqueux et invasives parties de Tubs avancées ont souvent montré des nombres de copies discordantes de MYC
et TP53
dans cette étude: MYC
- et TP53
+ dans 5 des 6 échantillons des pièces des muqueuses, comme communément comme dans les cancers du intramuqueux examinés et MYC
+ et /ou TP53
- dans 5 des 6 échantillons des pièces invasives. En outre, sur la base du CGH array motif global de la muqueuse et des parties invasives des tumeurs, une lignée génétique discontinue a été trouvé dans 5 des 6 cancers avancés. Par conséquent, il apparaît que les clones de la tumeur dans les parties de la muqueuse des cancers avancés ne sont pas des précurseurs de la partie invasive, mais les cancers intramuqueux minute qui coexiste avec les cancers invasifs. Il a été rapporté que les cancers multiples minute sont plus fréquentes dans les cuves que dans le type indifférencié GCS [31]. Dans Tubs avancés, le précurseur intramuqueux d'une composante invasive aurait été perdue en raison d'une ulcération dans la tumeur, ou le précurseur n'a pas été examiné parce qu'elle ne coïncide pas avec la partie de la classe inférieure de atypisme, à laquelle l'examen de la muqueuse une partie de invasive GCS a été confiné dans la présente étude.
d'autre part, dans les cancers de la sous-muqueuse, une lignée génétique continue a été trouvée dans toutes les 3 tumeurs sous-muqueuses examinées. Il peut être parce que la partie de la muqueuse est essentiellement conservé au début de GCS et parce que le précurseur de la muqueuse d'une composante invasive a montré le plus bas degré de atypisme et n'a pas été exclu de l'analyse du présent tableau. La muqueuse et les parties invasives avaient des régions communes de nombre de copies aberrations avec des points d'arrêt concordant, et la plupart des changements dans la partie de la muqueuse ont été incluses dans celles de la partie invasive. . Au niveau du gène, le nombre de copies du MYC
et TP53
étaient compatibles entre les parties de la muqueuse et la sous-muqueuse dans 2 des cancers 3 sous-muqueux
Le TP53
- et /ou MYC
+ modèle a été détectée, non seulement dans les parties invasives 1 des cancers de la sous-muqueuse et la plupart des cancers avancés, mais aussi dans 3 des 13 cancers intramuqueux. Dans ces tumeurs, p53 immunohistochimie a montré une diffuse ou nulle (mutation) motif (tableaux 1 et 3), ce qui suggère que le TP53
- peut refléter LOH et l'inactivation résultante de type sauvage TP53
. Les analyses de séquençage des points chauds de mutation de TP53
ont démontré que des mutations hémizygotes (ie de mutation et de LOH) ont été détectés dans les échantillons de la muqueuse de 1 des cancers 3 de intramuqueux et 1 muqueux cancer avec
TP53 - motif, comme ainsi que les parties invasives des 4 cancers avancés qui étaient d'information pour l'analyse des mutations de TP53. Cette inactivation de type sauvage TP53
, ce qui peut provoquer une nouvelle instabilité génomique, a été fréquemment rapportés dans GCS avancés [15, 17]. Le locus du gène MYC de
est également connu pour montrer fréquemment gains nombre de copies ou amplifications dans divers cancers avancés [32]. MYC
+ /TP53
- peut donc être justifiée comme la signature de GC agressive
Il a été rapporté que LOH ainsi que des mutations de TP53
sont plus fréquemment détectés dans GCS avancés qu'au début. GCS [17, 33], et que, au sein de début de GCS, TP53 de les mutations sont plus fréquemment détectés dans Tubs sous-muqueux que dans Tubs intramuqueux [34, 35]. Cette tendance a également été observée dans la présente étude, mais la mutation analyses ont montré que des mutations de point chaud n'a été détecté dans la partie de la muqueuse des tumeurs, sauf dans 1 intramuqueux cancer (# M12). En outre, la perte de MDM2
, qui joue un rôle dans la dégradation de p53 [36] du nombre de copies, en corrélation avec diffuse p53 surexpression en l'absence d'un TP53
mutation. Ce phénomène est à peine signalé, mais il pourrait être l'un des mécanismes de p53 surexpression au début de GCS.
Dans les premiers cancers, il peut y avoir des composants dormants et envahissantes ainsi que de véritables précurseurs de cancers avancés. Parmi les premiers cancers examinés dans la présente étude, une partie invasive de 1 tumeur (# S3) et 3 cancers de intramuqueux (# M11, M12 et # # M13) a montré la signature d'un cancer agressif (MYC
+ et /ou TP53
-) et fréquentes mutations de TP53
; cependant, dans une sous-muqueux cancer (# S1), les parties invasives ont montré la signature d'un cancer dormant (MYC
- /TP53
+).

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