Diversity in bakteeri-isäntä vuorovaikutusten lajin sisällä Helicobacter heilmannii suppeassa

Diversity in bakteeri-isäntä vuorovaikutusten lajin sisällä Helicobacter heilmannii
suppeassa
Abstract
Helicobacter (H.) heilmannii
suppeassa (ss) on zoonoosi bakteeri, joka luonnollisesti colonizes mahassa koiria ja kissoja . Ihmisillä tämä mikro-organismi on liittynyt gastriitti, mahahaava tauti ja limakalvon liittyvän imukudos (MALT) lymfooma. On vain vähän tietoja siitä synnyssä H. heilmannii
S.S. infektiot ihmisillä eikä tiedetä, onko eroja virulenssin esiintyy tämän lajin. Siksi mongoliangerbiili mallia käytettiin tutkimaan bakteeri-isäntä vuorovaikutusten 9 H. heilmannii
S.S. kantoja. Kolonisaatiota kyky kantojen, intensiteetti gastriitti ja geenin ilmentymisen eri tulehduksellisten sytokiinien mahassa määritettiin 9 viikkoa sen jälkeen, kun koe-infektion. Induktion antrum-hallitseva krooninen aktiivinen gastriitti muodostumista lymfosyyttisen aggregaattien osoitettiin 7 kantoja. Korkean tason antral kolonisaation nähtiin 4 kantoja, kun taas kolonisaatio 4 muut kannat oli rajoitetussa ja yksi kanta ei havaittu vatsassa 9 viikon kuluttua infektion. Kaikki kannat indusoi krooninen aktiivinen gastriitti aiheutti säätely ylöspäin proinflammatoristen sytokiinien IL-1β Antrumin. Alentunut antral ilmaus H + /K + ATP nähtiin mahassa infektion jälkeen 3 erittäin siirtomaita kannat ja 2 erittäin kolonisoitumaan aiheuttamat paineet lisääntynyt gastriinin ilmentymistä silmänpohjan. Yhdessäkään H. heilmannii
s.s.-tartunnan ryhmiä, IFN-γ ilmentyminen oli sääteli. Tämä tutkimus osoittaa monimuotoisuuden bakteeri-isäntä vuorovaikutusten lajin sisällä H. heilmannii
S.S. ja että patogeneesi mahalaukun infektioiden tämä mikro-organismi ei ole sama kuin H. pylori
-infektio.
Johdanto
Helicobacter (H.) pylori
on yleisin Helicobacter
lajien asuttamista mahalaukun limakalvon ihmisten ja on liittynyt gastriitti, mahahaava tauti ja mahasyövän [1-3]. Sitä paitsi H. pylori
, muut morfologisesti erilliset ei-H. pylori Helikobakteeri
(NHPh) lajeihin, joita kutsutaan myös H. heilmannii
sensu lato (s.l.) [4] on yhdistetty mahan ihmiselle tautia [5-10]. NHPh edustaa ryhmää läheisesti liittyvien mutta erillisten bakteerilajit, lähinnä löytyy eri eläinlajeista, kuten H. felis
, H. salomonis
, H. bizzozeronii
, H. heilmannii
suppeassa (ss), H. cynogastricus
ja H. baculiformis
kissoilla ja koirilla ja H. suis
sioille [5, 7, 10-15]. Nämä mikro-organismit on ominaista niiden erittäin nirso luonteesta, joka on tähän asti johtanut rajallinen määrä in vitro isolaattien saatavilla maailmanlaajuisesti.
H. heilmannii
S.S. on vasta hiljattain eristettiin ja niitä viljeltiin in vitro [16]. Sitä on havaittu luonnonvaraisissa kissan ja ihmisen mahalaukun koepaloja, vaan se on yleisimmin todettu mahalaukun limakalvon kissojen ja koirien kanssa esiintyvyys vaihtelevat 20 100% [5-7, 10, 12]. Vaikka tämä bakteeri on liittynyt krooninen aktiivinen gastriitti kissoilla ja koirilla [12], sen patogeeninen merkitys on yhä arvoituksellinen ja on luultavasti kannasta riippuvaista. Ihmisillä, H. heilmannii
s.s. on havaittu 8-19% mahalaukun koepaloja kanssa histologiset NHPh infektion [5, 8, 10]. Infektio tämän bakteerin ihmisellä on liittynyt gastriitti, mahahaava tauti ja limakalvon liittyvän imukudos (MALT) lymfooma [5, 8, 10, 17, 18].
Useat tarttumistutkimuksia kokeellisissa eläinmalleissa on suoritettu tutkia synnyssä H. pylori
ihmisille infektioita. Sen sijaan vain vähän tietoa on saatavilla käsittelee patogeneesin H. heilmannii
S.S. ihmisille infektioita. Tämä bakteeri on tuotettu hiirillä enintään 28 kuukautta, ja kykeni indusoimaan MALT lymfooma vatsat näiden eläinten [18]. Kuitenkin tässä Hiirikoe homogenoituna mahalaukun kudosta käytettiin inokulaattina. Tämä merkitsee sitä, että muut mikro-organismit, ympättiin yhdessä H. heilmannii
s.s., jotka saattavat vaikuttaa tuloksiin, kuten on kuvattu aiemmin [19]. Siten saada parempia oivalluksia patogeneesiin Ihmisen mahalaukun sairauksien liittyy H. heilmannii
S. S., koeinfektio tutkimukset puhtaat viljelmät tämän mikro-organismin ovat välttämättömiä. Siksi käsillä olevan tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia bakteeri-isäntä vuorovaikutusten 9 H. heilmannii
S.S. kantoja, eristetty mahalaukun limakalvon eri kissoja. Mongolian gerbiilin malli on aiemmin osoitettu olevan käyttökelpoinen eläinmalli tutkia Helicobacter
-aiheiset mahalaukun patologiaa ihmisissä ja näin ollen käyttää esillä olevassa tutkimuksessa [19-21].
Materiaali ja menetelmät
Bakteeri kantoja
Yhdeksän kantoja H. heilmannii
ss saatiin mahalaukun limakalvon eri kissojen ja nimettyjen ASB1 (= -kanta, DSM 23983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 ja ASB14. Bakteerit viljeltiin kaksivaiheinen Brucella
-agarmaljoilla (Oxoid, Basingstoke, UK), johon oli lisätty 20% (v /v) vasikan sikiön seerumia (HyClone, Logan, UT, USA), 5 mg /l amfoterisiiniä B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, New York, USA), Skirrow (Oxoid, sisältää 10 mg /l vankomysiini, 5 mg /l trimetopriimia laktaattia ja 2500 U /L polymyksiini B), Vitox täydennysosa (Oxoid) ja 0,05% HCI: lla (pH 5). Inkuboinnin jälkeen mikroaerobisissa olosuhteissa (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2; 37 ° C), bakteerit kerättiin ja lopullinen pitoisuus säädettiin 7 x 10 8 elävien bakteereiden /ml, määritettynä laskemalla Neubauer laskenta kammio.
eläimet, asunto- ja koemenettely
Specific-taudinaiheuttajista vapaiden (SPF) female viisi viikkoa vanhoja Mongolian gerbiilit (CRL: MON (Tum), n
= 48), saatiin Charles River Laboratories (Lille, Ranska). Eläimiä pidettiin suodattimen häkeissä (1500 cm 2) autoklavoitiin lastuja ja autoklavoitiin heinää. Niitä ruokittiin ad libitum autoklaavikäsiteltyä kaupallista ravintoa (Teklad 2018S, joka sisälsi 18% proteiinia, Harlan, Hollanti) ja autoklavoitiin vettä. Kunkin 9 H. heilmannii
s.s. testatut kannat, 5 eläintä vatsansisäisesti ympättiin 3 kertaa 2 päivän välein 300 ui bakteerisuspensio. Kolme eläimet inokuloitiin Brucella
liemi (pH 5, Oxoid) ja toimi negatiivisena kontrollina. Siirrostus suoritettiin alla lyhyt isofluraanianestesiassa (2,5%), käyttäen pallo kärjellä letkuruokintaneulan. 9 viikon kuluttua ensimmäisestä inokulaation jälkeen eläimet tapettiin katkaisemalla kaula syvässä isofluraanianestesiassa (5%). Vatsa ja pohjukaissuolen kunkin gerbiilin resekoitiin ja otettiin näytteitä histopatologista tutkimusta ja kvantitatiivinen reaaliaikainen (RT) -PCR analyysi.
In vivo kokeessa hyväksyttiin eettisen komitean eläinlääketieteellinen tiedekunta, Gent University, Belgia (EY 2011/090).
histopatologia ja immunohistokemia
pitkittäisleikkaus, alkaen loppuun forestomach ja käsittää antrumin ja mahanpohjukassa ja osa pohjukaissuolen, leikattiin pitkin suurempi kaarevuus ja kiinnitettiin 10%: fosfaattipuskuriforaliinissa, prosessoidaan tavanomaisilla menetelmillä ja parafiiniin valomikroskopiaa. Kolme peräkkäistä leikettä 5 pm leikattiin. Sen jälkeen deparaffinization ja nesteytys, lämmön aiheuttama antigeeni haku suoritettiin sitraattipuskurilla (pH 6). Jos haluat estää endogeenisen peroksidaasin ja epäspesifiset reaktiot laseja inkuboitiin 3% H 2O 2 metanolissa (5 min) ja 30% vuohen seerumia (30 min), vastaavasti. Ensimmäinen osa värjättiin hematoksyliinillä /eosiinilla (H &E) pisteet intensiteettiä gastriitti mukaan päivitetty Sydney System [22], mutta tietyin muutoksin, kuten aiemmin on kuvattu [19]. Toisessa osassa, epiteelisolujen proliferaatiota määritettiin immunohistokemiallisella värjäyksellä käyttämällä hiiren monoklonaalista anti-Ki67-aineella (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgia). Ki67-positiivisten epiteelisolujen laskettiin 5 satunnaisesti valitun High Power Fields tasolla mahalaukun kuoppia (suurennus: 400 ×), sekä antrum ja silmänpohjan. Keskimääräinen Positiivisen solumäärä laskettiin kunkin koeryhmän molemmilla vatsassa alueilla.
Parietaalisoluihin tunnistettiin kolmannessa osassa immunohistokemiallisella värjäyksellä vedyn kalium ATPaasi käyttäen hiiren monoklonaalisella vasta-aineella (1/200; Abcam Ltd, Cambridge, UK). Inkubointi ensisijainen vastaan ​​suunnattuja vasta-Ki67 ja vetyä kalium ATPase seurasi inkubaatio HRP-leimattua sekundaarista vasta-ainetta (Envision Link Mouse K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belgia) visualisointia.
DNA: n uuttaminen ja kvantifiointi kolonisoitumaan H. heilmannii
ss mahassa ja pohjukaissuolessa
Kustakin hamsterin näytteitä silmänpohjan ja antrum vatsan ja pohjukaissuolesta otettiin. Kudosnäytteitä säilytettiin 1 ml: ssa RNA myöhemmin (Ambion, Austin, TE, USA) -70 ° C: ssa, kunnes RNA- ja DNA-uutto. Kudosnäytteet homogenisoitiin (MagNALyser, Roche, Mannheim, Saksa) ja RNA: n ja DNA erotettiin käyttämällä TriReagent RT (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Määrä colonizing H. heilmannii
S.S. per mg mahalaukun kudosta määritettiin DNA-näytteistä käyttäen H. heilmannii
s.s.-specific kvantitatiivinen RT-PCR: llä. Tuottamiseen standardin, osa ureAB
geenin klusterin (1224 bp) H. heilmannii
S.S. ASB1 monistettiin käyttämällä alukkeita U430F ja U1735R, kuten aiemmin on kuvattu [6]. Standardi koostui 10-kertainen-laimennoksilla alkaen 10 8 PCR amplikonit jokaista 10 ui reaktioseosta. Yksi ui uutettua DNA-templaattia suspendoitiin 10 ui reaktioseosta, joka sisälsi 0,25 ui molempien alukkeiden sijaitsevat 1224 bp: n fragmentti, jolloin saatiin 212 bp: n PCR-tuote (sense-aluke: HH_SP1: 5'-CTT TCT CCT GGT GAA GTG ATT CTC-3 ', antisense-aluke: HH_RVQ: 5'-GCT GTA CCA GAG GCA ATG TCC AAG-3', hehkutus lämpötila 58 ° C), 3,5 ui HPLC vettä ja 5 ui SensiMix ™ SYBR o-ROX (Bioline Reagenssit Ltd , UK). Sekä standardit ja näytteet ajettiin kahtena kappaleena on CFX96 ™ RT-PCR System, jossa on C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Bio-Rad CFX Manager (versio 1.6) ohjelmisto käytettiin laskettaessa kynnyksen jaksoa (Ct) -arvot ja sulamiskäyräanalyysi monistettua DNA. Keskiarvot päällekkäiset käytettiin kvantifiointia H. heilmannii
s.s. DNA kudosnäytteistä.
RNA: n valmistaminen ja geenin ilmentymisen
Kokonais-RNA, kudosnäytteistä, puhdistettiin käyttäen RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Saksa), mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Puhtaus RNA osoitettiin mittaamalla absorbanssisuhde 260 nm: ssä ja 280 nm: ssä NanoDrop, joka kaikissa tapauksissa oli noin 2. RNA-pitoisuus kussakin näytteessä säädettiin 1 ug /ul, ja cDNA syntetisoitiin heti RNA puhdistus käyttämällä iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad). Alikvootit cDNA (1/5 laimennos) käytettiin templaattina kvantitatiivista RT-PCR mittaamiseksi geenin ilmentymisen. MRNA ekspressiotasot eri sytokiinien (IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ: n ja TNF-α), gastriini ja H + /K + ATP kvantitoitiin. Taloudenhoito geenit GAPDH, β-aktiini
ja HPRT
sisällytettiin referenssinä geenejä. Alukesekvenssit on esitetty taulukossa 1 [23-28]. Kaikkien kohdegeenien ja viite geenit, pohjamaali tehokkuudet olivat välillä 1,9 ja 2,1. Reaktiot suoritettiin 10 pl tilavuutta, joka sisälsi 1 ui cDNA: ta, 0,05 ui molempien alukkeiden, 3,9 ui HPLC vettä ja 5 ui SensiMix ™ SYBR o-ROX. Koejärjestely PCR-reaktiossa (40 sykliä) suoritettiin CFX96 ™ RT-PCR System, jossa on C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad): denaturointi 15 min 95 ° C: ssa, minkä jälkeen monistussykliä 95 ° C: ssa 20 s, pariutuminen 60 ° C: ssa 30 s ja pidennys 73 ° C: ssa 30 s. Verrokkireaktiot ilman käänteiskopioijaentsyymiä vaihe toteutettiin jättää DNA saastuminen RNA-näytteet. Ei-template-ohjaus reaktioseokset mukana, ja kaikki näytteet ajettiin kahtena kappaleena. Ct-arvot normalisoitiin geometrinen keskiarvo Ct-arvot 3 viitaten geenit, jonka jälkeen normalisoidut mRNA-tasot laskettiin käyttäen 2 -ΔΔCt menetelmän [29] .table 1 Primer paria.
Alukkeet
Sequence (5 '→ 3)
Sytokiinit
IL-1β FW23
GGC AGG TGG TAT CGC TCA TC
IL- 1β RV23
CAC CTT GGA TTT GAC TTC TA
IL-5 FW
AGA GAA GTG TGG CGA GGA GAG ACG
IL-5 RV
ACA GGG CAA TCC CTT CAT CGG
IL-6 FW
CAA AGC CAG AGC CAT TCA GAG
IL-6 RV
GCC ATT CCG TCT GTG ACT CCA GTT TCT CC
IL-10 FW
GGT TGC CAA GCC TTA TCA GA
IL-10 RV
GCT GCA TTC TGA GGG TCT TC
IL-12p40 FW
GAC ACG ACC TCC ACC AAA GT
IL-12p40 RV
CAT TCT GGG ACT GGA CCC TA
IL-17 FW23
AGC TCC AGA GGC CCT CGG AC
IL-17 RV23
AGG ACC AGG ATC TCT TGC TG
IFN-γ FW24
CCA TGA ACG CTA CAC ACT GCA TC
IFN-γ RV24
GAA GTA GAA AGA GAC AAT CTG G
TNF-α FW23
GCT CCC CCA GAA GTC GGC G
TNF-α RV23
CTT GGT GGT TGG GTA CGA CA
Gastrin
Gastrin FW25
GCC CTG GAA CCG CAA CA
Gastrin RV25
TTC TTG GAC AGG TCT GCT TTG AA
H + /K + ATP ( parietaalisoluihin) B ATP4b FW
GGG GGT AAC CTT GAG ACC TGA TG
ATP4b RV
AAG AAG TAC CTT TCC GAC GTG CAG
Viite geenien
GAPDH FW26
AAC GGC ACA GTC AAG GCT GAG AAC G
GAPDH RV26
CAA CAT ACT CGG CAC CGG CAT CG
HPRT FW27
CTC ATG GAC TGA TTA TGG ACA G
HPRT RV27
AGC TGA GAG ATC ATC TCC ACC AAT
β-aktiini FW28
CCA AGG CCA ACC GCG AGA TGA C
β-aktiini RV28
AGG GTA CAT GGT GGT GCC GCC AGA C
Primer paria käytetään mittaamaan mRNA ekspressiotasot IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ: n, TNF-α, gastriinin ja H + /K + ATP on esitetty. Taloudenhoito geenit GAPDH, β-aktiini
ja HPRT
sisällytettiin viitteenä geenejä.
Tilastollinen analyysi
Normaalius ja varianssi tasalaatuisuus analysoitiin käyttämällä Shapiro-Wilk normaaliuden testi ja Levenen testi tasalaatuisuus varianssien. Gastriitti tulokset, kolonisaatio kapasiteetti ja ATPaasin ja gastriini-geenin ilmentymistä verrattiin eri tartunta-ryhmien ja valvonta käyttäen Kruskall-Wallis-analyysi, jota seurasi Mann-Whitneyn U-
testi. Sytokiiniekspressioanalyysi ja määrä Ki67-positiivisten solujen analysoitiin varianssianalyysillä kanssa Bonferronin post hoc testi. Erot katsottiin tilastollisesti merkittävä p
≤ 0,05. SPSS Statistics 21 ohjelmisto (IBM) käytettiin kaikissa analyyseissä.
Tulokset
Infektio virulentilla H. heilmannii
S.S. kantoja indusoi antrum-määräävän krooninen aktiivinen gastriitti
maha kaikki kontrollieläinten osoitti normaalia histomorphology (kuva 1a). Tulehdus vatsassa gerbiilit tartunnan H. heilmannii
S.S. kannat ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ja ASB14 leimasi krooninen aktiivinen gastriitti muodostumista lymfosyyttisen aggregaatteja lamina propriassa ja submukoosan antrum mahan (kuva 1b). Limakalvon paksuus oli hieman lisääntynyt ja vain harvat neutrofiilien havaittiin. Sen sijaan, H. heilmannii
s.s. kannat ASB7 ja ASB9 ei aiheuta nimenomaisen antral tulehduksen ja vain lievää lymfosyyttien solujen määrässä havaittiin lamina propria antrum mahan (kuvio 1c). Kaikki H. heilmannii
s.s.-tartunnan gerbiilit, vain vähän merkkejä tulehduksesta havaittiin mahanpohjukassa (Additional tiedosto 1). Antral tulehdus tulokset kunkin yksittäisen eläimen on esitetty kuvassa 2d. Tilastollisesti merkittävä ero tulehdus pistemäärät gerbiilit siirrostettiin ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ja ASB14 verrattuna kontrolliryhmään osoitettiin (Mann-Whitney U-
testi, p
< 0,05, kuvio 2d). Kuvio 1 H &E-värjäystä antrum on gerbiilin vatsaan. Normaali histologia antrum of huijausta-ympätty negatiivinen kontrolli eläin (a). Explicit lymfosyyttitunkeutumisella Lehtilavan proprian ja submukoosassa muodostumista imukeräsissä (nuolet) Antrumin of gerbil inokuloitu H. heilmannii
S.S. ASB1 (b). Lievää tai poissa lymfosyyttitunkeutumisella (nuolet) ja lamina proprian Antrumin of gerbil inokuloitu H. heilmannii
S.S. ASB7 (c). Bar = 30 pm.
Kuva 2 Colonization kapasiteetti H. heilmannii S.S. kantoja ja mahalaukun tulehdus ottelun kokeellisen infektion. Kolonisaatio kapasiteetti näkyy log10 arvot H. heilmannii
S.S. bakteeria per mg kudosta, havaittiin kvantitatiivinen RT-PCR silmänpohjan (a) ja antrum (c) mahan ja pohjukaissuolen (b). Tulokset alle määritysrajan (log 2,39 bakteeria per mg kudosta) asetettiin 0. Antral tulehdus (d) pisteytettiin asteikolla 0-4 (0: ei tunkeutumisen mononukleaaristen ja /tai polymorfonukleaarisiin solujen 1: lievä hajanainen tunkeutumisen mononukleaarisissa ja /tai polymorfonukleaarisiin soluja tai läsnäolo yksi pieni (50-200 solua) yhteenlaskettu tulehdussolujen; 2: kohtalainen hajanainen tunkeutumisen mononukleaaristen ja /tai polymorfonukleaarisiin soluja ja /tai läsnä on 2-4 tulehduksellisten kiviaines, 3: merkitty diffuusi tunkeutumisen mononukleaaristen ja /tai polymorfonukleaaristen solujen ja /tai läsnä on vähintään viisi tulehduksellinen aggregaatit, 4: diffuusi tunkeutumisen laajoja alueita ja suuria aggregaatteja mononukleaaristen ja /tai polymorfonukleaariset solut) .Individual gerbiilit kuvattu kuvioissa ympäri keskiarvo ( linjat). Tilastollinen merkittäviä eroja verrattuna kontrollieläimiin on merkitty * (Mann-Whitney U
testi, p
< 0,05).
Colonization mahtuu H. heilmannii
S.S. kantoja mahassa ja pohjukaissuolessa
havaitseminen H. heilmannii
s.s. DNA kvantitatiivinen RT-PCR-9 viikon kuluttua infektion paljasti korkean tason siirtokuntien ASB1, ASB2, ASB3 ja ASB6 mahassa (kuvio 2a-c). Sen sijaan, kolonisaatio ASB7, ASB11, ASB13 ja ASB14 oli rajoitettua, kun ASB9 ei havaittu vatsassa (kuva 2a-c). Yleisesti, kolonisaatiota kapasiteetti silmänpohjan (kuva 2a) oli pienempi kuin antrumissa (kuvio 2c) kaikki testatut kannat ja pienin bakteerien lukumäärä havaittiin pohjukaissuolessa (kuvio 2b). Lisäksi selvää yhteyttä nähtiin välillä siirtokuntien kapasiteetin H. heilmannii
S.S. kantoja ja mahalaukun tulehdus tulokset antrumissa mahan (kuva 2c-d).
Virulentti H. heilmannii
s.s. kannat aiheuttavat mahalaukun antral epiteelisolujen proliferaatiota
tulokset mahalaukun epiteelisolujen proliferaatiota pisteytys antrum mahan on esitetty kuviossa 3c. Huomattavasti suurempi määrä Ki67-positiivisia lisääntyvien epiteelisolujen havaittiin antrumin ASB1- ja ASB6-tartunnan gerbiilit, verrattuna kontrolliryhmään (ANOVA, p
< 0,05, kuva 3a-b). Numerot Ki67-positiivisia soluja kohtalaisesti lisääntynyt ASB2-, ASB3-, ASB11-, ASB13- ja ASB14-tartunnan gerbiilit, vaikkakaan ei tilastollisesti merkitsevästi. H. heilmannii
S.S. kantoja ASB7 ja ASB9 ei aiheuttanut lisäystä mahalaukun epiteelisolujen proliferaatiota. Lisäksi merkittävästi suurempi määrä lisääntyvien epiteelisolujen osoitettiin antrumin ASB1-, ASB2- ja ASB6-tartunnan gerbiilit, verrattuna gerbiilit tartunnan ASB7 ja ASB9 (ANOVA, p
< 0,05). Kuvio 3 Mahalaukun antral epiteelisolujen lisääntymistä. Ki67 värjäys antrum of gerbil inokuloitu H. heilmannii
S.S. ASB1 (b) esittää suurempi määrä lisääntyvien epiteelisolujen verrattuna sham-siirrostettiin negatiivinen kontrolli eläin (a). Nopeus epiteelisolujen proliferaatiota määritettiin laskemalla Ki67-positiivisten epiteelisolujen 5 satunnaisesti valitun High Power Fields tasolla mahalaukun kuoppia (suurennus: 400 ×) Antrumin on gerbil mahaan (c). Keskimääräinen määrä Ki67-positiivisten solujen esitetään kunkin koeryhmän. Merkittävät erot H. heilmannii
S.S.-siirrostettu ja ohjaus eläimet on merkitty * (ANOVA, p
< 0,05). Merkittäviä eroja verrattuna ASB7 ja ASB9 ympättiin ryhmät on merkitty + ja # vastaavasti (ANOVA, p
< 0,05).
Silmänpohjan kaikki H. heilmannii
ss-tartunnan gerbiilit, epiteelin soluproliferaatiota korko ei ollut merkittävästi korkeampi verrattuna kontrollieläimiin (Additional tiedosto 2).
Sytokiini geeniekspressiota vatsassa vastauksena H. heilmannii
ss infektio
Paikallinen isännän immuunivaste H. heilmannii
S.S. infektion tunnettu mittaamalla mRNA: n ekspressio tason IFN-γ, IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 ja TNF-α mahassa ja gerbiilit. Tulokset on esitetty taulukossa 2 ja kuviossa 4.Table 2 Tilastollinen analyysi mRNA: n ekspression tasoa.
antrum
Silmänpohjan
IL-1β
IFN-γ

H + /K + ATP
Gastrin
Mean Ct-Ctrefa
p-arvoB
Mean ct-Ctref
p-arvo
Mean ct-Ctref
p-arvo
Mean ct-Ctref
p-arvo
ASB1
6,92 ± 0,29 *
0,031
6,87 ± 0,60
1,000
3,70 ± 2,11 *
0,050
7,20 ± 1,68
0,101
ASB2
7,48 ± 1,42
0,231
8,15 ± 1,26
1,000
2,42 ± 5,01
0,513
5,94 ± 2,49 *
0,050
ASB3
6,55 ± 0,80 *
0,008
7,54 ± 0,37
1,000
3,49 ± 2,28 *
0,050
7,71 ± 1,17
0,101
ASB6
6,12 ± 0,67 *
0,001
7,99 ± 0,90
1,000
2,23 ± 1,99 *
0,050
5,33 ± 2,39 *
0,025
ASB7
10,25 ± 0,37
1.000
7,98 ± 0,52
1,000
0,45 ± 2,51
0,724
7,12 ± 1,54
0,180
ASB9
9,03 ± 2,54
1,000
8,55 ± 0,71
1.000
0,79 ± 0,03
0,564
8,11 ± 1,58
1,000
ASB11
7,47 ± 0,15
0,499
10,45 ± 0,95 *
0,004
1,32 ± 1,45
0,248
7,67 ± 1,25
0,289
ASB13
7,72 ± 1,17
0,523
9,54 ± 1,55 *
0,044
3,80 ± 0,34
0,083
8,10 ± 0,93
0,456
ASB14
7,07 ± 0,52
0,054
8,51 ± 0,97
1,000
3,81 ± 3,11
0,127
7,77 ± 2,96
0,881
Negative Control
9,71 ± 1,13 -
7,08 ± 0,65 -
0,15 ± 1,82 -
8,70 ± 0,62
- Kuvassa on tilastollinen analyysi IL-1β: n, IFN-γ ja H + /K + ATP-mRNA: n ekspression antrumin ja gastriini-mRNA: n ekspression silmänpohjan gerbiilin mahassa 9 viikkoa sen jälkeen, kun koe-infektion. Sytokiiniekspressioanalyysi analysoitiin varianssianalyysillä kanssa Bonferronin post hoc testi. H + /K + ATP-aasin ja gastriini-geenin ilmentymistä verrattiin eri tartunta-ryhmien ja valvonta käyttäen Kruskall-Wallis-analyysi, jota seurasi Mann-Whitneyn U-
testi. Erot katsottiin tilastollisesti merkittävä p
≤ 0,05. SPSS Statistics 21 ohjelmisto (IBM) käytettiin kaikkiin analyyseihin.
Mean Ct-Ctref: For kunkin koeryhmän keskimääräinen normalisoidun Ct-arvoja ± keskihajonta esitetään.
Bp
-arvo : tarkka p
-arvot annetaan.
* Tilastollisesti merkitseviä eroja verrattuna infektoitumattom.iin kontrolliryhmään (p
≤ 0,05).
Kuva 4 mRNA ekspressiotasot sytokiinien IL-1β ja IFN- y antrumin vatsaan. Sytokiinin mRNA-ekspressiotasot silmänpohjan ja antrum ja mahan tutkittiin kvantitatiivisella RT-PCR: llä. Ekspressiotasot IL-1β (a) ja IFN-γ (b) antrumissa on esitetty. Data esitetään kansi muutos geeniekspressiossa normalisoidaan 3 viitaten geenejä ja verrattuna negatiiviseen kontrolliryhmään, jota pidetään 1. Tulokset esitetään keinona + keskihajonta. Merkittävät erot ekspressiotason välillä ympätyn ryhmien ja negatiivinen kontrolliryhmä on merkitty * p
< 0,05 (ANOVA).
Proinflammatoristen sytokiinien IL-1β on voimakas estäjä mahahapon eritystä [30] ja sillä on merkitystä akuutin vaiheen tulehduksen [31]. IL-1β oli säädelty Antrumin vatsan gerbiilit tartunnan H. heilmannii
S.S. ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ja ASB14, verrattuna negatiiviseen kontrolliin eläimet (kuvio 4a). Sillä gerbiilit ympättiin ASB7 ja ASB9, ei up-regulation of IL-1β nähtiin.
Th1 sytokiini IFN-γ, allekirjoitus merkkiaine Th1-polarisoituneet vaste [24, 32], osoitti alentunutta ekspressiota antrum gerbiilit tartunnan ASB11 ja ASB13 (kuvio 4b), verrattuna kontrollieläimiin.
Mitään merkittäviä eroja ilmaisun välillä tartunnan ja sham-siirrostettiin gerbiilit voitiin havaita IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 ja TNF-α.
perietaalisolun H + /K + ATP-mRNA ilmentyminen säätyy alas vastauksena bakteerikannasta H. heilmannii
ss
Mitään selvää menetys parietaalisoluissa voisi olla näkyviksi immunohistokemiallisella värjäyksellä silmänpohjan ja antrumin H. heilmannii
ss-tartunnan gerbiilit verrattuna infektoimattomiin kontrolleihin (tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkin kvantitatiivinen RT-PCR osoitti selvän laskun ilmaus mahan H + /K + ATP Antrumin että gerbiilit tartunnan ASB1, ASB3 ja ASB6 (kuvio 5 ja taulukko 2). Verrattuna kontrollieläimiin, joissa mRNA: n ekspressiotasot asetettu 1,0, keskimääräinen suhteellinen ekspressio oli 0,09 ± 2,11 ASB1-, 0,10 ± 2,28 ja ASB3- ja 0,24 ± 1,99 ASB6-tartunnan gerbiilit, vastaavasti. Mitään merkittävää muutosta ilmentyminen nähtiin silmänpohjan H. heilmannii
s.s.-tartunnan gerbiilit. Kuvio 5 mRNA: n ekspression taso H + /K + ATP-aasin antrumin vatsaan. Vety kalium ATPaasi mRNA: n ilmentymisen tasoa mahalaukussa tutkittiin kvantitatiivisen RT-PCR. H + /K + ATP-mRNA-ilmentymisen määrä Antrumin näytetään. Data esitetään kansi muutos geeniekspressiossa normalisoidaan 3 viitaten geenejä ja verrattuna negatiiviseen kontrolliryhmään, jota pidetään 1. Tulokset esitetään keinona + keskihajonta. Merkittävät erot ekspressiotason välillä ympätyn ryhmien ja negatiivinen kontrolliryhmä on merkitty * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U
testi).
Virulentti H. heilmannii
S.S. kannat aiheuttaa lisääntynyt gastriinin ilmentymistä silmänpohjan
peptidi gastriini-hormoni stimuloi mahahapon eritystä, jonka parietaalisoluista. Häiriö sen ilmentyminen voi johtaa hypergastrinemian. Ilmaisu Gastriini oli erittäin säädellään ylöspäin silmänpohjan gerbiilit tartunnan ASB2 ja ASB6 9 viikon infektion jälkeen (kuvio 6 ja taulukko 2). Kontrollieläimiin verrattuna, keskimääräinen suhteellinen ilmaisu oli 6,79 ± 2,49 varten ASB2- ja 10,35 ± 2,39 varten ASB6-tartunnan gerbiilit. Antrumissa mahan, ei säätely ylöspäin gastriinin ilmentymistä havaittiin. Kuvio 6 mRNA: n ekspression taso gastriini silmänpohjan vatsaan. Gastriini mRNA ilmentymistaso mahalaukussa tutkittiin kvantitatiivisen RT-PCR. Näkyy on ilmentymistason silmänpohjan. Data esitetään kansi muutos geeniekspressiossa normalisoidaan 3 viitaten geenejä ja verrattuna negatiiviseen kontrolliryhmään, jota pidetään 1. Tulokset esitetään keinona + keskihajonta. Merkittävät erot ekspressiotason välillä ympätyn ryhmien ja negatiivinen kontrolliryhmä on merkitty * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U
testi).
Keskustelu
9 viikon inokulaation, krooninen aktiivinen gastriitti antrumin mahalaukun havaittiin antilooppirotilla kokeellisesti tartunnan 7 ulos 9 H. heilmannii
ss kannat testataan tässä tutkimuksessa (ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ja ASB14). Lamina propria ja submukoosan olivat massiivisesti soluttautunut lymfosyyttien, jolloin muodostuu imusolujen munarakkuloita. H. heilmannii
S.S. kantoja pääasiassa havaittiin antrumiin ja vähemmässä määrin silmänpohjan ja pohjukaissuoli. Ihmisillä tartunta NHPh, kolonisaatio ja tulehdusta myös tapahtuvan pääasiallisesti antrum mahan [5, 33-35]. Tämä vahvistaa, että Mongolian gerbiilit ovat sopiva malli tutkia H. heilmannii
S.S. ihmisille infektioita, kuten on myös esitetty H. suis
[19] ja helikobakteeri
[20, 21]. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Genomin analyysi Helicobacter pylori kantojen liittyvä mahahaava ja mahalaukun cancer
• Antimikrobinen aktiivisuus, välitön myrkyllisyys ja cytoprotective vaikutus Crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore humalauuterasiaan rotan etanoli-HCl mahahaava malli