Lineage анализ ранних и поздних трубчатых аденокарциномы желудка: непрерывной или прерывистой

анализа Lineage ранних и передовых трубчатых аденокарциномы желудка: непрерывный или прерывистый
Аннотация
фона
искоренение раннего рака желудка ( GC), как полагают, способствует снижению смертности GC, учитывая, что большая часть раннего прогресса GCS к передовым ШС. Тем не менее, в начале ГХ в качестве альтернативы рассматривается как бездействующий вариант GC, и он нередко прогрессирует к расширенному GC. Цель данного исследования состояла в том, чтобы уточнить степень перекрытия генетических линий между ранним и передовых трубчатых аденокарциномы (бадьи) желудка.
Методы
Иммуногистохимическое окрашивание для p53 проводили с использованием 28 резецировали хирургическим желудки с 13 intramucosal и 15 инвазивные ваннами. По chromosome- и массива на основе сравнительной геномной гибридизации (CGH), геномная количество копий конституции сравнивали между слизистых оболочек и инвазивных частей инвазивных кадки и между слизистыми частями инвазионных и intramucosal ваннами, с использованием 25 и 22 кадки, соответственно. TP53
мутация в экзонов 5-8 был рассмотрен в 20 ваннами.

Результаты хромосомной CGH показали, что 4Q + и 11q + были более распространены в развитых и ранних ваннами, соответственно, в то время как число копий изменяется в 8q и 17p показал нет существенных различий между ранней и передовых ваннами. Тем не менее, массив ГКГ показал, что из 13 intramucosal кадки исследовали, потеря MYC
(MYC
-) и усиления TP53
(TP53
+) был обнаружен в 9 кадки и MYC <бр> + и /или TP53
- был обнаружен в 3 ваннами. Из слизистых оболочек образцов 9 инвазивных кадках, 7 показал MYC
- /TP53
+ и никто не показал MYC
+ и /или TP53
-. Из 9 образцов из инвазивных частей, 1 (от подслизистых рака) показал MYC
- /TP53
+ и 6 (1 из подслизистого и 5 из поздних стадий рака) показали MYC
+ и /или TP53
-. Последние 6 опухолей обычно показали мутантный паттерн (диффузное или нулевую) в p53 иммуногистохимии, и 4 из 6 опухолей долевые для TP53
анализа последовательностей выявили мутации. Общий массив ГКГ модели показал, что, между слизистых оболочек и инвазивных частей, генетическая линия была обнаружена разрывной 5 на поздних стадиях рака и непрерывной в 3 подслизистых рака.
Выводы
Генетические клоны часто отличались от ранних и поздних ваннами. MYC
- /TP53
+ и MYC
+ и /или TP53
-. Могут быть подписи покоящихся и агрессивных кадках, соответственно, в желудке
фон
рак желудка остается второй наиболее распространенной причиной смертности от онкологических заболеваний во всем мире, несмотря на недавнее уменьшение в его смертности в развитых странах [1]. Желудочный карцинома (ГКС) классифицируются морфологически на 2 основные категории: трубчатые формирования типа и диффузного типа [2, 3] и, в постановке, в ранних форм рака (с участием слизистой оболочки и подслизистой) и на поздних стадиях рака (привлечение мышечная или Глубже). В начале ГХ считается излечимой рака [4]; Сообщается, что он прогрессирует к расширенному GC после различной продолжительности, как на ранней стадии GC [5, 6]. В Японии, в начале ШС может быть активно резекция эндоскопически, а также хирургическим путем [7], основанный на принципах раннего выявления и лечения. С другой стороны, некоторые патологи утверждают, что трубчатые формирования опухолевые поражения, которые приурочены к слизистой оболочке занять длительное время или не могут вторгнуться глубокие ткани. Таким образом, эти повреждения называются дисплазии [4].
В последнее время программа массового скрининга нейробластомы в Японии [8-10] было приостановлено, так как разрывная генетическая родословная была обнаружена между ранне- и позднеспелых представления нейробластомы. Отрицательные и позднеспелые представления (≥1 год) нейробластомы показал около-диплоидности с потерей терминала 1р, тогда как положительные нейробластомы у детей раннего возраста показали около-триплоидии без 1р удаления [11, 12]. С другой стороны, сравнительная геномная гибридизация (CGH) основе анализ показал, что полноценный атипичная гиперплазия аденоматозный в легких является истинным предшественником бронхиолоальвеолярной карциномы [13]. В желудке, это проблема, в какой степени генетической линии перекрывается в начале и передовых ШС.
В диффузный типа ШС, мы использовали CGH, чтобы продемонстрировать, что хромосомная копирования число изменений в intramucosal печатка кольцо клеточных карцином, которые показали, слоистая структура [14] были унаследованы в доли малодифференцированных ШС на поздних стадиях [15]. Наличие слоистой структуры перстневидно клеток в слизистой оболочке части этих поздних стадиях рака также предположил, что перстень клеточные карциномы может быть истинным предшественником слабо дифференцированных ШС. ГКГ на основе анализа родословная другого подмножества малодифференцированных передовых ШС с трубчатыми компонентами, но без слоистой структуры в слизистой оболочке части показал, что ШС этого подмножества были получены из трубчатого компонента в опухоли и характеризовались 17p- и 8Q + [16] и инактивация дикого типа TP53 Ру по мутации и потерей гетерозиготности (LOH) [17]. Для того, чтобы определить на ранней стадии аналог этого типа GC, мы проанализировали intramucosal трубчатые аденокарциномы (бадьи) с использованием CGH. Эти исследования показали, что intramucosal кадки показали не только несколько хромосомные изменения, общие для продвинутых ШС, но также часто показал 8q- и 17p +, которые были критически отличаются от развитых и слабо дифференцированных ШС [18].
В настоящем исследовании, об интеллектуальной собственности; число изменения хромосом и генов были исследованы в слизистой оболочке и инвазионных частях другой серии ранних и поздних кадки с использованием массива и хромосомной CGH. На основании этих данных, мы показали случаи непрерывных и прерывистых линий между intramucosal и инвазивные частями отдельных опухолей и обнаружили, что TP53
и MYC
могут быть хорошими маркерами клональные для желудка ваннами.
Методы
этическими комитетами по медицинской этике в Сига университета медицинских наук получил разрешение на проведение этого исследования при условии, что используемые материалы должны быть анонимными.
образцы Опухоль
в исследование было включено 28 резецировали желудки хирургическим путем (таблица 1) с 13 intramucosal кадки и 15 инвазивные кадки [6 подслизистого и 9 на поздних стадиях рака, которые вторглись в Propria или мышечный глубокие ткани (трубчатый компонент каждой опухоли оценивали более чем на 30%)]. Каждый желудок фиксировали в формалине и заливали в парафин. Они были выбраны случайным образом из материалов, диагностированных в нашем отделении с 1996 по 2008. гистологических типов и стадий опухолей определяли в соответствии с японской классификации рака желудка [19] и pTNM постановки соответственно. Когда через слизистую оболочку гистологическое картина была обнаружена гетерогенна в индивидуальной инвазивной опухоли, часть с самой низкой степени атипизм был взят в качестве образца через слизистую оболочку, что может предотвратить возможность повторного вторжения инвазивных раковых клеток в слизистую оболочку. В инвазивного рака, образцы ДНК были получены из intramucosal и инвазивного parts.Table 1 Резюме клинических, гистологических и молекулярно-генетических данных 25 трубчатого аденокарциномы желудка
Дело №

Возраст /пол

гистологического типа *

Invasion **

LN **

Этап **

ГКГ

р53 IHC

TP53mutation

M1
57/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M2
72/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
NT
M3
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M4
67/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
-
-
M5
74/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M6
65/M
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M7
67/F
tub1
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M8
70/F
tub1 > PAP
T1 (M)
N0
IA
C /A
-
-
М9
51 /M
tub1 > tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M10
52/M
tub2
T1(M)
N0
IA
c/a
+
-
M11
57/F
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
-
M12
89/M
tub2
T1(M)
N0
IA
NT/a
+
+
M13
70/M
tub1
T1(M)
N0
IA
NT/a
-
NA
S1m
73/F
tub2
T1(SM)
N0
IA
c/a
+
-
S1i
NT /а
+
-
S2M
81 /F
PAP
T1 (SM)
N1
IB
с /а
+
-
S2i
NT /а
+
+
s3m
79 /M
tub1
T1 (SM)
N0
IA
с /а
+
+
S3i
NT /а
+
+
S4M
63 /M
tub2 > tub1
T1 (SM)
N0
IA
C /NT
+
NT
S5m
75 /M
PAP > tub2
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
S6m
79/M
pap
T1(SM)
N1
IB
c/NT
+
NT
A1m
71/M
tub2
T2(SS)
N2
IIIA
c/a
null
-
A1i
NT /а
нуль
NA
Л2т
73 /M
tub1 > tub2
T2 (SS)

IB N0
с /а
+
-
A2i
NT /а
+
+ <бр> A3M
56 /M
PAP
T2 (SS)
N1
II
с /а
+
-
A3i
NT /
+
+
A4M
81 /M
tub2 /PAP
T2 (SS)
N2
IIIA
с /а
нуль
-
A4i
NT /а
нуль
+
А5М
56 /M
tub1
T2 (MP)
N0
IB
C /NT
-
NT
A5i
NT/NA
-
NA
A6m
45/F
tub2
T2(SS)
N1
IB
c/NT
+
NT
A7m
79/F
tub2
T2(MP)
N1
IB
c/NT
+/-
NT
A8m
69/M
tub1
T3(SE)
N2
IIIB
c/a
null
-
A8i
NT /а
нуль
NA
A9m
67 /F
tub2
T2 (SS)
N1
II
с /а
+
-
A9i
NT /а
+
+
* японская классификация рака желудка; ** PTNM классификации. В колонке Case Нет, M = intramucosal рака; S = рак с участием подслизистой; A = прогрессирующий рак; м = часть слизистых оболочек; I = инвазивной часть. В колонке CGH, с = хромосомная ГКГ; а = массив ГКГ. В столбце р53 иммуногистохимии (IHC); "+" Указывает на диффузно (> 70%) положительных ядер, "-" обозначает спорадически (&л; 5%) положительных ядер; "Нуль" указывает на отсутствие иммунореактивности вообще. В столбце TP53
мутации; "+" И "-" указывают на наличие или отсутствие мутации, соответственно; NA = не облагаемых; NT = не тестировали
Иммуногистохимия
Иммуногистохимическое окрашивание проводили с использованием моноклональных антител к белку р53 (DO-7, 1: 100; Dako, Glostrup, Дания).. После извлечения антигена срезов ткани в дистиллированной воде при температуре 121 ° С в течение 5 мин, иммунореактивность была обнаружена непрямой биотин-стрептавидин-пероксидаза методом с использованием набора Histofine (Nichirei, Токио, Япония) и реакции диаминобензидина. Срезы подвергали контрастному окрашиванию гематоксилином. Слайды отрицательного контроля без первичного антитела, а положительного контроля были обработаны параллельно.
Лазерная микродиссекция и препарат ДНК
клетки опухолевых были получены из секций 5 мкм толщиной ткани с использованием системы LMD6000 лазерной микродиссекции ( Leica Microsystems, Wetzlar, Германия). Для отдельных опухолей, раковые клетки были получены из областей &GТ; 3 мм 2, где раковые клетки составляли ≥90% от общего числа клеток. Эти раковые клетки переваривают в 200 мкл раствора протеиназы К при концентрации 200 мкг /мл в течение приблизительно 70 часов при 37 ° С, с последующей экстракцией фенолом /хлороформом ДНК.
Амплификация полного генома
усиливался образца ДНК используя вырожденные олигонуклеотидные загрунтованных полимеразной цепной реакции (ДОФ-ПЦР) в 2 этапа, как описано ранее [20], в результате которого в ПЦР-продуктов более чем 2 кбайт, подходит для маркировки ник-трансляции для CGH.
для массива ГКГ, образец ДНК амплифицировали с использованием GenomePlex Tissue полного генома Amplification Kit (WGA2 Kit; Sigma, St. Louis, USA) [21]. Для некоторых образцов ДНК, которые не могут быть в достаточной степени усиленных, был использован комплекта WGA5 (Sigma).
CGH (гибридизация, зондировать мечение ДНК и цифрового анализа изображений)
DOP-PCR-амплифицированного опухоли и нормальной ДНК метили с помощью флуоресцеин-12-дУТФ и тетраметилродамин-5-дУТФ (Roche, Mannheim, Германия), соответственно, ник-трансляцией [15]. Гибридизация и изображений анализы проводили, как описано ранее [22]. Прибыли и убытки, в числе копий ДНК были определены зеленого до красного коэффициентов > 1,2 и &лт; 0,8, соответственно. Хромосомы 1p32-PTER, 16p, 19, 22 и Y были исключены из этих анализов.
Массива CGH
Oligo CGH микрочипов (60 K, 60-мерный) (Agilent, Санта-Клара, США) использовали в данном исследовании , в соответствии с инструкциями изготовителя. Короче говоря, ДНК опухоли и контроль был неферментативно помечены Cy5 и Су3, соответственно, используя геномную ДНК ULS Этикетировочное Kit (Agilent) и на конкурсной основе гибридизуют с микрочипом. Использование Feature Extraction Ver.9.5.3 (Agilent), интенсивность флуоресценции опухолей и контроля вычисляли из гибридизированных изображений массива, захваченных с помощью сканера ДНК микрочипов (Agilent). Прописи количество прибыли и убытки, были определены как база 2 логарифму интенсивности сигнала опухоли к соотношению интенсивностей опорного сигнала более чем на 0.3219 и менее -0.3219 соответственно.
Мутационный анализ для наборов праймеров TP53
ПЦР были подготовлены к экзоны 5-8 TP53
, который гибридизоваться с фланкирующими интронов каждого экзона. См дополнительный файл 1 для последовательностей праймеров. Первая смесь ПЦР состояла из буфера, 200 мкМ дНТФ, 1,5 мМ MgCl <суб> 2, 0,8 мкМ праймера, 1 нг /ДНК мкл пробы и 0,5 Ед Платиновый Taq (Invitrogen, Калифорния, США) в 25-мкл конечного объема , После первоначальной денатурации при 94 ° С в течение 2 мин, 40 циклов ПЦР проводили при 94 ° С в течение 30 сек, 54 ° С в течение 1 мин и 72 ° С в течение 1 мин, а затем на конечной стадии удлинения при 72 ° С в течение 10 минут. После подтверждения ПЦР-продуктов с помощью электрофореза в агарозном геле, последовательность ПЦР проводили с использованием v1.1 Cycle Sequencing Kit BigDye терминаторы (Applied Biosystems, Калифорния, США). Реакционную смесь состояла из буфера, 2 мкл первой ПЦР-продукта, 0,15 мкМ праймера и 0,5 мкл BigDye Terminator V 1,1 в 10-мкл конечного объема. После первоначальной денатурации при 96 ° С в течение 1 мин, 25 циклов ПЦР проводили при 96 ° С в течение 10 сек, 50 ° С в течение 5 сек и 60 ° С в течение 4 мин. Прямой и обратной последовательности были определены с использованием ABI PRISM 3100 Genetic Analyser (Applied Biosystems). Мутации были выявлены путем сравнения этих образцов к ссылочной последовательности ДНК (GenBank номером доступа: HSU94788). Аллельное статус был определен с использованием отношения мутанта пиковых уровней дикого типа в профилях секвенирования.
Статистический анализ
Таблицы сопряженности были проанализированы с помощью точного критерия Фишера и тестов Cochran-Armitage. Отличия 2 односторонних испытаний с P < 0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
иммуногистохимии для выявления p53
окрашиванием образцов были сочтены избыточно экспрессируется только тогда, когда%? 70 опухолевых клеток показали, положительно окрашенных ядер при просмотре в области с низким энергопотреблением. Восемь из 13 intramucosal видов рака, все 6 подслизистой виды рака и 4 из 9 поздних стадий рака диффузно показали положительное окрашивание ядер для p53 (Таблица 1). Фокусном картина окрашивание наблюдалось в случае # A7. Образец считается отрицательным (представляющий дикого типа TP53
), когда наблюдалось наличие разреженной, спорадической и слабого ядерного окрашивания в &л; 5% ядер. Нулевой картина окрашивание наблюдалось в тех случаях, # A1, A4 и # # A8, предлагая нонсенс мутации TP53
[23].
Хромосомной CGH
Двадцать пять образцов из 25 случаев (10 слизистых оболочек , 6 подслизистой и 9 на поздних стадиях рака), были использованы для хромосомной CGH. Все эти образцы были получены из intramucosal поражений, которые показали самый низкий сорт атипизм.
В то время как 4Q + произошло в большинстве (6/9 случаев) передовых бадьи, он не был обнаружен в 16-ти ранних бадьи (P = 0,0005). Другой значительно отличается изменение хромосомного между ранней и поздних стадий рака был 11q +, который был обнаружен в 11 из 16-ти раннего рака и 2 из 9 поздних стадий рака (P = 0,0414). Из 10 исследованных intramucosal кадки, 3 показал потерю 8q (8q-) и /или коэффициента усиления 17p (17p +), в то время как 7 и 2 показали 8Q + и 17p-, соответственно. Из 15 образцов слизистых оболочек инвазивных кадки исследованных, 3 и 4 показали 8q- и 17p + соответственно, в то время как 7 и 6 показали 8Q + и 17p- соответственно.
Массив ГКГ
Тридцать один проб из 22 случаев (13 слизистых оболочек, 3 подслизистого и 6 на поздних стадиях рака) были оценены с использованием массива CGH (Рисунок 1). Образцы ДНК были получены из intramucosal и /или инвазивных поражений. Рисунок 1 Массив CGH данные MYC и TP53 и TP53 данных секвенирования в ранних и поздних трубчатых аденокарциномы желудка. Ранние виды рака делятся на intramucosal (м) раков и подслизистых (см) рака. Обратитесь к Таблице 1 для номера образцов. Цифрами представляют собой средние тест /ссылки на отношения массива CGH. Значительные потери и выгоды обозначены красным и зеленым, соответственно. Дикого типа (вес) и мутации в экзоне (ех) и интрон (МСО) из TP53
обозначены желтым и серым, соответственно.
Как показано на рисунке 1 и в таблице 2, сопутствующая потеря MYC <бр> (MYC
-) и были обнаружены в 9 из 13 intramucosal кадки усиление TP53
(TP53 +
), 7 из 9 образцов слизистых оболочек инвазивных кадках, 1 из 3 инвазивных образцов подслизистых рака и ни один из 6 инвазивных образцов на поздних стадиях рака. Шаблон MYC +
и /или TP53
- был обнаружен в 3 из 13 intramucosal раков, ни один из 9 образцов слизистых оболочек инвазивных кадках, 1 из 3 инвазивных образцов 3 подслизистых рака и 5 из 6 инвазивные образцы 6 передовых cancers.Table 2 Изменения MYC
и TP53
копировать номера в ранних и поздних трубчатых аденокарциномы желудка
Опухоль глубина

Mucosa

подслизистой основы

MP или глубже -

<й>
<й>
<й>
части
слизистой
SM

Мукозные части |
Deep

cCGH
(10)
aCGH
(13)
cCGH
(6)
aCGH
(3)
aCGH
(3)
cCGH
(9)
aCGH
(6)
aCGH
(6)
8q(MYC
)+
7
2 (2 *) страница 3 0
1 (1 *) 4
0
3 (2 *)
8q (MYC
) - <бр> 3
9 (9 **) страница 3 из 2 (2 **)
1 (1 **)
0
5 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) + страница 3 из 10 (9 **) страница 3 из 2 (2 **)
2 (1 ** )
1
6 (5 **)
1 (0 **)
17p (TP53
) - страница 2 3 (2 *)
2
0
1 (1 *) 4
0
4 (2 *)
SM, подслизистой; Депутата, мышечная. cCGH и aCGH, chromosome- и массив на основе сравнительной геномной гибридизации; Цифрами в скобках указывают общее число исследованных образцов. Жирным шрифтом выделены буквы показывает результаты aCGH. Звездочки в скобках указывают сопутствование из MYC
+ и TP53
-. Двойные звездочки указывают сопутствование из MYC
-. И TP53
+
Основываясь на общем массиве шаблонов CGH, были обнаружены генетические клоны быть прерывистым и непрерывным между слизистых оболочек и инвазивных частей в 5 передовых и 3 подслизистых рака соответственно. Как показано на рисунке 2, образец из слизистых оболочек части # S3 показал 4p-, 4q-, 8q +, 9p-, 13q +, 15q-, 18q-, 20q + и Y-, в то время как образец из инвазивной части # S3 унаследовали те же аберраций от слизистого части, показали дополнительные аберраций (2q-, 7р +, 8p-, 10p + 14Q + и 20q +) и потерял 4p- и 22q +. В # S1, коэффициенты усиления 1Q, 14Q, 19 и 20, а также потери 18q был распространен в слизистой оболочке и подслизистой образцах, хотя коэффициенты усиления 1Q, 14Q, 19q и 20 в подслизистой были немного меньше, чем значимый уровень. В # S2, общее изменение в обоих слизистых оболочек и подслизистой частей был прирост 20p. Образец подслизистого показал дополнительный прирост в 10p, 12 и 13q и потерь в 3К, 4, 5, 8P, 9P, 9q, 10q, 12p, 14Q, 16 и 19P. Образец слизистых оболочек показали потерю 18q, который был восстановлен в образце подслизистого, возможно, uniparental дисомия [24, 25]. В # A1, A3, # # # A4, A8 и A9 #, аберраций в образцах из слизистых оболочек части не были обнаружены в тех инвазивных частей. В # A2, непрерывность генетических линий не может быть оценена из-за отсутствия значительных копирования количество изменений в слизистой оболочке части. Рисунок 2 Массив CGH профилей. Хромосомные регионы число копий аберраций в слизистой оболочке части # S3 (s3m) включены в основном в тех, в инвазивной части (S3i), в то время как те, в слизистой оболочке части # A1 (A1M) отличаются от инвазивной части (a1I)
TP53
анализ мутаций
мутации были выявлены в 7 из опухолей, которые были исследованы в анализе последовательности экзонов 5-8 TP53
(Рисунок 1, таблица 3):. 1 в 10 intramucosal рака, 2 из 3-х подслизистых рака и все 4 на поздних стадиях рака (только инвазивные части). Во всех этих 7 опухолях TP53
аллель гемизиготной за исключением 1 рака intramucosal (# M12) с гетерозиготной рисунком для экзона-8 мутации (рисунок 3) и диффузных или нулевой образец для р53, как показано иммуногистохимии. Ни один ТР53
мутация была обнаружена в образцах p53-, как показано на рисунке 4. В р53 + /нуль выборок, 2 из 15 образцов слизистой части показали TP53
мутации, в то время как 6 из 7 образцов инвазивной части показал TP53
мутации (P = 0,0023). В 1 из подслизистых раков, показывая TP53
+ и гемизиготной мутации (инвазивная часть # S2), TP53
+ может отражать uniparental полисомию [24, 25] .table 3 число копий изменения TP53
и MYC
и р53 иммунореактивности в образцах, прошедших тестирование на мутации анализа
Дело №

MYC

TP53

Мутация TP53exons 5-8

мутантный аллель

MDM2

p53 IHC

M3 <бр> -
+
вес
-
-
M4
-
+
вес
нс
-
M5
-
+
вес
нс
+
M6
-
+
вес
-
+
M7
нс <бр> +
вес
-
+
M8
-
+
вес
нс
-
M9
-
+
вес
нс
+
M10
-
+
вес
-
+
M11
нс
- <бр> вес
нс
-
M12
+
-
экзоны 5/8
геми /гетеро
нс
+
М13
+
-
NA
нс
-
S1M
-
+
вес
-
+
S1i
-
+
вес
-
+
S2m
-
+
вес
-
+
S2i
нс
+
экзон 7
геми
нс
+
s3m
нс
нс
экзон 8
геми
нс
+
S3i
+
-
экзоны 5/6/8
геми
нс
+
A1M
-
+
вес
-
нуль
a1I
+
-
NA
-
нуль
Л2т
-
+
вес
нс <бр> +
A2i
+
-
экзон 8
геми
нс
+
A3M
-
+
вес
нс
+
A3i
-
-
экзон 5
геми
-
+
A4M
-
+
мас
-
нуль
A4i
нс
нс
экзон 5
геми
нс
нуль
A8m
нс
+
вес
-
нуль
A8i
+
-
NA
нс
нуль
A9m
-
+
вес
-
+
A9i
+
+
экзон 6
геми
нс
+
нс = не имеет существенного значения; вес = дикого типа; NA = не облагаемых; геми = гемизиготной; . Гетеро = гетерозиготных
M12, экзон 5: R175H (CGC > CAC), C182C (ТГК > TGT), S183L (TCA > TTA); экзон 8: R267R (CGG > CGA)
S2i, экзон 7: C242F (ТГК > TTC)
S3M, экзон 8: R273S (ВКТ > АГТ)
S3i, экзон 5: A161V ( НКУ > GTC); экзон 6: T211I (ACT > ДТО); экзон 8: R273S (ВКТ > АГТ)
A2i, экзон 8: R273 H (ВКТ > CAT)
A3I, экзон 5: A161T (ССАГПЗ > ACC)
A4i, экзон 5: IVS5 + 1G > T
A9i, экзон 6: Y220C (ТАТ &GТ; TGT)
Рисунок 3 TP53 модели мутаций. Гетерозиготная мутации со значительным компонентом дикого типа в экзоне 8 (А) и гемизиготном мутации в экзоне 5 (В) в качестве intramucosal рака (# М12). Мутации в других опухолей обследованных были гемизиготной, как показано на C # (S2).
Рисунок 4 Отношения между p53 иммуногистохимии, скопировать число TP53 и горячей точке мутации TP53. Для "р53 +" и "p53-", см легенду в таблице 1. "TP53
+", "TP53
-" и "TP53
п /с" указывают на значительный выигрыш от копирования номера и потери , не и никаких существенных изменений, соответственно. Цифрами в скобках указано количество образцов в инвазивные частях. Цифрами приведены примеры номеров. Цифрами в скобках указано количество образцов в инвазивные частях. NA = не облагаемых.
С другой стороны, в образцах слизистых оболочек, диффузная /нуль картина часто ассоциируется с дикого типа TP53
. Для объяснения этого вывода Mdm2
количество копий исследовали с помощью массива данных CGH. Из общего числа 22 образцов, начисленной за TP53
анализа мутаций, MDM2
показал потерю копирования число в 10 из 14 образцов с дикого типа TP53
и 1 из 8 образцов с TP53
мутации . (р = 0,0237)
Обсуждение
В intramucosal кадках, хромосомная ГКГ показал 8q- и /или 17P + на частоте 3 из 10 опухолей обследованных; эти изменения были более распространены в предыдущем исследовании, которое используется случайное мечение заливную [18]. В настоящем исследовании, 8q ​​+ часто обнаруживается как в intramucosal рака (7/10) и инвазивного рака (7/15); Тем не менее, вышеупомянутый предыдущие данные редко показали 8Q +. Эти расхождения могут отражать различия в методах маркировки, используемых; Результаты CGH с Ником мечения перевода или случайной маркировки грунтовочного сравнивали с FISH сигналов, и было установлено, что ник этикетирование перевод нередко показали ложноположительные прибыли [26]. Тем не менее, используя те же условия маркировки, существенные различия в частоте 4д + и 11q + были обнаружены между ранними и на поздних стадиях рака, возможно, отражает различия в генетических линиях между ними. Хромосомные CGH данные на поздних стадиях рака в данном исследовании были совместимы с предыдущими хромосомных данных, полученных с помощью CGH нику маркировки перевода для продвинутых ШС (т.е. 17p- и 8q + были весьма распространены) [27-30].
Хотя клинически различимых ранние виды рака, как правило, считаются предшественниками поздних стадий рака [5, 6], то intramucosal и инвазивные части передовых кадки часто показывали искажённые числа копий MYC
и TP53
в этом исследовании: MYC
- и TP53
+ в 5 из 6 образцов слизистой части, как обычно, как и в intramucosal рака, исследованных и MYC
+ и /или TP53
- в 5 из 6 образцов инвазионных частей. Кроме того, на основе общего массива CGH образцу слизистых оболочек и инвазивных опухолей частей, разрывная генетической линии был обнаружен в 5 из 6 на поздних стадиях рака. Таким образом, представляется, что опухолевые клоны в слизистой частях на поздних стадиях рака, не были предшественниками инвазивной части, но минут intramucosal рака, которые, вероятно, сосуществовали с инвазивного рака. Сообщалось, что несколько минут рака являются более распространенными в кадках, чем в недифференцированных типа ШС [31]. В развитых кадки, то intramucosal предшественником инвазивного компонента, возможно, были потеряны из-за изъязвления в опухоли, или предшественник не рассматривался, поскольку он не совпадает с частью самого низкого сорта атипизм, к которой исследование слизистых оболочек часть инвазивной ШС был заключен в настоящем исследовании.
с другой стороны, в подслизистых рака, непрерывное генетическое происхождение было обнаружено во всех 3-х подслизистых опухолей обследованных. Это может быть потому, что часть слизистых оболочек в основном сохраняется в начале ШС и потому, что через слизистую оболочку предшественника инвазивного компонента показал самый низкий класс атипизм и не был исключен из настоящего массива анализов. Через слизистую оболочку и инвазивные части имели общие области число копий аберраций с согласующихся контрольными точками, а большинство изменений в слизистой оболочке части были включены в те инвазивной части. . На уровне генов, числа копий MYC
и TP53
согласуются между слизистыми и подслизистых частями в 2-х из 3-х подслизистых рака
The TP53
- и /или MYC
+ образец был обнаружен не только в инвазионных частях 1 из подслизистых видов рака и большинство поздних стадиях рака, но и в 3 из 13 intramucosal видов рака. В этих опухолей р53 иммуногистохимии показали, диффузный или нулевой (мутация) шаблон (таблицы 1 и 3), предполагая, что TP53
- может отражать LOH и возникший в результате инактивации дикого типа TP53
. Секвенирование анализ мутации горячих точках TP53
показали, что гемизиготной мутации (т.е. мутации и LOH) были обнаружены в слизистой оболочке образцов 1 из 3 intramucosal рака и рака 1 подслизистого с TP53
- шаблон, а а также инвазивных частей 4 на поздних стадиях рака, которые были информативными для TP53
анализа мутаций. Такая инактивация дикого типа TP53
, что может вызвать дальнейшее нестабильность генома, неоднократно сообщалось в передовых ШС [15, 17]. MYC
локуса гена Известно также, что часто показывают выгоды от копирования с цифрами или уточнениями в различных поздних стадиях рака [32]. MYC
+ /ТР53
- таким образом, может быть оправдано в качестве подписи агрессивного GC
Сообщалось, что LOH, а также мутации TP53
чаще обнаруживаются в продвинутых ШС, чем в начале. ШС [17, 33], и что, в начале ШС, TP53
мутации чаще обнаруживаются в подслизистых кадках, чем в intramucosal кадки [34, 35]. Эта тенденция наблюдалась и в настоящем исследовании, но мутации анализы показали, что горячая точка мутации не были обнаружены в слизистой части опухолей, за исключением рака 1 intramucosal (# M12). Кроме того, потеря копирования количество MDM2
, который играет определенную роль в деградации р53 [36], коррелирует с диффузным р53 избыточной экспрессии в отсутствие TP53
мутации. Это явление едва сообщается, но может быть одним из механизмов р53 избыточной экспрессии в начале ГКС.
В ранних видов рака, может быть в состоянии покоя и инвазивные компоненты, а также истинные предшественники поздних стадий рака. Среди ранних видов рака, рассмотренных в настоящем исследовании, инвазивная часть 1 опухоли (# S3) и 3 intramucosal рака (# M11, M12 и # # M13) показал подпись агрессивного рака (MYC
+ и /или TP53
-) и частые мутации TP53
; Тем не менее, в 1 рака подслизистого (# S1), инвазивные части показали подпись бездействующего рака (MYC
- /TP53
+).

• GASTRICHIP: D2 резекция и гипертермическая внутрибрюшинного химиотерапии при местно-распространенном раке желудк…
• Временные характеристики влияния алкоголя прекращения на риск развития рака желудка - мета-анализ