Raznolikost v interakcijah bakterije in gostitelji znotraj vrste Helicobacter heilmannii sensu stricto

raznolikost v interakcijah bakterije in gostitelji znotraj vrste Helicobacter heilmannii
v ožjem pomenu besede
Abstract
Helicobacter (H.) heilmannii
v ožjem pomenu besede (p) je zoonoza bakterija, ki naravno colonizes želodec psov in mačk. Pri ljudeh, je ta mikroorganizem povezano z gastritis, peptični ulkus in sluznica povezan limfoidni tkivni (MALT) limfoma. Na voljo malo informacij o patogenezi H. heilmannii
s.s. okužb pri ljudeh in ni znano, ali obstajajo razlike v virulence znotraj te vrste. Zato je bil mongolski model, gerbil uporablja za proučevanje interakcije bakterije-gostitelj 9 H. heilmannii
s.s. sevi. Kolonizacija sposobnost sevov, intenzivnost gastritis in genskega izražanja različnih vnetnih citokinov v želodcu smo določili pri 9 tednov po eksperimentalni okužbi. Indukcija z antruma-dominantna kroničnim aktivnim gastritis z nastankom limfocitnih agregatov bil prikazan 7 sevov. Visoki ravni antralnih kolonizacija opazili 4 seve, medtem ko je bila kolonizacija 4 drugih sevov bolj omejena in en sev ni bil odkrit v želodcu ob 9 tednov po okužbi. Vsi sevi induciranje kroničnega aktivnega gastritis povzročil regulacijo navzgor pro-vnetnih citokinov IL-1β v antruma. Znižana antralnih izraz H + /K + ATPaze je bila opažena v želodcu po okužbi s 3 visoko naseljenim sevov in 2 visoko naseljenim sevi povečano gastrin izraz v fundusa. V nobenem od H. heilmannii
s.s. okuženih skupin, je IFN-γ izraz up-urejena. Ta študija kaže raznolikost v interakcijah bakterije in gostitelji v H. vrste heilmannii
s.s. in da patogeneza želodčnih okužb s tem mikroorganizmom, ni enak tistemu iz nekega H. pylori
okužbe.
Uvod
Helicobacter (H.) pylori
je najbolj razširjena Helicobacter
vrste kolonizacije želodčne sluznice ljudi in je bila povezana z gastritis, peptični ulkus in rakom želodca [1-3]. Poleg H. pylori
, drugi morfološko izrazito ne-H. pylori Helicobacter
(NHPh) vrsta, znana tudi kot H. heilmannii
sensu lato (S.L.) [4], je bila povezana z želodčno bolezen pri ljudeh [5-10]. NHPh predstavlja skupino tesno povezanih, vendar različnih bakterijskih vrst, v glavnem najdemo v različnih živalskih vrst, kot so H. felis
, H. salomonis
, H. bizzozeronii
, H. heilmannii
strogem pomenu besede (ss), H. cynogastricus
in H. baculiformis
pri mačkah in psih in H. suis
pri prašičih [5, 7, 10-15]. Ti mikroorganizmi se odlikujejo z izjemno hitre narave, ki je doslej imelo za posledico omejeno število in vitro izolatov na voljo po vsem svetu.
H. heilmannii
s.s. je bil šele pred kratkim izolirali in kultivirani in vitro [16]. To je bila odkrita v divji mačji in človeške želodčne biopsije, vendar se najpogosteje najdemo v želodčni sluznici mačk in psov z razširjenostjo v razponu od 20 do 100% [5-7, 10, 12]. Čeprav je bila ta bakterija povezana z aktivnim kroničnim gastritisom pri mačkah in psih [12], njegova patogene pomen ostaja skrivnosten in je verjetno sev-odvisna. Pri ljudeh, H. heilmannii
s.s. Zaznana je bila v 8-19% želodca biopsije s histološko dokazano okužbo NHPh [5, 8, 10]. Okužba s to bakterijo pri ljudeh je bila povezana s gastritis, peptični ulkus in sluznice, povezane limfnem tkivu (MALT) limfom [5, 8, 10, 17, 18].
Številne študije okužbe v eksperimentalnih živalskih modelih so bile opravljene do raziskati patogenezo H. pylori
okužb pri ljudeh. V nasprotju s tem, malo informacij je na voljo, ki se ukvarjajo s patogenezo H. heilmannii
s.s. okužbe pri ljudeh. Ta bakterija je razmnožujejo pri miših do 28 mesecev in je lahko povzroči slad limfoma v želodcih teh živali [18]. Vendar pa v tem miške eksperimentu smo homogenizirali v želodcu tkivo uporabili kot inokulum. To pomeni, da so bili drugi mikroorganizmi inokulirali skupaj s H. heilmannii
s.s., ki bi lahko vplivali na rezultate, kot je bilo prej [19] opisano. Tako, da dobimo boljši vpogled v patogenezi želodčne bolezni ljudi, povezane s H. heilmannii
s.s., eksperimentalne študije, okužba s čistimi kulturami ta mikroorganizem so bistvenega pomena. Zato je bil cilj te študije za študij interakcije bakterije-gostitelj 9 H. heilmannii
s.s. seve, izolirane iz želodčne sluznice različnih mačkah. Mongolski gerbil model je bil že izkazalo, da je koristno živalski model za študij Helicobacter
-povezana želodčne patologije pri ljudeh in zato je bila uporabljena v tej študiji [19-21].
Material in metode
Bakterijske sevov
devet sevov H. heilmannii
ss smo pridobili iz želodčne sluznice različnih mačk in imenuje ASB1 (= tip sev, DSM 23983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 in ASB14. Bakterije so bile vzgojene na dvofaznih Brucella
agar plošče (Oxoid, Basingstoke, Velika Britanija), dopolnjenih z 20% (v /v) fetalni telečji serum (Hyclone, Logan, UT, ZDA), 5 mg /L amphothericin B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, New York, ZDA), Skirrow (Oxoid vsebuje 10 mg /l vankomicin, 5 mg /l trimetoprima laktata in 2500 U /L polimiksin B), Vitox dodatek (Oxoid) in 0,05% HCl (pH 5). Po inkubaciji pod pogoji microaerobic (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2; 37 ° C), so se bakterije nabirajo in končna koncentracija je bila prilagojena za 7 x 10 8 živih bakterij /ml, kot je štetje v Neubauer števno komoro določi
Živali, stanovanja in eksperimentalni postopek
Posebna patogenom brez (SPF) ženski pet tednov stare mongolske peščene (CRL. po (Tum), n
= 48) so bili pridobljeni iz Charles River Laboratories (Lille, Francija). Živali so bile nastanjene v filter top kletkah (1500 cm 2) na avtoklavni oblanci in avtoklaviranega sena. Bili so hranili ad libitum z avtoklaviranega komercialno prehrano (TEKLAD 2018S, ki vsebuje 18% beljakovin, Harlan, Nizozemska) in avtoklavirata vodo. Za vsako od 9 H. heilmannii
s.s. preizkušeni sevi, 5 živali so intragastrically nacepili 3-krat na 2 dni intervalu s 300 p.L bakterijske suspenzije. Tri živali smo inokulirali z Brucella
juho (pH 5, Oxoid) in je služil kot negativne kontrole. Inokulacijo je bila izvedena v skladu s kratko Izofluran anestezijo (2,5%), s pomočjo kepe konico gavaże iglo. Pri 9 tednov po prvi inokulaciji smo živali evtanazirali s cervikalno dislokacijo pod globokim Izofluran anestezijo (5%). Želodec in dvanajsternik vsakega gerbil bila resekcija in so bili odvzeti vzorci za histopatološko preiskavo in kvantitativno realnem času (RT) analizo -PCR.
Vivo eksperiment, ki ga je odobrila etični odbor Fakultete za veterinarsko medicino, Gentu univerza, Belgija (ES 2011/090).
histopatologijo in imunohistokemijo
vzdolžnem prerezu, začenši od konca predželodca in obsega antruma in fundusa želodca in dvanajstnika del, smo razrezali vzdolž večja ukrivljenost in pritrjen na 10% fosfatom zapufrana formalinu, obdelajo s standardnimi metodami in vdelali v parafin za svetlobno mikroskopijo. smo razrezali treh zaporednih odsekov 5 um. Po deparaffinization in hidratacije, je toplotno inducirano pridobivanje antigena izvedemo v citratnem pufru (pH 6). Če želite blokirati endogene peroksidaze aktivnost in nespecifične reakcije, so diapozitivi inkubirali s 3% H 2O 2 v metanolu (5 min) in 30% seruma koze (30 min), v tem zaporedju. V prvem delu smo obarvali s hematoksilinom /eozinom (H & E), da bi dosegel jakost gastritis po Posodobljeno Sydney sistema [22], vendar z nekaterimi spremembami, kot je opisano zgoraj [19]. V drugem delu je bila proliferacijo epitelijskih celic določi imunohistokemičnim barvanjem z uporabo monoklonsko Mouse anti-Ki67 protitelesa (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgija). epitelne celice Ki67 pozitivni so bili prešteti v 5 naključno izbranem High Power polja na ravni želodca jam (povečava: 400 x), tako v antruma in fundusa. Povprečje števila pozitivnih celic smo izračunali za vsako preskusno skupino v obeh želodčne regijah
parietalnih celicah so bile ugotovljene na tretjem delu, ki ga imunohistokemičnim barvanjem za kalij vodika ATPaze uporabo mišjega monoklonskega protitelesa (1/200;. Abcam Ltd, Cambridge, Velika Britanija). Inkubacija s primarnimi protitelesi, usmerjenimi proti Ki67 in kalijevega hidrogen ATPaze je sledila inkubacija s HRP-oznako sekundarnih protiteles (Predstavljajte si Link Mouse K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belgija) za vizualizacijo.
Ekstrakcijo DNK in količinsko kolonizacije H. heilmannii
ss v želodcu in dvanajstniku
Iz vsake gerbil, so bili odvzeti vzorci iz fundusa in antruma želodca in med dvanajsternik. Vzorce tkiva so bili shranjeni v 1 ml RNA kasneje (Ambion, Austin, TE, ZDA) pri -70 ° C, dokler RNA in DNA ekstrakcijo. Vzorce tkiva smo homogenizirali (MagNALyser, Roche, Mannheim, Nemčija) in RNA in DNA smo ločili s pomočjo TriReagent RT (molekularne raziskave Center Inc, Cincinnati, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Število kolonizacije H. heilmannii
s.s. na mg želodčnega tkiva smo določili v vzorcih DNA z uporabo H. heilmannii
s.s.-specifične kvantitativne RT-PCR. Za generacijo standarda, ki je del tega ureAB
genski skupini (1224 bp) od H. heilmannii
s.s. ASB1 smo pomnožili z uporabo primerjev U430F in U1735R, kot je opisano predhodno [6]. Standard je sestavljalo 10-kratnih-razredčitev od 10 8 PCR pomnožkov za vsako 10 ml reakcijske zmesi. Eden xl ekstrakta predlogo DNA smo suspendirali v 10! Li reakcijski zmesi, ki vsebuje 0,25 p.L obeh primerjev, ki se nahajajo znotraj bp fragmenta 1224, da dobimo 212 bp PCR produkt (oligonukleotidni: HH_SP1: 5'-CTT CCT TCT GGT GAA GTG ATT CTC-3 'protismerni oligonukleotidni: HH_RVQ: 5'-GCT GTA CCA GAG GCA ATG TCC AAG-3', temperatura kaljenja 58 ° C), 3,5 u.l HPLC z vodo in 5 xl SensiMix ™ SYBR št-ROX (Bioline Reagenti Ltd. , UK). Oba standarda in vzorcev smo izvedli v dveh izvodih na CFX96 ™ RT-PCR System z C1000 Thermal ciklerja (Bio-Rad, Hercules CA, ZDA). The (različica 1.6) programska oprema Bio-Rad CFX Manager je bila uporabljena za izračun ciklov praga (CT) -values ​​in analize taljenja krivulja pomnožene DNA. Povprečne vrednosti dvojnikov so bili uporabljeni za kvantifikacijo H. heilmannii
s.s. DNA v vzorcih tkiva.
Priprava RNA in izražanje genov
Total RNA iz vzorcev tkiv, čistimo z RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Nemčija), v skladu z navodili proizvajalca. Čistost RNA je bila dokazana z merjenjem razmerja absorbance pri 260 nm in 280 nm s NanoDrop ki v vseh primerih je bila približno 2. Koncentracijo RNA v vsakem vzorcu je prilagojena tako, da 1 g /! Li in cDNA smo sintetizirali takoj po čiščenju RNA uporabo iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad). Alikvote cDNA (1/5 razredčitev) smo uporabili kot predlogo za kvantitativno RT-PCR za merjenje izražanje genov. Ravni mRNA izražanje različnih citokinov (IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ in TNF-α), gastrin in H + /K + -ATPaze bili količinsko. V gospodinjstvu geni GAPDH, β-aktin
in HPRT
bili vključeni referenčnih genov. Primer sekvence so prikazane v tabeli 1 [23-28]. Za vse ciljne genov in referenčnih genov, so primerji učinkovitosti med 1,9 in 2,1. Reakcije so bile opravljene v 10 ml volumnih, ki vsebujejo 1 ul cDNA, 0,05 tjj- obeh primerji, 3.9 xl HPLC vode in 5 xl SensiMix ™ SYBR Ni-ROX. Eksperimentalni protokol za PCR reakcijo (40 ciklov) smo izvedli na CFX96 ™ RT-PCR sistem s C1000 Thermal ciklerja (Bio-Rad): denaturacijo za 15 minut pri 95 ° C, čemur sledi pomnoževalnih ciklov pri 95 ° C za 20 y, prileganje pri 60 ° C 30 sekund in podaljšanje pri 73 ° C za 30 sekund. Kontrolne reakcije brez korak reverzne transkriptaze so bili izvedeni za izključitev kontaminacijo DNA vzorcev RNA. No-template-nadzor so bili vključeni reakcijske zmesi in vsi vzorci so bile izvedene v dveh izvodih. CT-vrednosti so bile normalizirane na aritmetična CT-vrednosti od 3 referenčnih genov, po katerem so bili izračunani normalizirane ravni mRNA z 2 -ΔΔCt metoda [29] .table 1 Primer parov.
premazi
Sequence (5 '→ 3')
Citokini
IL-1β FW23
GGC AGG TGG TAT CGC TCA TC
IL 1β RV23
CAC CTT GGA TTT GAC TTC TA
IL-5 FW
AGA GAA GTG TGG CGA GGA GAG ACG
IL-5 RV
ACA GGG CAA TCC CTT CAT CGG
IL-6 FW
CAA AGC OAS AGC CAT STS GAG
IL-6, RV
GCC ATT CCG TCT GTG ACT CCA GTT TCT CC
IL-10 FW
GGT TGC CAA GCC TTA TCA GA
IL-10 RV
GCT GCA TTC TGA GGG TCT TC
IL-12p40 FW
GAC ACG ACC TCC ACC AAA GT
IL-12p40 RV
CAT TCT GGG ACT GGA ccc TA
IL-17 FW23
AGC TCC AGA GGC SCT CGG AC
IL-17 RV23
aGG ACC aGG ATC TCT TGC TG
IFN-γ FW24
CCA TGA ACG CTA CAC Zakon GCA TC
IFN-γ RV24
GAA GTA GAA Aga GAC ​​AAT CTG G
TNF-α FW23
GCT CCC cca GAA GTC GGC G
TNF-alfa RV23
CTT GGT GGT TGG GTA CGA ca
gastrin
gastrin FW25
GCC CTG GAA CCG CAA CA
gastrin RV25
TTC TTG GAC AGG TCT GCT TTG AA
H + /K + -ATPaze ( parietalnih celic)
ATP4b FW
GGG GGT AAC CTT gag ACC TGA TG
ATP4b RV
AAG AAG TAC CTT TCC GAC GTG OAS
referenčnih genov
GAPDH FW26
AAC GGC ACA GTC AAG GCT GAG AAC g
GAPDH RV26
CAA CAT ACT CGG CAC CGG CAT CG
HPRT FW27
CTC ATG GAC TGA TTA TGG Aca g
HPRT RV27
AGC TGA GAG ATC ATC TCC ACC AAT
β-aktina FW28
CCA AGG CCA ACC GCG AGA TGA C
β-aktina RV28
AGG GTA CAT GGT GGT GCC GCC AGA C
Primer pari uporabljajo za merjenje nivoji mRNA izraz IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-y, TNF-a, gastrina in H + /K + ATPaze so prikazani. V gospodinjstvu geni GAPDH, β-aktin
in HPRT
bili vključeni referenčnih genov.
Statistična analiza
normalnosti in variance homogenost podatkov smo analizirali s pomočjo Shapiro-Wilk preskus običajnega in Levenejev je test za homogenost varianc. Gastritis točke, kolonizacija zmogljivosti in ATPase in gastrin izražanje genov smo primerjali med različnimi okuženih skupinami in kontrol, ki uporabljajo Kruskall-Wallis analizo, nato pa Mann-Whitney U.-
test. Citokinov izražanja in število Ki67-pozitivnih celic, so bili analizirani z analizo variance z Bonferroni po hoc testa. Razlike so bile upoštevane statistično značilne pri p
≤ 0,05. SPSS Statistics 21 programske opreme (IBM) je bila za vse analize, ki se uporabljajo.
Rezultati
Okužba z virulentni H. heilmannii
s.s. sevi inducira antruma prevladujoča kronični aktivni gastritis
želodcu vseh kontrolnih živalih so pokazali normalno Histomorfologija (slika 1a). Vnetje v želodcu peščene okuženih z H. heilmannii
s.s. sevov ASB1, ASB2, ASB3, ASB6 je ASB11, ASB13 in ASB14 označeno s kroničnim aktivnim gastritis z nastankom limfocitnih agregatov v lamine proprie in submucosa v antruma želodca (slika 1b). Debelina sluznice se je nekoliko povečal in je bilo odkritih le nekaj nevtrofilcev. V nasprotju s tem, H. heilmannii
s.s. sevov ASB7 in ASB9 ni povzročil izrecno antralnih vnetje in le rahlo povečanje števila limfocitno celic je bilo opaziti v lamine proprie na antruma želodca (slika 1c). V vseh H. heilmannii
s.s. okužene peščene podgane, so bile odkrite le omejeni znaki vnetja fundusa želodca (Dodatni datotek 1). Je antralnih rezultati vnetje vsake posamezne živali so prikazani na sliki 2d. Statistično pomembna razlika med vnetje rezultati za peščene, cepljenih z ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 in ASB14 v primerjavi s kontrolno skupino je bila dokazana (Mann-Whitney U
test, p
< 0.05, Slika 2d). Slika 1 H &E obarvanje antruma za gerbil želodcu. Normalno histologijo na antruma negativne kontrole živali na-placebom nacepili (a). Izrecna limfocitna infiltracija lamine proprie in submucosa z oblikovanjem limfnih foliklov (puščici) v antruma za gerbil inokulirano s H. heilmannii
s.s. ASB1 (b). Blaga do odsotni limfocitne infiltracije (puščice) lista proprie v antruma za gerbil inokulirano s H. heilmannii
s.s. ASB7 (c). Bar = 30 um.
Slika 2 Kolonizacija zmogljivost H. heilmannii s.s. sevi in ​​želodca vnetje rezultat poskusne okužbe. Kolonizacija kapaciteta je prikazana kot log10 vrednosti H. heilmannii
s.s. bakterije na mg tkiva, zaznani s kvantitativno RT-PCR v fundusa (a) in antruma (c) želodca in dvanajstnika (b). Rezultati pod mejo detekcije (log 2,39 bakterije na mg tkiva) so bili postavljeni, kot je dosegel 0. antralnih vnetje (d) na lestvici od 0 do 4 (0: brez infiltracijo z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic; 1: blago difuzna infiltracija z mononuklearne in /ali polimorfi celice ali prisotnost enega majhnega (50-200 celic) agregata vnetnih celic; 2: zmerno difuzna infiltracija z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic in /ali prisotnost 2-4 vnetnih agregatov; 3: označeni difuzna infiltracija z mononuklearnih in /ali polimorfonuklearnih celic in /ali prisotnost vsaj pet vnetnih agregatov; 4: difuzna infiltracijo velikih regij z velikimi agregati mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic) so .Individual peščene upodobljene kot podatkih okoli srednje vrednosti ( linije). Statistične pomembne razlike v primerjavi s kontrolnimi živalmi, so označeni z * (Mann-Whitney U
test, p
< 0,05)
Kolonizacija zmogljivost H. heilmannii
s.s.. sevov v želodcu in dvanajstniku
Dokaz H. heilmannii
s.s. DNA s kvantitativno RT-PCR ob 9 tednov po okužbi pokazala kolonizacijo visoki ravni ASB1, ASB2, ASB3 in ASB6 v želodcu (slika 2a-c). V nasprotju s tem pa je bila kolonizacija ASB7 ASB11, ASB13 in ASB14 bolj omejen, medtem ko ASB9 ni bil odkrit v želodcu (slika 2a-c). V splošnem je zmogljivost kolonizacija v fundusa (slika 2a), nižji kot v antruma (slika 2c), pri vseh testiranih sevov in najnižjim številom bakterij bila odkrita v dvanajsterniku (slika 2b). Poleg tega je bila jasna povezava videl med zmogljivostjo kolonizacijo H. heilmannii
s.s. sevi in ​​želodčnih rezultati vnetje v antruma želodca (Slika 2c-d).
virulentnih H. heilmannii
s.s. Sevi povzroči želodčnega antralnih celično proliferacijo
epitelijskih Rezultati želodca epitelno točkovanja celične proliferacije v antruma želodca so prikazani na sliki 3c. Bistveno višje število Ki67 pozitivnih proliferirajoče epitelijskih celic so opazili pri antruma z ASB1- in-ASB6 okuženih peščene, v primerjavi s kontrolno skupino (ANOVA, str
< 0,05 sliki 3a-b). Število Ki67-pozitivnih celic so v ASB2-, ASB3-, ASB11-, ASB13- in ASB14 okuženih peščene zmerno povečala, čeprav niso statistično značilne. H. heilmannii
s.s. sevi ASB7 in ASB9 ni povzročila povečanje širjenja želodca epitelijskega. Poleg tega, so pokazali precej višje številke razraščajo epitelijskih celic v antruma z ASB1-, ASB2- in-ASB6 okuženih peščene, v primerjavi s peščene okuženih z ASB7 in ASB9 (ANOVA, str
< 0,05). Slika 3 želodca antralnih proliferacijo epitelijskih celic. Ki67 obarvanje antruma za gerbil inokulirano s H. heilmannii
s.s. ASB1 (b) prikazuje večje število proliferirajoče epitelnih celic v primerjavi z negativno kontrolno žival-lažno inokulirali (a). Stopnja širjenja epitelijskega smo določili s štetjem Ki67 pozitivne epitelijskih celic v 5 naključno izbrane visoki moči polja na ravni želodca jam (povečava 400 x) v antruma v gerbil želodca (c). Srednji številke Ki67-pozitivnih celic so prikazani v vsaki poskusni skupini. Pomembne razlike med H. heilmannii
s.s.-inokulirali in nadzor živali, so označeni z * (ANOVA, p
< 0,05). Pomembne razlike v primerjavi z ASB7 in ASB9 nacepili skupine so označene z + in # v tem zaporedju (ANOVA, p
< 0,05).
V fundusa vseh H. heilmannii
-ss okuženih peščene je epitelija stopnja proliferacijo celic ni bila bistveno višja v primerjavi s kontrolnimi živalmi (Dodatni datotek 2).
citokinov izražanje genov v želodcu kot odgovor na H. heilmannii
ss Okužba
lokalnega gostitelja imunski odziv proti H. heilmannii
s.s. infekcija je označen z merjenjem nivoja mRNA ekspresije IFN-y, IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 in TNF-a v želodcu od peščene. Rezultati so prikazani v tabeli 2 in sliki 4.Table 2 Statistična analiza nivojih izražanja mRNA.
antruma
Fundus
IL-1β
IFN-γ

H + /K + ATPaze

gastrin

Povprecna CT-Ctrefa
p-VALUE mrd
Mean CT-Ctref
p-vrednost
Povprečna CT-Ctref
p-vrednost
Povprečna CT-Ctref
p-vrednost
ASB1
6,92 ± 0,29 *
0,031
6,87 ± 0,60
1.000
3,70 ± 2,11 *
0.050
7,20 ± 1,68
0,101
ASB2
7,48 ± 1,42
0,231
8,15 ± 1,26
1.000
2,42 ± 5,01
0,513
5,94 ± 2,49 *
0.050
ASB3
6,55 ± 0,80 *
0.008
7,54 ± 0,37
1.000
3,49 ± 2,28 *
0.050
7,71 ± 1,17
0,101
ASB6
6,12 ± 0,67 *
0,001
7,99 ± 0,90
1.000
2,23 ± 1,99 *
0.050
5,33 ± 2,39 *
0.025
ASB7
10,25 ± 0,37
1.000
7,98 ± 0,52
1.000
0,45 ± 2,51
0,724
7,12 ± 1,54
0.180
ASB9
9,03 ± 2,54
1.000
8,55 ± 0.71
1.000
0,79 ± 0,03
0,564
8,11 ± 1,58
1.000
ASB11
7,47 ± 0,15
0,499
10,45 ± 0,95 *
0,004
1,32 ± 1,45
0,248
7,67 ± 1,25
0,289
ASB13
7,72 ± 1,17
0,523
9,54 ± 1,55 *
0,044
3,80 ± 0,34
0,083
8,10 ± 0,93
0,456
ASB14
7,07 ± 0,52
0,054
8,51 ± 0,97
1.000
3,81 ± 3,11
0,127
7,77 ± 2,96
0,881
negativna kontrola
9,71 ± 1,13 -
7,08 ± 0,65 -
0,15 ± 1,82 -
8,70 ± 0,62 -
Prikazano je statistično analizo IL-1β, IFN-y in H + /K + ATPaze mRNA ekspresije v antruma in gastrin mRNA izražanja v fundusa v gerbil želodca pri 9 tednov po eksperimentalni infekciji. Citokinov ekspresijo smo analizirali z analizo variance z Bonferroni po hoc testa. H + /K + -ATPaze in gastrin izražanje genov smo primerjali med različnimi okuženih skupinami in kontrol, ki uporabljajo Kruskall-Wallis analizo, nato pa Mann-Whitney U.-
test. Razlike so bile upoštevane statistično značilne pri p
≤ 0,05. SPSS Statistics 21 programske opreme (IBM) je bila uporabljena za vse analize
srednjo CT-Ctref. Za vsako eksperimentalno skupino, so prikazani srednja normaliziranih Ct-vrednosti ± standardni odklon
bp
-vrednost. : natančne p
-values ​​so podani
* v primerjavi z neokuženih kontrolni skupini (p
≤ 0,05) statistično pomembne razlike
Slika 4 mRNA ravni ekspresijo citokinov IL-1β in FN.. y v antruma želodca. ekspresijski nivoji citokinov mRNA fundusa in antruma v želodcu so bile pregledane s kvantitativno RT-PCR. ekspresijski nivoji IL-1β (a) in IFN-y (b) v antruma so prikazani. Podatki so predstavljeni kot kratno spremembo izražanja genov normirane 3 referenčnih genov in relativno glede na negativno kontrolno skupino, ki se šteje kot so 1. podatki prikazani kot sredstvo + standardnega odklona. Pomembne razlike v stopnji izražanja med cepljenih skupin in negativno kontrolno skupino, so označeni z * p
< 0,05 (ANOVA).
Pro-vnetnih citokinov IL-1β je močan zaviralec izločanja želodčne kisline [30] in ima vlogo v akutni fazi vnetja [31]. Izražanje IL-1β je navzgor regulirana v antruma želodca od peščene okuženih z H. heilmannii
s.s. ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 in ASB14, v primerjavi z negativnimi živali kontrolnih (slika 4a). Za peščene cepljenih z ASB7 in ASB9, ni bilo videti up-regulacijo IL-1β.
Th1 citokinov IFN-y, marker podpis Th1-polarizirane odgovor [24, 32], razstavljena zmanjšano izražanje v antruma od peščene okuženih z ASB11 in ASB13 (slika 4b), v primerjavi s kontrolnimi živalmi.
Ni velike razlike v izražanju med okuženimi in navideznim nacepili peščene mogoče opaziti za IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 in TNF-α.
parietalnih celic H + /k + -ATPaze mRNA navzdol urejeno v odzivu na kolonizacijo s H. heilmannii
ss
Ni jasno izgubo parietalnih celic je lahko vizualiziramo z barvanjem imunohistokemičnim v fundusa in antruma od H. heilmannii
-ss okuženih peščene primerjavi z neokužene kontrole (podatki niso prikazani). Vendar kvantitativne RT-PCR je pokazalo jasno zmanjšanje izražanja želodca H + /K + ATPaze v antruma na peščene okuženih z ASB1, ASB3 in ASB6 (sliki 5 in tabeli 2). V primerjavi s kontrolnimi živalmi z ravni mRNA izražanja iz 1,0, je bila povprečna relativna izraz 0,09 ± 2,11 za ASB1-, 0,10 ± 2,28 za ASB3- in 0,24 ± 1,99 za-ASB6 okuženih peščene, v tem zaporedju. Ni bistveno spremenila v izrazu je bila opažena v fundusa od H. heilmannii
s.s. okuženih peščene. Slika 5 mRNA nivo izražanja H + /K + ATPaze v antruma želodca. Vodik kalij ATPaze mRNA nivo izražanja v želodcu je pregledal kvantitativno RT-PCR. H + /K + -ATPaze mRNA nivo izražanja v antruma je prikazano. Podatki so predstavljeni kot kratno spremembo izražanja genov normirane 3 referenčnih genov in relativno glede na negativno kontrolno skupino, ki se šteje kot so 1. podatki prikazani kot sredstvo + standardnega odklona. Pomembne razlike v stopnji izražanja med cepljenih skupin in negativno kontrolno skupino, so označeni z * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U
test).
Virulentnih H. heilmannii
s.s. sevi povzročijo povečano ekspresijo gastrin v fundusa
gastrin peptid hormon stimulira izločanje želodčne kisline parietalnih celicah. Motnje v svojem izrazu lahko privede do hipergastrinemije. Izraz gastrina je zelo reguliran v fundusa od peščene okuženih z ASB2 in ASB6 na 9 tednov po okužbi (slika 6 in tabela 2). V primerjavi s kontrolnimi živalmi, je bila povprečna relativna izraz 6.79 ± 2.49 za ASB2- in 10.35 ± 2.39 for-ASB6 okuženih peščene. V antruma želodca, ni bila odkrita navzgor regulacijo gastrin izražanja. Slika 6 mRNA nivo izražanja gastrina v fundusa želodca. Gastrin mRNA nivo izražanja v želodcu je pregledal kvantitativno RT-PCR. Prikazana je nivo izražanja v fundusa. Podatki so predstavljeni kot kratno spremembo izražanja genov normirane 3 referenčnih genov in relativno glede na negativno kontrolno skupino, ki se šteje kot so 1. podatki prikazani kot sredstvo + standardnega odklona. Pomembne razlike v stopnji izražanja med cepljenih skupin in negativno kontrolno skupino, so označeni z * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U
preskus).
Razprava
Na 9 tedna po okužbi, kronični aktivni gastritis v antruma želodca so opazili pri peščene eksperimentalno okuženih s 7 od 9 H. heilmannii
ss sevi preizkušene v tej študiji (ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 in ASB14). Plast, Propria in submucosa smo močno prepojena z limfociti, kar rezultira v tvorbi limfnih foliklov. H. heilmannii
s.s. sevi so se večinoma odkrijejo v antruma in v manjši meri v fundusa in dvanajstnika. Pri ljudeh, okuženih z NHPh, kolonizacija in vnetje tudi pretežno v antruma želodca [5, 33-35]. To potrjuje, da so mongolski peščene ustrezen model, za študij H. heilmannii
s.s. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Genom analiza zaporedja Helicobacter pylori sevov povezana z razjede želodca in raka želodca
• Protimikrobna aktivnost, akutna toksičnost in zaščito celice učinek Crassocephalum vitellinum (. Benth) S. Moore izvleček v rat etanol-HCl želodčni ulkus modelu