Odkrivanje karcinoembrionski antigen RNA v krvi z uporabo kvantitativne realnem času povratne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo napovedati ponovitve želodčne odkrivanje adenocarcinoma

od karcinoembrionski antigena RNK v krvi s kvantitativnimi in v realnem času povratne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo napovedati ponovitve adenokarcinomom želodca
Abstract
Ozadje
obstoj obtoku tumorske celice (CTCs) v periferni krvi kot pokazatelj tumorja ponovitve ni jasno določena, zlasti za bolnike z rakom želodca. Opravili smo retrospektivno analizo odnosa med CTCs v periferni krvi pri prvi diagnozi in clinicopathologic ugotovitev pri bolnikih z rakom želodca.
metod
Vzorci krvi so bili pridobljeni od 123 bolnikov karcinomom želodca pri prvi diagnozi. mRNA je bila vzeta in povečala za karcinoembrionski antigen (CEA) mRNA odkrivanje uporabo v realnem času RT-PCR. Redne 3-mesečne nadaljnji pregledi vključeni meritve serum CEA in slikanje.
Rezultati
minimalni prag za popravljene CEA mRNA rezultat [(CEA mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6] je bil določen na 100. petinštirideset od 123 bolnikov (36,6%) so bili pozitivni za CEA mRNA izražanja. CEA mRNA izraz bistveno povezana s stopnjo T in pooperativnem stanju ponovitve (P
= 0,001). Periodično bolezni je bilo v 44 123 primerih (35,8%), in 25 od teh (56,8%) so bili pozitivni na CEA mRNA. Od teh bolnikov, CEA mRNA je bolj občutljiv kot v serumu CEA na navedbo ponovitve. Triletno preživetje brez bolezni bolnikov pozitivnih za CEA mRNA je bistveno slabši od bolnikov negativnih za CEA mRNA (P
< 0,001). Samo histološki razred in CEA mRNA pozitivnost bili neodvisni dejavniki za preživetje brez bolezni s pomočjo multivariatne analize.
Sklepi
CEA mRNA število kopij v periferni krvi pri prvi diagnozi je značilno povezana z ponovitve bolezni pri bolnikih z adenokarcinomom želodca. Zdi se Real-time RT-PCR za odkrivanje ravni CEA mRNA pri prvi diagnozi, da je obetaven napovednik za ponovitve bolezni pri bolnikih z adenokarcinomom želodca.
Ozadje
raka želodca ostaja glavni vzrok umrljivosti za rakom po celem svetu v 20. stoletju. Edino dokazano kurativnega zdravljenja je kirurška resekcija vseh bruto in mikroskopskih poškodb. Kljub doživlja kurativno želodca, vključno s podaljšanim bezgavk seciranje in adjuvantno kemoterapijo, rak ponovi v obeh regionalnih kot tudi oddaljenih območij v večini bolnikov [1]. Diagnoza ponovitve s skupno nadaljnjega ukrepanja protokolov je običajno, ki v pozni fazi, ki je do neke mere izključuje možnost učinkovitega zdravljenja [2]. Zdi Nadzor obtoku tumorske celice (CTCs), ki ponujajo večje možnosti za zgodnejše diagnoze ponavljajočih se bolezni.
koncept preiskuje metastaz proces v periferni krvi izvira iz 19. stoletja, ko T.R. Ashworth prvi opisal pojav CTCs in S. Paget hipotezo ne-naključno vzorec raka metastasization (za "seme in zemljo" teorijo) [3, 4]. Pozneje je bil maligni narava CTCs potrdili dokazuje, da imajo tumorsko specifični kromosomske nepravilnosti [5, 6], in da rastejo ex vivo, kot celičnih linij z malignim fenotipa [7]. Več pristopov za odkrivanje CTCs so bili opisani in se lahko razvrstijo v metodah, ki temeljijo na PCR in citometrijo metod [8].
S prihodom kvantitativne realnem času PCR tehnike [9], natančna kvantifikacija ciljnega zaporedja je postalo mogoče . Kvantitativni PCR omogoča preiskovalcem, ne le s tehničnimi prednostmi, ampak tudi z aplikativnih prednosti, kot so opredelitev ločilne vrednosti, ki kažejo mRNA ravni izražanja klinično pomembno pri bolnikih z rakom, v primerjavi z zdravimi osebami. PCR v realnem času ponuja tudi možnosti za korelacijo ciljno zaporedje obremenitve s kliničnim izidom [10] ali odziv na zdravljenje [11].
CEA, prvotno opisan kot antigen raka debelega črevesa s tumorjem povezanega, smo klonirali leta 1987 in je zdaj priznana kot član superdružine imunoglobulina beljakovin [12]. Številne študije so poročali odkrivanje želodčnih celic v krvi [13], kostnega mozga [14], in peritonealno pranje [15] bolnikov z rakom želodca z uporabo PCR v realnem času za CEA mRNA.
Cilj te študije je bil oceniti učinkovitost CEA mRNA PCR v realnem času tehnike za zgodnje odkrivanje tumorjev ponovitve. Za dosego tega cilja, je razmerje med klinično ponovitve in krvne ravni CEA mRNA predoperativno bila preučena pri bolnikih adenokarcinomom želodca.
Metode
je bolnikov
Pisna privolitev pridobljena iz vsakega bolnika o uporabi vzorcev krvi za raziskave v skladu s smernicami ustanove v naši bolnišnici. Od februarja 2002 do decembra 2006 je bilo skupno 123 zaporednih bolnikov z adenokarcinomom želodca na Cancer Center Sun Yat-sen University vključenih v to raziskavo. Vsi bolniki so prejeli radikalno resekcijo in D2 limfadenektomijo. V najem so bili na voljo za odkrivanje 15 bezgavke. Ne peritonealno širjenje bilo mogoče najti. so potrebne jasne evidence sprememb v serumu CEA in ocenjevanje slikanje pred operacijo in vsake tri mesece po operaciji za. Bolniki, ki so imeli pozitiven bezgavko bilo priporočljivo, da prejemajo adjuvantno kemoterapijo, a na koncu le triinosemdeset bolniki doživela adjuvantno kemoterapijo. Sheme vključeni CAPOX (kapecitabin + oksaliplatinu, 16 zadev, z mediano ciklu 4), folfox6 (56 primerih, z mediano cikel 6), taksola + cisplatin (4 primerih, z mediano ciklu 4), taksola + 5FU /CF (fluorouracil /levkovorinu, 7 primerov, s srednjo cikel 6). Ponavljajoča bolezen, vključno z lokalnimi povratka in oddaljenih zasevkov, je bila odkrita s izračunani pregledu tomografije. Nove poškodbe, ki jih slikanja odkrite v nadaljnjih sestankov so bili šteti za ponovitev. Biopsija ni bilo storjeno rutinsko ugotoviti histološke ponovitve. Vse slikanje je ocenil vsaj dveh neodvisnih opazovalcev, vključno z radiologi. Mediana spremljanja obdobje je bilo.
Krvnih vzorcev
Vzorci krvi so bili zbrani ob prvi diagnozi en ali dva dni pred operacijo 37.0 mesecev (razpon, 3.0-73.6 mesecev). Prve 3 ml krvi smo zavrgli, da se prepreči onesnaženje povrhnjice, nato pa je bil vzorec krvi 5-ml pridobljen iz periferne vene. Periferne vzorce krvi, pridobljene iz 30 nerakave prostovoljci bolnikov so bili uporabljeni kot negativni kontroli
vse bolnike, ki pisno privolitev.; smo pridobili posebno dovoljenje za uporabo vzorca krvi. Odobritev je bila študija pridobijo iz neodvisnih odborov za etiko na Cancer Center Sun Yat-Sen University. Študija je bila izvedena v skladu z etičnimi standardi Svetovnega zdravniškega združenja Helsinški deklaraciji.
Predobdelave vzorcev krvi
Krvni vzorci so bili zbrani v ceveh, ki vsebujejo EDTA. obdelava vzorca je bila izvedena v 2 urah po odvzemu krvi. Kri smo prenesli v 30 mL falcon cev in centrifugiramo pri 1800 obratih na minuto pri sobni temperaturi 20 minut. Serum smo odstranili in celice resuspendiramo v 5 ml slanice in 0,3 ml RNA kasnejši raztopine. Po dobro mešanju smo zmes krvnih celic vodi preko noči pri 4 ° C in shranili pri -80 ° C do uporabe. Ekstrakcijo
RNA in cDNA sintezi
Celotna RNA perifernih krvnih vzorcih je bila ekstrahirana z uporabo RNAprep mobilni Kit (Tiangen Peking, Kitajska) po protokolu, ki ga določi proizvajalec. integriteta RNA smo preverili s pomočjo elektroforeze in kvantitativno določimo z absorpcijo pri 260 in 280 nm s pomočjo UV-vidne spektrofotometra (Beckman Coulter Du ® 800, Fullerton, CA). Za reverzno transkripcijo, 1 ug celotne RNA, 1 u.l oligo (dT) 15 in 1 xl dNTP smo razredčili v 10 ml RNaze proste vode, inkubiramo 10 minut pri 37 ° C in 1 p 25 mmol /l EDTA bil dodan. 11-xl Alikvot reakcijsko zmes inkubirali 10 minut pri 65 ° C in hitro ohladimo na ledu 2 minuti. cDNA smo shranili pri -80 ° C do uporabe. cDNA Sintezo smo izvedli po metodi TIANScript M-MLV (Tiangen Biotech, Peking, Kitajska).
Celične linije
Za pripravo CEA-specifično RT-PCR, dve celičnih linij, SW-480 (rak kolona celična linija ) in so bile uporabljene SC-7901 (rak celična linija želodca). Limfociti so bili zbrani iz zdravih prostovoljcev brez epitela malignosti. Po smo limfocite izoliramo iz periferne krvi z gradientno centrifugiranje, je mononuklearne celične plast zberemo. Celične linije so bile serijsko razredčene (10-krat) in 2 x 10 7 do 5 x 10 7 limfocitov dajejo karcinomom: razmerja limfocitov, od 1:10 do 1:10 7.
CEA mRNA Analiza v realnem času, količini PCR
kvantitativne PCR smo izvedli s pomočjo Sequence Detector System, ABI PRISM 7500 (Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System). PCR in TaqMan sonde so namenjeni uporabi programa 1.0 software Primer Express. V tem testu je bil vzdrževalni gen gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) uporablja kot notranje kontrole za normalizacijo razlike v integriteto in celotne količine RNA ekstrahiranega. PCR teste v realnem času za GAPDH in CEA je bilo narejeno v ločenih ceveh. Vrednosti CEA mRNA so bile prilagojene glede vrednot GAPDH mRNA in relativne CEA mRNA rezultati so bili predstavljeni kot (CEA mRNA /GAPDH mRNA) x 10 6 za vsak vzorec.
5 xl cDNA vzorca je bila uporabljena za realnem PCR v realnem času v 20! Li reakcijski zmesi, ki vsebuje 10 pmol ustreznih primerji (Invitrogen sodelovanju, Japonska) in 5 sonde pmol TaqMan (Invitrogen sodelovanju, Japonska). Reporter barvilo (6-karboksi-fluorescein: FAM) je kovalentno vezana na 5 'koncu sonde in dušilec barvilo (6-karboksi-tetrametil-rodamin: Tamra) je vezana na 3' koncu sonde. Temperaturni profil se uporablja za pomnoževanje bilo takole: denaturacijo za 1 cikel pri 95 ° C za 10 minut, čemur sledi 40 ciklov pri 95 ° C 10 sekund, pri 60 ° C 15 sekund in 72 ° C za 5 sekund. Količinska je storila ABI Prism 7500 Sequence detektor sistema. Vsak niz vzorcev in serijsko razredčenih zunanjih kontrol smo pomnožili v dveh izvodih. Povprečna vrednost dvojnikov je bil uporabljen kot kvantitativno vrednostjo.
CEA specifičnih oligonukleotid primer je bil oblikovan na podlagi poročila, ki ga Gerhard et al.
[16]. Sekvence so bile: 5'-TGTCGGCATCATGATTGG-3 '(čut) in 5'-GCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' (antisense). Fluorescentne in LC-Red zaporedja sonda, ki se uporabljajo za identifikacijo CEA so bili: 5'-CCTGAAATGAAGAAACTACACCAGGGC-fluorescein in 5'-LC-Red 640-GCTATATCAGAGCAACCCCAACCAGC-fosfat
v realnem času spremljanja PCR smo dosegli z merjenjem fluorescence signala na koncu. kaljenja fazo vsakega cikla. Primerski sekvence, uporabljene za GAPDH pomnoževanje bili: 5'-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3 '(čut) in 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (antisense). Sekvence sonda, ki se uporabljajo za identifikacijo GAPDH so bili: 5'-TCAACAGCGACACCCACTCCT-fluorescein in 5'-LC-Red 640-CACCTTTGACGCTGGGGCT-fosfat
Določanje CEA v vzorcih seruma
Pre-operativnih serumskih vzorcih smo uporabili tudi za analiziranje. tumorski marker CEA z uporabo komercialno na voljo encimsko imunsko komplet (Cobas Core EIA, Roche, Basel, Švica). . Patološki nivo Kritična je bila določena na 5 ng /ml v serumu CEA
Statistične analize
je bila uporabljena statistična metoda Kaplan-Meier za analizo kliničnih značilnosti in ponovitvi; Razlike so bile ocenjene s testom log-ranga. Napovedni dejavniki so pregledali univariatne in multivariatne analize (log-rang test za univariatno analizo in Cox sorazmernih tveganj regresijski model, nazaj stopenjsko (pogojno LR) za multivariatne analize). V hi-kvadrat in Fisher natančne teste smo uporabili za statistično analizo. Vse statistične analize so bile izvedene z SPSS16.0. . Vse vrednosti P so bili 2-repa, in raven pomembnosti, je določena na 0,05
Rezultati
Klinične značilnosti
123 bolnikov, vpisanih v raziskavi, starih od 28 do 84 let (povprečna, 57.11 let, mediana, 59 let) in razmerje med moškimi in ženskami je bilo 82:41 (tabela 1). Uprizoritev je bila izvedena v skladu s klasifikacijo Tumor-Node-Metastasis (TNM) Skupnega odbora ameriškega raka (AJCC, spremenjen 1997). Štiriindvajset tumorji so se nahajala v Kardije, 3 v želodčni fundusa, 44 v želodčni korpusa, 45 v želodčni antruma, 5 vključen celoten želodec in 2 pripadal ostankov raka želodca (tabela 1) .table 1 Clinicopathologic značilnosti in CEA * mRNA izraz, ki ga v realnem času RT-PCR zaznali
lastnosti
Skupno število
(N = 123)

CEA mRNA
vrednosti P
Pozitivna
(n = 45)
Negativni
(n = 78)

Age
≤40
13
3
10
41-50
20
9
11
51-60
39
9
30
61-70
42
18
24
> 70
9
6
3
0,063
Sex
ženski
41
12
29
Male
82
33
49
0.234
Tumor
T1
10
6
4
T2
16
3
13
T3
73
26
47
T4
24
10
14
0.001
limfnega vozla
n0
31
11
20
N1
43
15
28
N2
29
8
21
N3
20
11
9
0,261
Patološka TNM # oder
sem
16
7
9
II
21
6
15
III
51
17
34
IV
35
15
20
0,623
Histologija podtip
dobro diferenciran adenokarcinom
3
1
2
Zmerno razlikujejo adenokarcinom
27
7
20
Slabo diferenciran adenokarcinom
93
37
56
0,418
Serum CEA pogoj
Pozitivna
30
11
19
Negative
93
34
59
0,992
Ponavljanje
Da
44
25
19
Ne
79
20
59
0,001
Načini ponovitve
lokalno ponovitev
8
4
4
trebušno votlino
9
6
3
jetra
8
5
3
medeničnega
6
3
3
več strani
10
5
5
drugi
3
2
1
0,959
* karcinoembrionalen antigen
# TNM pomeni tumor-node-metastaze
občutljivosti odkrivanje CEA mRNA, ki ga v realnem času RT-PCR
CEA mRNA je bila odkrita v SW -480 in SC-7901 celične linije. Spodnja meja detekcije je bila koncentracija 10 tumorskih celic na 10 7 limfocitov. Konvencionalna nested RT-PCR je bila za potrditev občutljivosti produkta RT-PCR.
CEA mRNA izraz v krvi
je CEA mRNA izraz odkriti v 9 od 30 (30,0%) bolnikov nerakave in srednjo popravljena ocena CEA mRNA je bila 7,5 (razpon 0-92,5). Najvišja vrednost popravljene rezultatom CEA mRNA pri bolnikih brez malignosti bila 92,5, tako da mejna vrednost 100 je bil uporabljen v tej študiji. Z uporabo te mejna vrednost, je bilo 45 bolnikov (36,6%), diagnosticiran kot CEA mRNA-pozitiven. Povprečni popravljena CEA mRNA Ocena [(CEA mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6] od 123 bolnikov je bila 37,510.0 (razpon, 0-3,695,652.1) kopije Slika 1 je pokazala porazdelitev (CEA mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6 v tej skupini bolnikov. Slika 1 Razporeditev CEA nivo ekspresije. Ratio sredstva (CEA mRNA /GAPDH mRNA) × 106. Glede na razmerje nekaterih bolnikih je bilo nič, smo dodali 0,5 razmerju.
Povezava med CEA mRNA izražanja in clinicopathologic funkcije
CEA mRNA izraz ni bilo povezano z starost, spol, stopnja N, oder TNM, histološki podtip in serum CEA stanje (tabela 1). Vendar pa so imeli bolniki s pooperativno ponovitve bistveno višji odstotek CEA mRNA pozitivno kot tisti brez tumorja ponovitve (P
= 0,001) (tabela 1). Poleg tega, globina tumor tudi v pozitivni korelaciji s CEA mRNA izražanja (P
= 0,001).
Razmerje med ponovitvijo in CEA mRNA izražanja kot tudi serum CEA
Način ponovitve vključuje 8 lokalne ponovitve, 9 trebuhu razširjanje razen jeter, 8 metastaz jeter, 6 medenici metastaze, 3 drugih mest metastaz in 10 več mest metastaz. Ni velika razlika med izrazom CEA mRNA in načinu ponovitve (tabela 1).
Periodično bolezni je bilo v 44 od 123 primerov (35,8%). Petindvajset od teh bolnikov (56,8%) je bilo CEA mRNA-pozitiven. Po drugi strani pa je bilo le 14 bolnikov s ponavljajočimi bolezni (31,8%) pozitivna za predoperativno serumu CEA. Posebnosti CEA mRNA in serumu CEA, da kažejo na ponovitev bilo 74,7% in 79,9%, v tem zaporedju. (Tabela 2) .table 2: Primerjava med CEA * mRNA in serumu CEA pri napovedovanju ponovitve

CEA mRNA
serum CEA

Positive

Negative

Positive

Negative

Recurrence
Yes
25
19
14
30
Ne
20
59
16
63
P
0.001
0,152
X
2
12,088
2.050
Občutljivost (%)
56,8
31,8
Specifičnost (%)
74,7
79,7
* karcinoembrionalen antigen
Univariatna in multivariatna analiza 3-letno preživetje brez bolezni
s 5-letno celokupnega preživetja je bila 58,9% in 3-letno bolezen brez preživetja je bila 63,9%. Oba univariatne in multivariatne analize smo uporabili za oceno dejavnikov, povezanih s preživetjem brez bolezni. Po univariatno analizo, starost, globina tumorja, vozlišča metastaze, so histološko razred, stopnja TNM, CEA mRNA pozitivnost in serum CEA pozitivnost močno povezana s preživetjem brez bolezni (P
= 0,031, < 0,001, 0,001, 0,022, < 0,001, 0,001, 0,045 oz) (tabela 3). Multivariatna regresijska analiza je pokazala, da je le histološka razred in CEA mRNA pozitivnost neodvisni dejavniki za preživetje brez bolezni (P
= 0,047 in 0,020, oziroma, preglednica 4). Triletni brez bolezni stopnja preživetja za CEA bolnikov mRNA pozitivnih so bistveno nižje kot pri CEA mRNA negativnih bolnikih (43,9% proti 74,1%, v tem zaporedju, P
= 0,001, slika 2) .table 3 Univariatna analiza z boleznijo preživetje brez želodčnega raka
Parameter
brez bolezni preživetje, P valuea
Starost
< 59 vs. ≥59
0,031
Spol
Moški vs. ženskega
0.433
CEA mRNA
(+) v primerjavi z (-)
0.001
Serum CEA
(+) v primerjavi z (-)
0,045
histološki razred
dobro /zmerno vs. slabo
0,022
pT
pTis /PT1 vs. PT2 /PT3 /PT4
< 0,001
pN
(+) proti (-)
0.001
Stage
1/2 vs 3/4
< 0,001
adjuvantno kemoterapijo agenti
CAPOX vs. mFOLFOX6 vs. Taxol + DDP vs. taksola + 5-FU /CF
0.850
na Log-rank test
Tabela 4 multivariatne analize preživetja brez bolezni pri karcinomu želodca
Dejavniki
Značilnosti
razmerje ogroženosti
95% CI
P value

Unfavorable

Favorable

Age
≥59
<59
1.018
0.986-1.050
0.273
Histological grade
Poorly
Well/moderately
0.412
0.171-0.990
0.047
pT
2/3/4
Tis/1
1.673
0.100-8.690
0.947
pN
(+)
(-)
2.030
0.264-15.611
0.497
Stage
3/4
½
1.437
0.124-16.613
0.771
CEA mRNA
(+)
(-)
2,243
1,138-4,424
0,020
Serum CEA
(+)
(-)
1.130
0,582-2,194
0,717
CI, interval zaupanja; pT, globina tumorske invazije
Slika 2 bolezni prostih preživetje bolnikov po CEA mRNA izražanja. Triletno preživetje brez bolezni CEA bolnikov mRNA pozitivnih je bila bistveno nižja od CEA bolnikov mRNA negativne (43,9% proti 74,1%, v tem zaporedju; P
= 0,001).
Razprava
v polfinale količinskih narava tradicionalne tehnologije PCR se je bilo težko razlikovati osnovna raven izražanja genov v normalnih tkiv povečane ravni izražanja genov pri bolnikih z rakom, s čimer se poveča skrb za lažno pozitivne rezultate [17]. V naši raziskavi smo PCR v realnem času za CEA mRNA uporabili za preiskavo možnost periferne krvi kot vira za odkrivanje CTC in napovedovanje ponovitve raka pri bolnikih želodca karcinomom. Realnem času kvantitativna analiza CEA mRNA pri bolnikih z rakom je pogosto temelji na CEA mRNA pozitivnosti, ki se določi z uporabo stopnje cutoff [13]. CEA mRNA lahko odkrijemo pri bolnikih z benigno boleznijo, kot tudi zdravih prostovoljcih, tako da je raven cutoff se navadno določi z največjim izražanja v non-malignih bolnikov [18, 19]. Setoyama T et al. ugotovila, da je bila največja vrednost CEA mRNA pri bolnikih brez malignosti 8.6, so torej določiti mejno vrednostjo kot 9,0 [20]. Schuster R et al. [21] Uporablja se tudi največjo vrednost zdravih prostovoljcev ozadju kot mejne vrednosti za odkrivanje CEA mRNA pri bolnikih z rakom debelega črevesa. V naši raziskavi smo uporabili tudi največjo vrednost popravljene rezultatom CEA mRNA pri bolnikih brez malignosti kot mejno vrednostjo. Z vzpostavitvijo mejna vrednost 100 za normaliziranih ravni CEA mRNA, lahko ločimo bolnikov z rakom, pri bolnikih brez raka in zato bolj zanesljivo upoštevati izražanje CEA mRNA kot označevalec v obtoku tumorske celice.
Ugotovili smo, da 10 bolniki z T1 tumor, je bilo 6 bolnikov pozitivno CEA-mRNA izraz. Toda ni bil zapis ponovitev najdemo v 10 bolnikov. Zdi se, da je med izražanja CEA mRNA in ponovitve v T1 tumorja nobene povezave. Težko je razložiti visoko pozitivno stopnjo CEA-mRNA pri bolnikih T1, vendar smo ugotovili, da je bil CEA mRNA izraz nizka pri bolnikih T1 6, od 4320 izvodov na 44 600 izvodov. Ikeguchi M [22] poroča, da je 12,5% od faze I pri bolnikih želodca karcinom izražena CK20 mRNA in so menili, da je bila povzročena z majhnim CK20 izražanja v perifernih belih krvnih celic.
Nekaj ​​poročil ocenil stanje CTCs v želodcu bolnikov karcinom pred obdelavo. Ikeguchi in Kaibara poročali [23], ki jih ni bilo mogoče najti nobenih rakavih celic v periferni krvi iz nezdravljenih bolnikih želodca karcinomom. Avtorji predvidevali, da rakave celice niso prikazani omogoča enostavno migrirajo v periferno kri iz primarnih tumorjev pri bolnikih z nezdravljeno raka želodca. Nasprotno, Miyazono sod.
[24] kaže, da je pozitivna stopnja za CEA mRNA bolnikov želodca karcinomom 8,8% pred operacijo. Prisotnost CTCs pred zdravljenjem in njen odnos s kliničnim izidom tako še vedno sporna. V tej študiji smo ocenili klinični pomen CTCs v krvi pred operacijo s pomočjo realnem času RT-PCR za odkrivanje izražanje CEA mRNA. Pozitivna stopnja CEA mRNA pred kakršnimkoli zdravljenjem, je 36,6%. Dodatna datoteka 1 kaže pozitivno stopnjo mRNA markerjev iz literature za detekcijo tumorskih celic, ki jih v realnem času RT-PCR.
O'Sullivan et al.
[25] predlagal, da se pred operacijo odkrivanje micrometastasis odražajo bodisi prehodna prašijo celic, metastatskega potenciala ali rezidualne bolezni. V tej raziskavi smo ugotovili, da so bile CTCs odkrili v krvi pred zdravljenjem v odnosu do ponovitve. Več poročila so pokazala, da je bil pred operacijo odkrivanje obtoku rakave celice jasen pokazatelj slabega preživetja bolnikov, saj je veliko primerov, v obtoku rakave celice predoperativno pokazala bodisi razširjeno limfnega vozla metastaze ali oddaljenih metastaz, zato je prognoza teh bolnikov je bila slaba [26-28 ]. V sedanji raziskavi smo ugotovili, da je bil izraz CEA mRNA bistveno povezana z ponovitve bolezni. Poleg tega so imeli bolniki s pozitivnim CEA mRNA krajše 3-letno izide preživetje brez bolezni. Incidenca ponovitev je bila bistveno višja pri bolnikih, pozitivnih za CEA mRNA kot pri tistih, negativen.
Občutljivost CEA mRNA izražanja napovedati ponovitev je le 56,8%. Devetnajst sedemdeset osem bolnikov (24,4%) z negativno CEA ekspresijo mRNA imela tumor ponovitev. Setoyama et al.
[20] je pokazala, da je imela 8 69 (11,6%) požiralnika karcinom bolniki z negativnim CEA ekspresijo mRNA tumorja ponovitev in 6 bolnikov je imelo limfnega vozla ponovitev. Ena od pogosto uporabljajo obrazložitev odpovedi odkrivanja je, da so v obtoku celice niso homogeno porazdeljeni in ne stalno skladišče v promet [29, 30]. Poleg tega je idealen oznako (ni nezakonski izražanje v krvi visoka ekspresija v tumorskih celicah), še ni bila ugotovljena. Beyond CEA mRNA, drugi prepisi, vključno citokeratina (CA) 18 [31], matrika metaloproteinaze (MMP) -7 [32], CK 20 [33], Urokinaza aktivator plazminogena receptor (uPAR), CK 19 in CK 7 [ ,,,0],34], so poskusili kot potencialnih označevalcev CTCs. Vendar pa je treba tumorske celice lopa je relativno redek dogodek. Torej, ali je periferna kri primeren predal za zgodnje odkrivanje micrometastases je še vedno sporen. Drugi predeli, kot so kostni mozeg ali trebušne votline je znano, da zagotavljajo višjo stopnjo zaznavanja, verjetno zaradi večjega števila tumorskih celic predloženega [35-37].
Eno pomembno vprašanje je lažno pozitivni izraz CEA mRNA. Dvajset bolnikov (44,4%), ki so imeli pozitiven CEA mRNA izraz ni zapis ponovitev pri spremljanju. Eden od razlogov je lahko relativno kratka spremljanje obdobje.
Druga možnost je, je to lahko zelo smiselno, ker nekaj karcinoma celice shed v krvni obtok uspelo vzpostaviti metastatsko bolezen [25]. Te v obtoku rakave celice morda ne pripisujejo v oddaljene organe in morda ne rastejo. V zadnjem času, Méhes et al.
[38] raziskali morfologijo krožijo rakavih celic in ugotovila, da je večina v obtoku raka dojk celic v stanju apoptoze. V periferni krvi rakavih pacientov opazili obstoj tumorsko celico-limfocitov kompleksa [39]. Te ugotovitve kažejo, da bi makrofagov ali limfocitov igrajo pomembno vlogo pri indukciji obtoku tumorskih celic apoptoze in protitumorsko imunski odziv gostitelja. Te imuniziralo makrofagov lahko senzibilizirati limfocite na citotoksični T gostiteljice, in občutljive limfociti T lahko napadejo preostale micrometastatic lezij rakavih pacientov [23]. Da bi razjasnili to hipotezo, so nadaljnje preiskave v zvezi s povezavo med obstojem obtoku rakavih celic in gostiteljskega imunskega odziva so potrebni.
Sedanja študija je bila retrospektivna analiza, in bolniki, ki bi morali prejemajo adjuvantno kemoterapijo niso bili določeni pred časom. Na splošno je bilo priporočeno pri bolnikih, ki so imeli pozitiven bezgavko prejeli adjuvantno kemoterapijo. Do sedaj ni standardna merila za adjuvantno kemoterapijo raka želodca na Kitajskem. Naša raziskava je pokazala, da je število kopijo CEA mRNA v periferni krvi na prvi diagnozi močno povezana s ponovitve bolezni pri bolnikih adenokarcinomom želodca. V vidika ponovitve, smo zato predlagamo, da bolniki, ki imajo pozitiven CEA mRNA izraz predoperativno prejemajo adjuvantno kemoterapijo po radikalni resekciji.
Sklepe
V tej študiji je bila občutljivost CEA mRNA višja kot v serumu CEA. Poleg tega je v skladu z multivariatno regresijsko analizo, je neodvisen dejavnik za ponovitev CEA mRNA pozitivnost. Sedanja študija je potrdila, da je bila ta metoda obeta za zgodnje odkrivanje CTCs pri bolnikih z razjedo karcinomom pred začetkom zdravljenja; bolniki s pozitivnim CEA mRNA imajo lahko večje tveganje za ponovitev tudi po kurativno resekcijo. Vendar pa je velika randomizirana študija o možnostih upravičeno opredeliti vlogo CEA mRNA odkrivanja v krvi
Kratice
RT-PCR.
Reverzne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo

CTCs:
Obratna tumorskih celic
CEA:
karcinoembrionalen antigen
CA19-9:
Ogljikovi hidrati antigen 19-9
TNM:
Tumor-Node-Metastasis
AJCC:
Skupnega odbora ameriškega raka
GAPDH:
gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza
MMP-7:
Matrix metalo--7


uPAR.
urokinaza aktivator plazminogena Receptor
deklaracij
Zahvala
teh del je financirala National Natural Science Foundation Kitajske donacije 30672408, Guangzhou urad za znanost in tehnologijo podelitev 2006Z3-E0041 in Sun Yat-sen University 985 Program Začetek sklad (Kitajska). S hvaležnostjo zahvalil članom osebja v oddelku za onkologijo in GI kirurgije onkologijo Onkološkega Sun Yat-sen University Cancer Center za njihov predlog in pomoč
Electronic dodatno gradivo
12967_2009_529_MOESM1_ESM.DOC Dodatna datoteka 1:. Podatki iz literature za detekcijo tumorskih celic, ki jih v realnem času RT-PCR za mRNA označevalcev. Kaže pozitivno stopnjo mRNA markerjev iz literature za detekcijo tumorskih celic, ki jih v realnem času RT-PCR. (DOC 58 KB) avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev prvotna predloženih spisov za slike.

• DNA polymeraseη protein izraz napoveduje odziv na zdravljenje in preživetje bolnikih z metastatskim adenokarcinomom želodca, zdravljenih s kemoterapijo na podlagi oksaliplatina
• Učinkovitost UZ pri preverjanju postavitev nazogastrično cevko pri bolnikih z nizko stopnjo zavesti, v centru, v sili