análisis de linaje de los adenocarcinomas tubulares tempranas y avanzadas del estómago:? continua o discontinua

análisis de linaje de los adenocarcinomas tubulares tempranas y avanzadas del estómago:? continuos o discontinuos
Resumen Antecedentes

Erradicación del carcinoma gástrico precoz (GC) se cree que contribuyen a la reducción de la mortalidad de GC, dado que la mayor parte de principios del progreso GC GC a las avanzadas. Sin embargo, a principios de GC se considera como alternativa una variante inactiva de GC, y con poca frecuencia progresa a CG avanzado. El objetivo de este estudio era aclarar el grado de solapamiento de los linajes genéticos entre principios y adenocarcinomas tubulares avanzadas (las tinas) del estómago.
Métodos
tinción inmunohistoquímica para p53 se realizó con 28 estómagos resecado quirúrgicamente con 13 y intramucoso 15 bañeras de invasoras. Por hibridación genómica comparativa chromosome- y basada en matrices (CGH), genómica constitución número de copias se comparó entre la mucosa y partes invasivas de las tinas invasivos y entre las partes de la mucosa de las tinas invasivos y intramucosos, utilizando 25 y 22 tinas, respectivamente. TP53
mutación en los exones 5-8 se examinó en 20 tubos.
Resultados
cromosómicas CGH reveló que 4q + y + 11q fueron más comunes en las tinas de avanzada y principios, respectivamente, mientras que el número de copias cambia en 8q y mostró 17p no hay diferencias significativas entre las tinas tempranas y avanzadas. Sin embargo, CGH array reveló que, de las 13 tinas de intramucosos examinado, la pérdida de MYC gratis (MYC CD -) fue detectado y la ganancia de TP53 gratis (TP53
+) en 9 tinas y MYC
+ y /o TP53 CD - se detectó en 3 bañeras. De las muestras de la mucosa de las tinas 9 invasivas, 7 mostraron MYC CD - /+
TP53 y ninguno mostró MYC
+ y /o TP53 CD -. De las 9 muestras de las partes invasoras, 1 (de cánceres submucosas) mostraron MYC
- /TP53
+ y 6 (1 de submucosa y 5 de cánceres avanzados) mostraron MYC
+ y /o TP53
-. Los últimos 6 tumores comúnmente mostraron un patrón mutante (difusa o null) en inmunohistoquímica p53, y 4 de los 6 tumores evaluables para TP53
análisis de la secuencia reveló mutaciones. La matriz patrón general CGH indicó que, entre la mucosa y partes invasivos, linaje genético se encontró discontinua en 5 cánceres avanzados y continuo en 3 tipos de cáncer de la submucosa.
Conclusiones
linajes genéticos a menudo difieren entre tempranas y avanzadas de las tinas. MYC CD - /+ y TP53
MYC
+ y /o TP53.
- Puede ser las firmas de las tinas inactivos y agresivos, respectivamente, en el estómago
Antecedentes
El cáncer gástrico sigue siendo la segunda causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo, a pesar de una reciente disminución de su mortalidad en los países desarrollados [1]. carcinomas gástricos (GCS) se clasifican morfológicamente en 2 categorías principales: tubular de formación de tipo y el tipo difuso [2, 3] y, en la estadificación, en cánceres tempranos (que implican la mucosa y la submucosa) y los cánceres avanzados (que implican la muscular propia o Más adentro). GC Early se considera un cáncer curable [4]; Según se informa, progresa a GC avanzada después de duraciones variables como una etapa temprana de GC [5, 6]. En Japón, a principios de GCs puede ser resecado endoscópicamente activamente, así como quirúrgicamente [7], en base a los principios de la detección y tratamiento tempranos. Por otro lado, algunos patólogos sostienen que las lesiones neoplásicas que forma tubular que están limitados a la mucosa toman mucho tiempo o son incapaces de invadir tejidos más profundos. De esta manera, estas lesiones se denominan displasia [4].
Recientemente, se suspendió un programa de cribado poblacional de neuroblastomas en Japón [8-10] porque un linaje genético discontinua se encontró entre el temprano y los neuroblastomas presentadoras de finales de los años. neuroblastomas negativos y presentadoras de finales de los años (≥1 año) mostraron casi diploidia con pérdida de la terminal de 1p, mientras que los neuroblastomas positivos en los niños mostraron casi sin triploidía 1p supresión [11, 12]. Por otra parte, la hibridación genómica (CGH) análisis basado comparativo sugirió que de alto grado de hiperplasia adenomatosa atípica en el pulmón es el verdadero precursor del carcinoma bronquioloalveolar [13]. En el estómago, se trata de un problema de en qué medida linaje genético se superpone a principios de los GC y avanzó.
Tipo difuso en los GC, hemos utilizado CGH para demostrar que las alteraciones número de copias cromosómicas en los carcinomas de células en anillo de sello intramucoso que mostraron una estructura en capas [14] se hereda en una fracción de GC pobremente diferenciado en estadios avanzados [15]. La presencia de una estructura en capas de células en anillo de sello en las partes de la mucosa de estos cánceres avanzados también sugirió que los carcinomas de células en anillo de sello puede ser un verdadero precursor de GCs pobremente diferenciado. análisis de linaje a base de CGH de otro subconjunto de GCs avanzada pobremente diferenciados con componentes tubulares pero no estructura en capas en la parte de la mucosa reveló que GCs de este subconjunto se obtuvieron a partir de un componente tubular en un tumor y se caracteriza por 17p y 8q + [16] y la inactivación de la de tipo salvaje TP53
por mutación y la pérdida de heterozigosidad (LOH) [17]. Con el fin de determinar la contraparte en etapa temprana de este tipo de GC, se analizaron los adenocarcinomas tubulares intramucosos (recipientes de lavado) utilizando CGH. Estos estudios encontraron que las bañeras intramucosos mostraron no sólo varios cambios cromosómicos comunes a los GC avanzadas, pero también mostraron con frecuencia 8q- y 17p + que estaban críticamente diferentes de los GC avanzada y pobremente diferenciado [18].
En el presente estudio, de autor cambios en el número de cromosomas y genes fueron examinados en las partes de la mucosa e invasivos de otra serie de bañeras de tempranos y avanzados usando matriz y CGH cromosómicas. Sobre la base de estos datos, hemos demostrado casos de linajes continuos y discontinuos entre intramucoso y partes invasivas de tumores individuales y encontramos que TP53 Opiniones y MYC
pueden ser buenos marcadores de linaje para las tinas gástricos.
Métodos Francia El Junta de Revisión institucional de Ética médica de la Universidad de Shiga de Ciencias Médicas concedió la aprobación para la realización de esta investigación con la condición de que los materiales utilizados deben ser anónimos.
muestras tumorales
este estudio incluyó a 28 estómagos resecado quirúrgicamente (Tabla 1) con 13 bañeras de hidromasaje las intramucosos y 15 invasoras [6 submucosa y 9 cánceres avanzados que invadieron la muscular propia o tejidos más profundos (el componente tubular de cada tumor se evaluó a ser más del 30%)]. Cada estómago se fijó en formalina y embebidos en parafina. Estos fueron seleccionados al azar de los materiales diagnosticados en nuestro servicio entre 1996 y 2008. tipos y estadios tumorales histológicos fueron determinados de acuerdo con la Clasificación japonesa de cáncer gástrico [19] y puesta en escena pTNM, respectivamente. Cuando se encontró un patrón histológico de la mucosa que ser heterogéneos en un tumor invasivo individual, la parte con el grado más bajo de atypism se tomó como la muestra de la mucosa que puede prevenir la posibilidad de volver a la invasión de las células cancerosas invasivas en la mucosa. En los cánceres invasivos, muestras de ADN se obtuvieron de intramucoso e invasivo parts.Table 1 Resumen de los datos genéticos clínicos, histopatológicos y moleculares de 25 adenocarcinoma tubular de estómago
Caso No.
Edad /sexo
tipo histológico *
invasión ** **
LN
Etapa **
CGH
p53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 ≫ pap
T1 (M)
N0
IA
c /CD -
- M9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /a
+ -
S2m
81 /F
pap
T1 (SM)
N1
IB
c /c +
-
s2i
NT /a
+ +

s3m
79 /M
tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /a
+ +

S3i
NT /a
+ +

S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
N0
IA
c /NT
+
NT
S5M
75 /M
pap > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /a
nula
NA
A2m
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)
N0
IB
c /a
+ -
A2i
NT /a
+
+
A3M
56 /M
pap
T2 (SS)
N1
II
c /a
+ -
A3I
NT /un
+ +

A4M
81 /M
tub2 /pap
T2 (SS)
N2
IIIA
c /a
nula -
A4i
NT /a
nula
+
A5M
56 /M
tub1
T2 (MP)
N0
IB
c /NT -
NT
A5I
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /a
nula
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
c /c +
-
A9i
NT /a
+ +

* clasificación japonesa de carcinoma gástrico; ** Clasificación pTNM. En la columna de Caso n, M = intramucoso cáncer; S = cáncer que implica la submucosa; A = cáncer avanzado; m = parte de la mucosa; i = parte invasiva. En la columna de CGH, c = cromosómico CGH; a = array CGH. En la columna de la inmunohistoquímica p53 (IHC); "+" Indica de forma difusa (> 70%) núcleos positivos, "-" indica de forma esporádica (< 5%) núcleos positivos; "Nulo" indica que no hay inmunorreactividad en absoluto. En la columna de TP53
mutación; "+" Y "-" indican la presencia y ausencia de la mutación, respectivamente; ND = no evaluable; NT = no ensayado
Inmunohistoquímica
La tinción inmunohistoquímica se realizó con anticuerpos monoclonales a la proteína p53 (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Dinamarca).. Después de la recuperación de antígenos de secciones de tejido en agua destilada a 121 ° C durante 5 min, la inmunorreactividad se detectó mediante un método de biotina-estreptavidina-peroxidasa indirecta utilizando el Kit Histofine (Nichirei, Tokio, Japón) y la reacción diaminobencidina. Las secciones se counterstained con hematoxilina. Los portaobjetos de control negativo sin el anticuerpo primario y las del control positivo se procesaron en paralelo. Microdisección
Laser y preparación de ADN
Las células tumorales se obtuvieron de secciones de tejido 5-micras de grosor usando un sistema láser de microdisección LMD6000 ( Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania). Para los tumores individuales, se obtuvieron las células cancerosas de las áreas > 3 mm 2, donde las células cancerosas representaron el ≥90% del total de células. Estas células cancerosas se digirieron en 200 l de solución de proteinasa K a una concentración de 200 g /ml durante aproximadamente 70 horas a 37 ° C, seguido de la extracción de ADN con fenol /cloroformo.
Amplificación del genoma entero
se amplificó el ADN de la muestra usando la reacción en cadena de la polimerasa oligonucleótido cebado degenerado (DOP-PCR) en 2 fases, como se describe anteriormente [20], lo que resultó en productos de PCR más de 2 kb de tamaño, adecuados para el etiquetado de la mella para CGH.
para array CGH, la muestra de ADN se amplificó utilizando el GenomePlex tejido completo de amplificación del genoma Kit (Kit de WGA2; Sigma, St. Louis, EE.UU.) [21]. Para algunas muestras de ADN que no podía ser suficientemente amplificadas, se empleó el Kit WGA5 (Sigma).
CGH (hibridación, la sonda de marcaje de ADN y análisis de imagen digital)
tumor amplificado por DOP-PCR y ADN normal se marcó usando fluoresceína-12-dUTP y tetrametilrodamina-5-dUTP (Roche, Mannheim, Alemania), respectivamente, por la traducción de nick [15]. análisis de hibridación y de imagen se realizaron como se describe anteriormente [22]. Las ganancias y pérdidas en el número de copias de ADN fueron definidos por relaciones de verde a rojo > 1,2 y < 0,8, respectivamente. Los cromosomas 1p32-PTER, 16p, 19, 22 e Y fueron excluidos de estos análisis.
CGH array CGH
Oligo microarrays (60 K, 60-mer) (Agilent, Santa Clara, EE.UU.) se utilizó en este estudio , de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En breve, el ADN del tumor y de control fue marcada con Cy5 y Cy3, respectivamente no enzimáticamente, usando el genoma de ADN ULS Etiquetado Kit (Agilent) y competitivamente hibridó con la micromatriz. El uso de extracción de características Ver.9.5.3 (Agilent), la intensidad de fluorescencia de los tumores y los controles se calculó a partir de las imágenes de matriz hibridadas capturados utilizando un escáner de microarrays de ADN (Agilent). Las ganancias y pérdidas del número de copias se definieron como logaritmo en base 2 de la intensidad de la señal del tumor a la relación de intensidad de señal de referencia de más de 0.3219 y menor que -0,3219, respectivamente. El análisis de mutaciones de TP53

PCR conjuntos de cebadores fueron preparados para exones 5-8 de TP53
, que se hibridan con los intrones flanqueantes de cada exón. Ver archivo adicional 1 para las secuencias de los cebadores. La primera mezcla de PCR consistía en un buffer, 200 mM dNTPs, MgCl 1,5 mM 2, 0,8 M de cebador, 1 ng /l de ADN de la muestra y 0,5 U Platinum Taq (Invitrogen, California, EE.UU.) en un volumen final de 25 l . Después de la desnaturalización inicial a 94 ° C durante 2 min, 40 ciclos de PCR se realizaron a 94 ° C durante 30 seg, 54 ° C durante 1 min y 72 ° C durante 1 min, seguido de la etapa de extensión final a 72 ° C durante 10 minutos. Después de la confirmación de los productos de PCR mediante electroforesis en gel de agarosa, secuencia de PCR se realizó usando el kit de secuenciación BigDye v1.1 Ciclo de Terminators (Applied Biosystems, California, USA). La mezcla de reacción consistió en un tampón, 2 l de la primera producto de PCR, 0,15 mM de cebadores y 0,5 l BigDye Terminator V 1,1 en un volumen final de 10 l. Después de la desnaturalización inicial a 96 ° C durante 1 min, 25 ciclos de PCR se realizaron a 96 ° C durante 10 seg, 50 ° C durante 5 s y 60 ° C durante 4 min. Las secuencias de avance y retroceso se determinaron utilizando el ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Las mutaciones se detectaron mediante la comparación de estas muestras a la secuencia de ADN de referencia (GenBank número de acceso: HSU94788). estado alélica se determinó utilizando la proporción de mutante para los niveles máximos de tipo salvaje en los perfiles de secuenciación.
análisis estadísticos tablas de contingencia
se analizaron mediante la prueba exacta de Fisher y las pruebas de Cochran-Armitage. Las diferencias de las pruebas de 2 caras con P < 0,05 fueron considerados estadísticamente significativos.
Resultados
inmunohistoquímica para patrones de tinción de p53
se consideraron sobreexpresa sólo cuando ≥ 70% de células tumorales mostraron núcleos con tinción positiva cuando se ve en un campo de baja potencia. Ocho de los 13 tipos de cáncer intramucosos, todos los 6 tipos de cáncer submucosas y 4 de los 9 cánceres avanzados mostraron difusa tinción nuclear positiva para p53 (Tabla 1). Un patrón de tinción focal se observó en el caso # A7. Un patrón se consideró negativo (que representa el tipo salvaje TP53
) cuando se observó la presencia de tinción nuclear escasa, esporádica y débil en < 5% de los núcleos. Un patrón de tinción nula se observó en los casos # A1, A4 y # # A8, lo que sugiere una mutación sin sentido de TP53
[23].
Cromosómico CGH
Veinticinco muestras de 25 casos (10 mucosal , 6 y 9 de la submucosa cánceres avanzados) se utilizaron para CGH cromosómicas. Todas estas muestras se obtuvieron a partir de lesiones intramucosos que mostraron el grado más bajo de atypism.
Mientras 4q + ocurrieron en la mayoría (6/9 de los casos) de las tinas de avanzada, no se detectó en los primeros 16 bañeras de (P = 0,0005). Otro cambio significativamente diferente cromosómica entre los cánceres temprana y avanzada era 11q +, que se detectó en 11 de los 16 cánceres tempranos y 2 de los 9 cánceres avanzados (P = 0,0414). De los 10 bañeras intramucosos examinados, 3 mostraron pérdida de 8q (8q-) y /o ganancia de 17p (17p +), mientras que el 7 y 2 mostraron 8q + y 17p, respectivamente. De las 15 muestras de la mucosa de bañeras invasivos examinados, 3 y 4 mostraron 8q- y 17p +, respectivamente, mientras que 7 y 6 mostraron 8q + y 17p, respectivamente.
Matriz CGH
Treinta y un muestras de 22 casos (13 mucosa, submucosa 3 y 6 cánceres avanzados) se evaluaron utilizando CGH array (Figura 1). Las muestras de ADN se obtuvieron de intramucoso y /o lesiones invasivas. Figura 1 CGH array de datos de los datos de secuenciación TP53 y TP53 y MYC en adenocarcinomas tubulares tempranas y avanzadas del estómago. Los cánceres tempranos se dividen en tipos de cáncer intramucosos (m) y los cánceres de la submucosa (SM). Consulte la Tabla 1 para los números de muestra. Números son relaciones analizadas /de referencia promedio de CGH array. importantes pérdidas y ganancias son indicados en rojo y verde, respectivamente. tipo salvaje (WT) y la mutación en el exón (ex) y secuencia interpuesta (IVS) de TP53
se indica con amarillo y gris, respectivamente.
Como se muestra en la Figura 1 y la Tabla 2, la pérdida concomitante de MYC
(MYC CD -) y la ganancia de TP53 gratis (TP53 +
) se detectaron en 9 de las 13 tinas de intramucosos, 7 de las 9 muestras de la mucosa de las tinas invasivos, 1 de las 3 muestras invasivas de cáncer submucosos y ninguna de las 6 muestras invasivas de cánceres avanzados. Un patrón de TP53
MYC +
y /o - se detectó en 3 de los 13 tipos de cáncer intramucosos, ninguna de las 9 muestras de la mucosa de las tinas de invasoras, 1 de los 3 muestras invasivas de 3 tipos de cáncer submucosas y 5 de la 6 muestras invasivas de 6 avanzaron cancers.Table 2 Alteraciones de MYC Opiniones y TP53
número de copias en los adenocarcinomas tubulares tempranas y avanzadas del estómago
tumor profundidad
mucosa
submucosa
MP o más profundo -



mucosas parte
SM
mucosas parte
profundo
cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *): perfil 3
0
1 (1 *) 0
4 de Sims 3 (2 *)
8q (MYC
) -
3 página 9 (9 **) página 3 página 2 (2 **)
1 (1 **) 0
página 5 (5 **) 1
(0 **)
17p (TP53
) + página 3
10 (9 **) página 3 página 2 (2 **) página 2 (1 ** ): perfil 1 página 6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) -
2 3 (2 *) página 2
0
1 (1 *)
4 de 0 página 4 (2 *)
SM, la submucosa; MP, la muscular propia. cCGH y aCGH, chromosome- y la matriz basados ​​en la hibridación genómica comparativa; Los números entre paréntesis indican el número total de las muestras examinadas. Las letras en negrita indican los resultados de aCGH. Los asteriscos indican entre paréntesis concomitancia de MYC
+ y TP53 CD -. El doble asterisco indican concomitancia de MYC CD -. TP53 y
+
Basado en la matriz global patrones CGH, se encontraron linajes genéticos para ser discontinuo y continuo entre la mucosa y partes invasivos en 5 tipos de cáncer avanzado y 3 de la submucosa , respectivamente. Como se muestra en la Figura 2, la muestra de la parte de la mucosa de # S3 mostró 4p-, 4q-, 8q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20q + y Y-, mientras que la muestra de la parte invasiva del # S3 heredado las mismas aberraciones de la parte de la mucosa, mostraron aberraciones adicionales (2T-, 7p +, 8p-, 10p +, 14q y 20q + +) y perdió 4p- y 22q +. En # S1, las ganancias de 1q, 14q, 19 y 20, y la pérdida de 18q era común en las muestras de la mucosa y submucosa, aunque las ganancias de 1q, 14q, 19q y 20 en la submucosa fueron ligeramente menor que el nivel significativo. En # S2, un cambio común en ambas partes de la mucosa y submucosa fue una ganancia de 20 peniques. La muestra submucosa mostró ganancias adicionales en 10p, 13q y 12 y las pérdidas en el 3T, 4, 5, 8p, 9p, 9q, 10q, 12p, 14q, 16 y 19p. La muestra de la mucosa mostró pérdida de 18q, que fue restaurado en la muestra de la submucosa, posiblemente por disomía uniparental [24, 25]. En # A1, A3 #, # A4, A8 # y # A9, aberraciones en las muestras de las partes de la mucosa no se detectaron en los de las partes invasivos. En # A2, la continuidad de los linajes genéticos no puede ser evaluada debido a la ausencia de importantes alteraciones del número de copias en la parte de la mucosa. Figura 2 perfiles de CGH array. Las regiones cromosómicas de copia aberraciones numéricas en la parte de la mucosa de # S3 (S3M) se incluyen, básicamente, en las de la parte invasiva (S3i), mientras que las de la parte de la mucosa de # A1 (A1m) son diferentes de las de la parte invasiva (A1i)
TP53
se detectaron análisis de mutaciones
las mutaciones en 7 de los tumores que fueron examinados por análisis de secuencias de los exones 5-8 de TP53 gratis (Figura 1, Tabla 3):. 1 de los 10 cánceres intramucosos, 2 de los 3 tipos de cáncer de la submucosa y los 4 cánceres avanzados (sólo las partes invasoras). En todos estos 7 tumores, el TP53
alelo era hemizygous excepto en 1 cáncer intramucoso (# M12) con un patrón de heterocigotos para una mutación exón-8 (Figura 3) y un difuso o un patrón nulo para p53, como se indica por inmunohistoquímica. No TP53
mutación se detectó en muestras de p53, como se muestra en la Figura 4. En las muestras de p53 + /null, 2 de las 15 muestras de la parte de la mucosa mostró TP53
mutación, mientras que 6 de las 7 muestras de parte invasiva mostró TP53
mutación (P = 0,0023). En 1 de los cánceres de la submucosa que muestran TP53
+ y una mutación hemizygous (la parte invasiva # S2), TP53
+ puede reflejar polysomy uniparental [24, 25] .table 3 número de copias cambios de TP53
y MYC
e inmunorreactividad de p53 en las muestras analizadas para la mutación análisis
Caso No.
MYC
TP53
La mutación de TP53exons 5-8
alelo mutante
MDM2 p53
IHC
M3
-
+
peso CD -
- M4 -
+
peso
ns -
M5 CD -
+
peso
ns
+
M6 -
+
peso -
+
M7
ns
+
peso -
+
M8 -
+
peso
ns -
M9 -
+
peso
ns
+
M10 -
+
peso -
+
M11
ns CD -
peso
ns -
M12 +

- Los exones 5/8
hemi /hetero
ns
+
M13
+ -
NA
ns -
S1M -
+
peso -
+
S1i CD -
+
peso -
+
S2m -
+
peso -
+
s2i
ns
+
exón 7
hemi
ns
+
s3m
ns ns

exón 8
hemi
ns
+
S3i
+ -
exones 5/6/8
hemi
ns
+
A1m -
+
peso CD -
nula
A1i
+
- NA -
nula
A2m -
+
peso
ns
+
A2i
+ -
exón 8
hemi
ns
+
A3M -
+
peso
ns
+
A3I CD -
- exón 5
hemi -
+
A4M -
+
wt -
nula
A4i
ns ns

exón 5
hemi
ns
nula
A8M
ns
+
peso -
nula
A8i
+
- NA
ns
nula
A9m -
+
en peso -
+
A9i
+ +

exón 6
hemi
ns
+
ns = no significativo; peso = tipo salvaje; ND = no evaluable; hemi = hemizygous; . Hetero = heterocigoto
M12, el exón 5: R175H (CGC > CAC), C182C (TGC > TGT), S183L (TCA > TTA); exón 8: R267R (CGG > CGA)
s2i, el exón 7: C242F (TGC > TTC)
s3m, el exón 8: R273S (CGT > AGT)
S3i, el exón 5: A161V ( GCC > GTC); exón 6: T211I (ACT > ATT); exón 8: R273S (CGT > AGT)
A2i, el exón 8: R273 H (CGT > CAT)
A3I, el exón 5: A161T (GCC > ACC)
A4i, el exón 5: IVS5 +1 G > T
A9i, el exón 6: Y220C (TAT > TGT): perfil Figura 3 TP53 patrones de mutación. Una mutación heterocigótica con un componente significativo de tipo salvaje en el exón 8 (A) y una mutación en el exón 5 hemizygous (B) en un cáncer intramucoso (# M12). Las mutaciones en los otros tumores examinados fueron hemizygous como se muestra en C (# S2).
Figura 4 Relaciones entre inmunohistoquímica de p53, el número de copia TP53 y la mutación de TP53 punto caliente. Por "p53 +" y "p53", ver la leyenda en la Tabla 1. "TP53
+", "TP53 CD -" y "TP53
n /s" indica significativa ganancia en el número de copias y la pérdida y ningún cambio significativo, respectivamente. Los números entre paréntesis indican el número de muestras en partes invasivos. Los números son números de muestra. Los números entre paréntesis indican el número de muestras en partes invasivos. ND = no evaluable.
Por otro lado, en las muestras de la mucosa, el patrón difuso /null se asocia a menudo con el tipo salvaje TP53
. Con el fin de explicar este hallazgo, la MDM2
número de copias se examinó mediante CGH array de datos. De un total de 22 muestras evaluadas para TP53
análisis de la mutación, MDM2
mostró pérdida de número de copias en 10 de las 14 muestras de tipo salvaje TP53 Opiniones y 1 de las 8 muestras con TP53 mutación
. (P = 0,0237)
Discusión
en tinas intramucosos, CGH cromosómicas reveló 8q- y /o 17p + a una frecuencia de 3 de cada 10 tumores examinados; estos cambios fueron más comunes en un estudio previo que utiliza el etiquetado cebado aleatorio [18]. En el presente estudio, 8q + se detectó con frecuencia tanto en los cánceres intramucosos (7/10) y en cánceres invasivos (7/15); sin embargo, los datos anteriores antes mencionado raramente mostró 8q +. Estas discrepancias pueden reflejar diferencias en los métodos de etiquetado utilizados; CGH resultados con el etiquetado o el etiquetado traslado de cortes cebado aleatorio se compararon con las señales de FISH, y se encontró que el etiquetado traducción nick no mostró poca frecuencia ganancias de falsos positivos [26]. Sin embargo, usando las mismas condiciones de etiquetado, no se detectaron diferencias significativas en la incidencia de 4q + y + 11q entre los cánceres tempranos y avanzados, posiblemente como consecuencia de las diferencias en los linajes genéticos entre ellos. los datos CGH cromosómicas de los cánceres avanzados en este estudio fueron consistentes con los datos CGH cromosómicas previos obtenidos con el etiquetado para el traslado de cortes GC avanzado (es decir, 17p y 8q + eran bastante común) [27-30].
Aunque los cánceres tempranos clínicamente discernibles son generalmente considerados los precursores de cánceres avanzados [5, 6], las partes intramucosos e invasoras de las tinas de avanzada a menudo mostraron números de copias discordantes de MYC Opiniones y TP53
en este estudio: MYC CD - TP53 y
+ en 5 de las 6 muestras de las partes de la mucosa, como comúnmente como en los cánceres intramucosos examinados, y MYC
+ y /o TP53
- en 5 de las 6 muestras de las partes invasivos. Además, sobre la base de la matriz CGH patrón general de la mucosa y partes invasivas de tumores, un linaje genético discontinua se encontró en 5 de los 6 cánceres avanzados. Por lo tanto, parece que los clones tumorales en las partes de la mucosa de los cánceres avanzados no eran precursores de la parte invasiva, pero los cánceres intramucosos minutos que probablemente coexistían con los cánceres invasivos. Se ha informado de que varios tipos de cáncer hora son más comunes en tinas que en de tipo indiferenciado GCs [31]. En bañeras de avanzada, el precursor intramucoso de un componente invasivo podría haberse perdido debido a la ulceración en el tumor, o el precursor no fue examinada, ya que no coincide con la parte de el grado más bajo de atypism, a la que el examen de la mucosa parte de los GC invasivo fue confinado en el presente estudio.
por otro lado, en los cánceres de la submucosa, un linaje genético continua se encontró en todos los 3 tumores submucosos examinados. Puede ser debido a que la parte de la mucosa es, básicamente, retuvo a principios de los GC y porque el precursor de la mucosa de un componente invasivo mostraron el grado más bajo de atypism y no se excluyó del análisis de la actual matriz. La mucosa y partes invasivos tenían regiones comunes de copia aberraciones numéricas con puntos de interrupción concordantes, y la mayoría de los cambios en la parte de la mucosa se incluyeron en los de la parte invasiva. . A nivel de genes, el número de copias de MYC Opiniones y TP53
fueron consistentes entre las partes mucosa y submucosa en 2 de los 3 tipos de cáncer submucosos comentario El TP53 CD - y /o MYC
+ patrón se detectó no sólo en las partes invasivas de 1 de los cánceres de la submucosa y la mayoría de los cánceres avanzados, sino también en 3 de los 13 tipos de cáncer intramucosos. En estos tumores, inmunohistoquímica de p53 mostró un patrón nulo (mutación) o difusa (Tablas 1 y 3), lo que sugiere que el TP53 CD - puede reflejar LOH y la inactivación resultante de tipo salvaje TP53
. Secuenciación análisis de los puntos calientes de mutación de TP53
han demostrado que no se detectaron mutaciones hemizygous (es decir, mutación y LOH) en las muestras de la mucosa de 1 de los 3 tipos de cáncer y intramucosos 1 submucosa del cáncer con un TP53
- modelo, como así como las partes invasivos de los 4 cánceres avanzados que eran informativo para los TP53
análisis de la mutación. Tal inactivación de tipo salvaje TP53
, lo que puede causar una mayor inestabilidad genómica, se ha informado con frecuencia en los GC avanzada [15, 17]. El gen MYC
locus se conoce también con frecuencia para mostrar aumentos del número de copias o ampliaciones en varios cánceres avanzados [32]. MYC
+ /TP53 CD - puede, pues, ser justificada como la firma de GC agresiva
Se ha informado de que la LOH, así como mutaciones de TP53 ¿Cuáles son detectados con mayor frecuencia en los GC avanzada que en los comienzos. GC [17, 33], y que, dentro de principios de los GC, TP53
mutaciones se detectan con mayor frecuencia en las tinas de la submucosa que en las tinas intramucosos [34, 35]. Esta tendencia también se observó en el presente estudio, pero los análisis de mutación se indica que las mutaciones de punto caliente no se detectaron en la parte de la mucosa de los tumores, excepto en 1 cáncer intramucoso (# M12). Además, la pérdida-número de copias de MDM2
, que desempeña un papel en la degradación de p53 [36], correlacionada con la sobreexpresión de p53 difusa en ausencia de un TP53
mutación. Este fenómeno es apenas informó, pero podría ser uno de los mecanismos de la sobreexpresión de p53 a principios de GCs.
En cánceres tempranos, puede haber componentes inactivos y invasivos, así como verdaderos precursores de cánceres avanzados. Entre los cánceres tempranos examinados en el presente estudio, una parte invasiva del tumor 1 (# S3) y 3 tipos de cáncer intramucosos (# M11, M12 y # # M13) mostró la firma de cáncer agresivo (MYC
+ y /o TP53 CD -) y las mutaciones frecuentes de TP53
; Sin embargo, en el cáncer de 1 submucosa (# S1), las partes invasivos mostraron la firma de cáncer latente (MYC CD - /TP53
+).

• GASTRICHIP: la resección D2 y quimioterapia intraperitoneal hipertérmica en el carcinoma gástrico localmente avanzado: un estudio aleatorizado y multicéntrico en fase III study
• Características de tiempo del efecto del abandono del alcohol sobre el riesgo de cáncer de estómago - un meta-analysis