Aptikta karcinoembrioninius antigenas RNR kraujyje, naudojant kiekybinius realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininę reakciją prognozuoti pasikartojimo skrandžio adenocarcinoma

aptikimas karcinoembrioninį antigeno RNR kraujo naudojant kiekybinius realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininę reakciją prognozuoti pasikartojimo skrandžio adenokarcinoma
Anotacija
faktai
cirkuliuojančių vėžinių ląstelių (CTCs) periferiniame kraujyje kaip naviko atsinaujinimo rodiklio egzistavimą nebuvo aiškiai nustatytas, ypač skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Mes atlikome retrospektyvinę analizę tarp CTCs santykius periferiniame kraujyje pirminės diagnozės ir clinicopathologic išvadas pacientams su skrandžio karcinoma.
Metodai
Kraujo mėginiai buvo imami iš 123 skrandžio karcinoma sergantiems pacientams pirminės diagnozės. iRNR buvo išgaunamas ir išplėtotos karcinoembrioninį antigeno (CEA) iRNR aptikimo naudojant realaus laiko RT-PGR. Periodiniai 3 mėnesių stebėjimo tyrimai įtraukti serumo CEA matavimus ir vaizdo.
Rezultatai Viesbutis The minimali riba ištaisyti CEA mRNR rezultatas [(CEA mRNR /GAPDH iRNR) × 10 6] buvo nustatytas 100. keturiasdešimt penki 123 pacientų (36,6%) buvo teigiami CEA iRNR raiška. CEA iRNR raiška patikimai koreliavo su T etape ir pooperaciniu pasikartojimų būklės (P, pervežimas = 0,001). Atsinaujinusi liga buvo nustatyta 44 123 atvejais (35,8%), o 25 iš jų (56,8%) buvo teigiamas CEA mRNR. Iš šių pacientų CEA iRNR buvo jautresni nei CEA serumą nurodant pasikartojimo. Trejų metų išgyvenimo be ligos pacientų, kuriems atsirado CEA mRNR buvo žymiai skurdesnės nei pacientų neigiamas CEA mRNR (p
< 0,001). Tik histologinis kokybės ir CEA iRNR pozityvumo buvo nepriklausomi veiksniai ligos reiškinių išgyventas naudojant daugiamatę analizę.
Išvados
CEA mRNR kopijuoti skaičių periferiniame kraujyje pirminės diagnozės buvo reikšmingai susijęs su ligos pasikartojimo skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų. Realaus laiko PGR aptikimas CEA mRNR lygių pirminės diagnozės atrodo perspektyvus prognozuoti ligų pasikartojimo skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų.
Faktai
Skrandžio vėžio išliko pagrindinė priežastis, dėl mirtingumo nuo vėžio visame pasaulyje per 20 amžiuje. Vienintelė įrodyta gydomųjų yra chirurginis visų bendrųjų ir mikroskopinių pažeidimų. Tačiau, nepaisant to, vyksta gydomasis pašalintas skrandis, įskaitant pratęstas limfmazgių skrodimo ir palaikomąja chemoterapija, vėžys atsinaujina tiek regioniniu, taip pat tolimų svetainėse dauguma pacientų [1]. Diagnozė pasikartojimo su bendra tolesnių priemonių protokolai paprastai yra pagaminti vėlesniame etape, kuris tam tikra prasme, draudžia veiksmingos [2] gydymo galimybę. Priežiūros cirkuliuojančių vėžinių ląstelių (CTCs), atrodo, pasiūlyti didesnį galimybę anksčiau diagnozuoti pasikartojančių ligos.
Iš tiria metastazavusiu procesą periferiniame kraujyje koncepcija atsirado 19 amžiuje, kai T.R. Ashworth pirmasis aprašė CTCs reiškinį, ir S. Paget hipotezę yra ne atsitiktinis modelio vėžio metastasization (toliau "sėklos ir dirvos" teoriją) [3, 4]. Vėliau, piktybinė pobūdis CTCs buvo patvirtinta parodančią, kad jos turi auglio-specifinis chromosomų nukrypimus nuo normos [5, 6] ir, kad jie auga ex vivo kaip ląstelių linijų piktybinis fenotipo [7]. Keli požiūriai į aptikti CTCs buvo aprašyta ir gali būti suskirstyti į PGR metodais ir citometrijos metodais [8].
Su kiekybinio realiu laiku atėjimas PGR metodai [9], tiksliai kiekybiškai taikant tiriamos sekos tapo įmanoma , Kiekybinė PGR suteikia tyrėjams ne tik techninių privalumų, tačiau taip pat su taikomosios privalumų, pavyzdžiui, Ribinės vertės, nurodant, palyginti su sveikų iRNR raiškos lygius kliniškai reikšmingas pacientams, sergantiems vėžiu apibrėžimą. Realaus laiko PGR taip pat suteikia su koreliacijos tikslas sekos apkrovos su klinikiniais rezultatais [10] arba atsako į gydymą [11] galimybes.
CEA, iš pradžių apibūdinamas kaip naviko susijęs storosios žarnos vėžio antigeno, buvo klonuotas 1987 metais ir yra dabar pripažinta kaip imunoglobulino baltymo superfamily [12] nario. Daugelis tyrimų, pranešė aptikti skrandžio ląstelių kraujyje [13], kaulų čiulpų [14] ir pilvaplėvės plovimo [15] skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, naudojant realaus laiko PGR už CEA mRNR.
Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti CEA iRNR realaus laiko PGR metodu ankstyvo aptikimo naviko atsinaujinimo efektyvumą. Norėdami pasiekti šį tikslą, tarp klinikinės pasikartojimo ir kraujyje CEA mRNR santykiai prieš operaciją buvo nagrinėjamas skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų.
Metodai
Pacientų
Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno paciento dėl kraujo mėginių naudojimo tyrimai pagal įstaigoje patvirtintas gaires mūsų ligoninę. Nuo 2002 vasario ir 2006 metų gruodį iš 123 pacientų eilės, kurių skrandžio adenokarcinoma ne Cancer Center Sun Yat-sen Universiteto viso buvo įtrauktos į šį tyrimą. Visi pacientai gavo radikalų rezekcija ir D2 limfmazgiai. Tuo nuomos 15 limfmazgiai buvo galima aptikti. Nėra pilvaplėvės sklaida buvo rasta. buvo reikalaujama Išvalyti įrašai CEA pokyčių serume ir vaizdo įvertinimo prieš operaciją ir kas tris mėnesius po operacijos. Pacientai, kurie turėjo teigiamą limfmazgis buvo rekomenduojama gauti adjuvantinis chemoterapija, bet galiausiai tik aštuoniasdešimt trys pacientai patyrė adjuvantinis chemoterapija. Į režimai įtraukti CAPOX (kapecitabinas + oksaliplatinos, 16 atvejų, kai vidutinis ciklo 4) folfox6 (56 atvejų, kai vidutinis ciklo 6) Taxol + cisplatina (4 atvejais, kai vidutinis ciklo 4), Taxol + 5FU /CF (fluorouracilu /leukovirino, 7 atvejai, kai vidutinis ciklo 6). Atsinaujinusi liga, įskaitant vietos atkryčio ir tolimų metastazių, buvo aptikta kompiuterinės tomografijos tyrimas. aptiktų vaizdo patikrinimui tolesnius susitikimus Nauja pažeidimai buvo laikomi pasikartojimo. Biopsija nebuvo padaryta paprastai nustatyti histologiniai pasikartojimo. Visi vaizdo buvo įvertintas ne mažiau kaip dviejų nepriklausomų stebėtojų, įskaitant radiologai. Vidutinė stebėjimo laikotarpio trukmė buvo 37,0 mėnesiai (diapazonas, 3.0-73.6 mėnesių).
Kraujo mėginiai
Kraujo mėginiai buvo surinkti pirminės diagnozės vieną ar dvi dienas prieš operaciją. Pirmieji 3 ml kraujo buvo išmesti, kad būtų išvengta epidermio užteršimo, ir tada 5-ml kraujo mėginys buvo gautas iš periferinę veną. Periferinio kraujo pavyzdžiais, gautais iš 30 ne vėžiu savanorių buvo naudojami kaip neigiamos kontrolės
Visi pacientai pateikė rašytinį informuoto sutikimo.; mes gauti atskirą sutikimą, skirtas panaudoti pagal kraujo mėginyje. Tyrimas patvirtinimas buvo gautas iš nepriklausomų etikos komitetuose Cancer Center Sun Yat-Sen universitete. Tyrimas buvo vykdomas laikantis etinių standartų Pasaulio medikų asociacijos deklaracijos Helsinkyje.
Išankstinio apdorojimo kraujo mėginių
kraujo mėginiai buvo surinkti EDTA, kurių sudėtyje yra vamzdžių. Pavyzdys apdorojimas buvo atliktas per 2 valandas po kraujo panaikinimą. Kraujo buvo perkeltas į 30-ml sakalas vamzdžio ir centrifuguojamas esant 1800 rpm ir ties kambario temperatūroje 20 minučių. Serumo buvo pašalintas, ir ląstelės buvo resuspenduotos 5 ml fiziologiniu tirpalu ir 0,3 ml RNR vėliau tirpalo. Po sumaišymo gerai, kraujo ląstelių mišinys laikomas per naktį 4 ° C ir saugomi -80 ° C temperatūroje, kol naudojamas.
RNR gavybos ir sintezei
Iš viso RNR periferinio kraujo mėginių buvo rasti naudojant RNAprep Cell komplektas (Tiangen Pekinas, Kinija) po numatyto protokolo gamintojas. RNR vientisumas buvo patikrintas elektroforezės ir kiekybiškai 260 ir 280 nm, naudojant UV-matomas spektrofotometru absorbcija (Beckman Coulter "Du ® 800, Fullerton, CA). Už atvirkštinės transkripcijos, 1 mikrogramų viso RNR, 1 pL oligo (dT) 15 ir 1 pL dNTP buvo praskiesti 10 mikrol RNazės-laisvojo vandens, inkubuojami 10 minučių 37 ° C temperatūroje ir 1 pL 25 mmol /L EDTA buvo pridėta. 11 pL alikvotinė reakcijos mišinio buvo inkubuojamos 10 minučių 65 ° C temperatūroje ir greitai atšaldyti ant ledo 2 minutes. kDNR buvo laikomi -80 ° C temperatūroje, kol naudojamas. kDNR sintezės atlikta naudojant TIANScript M-MLV metodą (Tiangen Biotech, Pekinas, Kinija).
Mobilaus ryšio linijos
pasiruošti CEA-konkretų RT-PCR, dvi ląstelių linijos, SW-480 (storosios žarnos vėžio ląstelių linija ) ir buvo naudojami SC-7901 (skrandžio vėžys ląstelių linija). Limfocitai buvo surinkti iš sveikų savanorių be epitelio piktybinių navikų. Po limfocitai buvo išskirti iš periferinio kraujo gradiento centrifuguojant, mononukleininėje ląstelių sluoksnis buvo surinkta. Mobilaus ryšio linijos buvo serijiniu praskiesti (10 kartų) 2 × 10 7 5 × 10 7 limfocitai duoti karcinoma ląstelių: limfocitų santykis svyruoja nuo 1:10 iki 1:10 7.
CEA iRNR analizė realaus laiko kiekybine PGR
kiekybine PGR buvo atliekama naudojant sekos detektorius sistema ABI PRISM 7500 (Applied Biosystems 7500 Greitas realaus laiko PGR sistema). PGR pradmenis ir TaqMan zondai buvo sukurta naudojant Gruntas Express 1.0 programinės įrangos. Siame bandyme, į namų ūkį genas gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH) buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės normalizuoti svyravimus vientisumą ir bendrą sumą ekstrahuotos RNR. Realaus laiko PGR tyrimai, skirti GAPDH ir CEA buvo padaryta atskirais vamzdžiais. CEA iRNR vertės buvo tikslinamos prieš GAPDH mRNR vertybių ir santykiniai CEA iRNR balai buvo pristatytas kaip (CEA mRNR /GAPDH iRNR) × 10 6 kiekvieno mėginio.
5 pL mėginio kDNR buvo naudojamas Real- laiko PGR per 20 iL reakcijos mišinio, sudaryto iš 10 pmol atitinkamų gruntų (Invitrogen bendradarbiavimo, Japonija) ir 5 pmol TaqMan zondas (Invitrogen bendradarbiavimo, Japonija). Reporteris dažų (6-karboksi-fluoresceino: FAM) buvo, kovalentiškai sujungtas su 5 'galo zondo, ir kvenčeris dažų (6-karboksi-tetrametil-Rodamininių: Tamra) buvo pridėtas prie 3' galo zondu. Temperatūros kreivė naudojamas amplifikacijai buvo taip: denatūraciją 1 ciklo ne mažesnis nei 95 ° C temperatūroje 10 minučių, po to 40 ciklų, esant 95 ° C temperatūroje 10 sekundžių, 60 ° C temperatūroje 15 sekundžių, ir 72 ° C temperatūroje 5 sekundes. Kiekybinis buvo padaryta ABI PRISM 7500 seka detektoriaus sistema. Kiekviena mėginių ir serijinės sumažintą išorės kontrolės rinkinys buvo papildytas dviem egzemplioriais. Vidutinis vertė dublikatų buvo naudojamas kaip kiekybinio vertės.
CEA konkrečių oligonukleotidas gruntas buvo sukurta remiantis Gerhard kt ataskaitoje.
[16]. Sekos buvo: 5'-TGTCGGCATCATGATTGG-3 '(pojūtis) ir 5'-GCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' (Priešprasminis). Liuminescencinės ir LC-raudona probe sekas naudojami CEA identifikavimo buvo: 5'-CCTGAAATGAAGAAACTACACCAGGGC-fluoresceino ir 5'-LC-Raudona 640-GCTATATCAGAGCAACCCCAACCAGC-fosfato
Realaus laiko PGR stebėsena buvo pasiektas matuojant fluorescencijos signalą pabaigoje. iš atkaitinimo etapą kiekvieno ciklo. Pradmenys sekos naudojami GAPDH amplifikacijos buvo: 5'-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3 '(pojūtis) ir 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (Priešprasminis). Zondo sekas naudojami GAPDH identifikavimo buvo: 5'-TCAACAGCGACACCCACTCCT-fluoresceino ir 5'-LC-Raudona 640-CACCTTTGACGCTGGGGCT-fosfato
nustatymas CEA kraujo serumo mėginiuose
prieš operaciją serumo mėginiuose taip pat buvo naudojamas tiriant. navikas žymeklis CEA naudojant komerciškai prieinamą imunofermentinį rinkinį (COBAS Core PAV, Roche, Bazelis, Šveicarija). . Patologinė Apipjaustymas lygis buvo nustatytas 5 ng /ml CEA koncentracija serume
statistines analizes
buvo naudojamas analizuojant klinikinius funkcijas ir pasikartojimo Kaplan-Meier metodu statistinis metodas; skirtumai buvo apskaičiuoti su log-rank testą. Prognostiniai veiksniai buvo nagrinėjami pagal Vienaveiksnės ir daugiamatis analizių (log-rank testas pagal vieną požymį analizės ir Cox proporciniai pavojų regresijos modelį, atgal pakopinių (sąlyginis LR) už Dispersinės analizės). Chi-kvadrato ir Fisher tikslūs testai buvo naudojami statistinei analizei. Visi statistinės analizės buvo padaryta su SPSS16.0. . Visi P vertės buvo 2-tailed ir reikšmingumo lygis buvo nustatytas 0,05
rezultatai
Klinikiniai požymiai
123 tyrime dalyvavusių pacientų tyrime amžiaus nuo 28 iki 84 metų (vidurkis, 57.11 metų; mediana, 59 metų), o vyrų santykis su moterų buvo 82:41 (1 lentelė). Skirstymas buvo atlikta pagal Amerikos jungtinio komiteto vėžio navikas mazgas-Metastazė (TNM) klasifikaciją (AJCC, peržiūrėta 1997). Dvidešimt keturi navikai buvo įsikūręs Cardia, 3 skrandžio dugno, 44 ​​skrandžio corpus, 45 skrandžio antralinėje dalyje, 5 apėmė visą skrandį, ir 2 priklausė likutis skrandžio karcinoma (1 lentelė) .table 1 Clinicopathologic funkcijos ir CEA * iRNR raiška aptinkama realaus laiko AT-PGR
Info
viso
(n = 123)

CEA mRNR
P verte

Teigiamas
(n = 45)
Neigiama
(n = 78)

Amžius
≤40
13
3
10
41-50
20
9
11
51-60
39
9
30
61-70
42
18
24
> 70
9
6 3 0,063
Lytis
Moteris
41
12
29
Male
82
33
49
0,234
naviko
T1
10
6
4
T2
16
3
13
T3
73
26
47
T4
24
10
14
0,001
Limfmazgių
N0
31
11
20
N1
43
15
28
N2
29
8 21
N3
20
11
9
0,261
patologinė TNM # etapas
Aš
16
7
9
II
21
6
15
III
51
17
34
IV
35
15
20
0,623
Histologija potipis
Na diferencijuota adenokarcinoma
3
1
2
Vidutiniškai diferencijuoti adenokarcinoma
27
7
20
Prastai Diferencijuoti adenokarcinoma
93
37
56
0,418
Serumas CEA būklė
Teigiamas
30
11
19
Neigiama
93
34
59
0,992
Pasikartojimas
Taip
44
25
19
Nėra
79
20
59
0,001
režimai pasikartojimo pervežimas vietos pasikartojimo pervežimas 8
4
4
pilvo ertmę
9
6 3
Ilgaamžis
8
5
3
dubens
6
3 3

kelias svetaines
10
5
5
kiti
3
2
1
0,959
* karcinoembrioninius antigenas
# TNM reiškia naviko limfmazgius metastazių
aptikimo jautrumą CEA mRNR realaus laiko AT-PGR
CEA iRNR buvo aptiktas SW -480 ir SC-7901 ląstelių linijos. Apatinė aptikimo riba buvo 10 vėžinių ląstelių koncentracija už 10 7 limfocitų. Tradiciniai lizdinė AT-PGR dirbo patvirtinti AT-PGR produkto jautrumą.
CEA iRNR raiška kraujyje
CEA iRNR raiška buvo nustatyti 9 iš 30 (30,0%) ne vėžiu sergantiems pacientams, ir vidutinė vertė ištaisyti CEA iRNR rezultatas buvo 7,5 (diapazonas, 0-92,5). Didžiausia vertė patikslinta CEA iRNR partitūros pacientams be piktybinių navikų buvo 92,5, todėl ribinė vertė 100 buvo naudojamas šiame tyrime. Naudojant šią ribinė vertė, 45 pacientų (36,6%) buvo diagnozuotas CEA iRNR-teigiamas. Vidutinė ištaisyti CEA iRNR balas [(CEA iRNR /GAPDH iRNR) × 10 6] iš 123 pacientų buvo 37,510.0 (klasės, 0-3,695,652.1) kopijos 1 pav parodė (CEA iRNR /GAPDH mRNR) paskirstymą × 10 6 šios grupės pacientams. 1 pav CEA ekspresijos lygio pasiskirstymas. Ratio priemonės (CEA iRNR /GAPDH iRNR) × 106. Atsižvelgiant į tai, kai kuriems pacientams santykis buvo lygus nuliui, mes pridėjome 0,5 santykiu.
Sąryšis tarp CEA mRNR ekspresijos ir clinicopathologic funkcijų
CEA iRNR raiška nebuvo įtakojantys amžius, lytis, N etapas, TNM stadija histologinis potipis ir serumo CEA būklė (1 lentelė). Tačiau pacientams, sergantiems pooperaciniu pasikartojimo buvo žymiai didesnis procentas CEA mRNR teigiamą nei be naviko atsinaujinimo (P
= 0,001) (1 lentelė). Be to, naviko gylis taip pat teigiamai koreliuoja su CEA iRNR išraiškos (P, pervežimas = 0,001).
Ryšys tarp pasikartojimo ir CEA iRNR išraiškos taip pat serumo CEA
pasikartojimo režimu apima 8 vietos pasikartojimo, 9 pilvo sklaidą išskyrus kepenis, 8 metastazių kepenyse, 6 dubens metastazių, 3 kiti svetainių metastazių ir 10 kelias svetaines metastazių. Nėra didelio skirtumo tarp CEA iRNR raiška ir pasikartojimo (1 lentelė) režimu.
Atsinaujinusi liga buvo nustatyta 44 iš 123 atvejų (35,8%). Dvidešimt penkių šių pacientų (56,8%) buvo CEA iRNR-teigiamas. Priešingai, tik 14 pacientai, sergantys atsinaujinusia liga (31,8%) buvo teigiami Priešoperacinės serumo CEA. CEA mRNR ir serumo CEA ypatumus nurodyti pasikartojimo buvo 74,7% ir 79,9%, atitinkamai. .table 2 (2 lentelė) Palyginimas tarp CEA * mRNR ir serumo CEA prognozuojant pasikartojimo

CEA iRNR
serumas CEA

Positive

Negative

Positive

Negative

Recurrence
Yes
25
19
14
30
Nėra
20
59
16
63
P
0,001
0,152
X
2
12,088
2,050
jautrumas (%)
56,8
31,8
specifiškumas (%)
74,7
79,7
* karcinoembrioninius antigenas
vienmatės ir daugiamatis analizė 3 metų ligos reiškinių išgyventas
5 metų bendras išgyvenamumas buvo 58,9%, o 3 metų liga išgyvenamumas buvo 63,9%. Abu Vienmatės ir daugiamatės analizės buvo naudojamas įvertinti aplinkybes, susijusias su išgyvenimą iki ligos progresavimo. Pagal vieną požymį analize, amžius, naviko gylio, mazgų metastazės histologinis kokybės, TNM stadija CEA iRNR pozityvumo ir serumo CEA pozityvumo buvo reikšmingai susiję su išgyvenimą iki ligos progresavimo (p
= 0,031, < 0,001, 0,001, 0,022, < 0,001, 0,001, 0,045, atitinkamai) (3 lentelė). Daugiamatė regresinė analizė parodė, kad tik histologinio laipsnio ir CEA iRNR pozityvumo buvo nepriklausomi veiksniai išgyvenimą iki ligos progresavimo (p
= 0,047 ir 0,020, atitinkamai, 4 lentelė). Trejų metų išgyvenimo be ligos kursai CEA iRNR-teigiamiems pacientams buvo reikšmingai mažesnis nei CEA mRNR neigiamų pacientų (43,9%, palyginti su 74,1%, atitinkamai, p = 0,001
, 2 paveikslas) .table 3 vienmatės analizės disease- išgyvenamumas be Skrandžio vėžio
Parametras
ligos reiškinių išgyventas P valuea
Amžius
< 59 vs ≥59
0,031
Lytis
Vyras vs patelės
0.433 CEA iRNR
(+) vs (-)
0,001
Serumas CEA
(+) vs (-)
0,045
histologinis laipsnio
Na /vidutiniškai vs prastai
0,022
pT
pTis /PT1 vs pt2 /PT3 /PT4
< 0,001
pN
(+) vs (-)
0,001
etapas
1/2 vs 3/4
< 0,001
palaikomoji chemoterapija agentai
CAPOX vs mFOLFOX6 vs Taxol + DDP vs Taxol + 5FU /CF
0.850
4 log-rank testas
lentelė Dispersinės analizės apie išgyvenimą iki ligos progresavimo skrandžio karcinoma
veiksniai

Charakteristikos
rizikos santykis
95% PI
P value

Unfavorable

Favorable

Age
≥59
<59
1.018
0.986-1.050
0.273
Histological grade
Poorly
Well/moderately
0.412
0.171-0.990
0.047
pT
2/3/4
Tis/1
1.673
0.100-8.690
0.947
pN
(+)
(-)
2.030
0.264-15.611
0.497
Stage
3/4
½
1.437
0.124-16.613
0.771
CEA iRNR
(+)
(-)
2,243
1,138-4,424
0,020
Serumas CEA
(+)
(-)
1,130
0,582-2,194
0,717
PI, pasikliautinasis intervalas; PT, gylis naviko invazijos
2 pav ligos reiškinių išgyventas pacientų pagal CEA iRNR raiška. Trejų metų išgyvenimo be ligos CEA iRNR-teigiamiems pacientams buvo reikšmingai mažesnis nei CEA iRNR-neigiamų pacientų (43,9%, palyginti su 74,1%, atitinkamai; p
= 0,001).
Diskusijos
pusiau -quantitative pobūdis tradicinės PGR technologija tapo sunku atskirti bazinius genų ekspresijos lygį sveikuose audiniuose dėl padidėjusių genų ekspresijos lygį vėžio, taip didinant tariamai teigiamų rezultatų [17] susirūpinimą. Mūsų tyrimo duomenimis, realaus laiko PGR CEA mRNR buvo ištirti periferinio kraujo kaip galimybę už CTC aptikimo ir prognozavimas vėžio pasikartojimo skrandžio karcinoma sergantiems pacientams šaltinį. Realaus laiko kiekybine CEA iRNR analizė vėžiu sergantiems pacientams dažnai atliekama remiantis CEA iRNR pozityvumo, kuris yra nustatoma naudojant Apipjaustymas lygį [13]. CEA mRNR gali būti aptikta pacientai, sergantys gerybine ligos, taip pat sveikų savanorių, todėl uždaromoji lygiai yra paprastai nustatomas pagal maksimalų raiškos nepiktybinių pacientų [18, 19]. Setoyama T ir kt. Nustatyta, kad didžiausia vertė CEA mRNR pacientams be piktybinių navikų buvo 8,6, jie, todėl nustatyti ribinė vertė kaip 9,0 [20]. Schuster R et al., [21] taip pat naudoti didžiausią vertę sveikais savanoriais fone kaip ribinę vertę už CEA iRNR aptikti storosios žarnos vėžiu sergantiems pacientams. Mūsų tyrimo duomenimis, mes taip pat naudojamas didžiausią vertę ištaisyti CEA iRNR partitūros pacientams be piktybinių navikų, kaip ir ribinei vertei. Sukuriant ribinė vertė 100 normalizuotų CEA mRNR lygius, galime išskirti vėžiu sergantiems pacientams ne iš vėžiu sergantiems pacientams, todėl labiau pasitikėdami savimi apsvarstyti CEA mRNR išraiška kaip cirkuliuojančių vėžinių ląstelių persekiotoją.
Mes nustatėme, kad 10 pacientams, sergantiems T1 naviko, 6 pacientai turėjo teigiamą CEA-iRNR išraiška. Bet ne pasikartojimo įrašas buvo rastas 10 pacientų. Atrodo, kad tarp CEA iRNR išraiškos ir pasikartojimo T1 naviko nėra santykiai. Ji yra sunku paaiškinti aukštą teigiamą pajamų normą CEA-mRNR T1 pacientams, tačiau mes nustatėme, kad CEA mRNR išraiška buvo labai mažas 6 T1 pacientais, kurių iš 4320 kopijų iki 44 600 kopijų. Ikeguchi M [22] pranešė, kad aš 12,5% sceną skrandžio karcinomos pacientai išreiškė CK20 iRNR ir jie manė, kad jis buvo sukeltas nedidelio CK20 išraiška periferinių leukocitų.
Keletas ataskaitas įvertino CTCs būklę skrandžio karcinomos pacientams prieš gydymą. Ikeguchi ir Kaibara pranešė [23], kad jie negalėjo rasti jokių vėžinių ląstelių periferiniame kraujyje nuo neapdorotų skrandžio karcinoma sergantiems pacientams. Autoriai spėja, kad neatrodė vėžinės ląstelės lengvai perkelti į periferinį kraują nuo pirminių navikų pacientams, sergantiems negydyta skrandžio karcinoma. Priešingai, Miyazono et al.,
[24] parodė, kad teigiamas rodiklis CEA mRNR skrandžio karcinoma sergantiems pacientams buvo 8,8% prieš operaciją. Taigi CTCs buvimas prieš gydymą ir jo santykius su klinikinės baigties išlieka kontraversiškas. Šiame tyrime mes įvertino klinikinė reikšmė CTCs kraujyje prieš operaciją naudojant realaus laiko RT-PGR aptikti išraišką CEA mRNR. Teigiamas norma CEA mRNR prieš bet kokį gydymo 36,6%. Papildoma failą 1 rodo teigiamą norma mRNR žymekliai iš literatūra aptikti vėžinių ląstelių realaus laiko RT-PGR.
O'Sullivan et al.,
[25] teigiama, kad Ikioperacinė aptikimas micrometastasis gali atspindėti arba laikinas praliejimo ląstelių, metastazavusiu potencialo, arba likęs liga. Šioje studijoje, mes nustatėme, kad CTCs buvo aptikta kraujyje prieš gydymą, atsižvelgiant į pasikartojimo. Keli ataskaitos parodė, kad Ikioperacinė aptikimo cirkuliuojančių vėžinių ląstelių buvo aiškus žymeklis prastos pacientų išgyvenimo, nes daugeliu atvejų su cirkuliuojančiu vėžines ląsteles prieš operaciją rodo, arba pratęstas limfmazgių metastazių ar nuotolinė metastazių, todėl tokių ligonių prognozė buvo prasta [26-28 ]. Be dabartinio tyrimo, mes nustatėme, kad CEA mRNR ekspresijos buvo reikšmingai susiję su ligos pasikartojimo. Be to, pacientams, sergantiems teigiamą CEA mRNR buvo trumpesnis 3 metų išgyvenimo be ligos baigtį. Pasikartojimo dažnis buvo reikšmingai didesnis pacientų, kuriems atsirado CEA mRNR nei tie neigiami.
CEA iRNR išraiškos jautrumas prognozuoti pasikartojimo tik 56,8%. Devyniolika septyniasdešimt aštuoni pacientai (24,4%), turintys neigiamą CEA iRNR išraiškos turėjo auglio augimą. Setoyama et al.,
[20] parodė, kad 8 iš 69 (11,6%) stemplės vėžys pacientai su neigiamu CEA iRNR išraiškos turėjo naviko recidyvo, o 6 pacientai turėjo limfmazgių pasikartojimo. Vienas dažnai naudojamas aiškinimas aptikimo nesėkmės yra apyvartoje esančių ląstelės nėra vienodai pasiskirsto ir ne nuolat barsto į apyvartą [29, 30]. Be to, puiki gaudantis (ne neteisėtas išraiška kraujyje, didelis išraiška auglio ląstelėse) dar nebuvo rasta. Be CEA mRNR, kiti nuorašai, įskaitant citokeratino (CA) 18 [31], matricos metaloproteinazės (MMP) -7 [32], CK 20 [33], urokinazės tipo plasminogeno aktyvatorius receptorių (uPAR) CK 19 ir CK 7 [ ,,,0],34], buvo išbandyta, kaip galimų žymenų CTCs. Tačiau naviko ląstelių paukštidę turėtų būti gana retas įvykis. Taigi, nesvarbu, ar periferinio kraujo yra tinkamas skyrelis ankstyvam mikrometastazių vis dar prieštaringai. Kiti skyriai, pavyzdžiui, kaulų čiulpų ar pilvo ertmėje yra žinoma, kad teikia didesnes aptikimo normas, tikriausiai dėl didesnio skaičiaus vėžinių ląstelių šiuo [35-37].
Kitas svarbus klausimas yra klaidingai teigiamas išraiška CEA mRNR. Dvidešimt pacientai (44,4%), kurie turėjo teigiamą CEA iRNR išraiška nebuvo įrašyti pasikartojimo tolesnių. Viena iš priežasčių gali būti gana trumpas stebėjimo laikotarpį.
Arba tai gali būti gana pagrįstas, nes keletą karcinomos ląstelės išskiriamas į kraują pavyks užmegzti metastazavusiu liga [25]. Šie cirkuliuojančių vėžinių ląstelių gali ne pridėti į tolimus organus ir gali neauga. Neseniai, Méhes ir kt.
[38] tyrė cirkuliacinių vėžinių ląstelių morfologiją ir nustatė, kad cirkuliuojančių krūties vėžio ląsteles dauguma buvo nuo apoptozės būklę. Periferiniame kraujyje vėžiu sergančių pacientų, buvo pastebėta, auglio ląstelių-limfocitų komplekso buvimas [39]. Šie rezultatai rodo, kad makrofagai ar limfocitai galėtų atlikti svarbų vaidmenį platinant naviko ląstelių apoptozę ir priešvėžiniai imuninį atsaką priimančiosios indukcija. Šie imunizuoti makrofagai gali įjautrinti citotoksinis T limfocitus priimančiosios, ir jautrūs T limfocitai gali atakuoti liekamieji micrometastatic vėžio pakitimų [23] pacientų. Paaiškinti šią hipotezę, kiti tyrimai, susiję su tarp cirkuliuojančių vėžinių ląstelių buvimą ir priimančiosios imuninis atsakas koreliacija yra būtina.
Dabartinė tyrimas buvo retrospektyvinė analizė, ir pacientams, kuriems būtinas adjuvantinis chemoterapija nebuvo nustatyta iš anksto. Paprastai pacientams, kurie turėjo teigiamą limfmazgis buvo rekomenduojama gauti adjuvantinis chemoterapija. Iki šiol nėra standartiniai kriterijai palaikomąja chemoterapija skrandžio vėžiu Kinijoje. Mūsų tyrimas parodė, kad CEA iRNR kopijų skaičiaus periferiniame kraujyje pirminės diagnozės buvo reikšmingai susijęs su ligos pasikartojimo skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų. Be pasikartojimo požiūriu, todėl mes rekomenduojame, kad pacientai, kurie turi teigiamą CEA iRNR raiška prieš operaciją gauna adjuvantinis chemoterapija, po radikalios rezekcijos.
Išvadas
į šį tyrimą, CEA mRNR jautrumas buvo didesnis nei CEA koncentracija serume. Be to, pagal regresijos analizės CEA iRNR pozityvumo buvo nepriklausoma veiksnys pasikartojimo. Dabartinė tyrimas patvirtino, kad toks metodas buvo perspektyvus ankstyvajam CTCs pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, prieš gydymą; pacientams, sergantiems teigiamą CEA mRNR gali turėti didesnę riziką pasikartojimo net po radikalių rezekcija. Tačiau didelė atsitiktinių imčių perspektyvinis tyrimas yra pagrįstas apibrėžti CEA iRNR aptikimo vaidmenį kraujo
Santrumpos
AT-PGR.
Atvirkštinės transkriptazės-polimerazės grandininė reakcija

CTCs: Rīga, Cirkuliacinis vėžinių ląstelių
CEA: Rīga, karcinoembrioninius antigeno
CA19-9:
Angliavandeniai antigeno 19-9
TNM: Rīga, naviko limfmazgius Metastazė
AJCC: Rīga, Amerikos jungtinio komiteto vėžio
GAPDH: Rīga, gliceraldehid 3-fosfato dehidrogenazės
MMP-7: Rīga, Matrica metaloproteinazės-7


uPAR:.
urokinazė tipo plazminogeną Aktyvatorius receptorių
deklaracijų
Padėka
Šios darbo finansavo Nacionalinis gamtos mokslo fondo Kinijos dotacijos 30672408, Guangžou biuras mokslo ir technologijų suteikti 2006Z3-E0041 ir Sun Yat-sen University 985 programos pradžia fondas (Kinija). Mums malonu padėkoti darbuotojų medicininio Onkologijos departamento ir GI chirurgijos onkologijos Sun Yat-sen Universiteto Cancer Center jų pasiūlymą ir pagalba
Elektroninės papildomą medžiagą
12967_2009_529_MOESM1_ESM.DOC Papildoma failą 1:. Duomenys iš literatūros aptikimas vėžinių ląstelių realaus laiko AT-PGR mRNR žymekliais. Tai rodo, teigiamą pajamų normą mRNR žymenų iš literatūros nustatymui naviko ląstelių realaus laiko RT-PGR. (DOC 58 KiB) Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų.

• NKKD polymeraseη baltymo ekspresija prognozuoja atsako į gydymą ir išlikimą metastazavusiu skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų, vartojusių oksaliplatinos pagrindu chemoterapijos
• Iš echoskopija veiksmingumas patikrinti nazogastrinį vamzdžio vietą pacientams su žemu sąmonės avarinio centro