Otkrivanje karcinoembrijski antigen RNK u krvi pomoću kvantitativne realnom vremenu preokrenuti lančana reakcija transkriptaze-polimeraze predvidjeti ponavljanje želučanog adenokarcinoma

Otkrivanje karcinoembrijski antigen RNK u krvi pomoću kvantitativne realnom vremenu preokrenuti lančana reakcija transkriptaze-polimeraze predvidjeti ponavljanje želučanog adenokarcinoma pregled apstraktne pregled pozadine
postojanje cirkulirajućih stanica tumora (CTCs) u perifernoj krvi što je neki pokazatelj recidiva tumora nije jasno utvrđeno, posebice kod pacijenata s rakom želuca. Proveli smo retrospektivnu analizu odnosa između CTCs u perifernoj krvi na početne dijagnoze i kliničko nalaza u bolesnika sa želučanim karcinoma.
metode
Uzorci krvi su dobiveni od 123 pacijenata karcinom želuca kod početne dijagnoze. mRNA ekstrahirana i pojačan za karcinoembrionski antigen (CEA), mRNA detekcije pomoću real-time PCR. Povremene 3 mjeseca praćenja pregledi uključeni mjerenja u serumu CEA i snimanja. Pregled Rezultati
minimalni prag za ispravljena CEA mRNA zabiti [(HUP mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6] je postavljena na 100. četrdeset i pet od 123 bolesnika (36,6%) bili su pozitivni na izrazu HUP mRNA. HUP mRNA značajno korelira s T pozornici i postoperativnom stanju recidiva (P
= 0,001). Recidiva bolesti je pronađena u 44 od 123 slučajeva (35,8%), a 25 od njih (56,8%) bili su pozitivni na CEA mRNA. Od tih pacijenata, HUP mRNA bio osjetljiviji od seruma HUP-u ukazuje na ponavljanje. Trogodišnje preživljenja bez znakova bolesti bez bolesnika pozitivnih na CEA mRNA bila znatno siromašnija od pacijenata negativne za CEA mRNA (P izvoznici < 0,001). Samo histološki stupanj i HUP mRNA pozitivnost bili neovisni faktori za preživljavanje bez bolesti multivarijantnim analizu.
Zaključci
CEA broj kopija mRNA u perifernoj krvi na početne dijagnoze bila značajno povezana s recidiva bolesti u bolesnika želučanog adenokarcinoma. Real-time RT-PCR za detekciju razine CEA mRNA na početne dijagnoze, kako se čini obećavajući prediktor povrata bolesti kod pacijenata želučanog adenokarcinoma. Pregled Pozadina pregled, rak želuca ostao vodeći uzrok smrtnosti od raka u svijetu tijekom 20. stoljeća. Je jedina dokazana Liječenje je kirurška resekcija svih Krupne i mikroskopske lezije. Međutim, unatoč prolazi ljekovito gastrektomije, uključujući i proširena limfnih čvorova disekcije i adjuvantne kemoterapije, rak ponavlja u oba regionalnoj, kao i udaljenim mjestima u većine bolesnika [1]. Dijagnoza recidiva sa zajedničkim follow-up protokola obično izrađena u kasnoj fazi, koja je, u nekoj mjeri, isključuje mogućnost učinkovitog liječenja [2]. Nadzor cirkulirajućih stanica tumora (CTCs) čini se da nudi veću mogućnost ranijeg dijagnosticiranja recidiva bolesti.
Koncept istražuje metastatski proces u perifernoj krvi je nastao u 19. stoljeću, kada T.R. Ashworth prvi opisao fenomen CTCs i S. Paget hipoteza ne-slučajni uzorak metastasization raka (na 'sjemena i tla' teorije) [3, 4]. Nakon toga, maligna priroda CTCs potvrđena je dokazati da oni imaju tumor specifične kromosomske aberacije [5, 6], a da oni rastu ex vivo kao staničnim linijama s malignim fenotipom [7]. Nekoliko pristupa za otkrivanje CTCs koji su opisani i mogu se svrstati u PCR-based metoda i citometrije metode [8].
Pojavom kvantitativnog real-time PCR tehnike [9], precizna kvantifikacija ciljne sekvence postalo je moguće , Kvantitativni PCR omogućuje istražiteljima, ne samo sa tehničke prednosti, ali i aplikativnih prednosti, kao što su definiranje granična vrijednosti znače mRNA razine ekspresije kliničkog značaja u pacijenata s rakom u usporedbi sa zdravim ispitanicima. Real-time PCR se također pruža mogućnosti za korelaciju opterećenje meta-redni s kliničkim ishodom [10] ili odgovor na terapiju [11].
CEA, izvorno opisan kao antigena raka debelog crijeva tumorom, kloniran je u 1987, te je sada priznata kao član imunoglobulina protein superfamilije [12]. Mnoge studije su izvijestili otkrivanje stanica želuca u krvi [13], koštane srži [14], i peritonealnoj pranje [15] pacijenata s rakom želuca pomoću real-time PCR za CEA mRNA.
Cilj ovog istraživanja bio je ocijeniti učinkovitost HUP mRNA u realnom vremenu PCR tehnikom za rano otkrivanje recidiva tumora. Za ispunjavanje ovog cilja, odnos između kliničke recidiva i razina u krvi CEA mRNA preoperativno ispitivan u bolesnika želučanog adenokarcinoma.
Metode pregled pacijenata
Pismeni informirani pristanak dobiven je od svakog pacijenta o korištenju uzoraka krvi za istraživanja u skladu s institucionalnim smjernicama našoj bolnici. Od veljače 2002. do prosinca 2006. godine, ukupno 123 uzastopnih bolesnika s želučanim adenokarcinom na Cancer Center Sun Sveučilišta Yat-sen je upisano u ovoj studiji. Svi su bolesnici primili radikalnu resekcija i D2 Limfadenektomija. U zakup 15 limfni čvorovi bili dostupni za detekciju. Ne peritonejska širenje pronađen. bile su potrebne jasne evidencije o promjeni u serumu CEA i ocjenjivanje slike prije operacije i svaka tri mjeseca nakon operacije. Pacijenti koji su imali pozitivan limfni čvorovi su preporučene za primanje adjuvantne kemoterapije, ali na kraju je samo osamdeset i tri bolesnika je učinjena adjuvantne kemoterapije. Režimi uključeni CaPOx (kapecitabina + oksaliplatin, 16 slučajeva, s medijanom ciklusu od 4), folfox6 (56 slučajeva, s medijanom ciklusa 6), taksola + cisplatin (4 predmeta, s medijanom ciklusu od 4), taksolom + 5FU /CF (fluoruracil /7 slučajeva, s medijanom ciklus od 6). Ponavljanje bolesti, uključujući i lokalne ponovne pojave i udaljenih metastaza, otkrivena je pomoću kompjutori ispita tomografiju. Nove lezije otkriven slike pregleda u follow-up sastanci su kao recidiva. Biopsija nije učinjeno rutinski odrediti histološki ponavljanje. Sve slike su ocijenjeni od strane najmanje dva neovisna promatrača, uključujući i radiologa. Medijan praćenja razdoblje je 37.0 mjeseci (raspon, 3.0-73.6 mjeseci). Pregled, uzorci krvi
uzeti su uzorci krvi na početne dijagnoze jedan ili dva dana prije operacije. Prva 3 ml krvi se ukloni da se spriječi kontaminacija epidermalni, a zatim 5 ml uzorka krvi je dobiven iz periferne venu. Periferne uzorci krvi dobiveni od 30 nekanceroznih dobrovoljaca pacijenata korišteni su kao negativne kontrole
svih pacijenata koje pismeni pristanak. dobili smo odvojeni suglasnosti za uporabu uzorku krvi. Odobrenje Studija je dobiven od neovisnih etičkih povjerenstava u Cancer Center Sun Sveučilišta Yat-Sen. Istraživanje je provedeno u skladu s etičkim standardima Svjetske deklaracije Medical Association Helsinkija.
Predobrada uzoraka krvi
Uzorci krvi prikupljeni su u epruvete s EDTA. Obrada uzorka je izvršena u roku od 2 sata nakon vađenje krvi. Krv se prenese u 30 ml Falcon epruvetu i centrifugira na 1.800 okretaja u minuti na sobnoj temperaturi tijekom 20 minuta. Serum je uklonjen i stanice su ponovno suspendirane u 5 ml slane otopine i 0,3 ml RNA kasnije otopine. Nakon što je dobro izmiješano, krv stanica smjesa je ostavljena preko noći na 4 ° C i uskladišten na -80 ° C do upotrebe. Ekstrakcija RNA pregled i pregled Sinteza cDNA Ukupna RNA uzoraka periferne krvi se ekstrahira pomoću RNAprep Cell Kit (Tiangen , Peking, Kina) slijedeći protokol koji osigurava proizvođač. Integritet RNA bio je provjeriti elektroforezom i kvantificira pomoću apsorpcije na 260 i 280 nm pomoću UV-vidljivo spektrofotometar (Beckman Coulter Du ® 800, Fullerton, CA). Za reverznu transkripciju, 1 ug ukupne RNA, 1 ul Oligo (dT) 15 i 1 ul dNTP razrijeđeni su u 10 uL RNaza-slobodne vode, inkubira 10 minuta pri 37 ° C i 1 ul 25 mmol /L EDTA doda. 11 ul Alikvot reakcijske smjese je inkubirano 10 minuta pri 65 ° C i brzo ohlađena na ledu tijekom 2 minute. cDNA pohranjena je na -80 ° C do upotrebe. Sinteza cDNA izvedena je pomoću TIANScript M-MLV metode (Tiangen Biotech, Beijing, Kina).
Stanične linije
pripremiti za CEA specifičnog RT-PCR, dvije stanične linije, SW-480 (stanična linija karcinoma debelog crijeva ) i korišteni su SC-7901 (rak želuca stanična linija). Limfociti su prikupljeni od zdravih dobrovoljaca bez epitela malignosti. Nakon što su limfociti izoliraju iz periferne krvi pomoću centrifugiranja u gradijentu je mononuklearnih stanica sloj je skupljen. Stanične linije su serijski razrijeđeni (10 puta) u 2 × 10 7 do 5 x 10 7 limfocitima kako bi se dobilo karcinom: limfocita omjerima od 1:10 do 1:10 7
HUP mRNA Analiza u stvarnom vremenu kvantitativni PCR pregled kvantitativnog PCR je izvedena pomoću niza detektor, ABI PRISM 7500 (Applied Biosystems 7500 Brzo real-Time PCR sustava). PCR početnice i TaqMan probe su napravljeni pomoću Primer Express 1.0 softver. U tom ispitivanju, vođenje gena gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) je korišten kao interna kontrola u normaliziranju varijacije u integritetu i ukupnoj količini RNA ekstrahirane. PCR testovi u stvarnom vremenu za GAPDH i HUP odrađeno u odvojenim cijevima. Vrijednosti CEA mRNA bile su podešene prema vrijednostima GAPDH mRNA, i odnosne rezultati CEA mRNA su prezentirane kao (KD mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6 za svaki uzorak. pregled 5 ul uzorka cDNA je korišten za realnom time PCR u reakcijskoj smjesi 20 ul sadrži 10 pmol odgovarajuće klicama (Invitrogen suradnje, Japan), i 5 pmol sonde TaqMan (Invitrogen suradnji, Japan). Reporter boja (6-karboksi-fluorescein: FAM) kovalentno je vezan na 5 'kraju sonde, a gašenje boja (6-karboksi-tetrametil rodaminom: TAMRA) je vezan na 3' kraj sonde. Temperaturni profil koristi za pojačavanje bio je sljedeći: denaturiranje 1 ciklus na 95 ° C tijekom 10 minuta, nakon čega slijedi 40 ciklusa na 95 ° C kroz 10 sekundi, 60 ° C tijekom 15 sekundi i 72 ° C kroz 5 sekundi. Kvantifikacija je učinjeno od strane ABI Prism 7500 detektor slijeda sustava. Svaki set uzoraka i serijski razrijeđene vanjske kontrole amplificirane su u duplikatu. Prosječna vrijednost duplikata je služila kao kvantitativne vrijednosti.
HUP-specifične oligonukleotidni primer na temelju izvješća Gerhard et al.
[16]. Sekvence su: 5'-TGTCGGCATCATGATTGG-3 '(smislena) i 5'-GCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' (antisense). Fluorescentne i LC-Red sonda sekvence korištene za identifikaciju KD su: 5'-CCTGAAATGAAGAAACTACACCAGGGC-fluorescein i 5'-LC-Red 640 GCTATATCAGAGCAACCCCAACCAGC fosfat pregled u realnom vremenu PCR nadzor se postiže mjerenjem fluorescentnog signala na kraju. žarenja fazu svakog ciklusa. Nizovi primera koji se koriste za GAPDH amplifikacije su bili: 5'-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3 '(smislena) i 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (antisense). Sonde sekvence korištene za identifikaciju GAPDH bile su: 5'-TCAACAGCGACACCCACTCCT-fluorescein i 5'-LC-Red 640 CACCTTTGACGCTGGGGCT fosfat pregled Određivanje CEA u serumu
uzoraka predoperativnih serumu su također korišteni za testiranje. tumorski biljeg HUP korištenjem komercijalno dostupnog imuno testom kita (Cobas Temeljni utjecaja na okoliš, Roche, Basel, Švicarska). . Patološka razini granična osnovana na 5 ng /ml za serum CEA pregled Statistički analizira pregled Statistička metoda Kaplan-Meier je korišten za analizu kliničkih značajki i ponavljanje; Razlike su procijenjene s log-rank testa. Prognostički čimbenici su pregledane univarijatne i multivarijatne analize (log-rank testa za univarijantne analize i Cox proporcionalnih rizika regresijski model, nazad postupno (uvjetno LR) za multivarijatne analize). U hi-kvadrat i Fisher-ov egzaktni test korišteni su za statističke analize. Sve statističke analize su učinili s SPSS16.0. . Sve vrijednosti P su dva kraka, a razina značajnosti postavljena je na 0,05 pregled Rezultati
Kliničke karakteristike
123 pacijenata upisani u studiju u dobi od 28 do 84 godina (srednja, 57,11 godina, medijan, 59 godina), a omjer muškaraca na žene bio je 82:41 (Tablica 1). Inscenacije je provedeno u skladu s Tumor-Node-metastaze (TNM) klasifikaciji Zajedničkog odbora američkog protiv raka (AJCC, revidiran 1997.). Dvadeset i četiri tumori su se nalazile u kardija 3 u želučanoj fundusa, 44 u želučanoj korpusa, 45 u želučanog antruma, 5 uključen cijeli trbuh, i 2 pripadao Ostatka želučanog karcinoma (Tablica 1) .table 1 kliničko značajke i HUP * ekspresija mRNA otkriven u realnom vremenu RT-PCR pregled karakteristike pregled
Ukupni broj
(N = 123)
pregled CEA mRNA
P vrijednosti
Pozitivna
(n = 45)
Negativan pregled (n = 78) pregled
Dob pregled ≤40 pregled 13 pregled 3
10 pregled, 41-50 pregled 20 pregled, 9
11 pregled, 51-60 pregled 39 pregled 9 pregled 30 pregled, 61-70 pregled 42 pregled, 18 pregled, 24 izvoznici > 70 pregled, 9
6
3
0,063 pregled Sex
Ženski pregled, 41 pregled, 12 pregled, 29 pregled, muški pregled, 82 pregled, 33 pregled, 49 pregled 0,234 pregled tumora pregled T1 pregled 10 pregled 6 pregled 4 pregled T2 pregled 16 pregled 3 pregled, 13 pregled, T3 pregled, 73 pregled, 26 pregled, 47 pregled, T4 pregled 24 pregled 10
14 pregled 0.001 pregled limfnih čvorova pregled N0 pregled, 31 pregled, 11 pregled, 20 pregled n1 pregled, 43 pregled, 15 pregled, 28 pregled, N2
29 pregled, 8
21 pregled N3 pregled 20 pregled, 11 pregled, 9
0,261 pregled Patološka TNM # pozornici pregled sam
16
7
9 pregled II pregled, 21 pregled 6
15 pregled III
51 pregled, 17 pregled, 34 pregled IV pregled 35 Netlogu 15
20 pregled 0,623 pregled Histologija podtip pregled dobro diferencirani adenokarcinom pregled 3
1 pregled 2 pregled, umjereno diferencirani adenokarcinom pregled 27 pregled 7
20 pregled Loše diferenciranog adenokarcinoma pregled, 93 pregled, 37 pregled, 56 pregled 0,418 pregled serum HUP stanje
Pozitivan pregled 30 pregled, 11 pregled, 19 pregled Negativna pregled 93
34 pregled, 59 pregled 0,992 pregled Ponavljanje
Da
44 pregled, 25 pregled, 19 pregled, br pregled 79 pregled, 20 pregled, 59 pregled 0.001
načini ponovne
Lokalni recidiv
8 pregled 4
4. pregled trbušne šupljine pregled 9
6
3 pregled jetre pregled 8
5 pregled 3
zdjelice
6 pregled 3
3
Višestruke stranice
10 pregled 5 pregled 5
drugi
3
2 pregled, 1 pregled 0,959 pregled * karcinoembrijski antigen pregled # TNM označava tumorski čvor-metastaza
Detection osjetljivosti CEA mRNA u realnom vremenu RT-PCR pregled CEA mRNA je otkrivena u SW -480 i SC-7901 staničnih linija. Donja granica detekcije je koncentracija od 10 tumorskih stanica na 10 7 limfocita. Konvencionalna ugniježđena RT-PCR je korišten kako bi potvrdili osjetljivost RT-PCR produkta.
Izraz HUP mRNA u krvi pregled CEA mRNA je otkrivena u 9 od 30 (30,0%) bolesnika koji nisu rak, a srednju ispravio HUP mRNA rezultat bio 7,5 (raspon od 0 do 92,5). Maksimalna vrijednost ispravljenog CEA mRNA rezultat u pacijenata bez malignosti je 92.5, tako da granična vrijednost od 100 je korištena u ovom istraživanju. Koristeći ovu kritična vrijednost, 45 bolesnika (36,6%) su dijagnosticirana kao HUP mRNA-pozitivne. Srednja ispravljena CEA mRNA indeksne [(HUP mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6] od 123 pacijenata je 37,510.0 (raspon, 0-3,695,652.1) kopije Slika 1 pokazali distribuciju (AZO mRNA /GAPDH mRNA) × 10 6 u ovoj skupini bolesnika. Slika 1 Raspodjela HUP razini ekspresije. Omjer sredstva (CEA mRNA /GAPDH mRNA) × 106. S obzirom na omjer nekih bolesnika su nula, dodali smo 0,5 omjeru.
Odnos između HUP mRNA i kliničko značajke pregled CEA mRNA nije u korelaciji s dob, spol, N pozornici, TNM stadij, histološki podtip i serum CEA stanje (Tablica 1). Međutim, bolesnici s postoperativnim recidiva imali su značajno veći postotak HUP mRNA pozitivno od onih bez recidiva tumora (P
= 0,001) (Tablica 1). Osim toga, dubina tumora također pozitivno korelira s izrazom HUP mRNA (P
= 0,001). Pregled Odnos između recidiva i izražavanja HUP mRNA kao serum HUP
Način ponovne uključuje 8 lokalna ponavljanja, 9 trbušne širenje osim jetre, 8 metastaze jetre, 6 zdjelice metastaza, 3 druge web stranice metastazama i 10 više web-mjesta metastaza. Ne postoji značajna razlika između izraza HUP mRNA i načinu povrata bolesti (Tablica 1).
Recidiva bolesti je pronađena u 44 od 123 slučajeva (35,8%). Dvadeset i pet od tih bolesnika (56,8%) bilo HUP mRNA-pozitivne. S druge strane, samo 14 bolesnika s recidivom bolesti (31,8%) bili su pozitivni na preoperativne serumske CEA. Specifičnosti CEA mRNA i serumskog HUP da pokazuju ponavljanje bile 74,7% i 79,9%, respektivno. (Tablica 2) .table 2 Usporedba između HUP * mRNA i serumskog HUP-u predviđanju ponavljanje pregled pregled CEA mRNA
Serum CEA

Positive

Negative

Positive

Negative

Recurrence
Yes
25
19
14
30
Ne pregled 20 pregled, 59 pregled, 16 pregled, 63 pregled P
0.001
0.152
X pregled, 2. pregled 12,088 pregled 2.050
Osjetljivost (%) pregled 56,8 pregled 31.8 pregled Specifičnost (%) pregled 74.7 pregled 79,7 pregled * karcinoembrijski antigen pregled Jednosmjerna i multivarijatne analize preživljavanja 3 godine bez bolesti
5-godišnje ukupno preživljenje je iznosio 58,9%, a tri godine bez znakova bolesti opstanak bio 63,9%. Oba univarijantna i multivarijatne analize korišteni su za procjenu faktora koji se odnose na preživljavanje bez bolesti. Prema univarijatne analize, dobi, dubina tumora, metastazama u limfnim čvorovima, histološki stupanj, TNM stadij, HUP mRNA pozitivnost i HUP pozitivnost u serumu značajno su se odnosile na preživljavanje bez bolesti (P ​​Netlogu = 0.031, < 0.001, 0.001, 0.022, < 0.001, 0.001, 0.045 pojedinačno) (tablica 3). Multivarijatna regresijska analiza pokazala je da samo histološki stupanj i HUP mRNA pozitivnost bili neovisni faktori za preživljavanje bez bolesti (P ​​Netlogu = 0,047 i 0,020, odnosno, tablica 4). Trogodišnje bez bolesti stope preživljavanja za HUP-mRNA-pozitivnih pacijenata bili su znatno niži nego za CEA mRNA negativnih pacijenata (43,9% u odnosu na 74,1%, odnosno, P = 0,001 pregled, Slika 2) .table 3 Jednosmjerna analiza disease- slobodan opstanak u karcinom želuca pregled Parametar
bolesti bez opstanak, P valuea
Age izvoznici < 59 vs ≥59 pregled 0.031
Spol pregled, muškarci i žene pregled 0.433
CEA mRNA Netlogu (+) u odnosu na (-)
0.001 pregled serum CEA
(+) vs (-) pregled 0,045 pregled histološkog stupnja pregled Pa /umjereno u odnosu na slabo pregled 0,022 pregled PT pregled pTis /pT1 vs PT2 /pT3 /pT4 izvoznici < 0,001 pregled pN
(+) vs (-)
0.001 pregled Stage
1/2 vs 3/4 izvoznici < 0,001 pregled adjuvantne kemoterapije agenti
CaPOx vs mFOLFOX6 vs Taxol + DDP vs taksol + 5FU /CF
0,850 pregled u multivarijatne analize Log-rank test pregled Tablica 4. preživljavanja bez bolesti u želučanom karcinomu pregled Čimbenici
Karakteristike

omjer rizika
95% CI
P value

Unfavorable

Favorable

Age
≥59
<59
1.018
0.986-1.050
0.273
Histological grade
Poorly
Well/moderately
0.412
0.171-0.990
0.047
pT
2/3/4
Tis/1
1.673
0.100-8.690
0.947
pN
(+)
(-)
2.030
0.264-15.611
0.497
Stage
3/4
½
1.437
0.124-16.613
0.771
CEA mRNA pregled (+) pregled (-) pregled 2,243 pregled 1,138-4,424 pregled 0,020 pregled serum CEA Netlogu (+) pregled (-) pregled 1.130
0,582-2,194 pregled 0,717 pregled CI, interval povjerenja; PT, dubina invazije tumora
Slika 2 slobodnim od bolesti preživljavanje pacijenata prema izrazu HUP mRNA. Trogodišnje preživljenja bez znakova bolesti slobodnog od HUP-mRNA-pozitivnih bolesnika bila je značajno niža od one AZO mRNA-negativnih pacijenata (43,9% u odnosu na 74,1%, respektivno; P pregled = 0,001). Pregled Rasprava pregled semi -quantitative priroda tradicionalnom PCR tehnologija je napravio to teško razlikovati osnovne razine ekspresije gena u normalnim tkivima od povećane razine ekspresije gena u raka, čime se povećava zabrinutost za lažno pozitivnih rezultata [17]. U našoj studiji, real-time PCR CEA mRNA se koristi da istraži mogućnost periferne krvi kao izvor za CTC otkrivanje i predviđanje recidiva raka kod pacijenata karcinom želuca. U stvarnom vremenu kvantitativni HUP mRNA analiza u pacijenata oboljelih od raka često se obavlja na temelju CEA mRNA pozitivnosti, koja se određuje pomoću graničnu razinu [13]. CEA mRNA se može otkriti u bolesnika s benignom bolesti, kao i zdravih volontera, tako da se razina prekidni obično određuje maksimalni ekspresijom u nemalignih pacijenata [18, 19]. Setoyama T et al. utvrdio da je maksimalna vrijednost CEA mRNA u bolesnika bez malignosti bio 8.6, što zbog toga postavite vrijednost kritična kao 9.0 [20]. Schuster R et al. [21] Također je iskoristio najveću vrijednost zdrave volontera pozadini kao cut-off vrijednosti za detekciju HUP mRNA u bolesnika s kolorektalnim karcinomom. U našoj studiji, mi također koristiti maksimalnu vrijednost ispravljena HUP mRNA rezultat u bolesnika bez maligniteta kao vrijednost kritična. Uspostavom granice od 100 za normalizirala razina CEA mRNA, možemo razlikovati pacijente oboljele od raka od pacijenata bez raka, te stoga više pouzdano razmotriti ekspresiju CEA mRNA kao marker cirkulirajućih tumorskih stanica.
Otkrili smo da je 10 bolesnika s T1 tumor, 6 bolesnika je imalo pozitivan HUP-mRNA. No, nema zapisa od recidiva pronađen je u 10 bolesnika. Čini se da ne postoji veza između izražavanja HUP mRNA i povratak u T1 tumor. Teško je objasniti visoku pozitivnu stopu HUP-mRNA u T1 pacijenata, ali smo otkrili da je izražavanje CEA mRNA bila je niska u bolesnika 6 T1, u rasponu od 4320 primjeraka na 44 600 primjeraka. Ikeguchi M [22] izvijestili da je 12,5%, u fazi sam pacijenti karcinom želuca izrazio CK20 mRNA i oni smatraju da je izazvana malim CK20 ekspresiju u perifernim bijelih krvnih stanica.
Nekoliko izvješća procjenjuju stanje CTCs u želučanom pacijenti karcinom prije tretmana. Ikeguchi i Kaibara izvijestio [23] da ne mogu naći nikakve stanice raka u perifernoj krvi od bolesnika netretirane želučanog karcinoma. Autori nagađa se da stanice raka ne čini se da lako migrirati na perifernoj krvi iz primarnih tumora u bolesnika s neobrađenom želučanog karcinoma. S druge strane, Miyazono et al.
[24] pokazalo je da je pozitivna stopa za CEA mRNA pacijenata karcinom želuca prije operacije bila je 8,8%. Prisutnost CTCs prije tretmana i njegov odnos s klinički ishod tako ostaje kontroverzno. U ovoj studiji, istražili smo kliničko značenje CTCs u krvi prije operacije pomoću real-time RT-PCR za detekciju ekspresije CEA mRNA. Pozitivna stopa CEA mRNA prije bilo kojeg postupka je 36,6%. Dodatni file 1 pokazuje pozitivnu stopu mRNA biljezi iz literature za otkrivanje tumorskih stanica u realnom vremenu RT-PCR. Pregled O'Sullivan i sur.
[25] predložili da preoperativna otkrivanje micrometastasis može odražavati bilo prolazno prolijevanja stanice, metastatskim potencijalom, ili ostatne bolesti. U ovom istraživanju, otkrili smo da su CTCs otkrivena u krvi prije liječenja u odnosu na povratak. Nekoliko izvješća su pokazala da preoperativna otkrivanje cirkulirajućih stanica raka je bio jasan pokazatelj lošeg preživljavanje pacijenta, jer mnogi slučajevi s cirkulirajuće stanice karcinoma preoperativno pokazao ni produženi limfnog čvora metastaza ili udaljenim metastazama, čime je prognoza takvih pacijenata bio siromašan [26-28 ]. U trenutnoj studiji, otkrili smo da je izraz CEA mRNA bila je značajno povezana s recidiva bolesti. Nadalje, bolesnici s pozitivnim CEA mRNA imali kraće od 3 godine ishod preživljavanja bez znakova bolesti. Učestalost recidiva bila je značajno viša u bolesnika pozitivnih na CEA mRNA u odnosu na one negativne.
Osjetljivost izražavanja HUP mRNA predvidjeti povratak je samo 56,8%. Devetnaest od sedamdeset i osam bolesnika (24,4%) s negativnim izrazom HUP mRNA imala recidiv tumora. Setoyama i sur.
[20] pokazalo je da 8 od 69 (11,6%) bolesnika jednjaka karcinoma s negativnim izrazom HUP mRNA imao povrata tumora, i 6 bolesnika imalo limfnog čvora ponavljanje. Jedan često koristi objašnjenje neuspjeha detekcije je da kruži stanice nisu ravnomjerno raspoređena i ne-stalno bacaju u opticaj [29, 30]. Nadalje, idealni marker (br nezakoniti ekspresija u krvi, visoke ekspresije u stanica tumora) još nije pronađen. Iza CEA mRNA, drugi transkripti, uključujući citokeratin (CA) 18 [31], matrična metaloproteinaza (MMP) -7 [32], CK 20 [33], Urokinaza tip aktivatora plazminogena receptora (PAR), CK 19 CK 7 [ ,,,0],34], su pokušali kao potencijalni markeri CTCs. Međutim, tumorske stanice šupa bi trebao biti relativno rijedak događaj. Dakle, da li periferne krvi je pogodan pretinac za rano otkrivanje mikrometastaza je još uvijek sporan. Ostali odjeljci, kao što su koštane srži ili trbušne šupljine su poznati za pružanje veće stope detekcije, vjerojatno zbog većeg broja tumorskih stanica sadašnjeg [35-37].
Drugo važno pitanje je lažno pozitivan izraz CEA mRNA. Dvadeset pacijenata (44,4%) koji su imali pozitivan CEA mRNA ekspresije nije snimati ponavljanje u follow-up. Jedan od razloga može biti relativno kratko vrijeme perioda praćenja.
Alternativno, to može biti prilično razumno, jer malo stanicama karcinoma bacaju u krvotok uspjeli u uspostavi metastatske bolesti [25]. Ove kruži stanice raka ne može pričvrstiti na udaljene organe i ne može rasti. Nedavno, Méhes i sur.
[38] istraživali morfologiju cirkulirajućih stanica raka i utvrdili da je većina cirkulirajućih stanica raka dojke je u stanju apoptoze. U perifernoj krvi pacijenata s rakom, postojanje tumora stanica limfocita kompleksa uočeno [39]. Ovi rezultati pokazuju da su makrofagi i limfociti može igrati važnu ulogu u indukciji cirkulirajućih tumorskih stanica apoptoze i antitumornu imunološki odgovor domaćina. Ove imunizirane makrofagi mogu senzibilizirati citotoksičnih T-limfocita domaćina, a senzibiliziranih T limfociti mogu napasti zaostali mikrometastatskom lezija raka bolesnika [23]. Da pojasnimo ovu hipotezu, daljnja istraživanja koji se odnose na povezanost između postojanja cirkulirajućih stanica raka i odgovor imunosnog su potrebne.
Trenutna studija je retrospektivna analiza, a pacijenti koji trebaju primiti adjuvantne kemoterapije nisu bili postavljeni ispred vremena. Općenito, bolesnici koji su imali pozitivan limfni čvorovi su preporučene za primanje adjuvantne kemoterapije. Do sada, ne postoje standardni kriteriji za adjuvantne kemoterapije raka želuca u Kini. Naše je istraživanje pokazalo da je CEA broj kopija mRNA u perifernoj krvi na početne dijagnoze bila je značajno povezana s recidiva bolesti u bolesnika želučanog adenokarcinoma. U stanovišta recidiva, mi, dakle, ukazuju na to da pacijenti koji imaju pozitivan HUP mRNA preoperativno primanje adjuvantne kemoterapije nakon radikalne resekcije. Pregled Zaključci pregled U ovom istraživanju, osjetljivost CEA mRNA bila je veća od one u serumu CEA. Štoviše, prema multivarijatne regresijske analize, HUP mRNA pozitivnost je neovisni čimbenik za povratak. Trenutna studija je potvrdila da je takav način bio obećavajući za rano otkrivanje CTCs u bolesnika sa želučanim karcinoma prije tretmana; bolesnici s pozitivnim CEA mRNA mogu imati veći rizik od recidiva čak i nakon kurativne resekcije. Međutim, veliki randomizirano prospektivno istraživanje je opravdano definirati ulogu CEA mRNA detekcije u krvi pregled Kratice pregled RT-PCR.
Ove reverzne transkriptaze-lančana reakcija polimeraze

CTCs: pregled cirkulirajućih stanica tumora
HUP: pregled karcinoembrijski Antigen
CA19-9:
ugljikohidratni antigen 19-9
TNM: pregled, Tumor-čvor-Metastaza
AJCC: pregled američke Zajednički odbor protiv raka
GAPDH: pregled gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze
MMP-7: pregled Matrix Metalloproteinase-7 pregled
pregled PAR. pregled urokinaza tipa receptora za aktivator plazminogena
deklaracijama
Zahvale
tih rad je financiran od strane Nacionalne Natural Science Foundation Kine potpore 30672408, Guangzhou ured za znanost i tehnologiju dati 2006Z3-E0041 i Sun Yat-sen University 985 programa Inicijacija fond (Kina). Mi sa zahvalnošću zahvaljujemo djelatnika u Odjelu za medicinsku onkologiju i GI kirurgija onkologije u Sun University Jat-sena Cancer Center za svoje sugestije i pomoć
Elektronski dopunski materijal pregled 12967_2009_529_MOESM1_ESM.DOC Dodatni file 1:. Podaci iz literature detekcija tumorskih stanica u realnom vremenu RT-PCR mRNA markera. Pokazuje pozitivnu stopu mRNA markera iz literature za detekciju tumorskih stanica u realnom vremenu RT-PCR. (DOC 58 KB) autora originalnih dostavljeni datoteke za slike
Ispod su linkovi na autora izvornika dostavljenih datoteka za slike.

• Izraz DNA polymeraseη proteina predviđa terapijski odgovor i opstanak metastatskih adenokarcinoma pacijenata želuca liječenih izražavanja chemotherapy
• Djelotvornost ultrazvuka u potvrdi plasman nazogastrične sonde u bolesnika s niskim svijesti u hitnim slučajevima center